碱性单细胞凝胶电泳技术用于淋巴细胞辐射生物剂量估算初探

目的 初步探索碱性单细胞凝胶电泳（SCGE）方法用于电离辐射生物剂量估算的可行性.方法 不同剂量水平（0～5 Gy）的60Co γ射线照射正常人外周血,用碱性SCGE分析淋巴细胞“彗星”尾长和尾矩,建立各自的剂量-效应曲线.收集某基地放射工作从业人员的外周血进行碱性SCGE分析,并估算受照剂量,与监测物理剂量相比较.结果 淋巴细胞“彗星”尾长和尾矩均随着照射剂量的增加而增加,其剂量-效应曲线均为线性平方模式.以“彗星”尾长为指标的剂量-效应曲线方程为Y=13.59＋20.87X-2.27X^2,以尾矩为指标的曲线方程为Y=8.50＋15.04X-1.43X^2.参照上述方程,以尾矩为指标估算放射工作从业人员的剂量更接近实际受照剂量.结论 用碱性SCGE分析淋巴细胞“彗星”尾矩有希望成为电离辐射生物剂量计.     

单细胞凝胶电泳在放射医学中的应用

单细胞凝胶电泳是一种在单细胞水平检测哺乳类有核细胞DNA断裂的新技术,本文着重介绍了该技术在DNA辐射损伤、辐射致突致癌分子机制、自由基清除与辐射效应阻断药物、辐射剂量估算、肿瘤放射敏感性的预测、辐射诱发细胞凋亡的研究中的应用进展。     

单细胞凝胶电泳用于放射工作者DNA损伤评价的研究

目的 评价不同级别医院放射工作人员的DNA损伤情况,探讨不同工种、工龄与DNA损伤程度之间的关系。方法 用碱性单细胞凝胶电泳技术检测放射组和对照组外周血淋巴细胞的DNA单链断裂水平。CASP软件分析彗星图像,主要观察彗星尾部DNA百分含量(TDNA%)、彗星尾长(TL)、尾矩(TM)和Olive尾矩(OTM)等指标。 结果 放射组的TDNA%,TL、TM、OTM明显高于对照组(F=3.93, P<0.01),不同工种、工龄间均有统计学差异(F=1.83, P<0.05),不同级别医院之间放射工作者上述指标也差异存在统计学意义(F=1.91,P<0.05)。结论 所观察医院的放射工作者外周血淋巴细胞DNA均存在不同程度的损伤,高级别医院略好于低级别医院,而且DNA损伤程度与放射工龄和工种有一定的相关性。     

室内氡暴露居民外周血淋巴细胞DNA损伤及微核细胞发生率

目的：观察室内氡暴露居民外周血淋巴细胞DNA损伤及微核细胞发生率。方法：采用单核细胞凝胶电泳和微核检测两种方法。观察了我国甘肃省窑洞内氡暴露居民及对照居民外周血淋巴细胞DNA损伤及微核细胞发生率。结果：窑洞和普通住房居民（室内空气中氡浓度分别为200－350Bq.m^－3及37．5-77.1Bq.m^－3)的细胞迁移发生率分别为1．68％和1．43％，人发生细胞迁移百分别为57．1％和54．3％。50岁以上窑洞和普通住房居民细胞迁移和人发生细胞迁移率分别为2．14％、75．0％和2．00％、64．7％。窑洞和普通住房居民微核细胞发生率分别为1．07％和0．78％。结论：窑洞居民外周血淋巴细胞DNA损伤及微核细胞发生率略高于普通住房居民，P值接近0．05。     

单细胞凝胶电泳检测辐射诱导的DNA双链 断裂修复时效性研究

目的 探讨细胞DNA辐射损伤修复时效性,拟合修复曲线和修复平面模型,提高其在辐射生物剂量估算中应用的准确性。方法 通过对离体外周血淋巴细胞用不同剂量γ射线照射后3、24、48 和72 h进行中性单细胞凝胶电泳实验,检测辐射诱导的DNA双链断裂修复程度。结果 照射后不同时间点的剂量-效应曲线和不同剂量点的修复曲线拟合度均较高(r >0.98, P <0.01),将两者结合后,拟合的曲面光滑度较好。结论 不同剂量下的损伤修复呈线性关系,修复曲面模型可用于辐射原发损伤估算。     

单细胞凝胶电泳用于放射工作者DNA损伤评价的研究

目的 评价不同级别医院放射工作人员的DNA损伤情况,探讨不同工种、工龄与DNA损伤程度之间的关系.方法 用碱性单细胞凝胶电泳技术检测放射组和对照组外周血淋巴细胞的DNA单链断裂水平.CASP软件分析彗星图像,主要观察彗星尾部DNA百分含量(TDNA%)、彗星尾长(TL)、尾矩(TM)和Olive尾矩(OTM)等指标.结果 放射组的TDNA%,TL、TM、OTM明显高于对照组(F=3.93.P<0.01),不同工种、工龄间均有统计学差异(F=1.83,P<0.05),不同级别医院之间放射工作者上述指标也差异存在统计学意义(F=1.91,P<0.05).结论 所观察医院的放射工作者外周血淋巴细胞DNA均存在不同程度的损伤,高级别医院略好于低级别医院,而且DNA损伤程度与放射工龄和工种有一定的相关性.     

单细胞凝胶电泳用于放射工作者DNA损伤评价的研究

目的 评价不同级别医院放射工作人员的DNA损伤情况,探讨不同工种、工龄与DNA损伤程度之间的关系.方法 用碱性单细胞凝胶电泳技术检测放射组和对照组外周血淋巴细胞的DNA单链断裂水平.CASP软件分析彗星图像,主要观察彗星尾部DNA百分含量(TDNA%)、彗星尾长(TL)、尾矩(TM)和Olive尾矩(OTM)等指标.结果 放射组的TDNA%,TL、TM、OTM明显高于对照组(F=3.93.P<0.01),不同工种、工龄间均有统计学差异(F=1.83,P<0.05),不同级别医院之间放射工作者上述指标也差异存在统计学意义(F=1.91,P<0.05).结论 所观察医院的放射工作者外周血淋巴细胞DNA均存在不同程度的损伤,高级别医院略好于低级别医院,而且DNA损伤程度与放射工龄和工种有一定的相关性.     

单细胞凝胶电泳在放射医学中的应用

单细胞凝胶电泳是一种在单细胞水平检测哺乳类有核细胞DNA断裂的新技术。本文着重介绍了该技术在DNA辐射损伤、辐射致突致癌分子机制、自由基清除与辐射效应阻断药物、辐射剂量估算、肿瘤放射敏感性的预测、辐射诱发细胞凋亡的研究中的应用进展。     

淋巴细胞DNA双链断裂用于放射损伤检测的可行性研究

目的探讨受照后淋巴细胞DNA双链断裂和凋亡作为放射损伤生物学检测指标的可行性。方法采用DH值中性彗星电泳方法，检测人外周血离体照射0．1～4Gy后6h和24h淋巴细胞彗星率和彗星尾长，并观察其量效关系。结果照后6h和24h彗星率呈剂量依赖性上升，反应剂量阈值分别为0．6Gy和0．1Gy，γ分别为0．967和0．927；照后6h彗星尾长亦呈剂量依赖性上升，γ为0．847。结论中性彗星电泳法结果提示在照射剂量和淋巴细胞彗星率及彗星尾长间存在较紧密的相关性。     

裂片核素内照射诱导大鼠外周血淋巴细胞DNA单链断裂

目的：探讨混合裂变产物致癌的分子机理和混合裂变产物内污染诱发免疫细胞的放射免疫毒理效应。方法：应用碱性单细胞凝胶电泳技术观察了混合裂变产物急性染毒时对大鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤。结果：裂片核素内照射对大鼠外周血淋巴细胞DNA具有明显的损伤作用，慧星细胞率和DNA的损伤程度随染毒时间的延长、累积剂量增大而逐渐加重，且存在较好的剂量效应关系。结论：单细胞凝胶电泳技术检测的DNA单链断裂可作为毒物对健康影响的早期生物学指标。     

一例辐射事故病人外周血淋巴细胞HPRT基因突变谱分析

一例辐射事故病人外周血淋巴细胞ＨＰＲＴ基因突变谱分析赵艳华邢瑞云夏寿萱次黄嘌呤磷酸核糖转移酶（ＨＰＲＴ）基因是研究电离辐射所致ＤＮＡ损伤和衡量对人体的近、远期辐射效应较为理想的靶基因。作者利用计算机辅助设计，合成ＨＰＲＴ基因全部外显子的寡核苷酸引物，...     

一例辐射事故病人外周血淋巴细胞HPRT基因突变频率的测定

一例辐射事故病人外周血淋巴细胞ＨＰＲＴ基因突变频率的测定邢瑞云赵艳华夏寿萱次黄嘌呤磷酸核糖转移酶（ＨＰＲＴ）基因位于细胞Ｘ染色体上，其产物在细胞核酸代谢中参与嘌呤核苷酸合成旁路代谢。ＨＰＲＴ基因对于电离辐射比较敏感，而且ＨＰＲＴ基因突变的细胞能在含６...     

单细胞凝胶电泳检测DNA辐射损伤的剂量-效应关系研究

目的探索新的简便、快捷的辐射生物剂量学方法，用于急性辐射事故早期生物剂量估算。方法用中性单细胞凝胶电泳技术检测辐射诱导的DNA双链断裂，CASP软件分析彗星图像，主要观察彗星头部DNA％（HDNA％）、尾部DNA％（TDNA％）、彗星全长（CL）、尾长（TL）、尾矩（TM）和Olive尾矩（OTM）等指标，SPSS12．0软件拟合剂量．效应曲线。结果上述指标均呈显著剂量一效应关系，以OTM指标的拟合优度最佳。结论中性单细胞凝胶电泳技术结合CASP软件的应用，有望成为新一代辐射生物剂量计。     

介入诊疗对心血管病患者外周淋巴细胞DNA的损伤

目的探讨心血管病介入诊疗中的X线电离辐射对心血管病患者DNA损伤的影响。方法收治接受心血管病介入诊疗患者244例,按介入术式不同分为四组:经皮冠状动脉造影术组87例,经皮冠状动脉介入术组72例,射频消融术组48例,起搏器植入术组37例。分别于术前、术后2 h、24 h抽取患者外周血,检测外周血淋巴细胞染色体微核。同时记录患者手术全程辐射的累积皮肤表面入射剂量(CD)、面积剂量乘积(DAP)、透视时间(FT)等,观察各种介入诊疗中患者接受的辐射损伤程度和差异。结果经皮冠状动脉支架置入术组CD和DAP值显著高于其他三组,而其他三组间CD和DAP值差异无统计学意义(P>0.05)。患者术后2 h染色体微核率为16.3‰±4.2‰,P<0.05),术后24 h为17.5‰±5.1‰,,明显高于术前水平(13.8‰±4.7‰,P<0.05)。结论不同介入术中,患者接受的辐射剂量不同,但介入诊疗中的电离辐射都可能会造成患者的DNA损伤。     

SCGE作为辐射生物剂量计的可行性研究

单细胞凝胶电泳技术建立于20世纪80年代，用于检测单个细胞的DNA损伤。放射生物学研究表明，该技术可用于检测精了细胞、肿瘤细胞和淋巴细胞等哺乳动物细胞受照后的DNA损伤。近年来，随着科学技术的不断进步，各种有关软件的深层开发，使得这一技术增添了许多新的内涵。尤其在照后早期，较其他传统生物剂量学技术具有明显优势，用于放射生物剂量学研究将有良好前景。     

电离辐射诱导人外周血淋巴细胞gadd45基因表达的变化

电离辐射诱导的一些特殊基因表达的改变，有可能作为新的分子生物标记物用于估算细胞的受照剂量。其中生长抑制和BNA损伤诱导基因gadd45(growth arrest and DNA damage 45)尤其引人关注。当DNA受到辐射损伤后．作为p-S3基因下游基因，gadd45表达增强，诱导受损细胞停滞于G1期，抑制细胞进入S期进行DNA复制及细胞增殖，同时激活     

辐射诱导人外周血淋巴细胞DNA损伤反应相关基因表达变化的实验研究

目的 采用实时定量PCR技术,检测人外周血淋巴细胞DNA损伤反应相关基因表达对X射线全身照射的反应,为探索新型辐射生物标志物奠定基础.方法 以吸收剂量为0、1、2、3、4、5 Gy X射线照射正常人外周血,在照射后4和24 h,应用实时定量PCR法,对淋巴细胞细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制物蛋白1a(Cdknla)、生长阻滞和DNA损伤基因45a(Gadd45α)基因的表达变化进行检测.应用胞质分裂阻滞微核法(CB微核法),检测淋巴细胞微核率变化.结果 Cdknla基因在人外周血淋巴细胞受到1～5 Gy照射后4和24 h,其相对表达量均较对照组显著性升高,至4 Gy达到峰值,5 Gy后不再继续增加.Cdknla基因表达与照射剂量呈线性相关(r=0.946、0.975,P<0.05).Gadd45ct基因在1～5 Gy照后4和24 h,其相对表达量均呈剂量依赖性升高,且照射后4 h的表达高于24 h(r=0.936、0.797,P<0.05).CB微核法中,在1～5 Gy X射线照射后4和24 h,各剂量组淋巴细胞微核率均显著增多,呈现良好的线性关系(r=0.990、0.984,P<0.05).结论 辐射使Cdknla基因和Gadd45α基因表达上调,表现出较好的剂量线性关系,有可能成为研制新型辐射生物剂量计的候选基因.

Abstract：

Objective To detect the expression of DNA damage response genes induced by radiation in human peripheral blood lymphocyte,and to explore the new biomarkers of radiation.Methods The human peripheral blood cells were irradiated to X-rays at different doses of 0,1,2,3,4,and 5 Gy.The quantitative real.time qPCR wag used to detect the expressions of cyclin-dependent kinase inhibitor l a gene(Cdknl a)and growth arrest and DNA damage inducible gene(Gadd45a)in lymphoeytes at 4 and 24 h post-irradiation,respectively.The method of CB mieronucleus was used to determine the change of micronucleus ratio.Results The expression of Cdknl a in peripheral blood lymphocytes wag increased significantly at 4 and 24 h post-irradiation to 0-5 Gy.reached the peak at 4 Gy and began to decrease at 5 Gy,which showed a dose-dependent manner(r=0.946,0.975,P<0.05).Similarly,the expression of Gadd45α in human peripheral blood lymphocytes was also increased significantly at 4 and 24 h post-irradiation to 0-5 Gy in a dose-dependent manner,while the expression of Gadd45a at 4 h wag higher than that at 24 h(r=0.936,0.797,P<0.05).The ratio of micronuclei wag increased significantly at 4 and 24 h post-irradiation to 0-5 Gy(r=0.990,0.984,P<0.05).Conciusions Cdknl a and Gadd45α expression could be increaged significandy at 4 and 24 h post-irradiation to 0-5 Gy,showing a good linear relationship.which might be candidate for radiation biological dosimeter.     

辐射诱导人外周血淋巴细胞DNA损伤反应相关基因表达变化的实验研究

Objective To detect the expression of DNA damage response genes induced by radiation in human peripheral blood lymphocyte,and to explore the new biomarkers of radiation.Methods The human peripheral blood cells were irradiated to X-rays at different doses of 0,1,2,3,4,and 5 Gy.The quantitative real.time qPCR wag used to detect the expressions of cyclin-dependent kinase inhibitor l a gene(Cdknl a)and growth arrest and DNA damage inducible gene(Gadd45a)in lymphoeytes at 4 and 24 h post-irradiation,respectively.The method of CB mieronucleus was used to determine the change of micronucleus ratio.Results The expression of Cdknl a in peripheral blood lymphocytes wag increased significantly at 4 and 24 h post-irradiation to 0-5 Gy.reached the peak at 4 Gy and began to decrease at 5 Gy,which showed a dose-dependent manner(r=0.946,0.975,P<0.05).Similarly,the expression of Gadd45α in human peripheral blood lymphocytes was also increased significantly at 4 and 24 h post-irradiation to 0-5 Gy in a dose-dependent manner,while the expression of Gadd45a at 4 h wag higher than that at 24 h(r=0.936,0.797,P<0.05).The ratio of micronuclei wag increased significantly at 4 and 24 h post-irradiation to 0-5 Gy(r=0.990,0.984,P<0.05).Conciusions Cdknl a and Gadd45α expression could be increaged significandy at 4 and 24 h post-irradiation to 0-5 Gy,showing a good linear relationship.which might be candidate for radiation biological dosimeter.