不同代数SD大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖和成骨分化能力的实验研究

目的:探讨不同代数SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)体外增殖和成骨分化能力的差异.方法:从SD大鼠骨髓中分离并培养原代BMSCs,免疫荧光染色鉴定BMSCs.传代培养分别获取P1、P3、P5、P7、P9代BMSCs.CCK-8实验检测不同代数BMSCs的增殖能力;显微镜下观察细胞形态学特征;免疫荧光染色检测细胞骨架;流式细胞术检测细胞凋亡情况;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和茜素红染色比较不同代数BMSCs的体外成骨分化能力;实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫荧光检测不同代数BMSCs成骨分化标志物Ⅰ型胶原A1(collagen typeⅠα1,COL1A1)、骨钙素(osteocalcin,OCN)基因表达和蛋白水平.结果:P1、P3、P5代间BMSCs的细胞形态、体外增殖、细胞凋亡及成骨分化能力无显著差别;而P7和P9代BMSCs各方面指标与P1代BMSCs比较,均明显降低(P<0.05).结论:5代以后的BMSCs随着传代次数的增加,其细胞增殖和成骨分化能力显著降低.     

载辛伐他汀PLGA/CPC复合骨髓基质干细胞构建组织工程骨的实验研究

目的：探讨载辛伐他汀PLGA/CPC复合骨髓基质干细胞(bone marrow stromal stem cells)构建组织工程骨的可行性,并筛选辛伐他汀的有效载药量。方法：采用溶剂浇铸—粒子沥滤技术结合相分离法,制备不同浓度(辛伐他汀质量分别为0.1、0.5、1 mg)的载辛伐他汀PLGA/CPC复合支架材料,扫描电镜观察孔隙率,绘制药物释放曲线;茜素红染色、I型胶原染色观察成骨诱导液和辛伐他汀对骨髓基质干细胞向成骨分化的作用;将第3代BMSCs经dil染色后,接种于不同浓度的复合支架材料上,扫描电镜、激光共聚焦显微镜观察细胞在支架上的黏附情况,CCK-8和碱性磷酸酶(ALP)检测对其增殖和分化作用;采用SPSS 18.0软件包对数据进行统计学分析。结果：支架材料孔隙率达90%以上,孔径平均200~300 μm,载药组药物持续缓慢释放,未见药物突释现象;经辛伐他汀和成骨诱导组I型胶原表达阳性,茜素红染色可见明显钙结节;4组支架材料与细胞黏附性较好,0.5 mg组细胞生长状态最佳。CCK-8和ALP检测0.5 mg组能够明显促进细胞的增殖和分化。结论：辛伐他汀和成骨诱导液联合利用,能够更有效地促进BMSCs向成骨分化;载辛伐他汀PLGA/CPC复合支架材料是理想的组织工程支架材料;载0.5 mg辛伐他汀PLGA/CPC支架材料能够有效促进BMSCs的增殖和分化。     

黄精多糖对乳牙牙髓干细胞增殖及成骨向分化的影响

目的:初步探索不同浓度黄精多糖(PSP)对乳牙牙髓干细胞(SHEDs)增殖及成骨分化能力的影响.方法:分离、培养SHEDs,通过流式细胞术及茜素红染色分别对细胞表面标志物和成骨分化潜能进行鉴定.采用不同浓度PSP处理SHEDs后,CCK-8法检测SHEDs的增殖情况,钙钴法染色和碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测其ALP活...     

Ⅱ型糖尿病大鼠颌骨骨髓基质干细胞体外培养及其成骨特性观察

目的:观察Ⅱ型糖尿病大鼠颌骨骨髓基质干细胞(BMSCs)的成骨分化特性。方法:无菌条件下从10周龄GK大鼠(实验组)及同龄正常Wistar大鼠(对照组)下颌骨获取BMSCs,采用全骨髓贴壁培养法对细胞进行纯化及培养,流式细胞仪检测干细胞表型.取第3代细胞成骨诱导培养,分别对两组细胞行茜素红染色,碱性磷酸酶染色及活性测定,培养基钙、磷含量测定,以及real-time PCR测定Runx2基因表达变化。结果:成功培养出Ⅱ型糖尿病大鼠颌骨来源的BMSCs,与正常组比较,实验组BMSCs茜素红染色变浅、钙结节形成减少,碱性磷酸酶(ALP)活性下降,细胞钙、磷分泌显著降低,差异有统计学意(P<0.05);Runx2 mRNA表达也明显降低(P<0.05)。结论:Ⅱ型糖尿病大鼠颌骨来源的BMSCs的成骨分化能力受到损害,并且即使在正常糖浓度下培养其成骨能力仍无法恢复。     

犬骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化的实验研究

目的:研究犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)在体外诱导分化为成骨细胞的方法和活性检测。方法:抽取犬骨髓3 mL,使用成骨条件培养液,贴壁法体外培养,将培养的第2、3代细胞进行透射电镜、流式细胞仪、生长曲线、碱性磷酸酶、Von Kossa和免疫组化等检测。结果:第2代细胞碱性磷酸酶染色呈阳性表达;第3代细胞Von Kossa染色、骨桥素、骨涎蛋白和骨钙蛋白呈阳性表达;第3代细胞透射电镜显示高尔基体和线粒体丰富;流式细胞仪检测显示第3代处于S期的细胞比例较第2代增加。结论:犬骨髓基质细胞在体外能定向诱导分化为成骨细胞。     

高糖条件下Exendin-4对骨髓间充质干细胞增殖分化的影响

目的:观察艾塞那肽(Exendin-4)对高糖条件下骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖分化的影响.方法:分离培养SD大鼠BMSCs,高糖条件下用Exendin-4(1、5、10、15 nmol/L)干预,CCK-8检测细胞增殖;ALP染色、茜素红染色检测细胞成骨分化能力.结果:高糖可抑制BMSCs增殖(P<0.05),...     

人牙髓细胞条件培养液对人牙囊细胞成骨分化作用的体外研究

目的:探索人牙髓细胞条件培养液(HDPSCs-CM)对人牙囊细胞(HDFSCs)向成骨分化的作用.方法:利用胶原酶消化法获得HDFSCs,经纯化鉴定后培养于HDPSCs-CM中;CCK-8检测HDFSCs增殖活性,观察细胞形态改变;碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红S染色定性分析细胞成骨能力的改变.qRT-PCR检测HDFSCs中骨膜蛋白(POSTN)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)以及骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达情况.结果:经HDPSCs-CM诱导后,HDFSCs形态发生成牙骨质或成骨样改变;诱导组HDFSCs增殖活性受到明显抑制(P<0.05或P<0.01);诱导组ALP染色强于对照组,茜素红S染色矿化结节多于对照组;诱导组POSTN、Col-Ⅰ、ALP、BSP、OPN的表达量明显增高(P<0.05或P<0.01).结论:HDPSCs-CM能促进HDFSCs成骨分化.     

载他克莫司可注射温敏水凝胶促牙髓干细胞成骨向分化作用研究

目的:研究载他克莫司可注射温敏水凝胶(FK506-TH)对人牙髓干细胞(hDPSCs)成骨分化的影响.方法:酶消化法体外分离培养hDPSCs,CCK-8法检测不同浓度FK506FK506-TH对hDPSCs增殖的影响,采用Real-time PCR、茜素红S和碱性磷酸酶(ALP)染色检测各组细胞成骨分化能力的影响.结果...     

雷帕霉素促进上颌窦黏膜细胞成骨分化

目的:探讨雷帕霉素对上颌窦黏膜细胞成骨分化的影响。方法:上颌窦黏膜细胞经不同浓度的自噬激动剂雷帕霉素处理后诱导成骨分化,然后进行碱性磷酸酶活性检测、茜素红染色以及自噬基因和成骨基因转录水平的检测,评估上颌窦黏膜细胞成骨分化和自噬水平的改变。结果:碱性磷酸酶活性、钙结节形成量以及成骨基因的表达随成骨诱导逐渐增加,并且100 nmol/L的雷帕霉素处理组表现出较强的成骨能力和自噬水平。结论:合适浓度的雷帕霉素可促进上颌窦黏膜细胞的成骨分化,这一过程可能与自噬途径相关。     

三重抗生素糊剂对乳牙感染根管中微生物的影响

目的:探讨三重抗生素糊剂对乳牙根尖周炎不同分期感染根管中微生物样本的影响.方法:将2017年4月—2020年4月南京医科大学附属儿童医院口腔科收治的89例儿童乳牙根尖周炎患儿纳入研究,根据临床症状及根尖X线片,将患儿分为急性炎症组和慢性炎症组.收集感染根管内感染样本,对样本进行细菌鉴定、分离与纯化,分析2组患儿感染根管...     

3种含漱液在口腔种植术后维护口腔卫生中的效果比较

目的 比较3种含漱液在口腔种植术后2周对口腔卫生维护的效果。方法 将60例口腔种植患者随机分为聚维酮碘组（PVP-I）、氯己定组（CHX）和精油组（EO）,每组20例。术后2周分别用相应含漱液维护口腔卫生。分别检查术前及术后2周时的改良菌斑指数（mPI）和改良出血指数（mBI）,填写视觉模拟量化表（VAS）,评价含漱液的使用感。应用实时定量PCR分析患者种植术区邻牙龈沟液中具核梭杆菌（Fn） 和牙龈卟啉单胞菌（Pg）含量的改变。采用SPSS 23.0软件包对mPI与mBI的组间差异进行t检验,细菌含量比较采用Wilcoxon符号秩检验及Mann-Whitney U检验。结果 种植术后应用含漱液2周,各组mPI均显著降低（P<0.05）。相对于PVP-I组,EO组的含漱液对黏膜刺激性更大（P<0.05）,CHX组的含漱液更容易造成牙面着色（P<0.05）。PVP-I组和CHX组中Fn含量显著降低（P<0.05）。结论 口腔种植手术后短期应用3种含漱液,均有助于维护良好的口腔卫生。在患者使用感主观评分上,PVP-I优于CHX和EO。PVP-I对Fn有一定抑制作用。     

葡萄籽原花青素对牙龈卟啉单胞菌内毒素的影响

目的探讨葡萄籽原花青素对牙龈卟啉单胞菌内毒素的影响。方法采用二倍稀释法测定葡萄籽原花青素对牙龈卟啉单胞菌的最小抑菌浓度(MIC);采用鲎试验测定低于MIC 6个浓度的葡萄籽原花青素对牙龈卟啉单胞菌内毒素含量的影响。采用SPSS17.0软件包进行组间比较。结果葡萄籽原花青素对牙龈卟啉单胞菌的MIC为0.8 mg/mL;在0.05~0.4 mg/mL范围内,随着葡萄籽原花青素浓度的升高,对释放内毒素的抑制作用逐渐增强（P<0.05、0.01）。结论葡萄籽原花青素对牙龈卟啉单胞菌内毒素的释放具有抑制作用。     

不同龈下楔状缺损充填材料对牙龈卟啉单胞菌生物膜形成的影响

目的：探讨常用龈下楔状缺损充填材料对牙龈卟啉单胞菌（P.gingivalis）生物膜形成的影响。方法：在48颗离体前磨牙颊侧牙颈部制备同一规格V类洞,将其随机分为A、B、C 3组,每组16颗,分别采用通用纳米固体树脂、通用纳米流体树脂、玻璃离子充填、抛光后,使用Isomet 4000 精密切割机制成包含全部充填材料的试件（近远中径5 mm、龈径3 mm、颊舌向深度 2 mm）。将上述3组试件置于P.gingivalis菌液中培养24 h,采用结晶紫染色法观察P.gingivalis的黏附量,使用激光共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscopy, CLSM）观察P.gingivalis生物膜的形成情况。采用SPSS 22.0 软件包对所得数据进行Kruskal-Wallis 秩和检验。结果：结晶紫染色实验显示,玻璃离子表面黏附P.gingivalis的量显著少于通用纳米固体树脂与通用纳米流体树脂（P<0.05）。CLSM扫描可见,3组间P.gingivalis生物膜内的活菌比例及生物膜厚度无显著差异（P>0.05）;玻璃离子表面P.gingivalis生物膜稀疏,呈小团块状,未聚集成片;通用纳米固体树脂组的P.gingivalis生物膜则呈大块片状,立体结构明显。结论：与通用纳米树脂材料相比,玻璃离子表面更不利于P.gingivalis生物膜的形成。对牙周健康而言,玻璃离子更适用于龈下楔状缺损的充填治疗。     

CKIP-1对骨髓间充质干细胞体外增殖和分化能力的影响

目的：探讨CKIP-1基因对小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）的增殖和分化能力的调控。方法：选择CKIP-1基因敲除型小鼠（KO）和野生型C57小鼠（WT）,采用全骨髓贴壁法培养BMSCs,取第3代BMSCs,分为KO组和WT组,分别采用成骨及成脂诱导液对细胞进行诱导培养,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测目的细胞表面标记分子,用ALP染色、茜素红染色、油红O染色分别对细胞成骨及成脂能力做定量分析。结果：2种细胞增殖和干细胞分子表达相似;成骨诱导后ALP染色显示,KO组的细胞染色的阳性率要大于WT组。茜素红染色观察显示KO组的矿化结节要多于WT组;油红O染色显示KO组细胞的脂质沉淀量大于WT组。结论：CKIP-1基因缺失可以使BMSCs成骨及成脂分化能力增强,对其增殖影响不明显。     

淫羊藿苷对犬骨髓间充质干细胞增殖、成骨和成脂分化的影响

目的:研究淫羊藿苷对犬骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖和成骨、成脂分化的影响。方法:将淫羊藿苷配制成终浓度为1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5、1×10-4 mol/L的溶液,以0 mol/L组为空白对照组,分别用于体外培养犬BMSCs。CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶活性。然后实验分为淫羊藿苷组和对照组,分别在含或不含成骨、成脂诱导液条件下,行成骨、成脂诱导分化实验,通过茜素红和油红O染色检测各组钙沉积和脂质形成面积。结果:发现淫羊藿苷1×10-6 mol/L组促进犬BMSCs增殖,而1×10-4mol/L组抑制增殖。碱性磷酸酶活性与淫羊藿苷浓度呈剂量依赖性关系。不含成骨、成脂诱导液条件下,各组均几乎未见明显钙沉积和脂质形成;含成骨、成脂诱导液条件下,淫羊藿苷组(1×10-6 mol/L)钙沉积面积高于对照组,脂质形成面积低于对照组。结论:淫羊藿苷能促进犬BMSCs增殖和成骨分化,并抑制其成脂分化。     

雷奈酸锶对大鼠骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响

目的:探讨雷奈酸锶(strontium ranelate,SrR)对大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖及成软骨分化的作用.方法:体外分离培养大鼠BMSCs,以含0.25～2.0 mmol/L的SrR软骨诱导分化培养基培养,CCK-8法检测细胞增殖状态,甲苯胺蓝...     

铍对牙龈卟啉单胞菌细胞形态和细胞膜离子含量的影响

目的研究铍离子（Be²⁺）对牙龈卟啉单胞菌细胞形态和细胞膜离子的影响,探讨镍铬合金对牙周损伤的微生物学机制。方法用含不同浓度Be²⁺的培养液厌氧培养牙龈卟啉单胞菌24 h。光镜及扫描电镜下观察不同浓度的Be²⁺对牙龈卟啉单胞菌细胞形态的影响,同时以X线能谱仪分析细胞膜离子含量的变化。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果Be²⁺浓度大于2.5 mg/L时,牙龈卟啉单胞菌菌体形态改变。牙龈卟啉单胞菌细胞膜表面Na原子和Ca原子含量随Be²⁺浓度升高呈降低趋势(P<0.05)。结论Be²⁺会改变细菌形态和细胞膜成分,引起细菌功能变化,从而可能导致口腔正常微生态环境失衡,引起牙周疾病。     

二十碳五烯酸对人牙龈成纤维细胞生物学活性及炎症因子表达的影响

目的:探索二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)生物学活性及炎症因子表达的作用.方法:分别通过活-死细胞染色、免疫荧光染色、流式细胞术观察EPA对HGFs细胞活性、形态、细胞周期的影响,采用牙龈卟啉单胞菌(P...     

黄芪多糖对犬骨髓基质干细胞增殖及超微结构的影响

目的探讨黄芪多糖（APS）对诱导培养的犬骨髓基质干细胞（BMSCs）增殖、分化成骨作用及超微结构的影响。方法用瑞氏- 姬姆萨染色、改良Gomori钙- 钴法、茜素红染色法检测BMSCs分化成骨的能力。用四唑盐（MTT）比色和酶动力学方法测定不同浓度和时间的APS对诱导培养的BMSCs增殖影响以及超微结构的改变。结果诱导条件下BMSCs具有成骨细胞活性,瑞氏- 姬姆萨染色呈深蓝色,改良Gomori钙- 钴法将细胞及矿化结节染成黑色,茜素红染色法见细胞及矿化结节成红色。第1、3天时,低浓度（0.005 mg/mL）APS可促进诱导培养的BMSCs增殖;而第5天时,高浓度（50 mg/mL）APS则明显抑制诱导培养的BMSCs增殖。第5天,透射电镜下,0.005 mg/mL APS组细胞线粒体、粗面内质网增多,细胞外基质分泌增加;50 mg/mL APS组细胞发生退变,粗面内质网和线粒体明显减少,且二者明显肿胀、变性、膜结构破坏。结论短期低浓度APS能促进诱导培养的BMSCs的代谢和蛋白质的合成,有利于细胞的增殖和向成骨分化。