VEGF对人血单核细胞基质金属蛋白酶表达及活性的影响

目的 :探讨血管内皮生长因子 （VEGF）对人单核细胞源巨噬细胞 （HMDM）基质金属蛋白酶 （MMPs）的表达及其活性的影响。方法 :分别应用 RT- PCR和 Western blot检测 MMPs（MMP- 2和 MMP- 9）基因和蛋白表达 ,Zym ography活性分析检测 MMPs活性。结果 :VEGF可明显增加人单核细胞源巨噬细胞 （HMDM） MMP- 2、MMP- 9m RNA及其蛋白表达和活性。结论 :VEGF可刺激 HMDM MMP- 2、MMP- 9m RNA及其蛋白的表达 ,增强其活性 ,因而有可能促进动脉粥样硬化斑块内基质降解 ,进而引起粥样硬化斑块破裂。     

葡萄籽原花青素对实验性动脉粥样硬化兔基质金属蛋白酶和氧化低密度脂蛋白的影响

目的观察葡萄籽原花青素(GSPE)对实验性动脉粥样硬化兔基质金属蛋白酶2,9(MMP-2,9)和氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的影响,探讨其抗动脉粥样硬化的可能机制。方法雄性新西兰兔24只,随机分为3组:正常对照组,饲喂标准颗粒饲料;模型组,饲喂含1%胆固醇的颗粒饲料;干预组,饲喂含1%GSPE和1%胆固醇的颗粒饲料。于实验前及实验的第4,8,12周末空腹经耳中动脉采空腹血,检测血清MMP-2,9和血浆ox-LDL水平。于12周末,留取主动脉作常规病理观察和免疫组化染色。结果与模型组相比,GSPE干预组病变明显减轻,免疫组化染色显示主动脉MMP-2和MMP-9表达明显减少,血清MMP-2,MMP-9和ox-LDL水平明显下降。结论GSPE有明显的抗动脉粥样硬化效应,该效应与其抗氧化、抑制MMP有关。     

脂多糖对胎儿主动脉平滑肌细胞合成基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶抑制物1的影响

为探讨脂多糖是否通过影响基质金属蛋白酶 1和基质金属蛋白酶抑制物 1的平衡对动脉粥样硬化的进程起作用 ,应用体外培养的胎儿主动脉平滑肌细胞 ,加入不同浓度的脂多糖孵育 72h ,收集细胞上清液 ,用蛋白质印迹分析方法检测细胞上清液中基质金属蛋白酶 1和基质金属蛋白酶抑制物 1的含量。结果发现 ,脂多糖组与对照组相比 ,基质金属蛋白酶 1的含量明显减少 (P <0 .0 5 ) ,基质金属蛋白酶抑制物 1的含量没有显著差别。以上提示 ,脂多糖能抑制胎儿主动脉平滑肌细胞合成基质金属蛋白酶 1 ,但对基质金属蛋白酶抑制物 1的合成没有影响     

氧化修饰低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶—2和骨桥蛋白基因表达及细胞增殖的影响

目的 探讨氧化修饰低密度脂蛋白（oxLDL)和天然低密度脂蛋白（nLDL)促血管平滑肌细胞（VSMC）增殖是否与细胞外基质（ECM）降解及粘附蛋白合成有关。方法 应用Northern印迹和^3H-TdR掺入的方法,观察两种脂蛋白对VSMC表达基质金属蛋白酶－2（MMP－2）和骨桥蛋白（OPN）的影响,以及ECM代谢与VSMC增殖之间的关系。结果 10μg/ml oxLDL作用于细胞24h可使MMP－2和OPN基因表达活性增加1倍左右;nLDL对两种基因表达的诱导作用较弱,高浓度的oxLDL对MMP－2和OPN表达不产生明显的影响。在一定浓度和时间范围内,LDL促细胞增殖作用显示量－效与时－效依赖关系。结论 oxLDL和nLDL可在多位点上发挥促进VSMC增殖和迁移的作用。     

C反应蛋白对U937细胞表达基质金属蛋白酶2的影响

目的　观察C反应蛋白对U937细胞表达基质金属蛋白酶 2的影响 ,探讨C反应蛋白导致动脉粥样硬化斑块不稳定甚至破裂的可能机制。方法　体外培养U937细胞 ,予不同浓度C反应蛋白及普伐他汀干预 ,分为空白对照组、C反应蛋白 5mg/L、2 0mg/L、10 0mg/L及C反应蛋白 2 0mg/L +普伐他汀 10 3 mol/L组 ,用蛋白免疫印迹分析及逆转录聚合酶链反应观察各组细胞表达基质金属蛋白酶 2的差异。结果　蛋白免疫印迹分析显示 ,C反应蛋白 5mg/L、2 0mg/L和 10 0mg/L组基质金属蛋白酶 2的蛋白条带灰度相对值逐渐增高 ,呈浓度依赖性 ,均高于空白对照组 ,其中C反应蛋白 2 0mg/L和 10 0mg/L组与空白对照组差别显著 (P <0 .0 5 ) ;而普伐他汀干预组的灰度相对值亦明显低于C反应蛋白 10 0mg/L组 (P <0 .0 5 )。逆转录聚合酶链反应结果显示 ,随着C反应蛋白浓度增加 ,细胞内基质金属蛋白酶 2mRNA表达量也相应增加 ,呈浓度依赖性 ,而普伐他汀可以减轻这种作用。结论　C反应蛋白干预体外培养的U937细胞后 ,可上调基质金属蛋白酶 2的表达 ,进而可能导致其它一系列炎症反应 ,因此C反应蛋白在导致斑块不稳定方面有直接致炎症作用及炎症放大作用 ,值得进一步研究     

丹红注射液对脑梗死患者氧化低密度脂蛋白及基质金属蛋白酶-2水平的影响

目的 探讨脑梗死患者丹红注射液治疗前后血清氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、基质金属蛋白酶(MMP-2)水平的变化.方法 选择住院治疗的急性脑梗死病人15例,给予0.9％生理盐水250 ml加丹红注射液40ml每日1次静点,且在入院时及药物治疗后2w分别检测ox-LDL,MMP-2的抗体水平.结果 丹红注射液治疗前ox-LDL、MMP-2水平分别为(43.94±25.20)、(25.84±14.10)μg／dl,治疗后水平分别为(31.25±24.45)、(21.12±7.82) μg/dl,治疗前后血清ox-LDL含量有显著变化(P＜0.05).结论 丹红注射液从抗氧化的角度,对急性脑梗死的治疗起重要作用.     

阿托伐他汀对氧化低密度脂蛋白诱导的内皮基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的 探讨不同浓度的阿托伐他汀对氧化型低密度脂蛋白（OX-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）基质金属蛋白酶-1（MMP-1）mRNA表达的影响。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞，待细胞生长到融合状态时加入oxLDL（100μg／m1），作用24h后分别加入不同浓度的阿托伐他汀（1～30ixmol／L），采用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）技术测定MMP-1 mRNA的表达。结果 OX-LDL可诱导HUVECs MMP-1 mRNA的表达；不同浓度的阿托伐他汀可抑制OX-LDL诱导的MMP-1 mRNA的表达，并呈浓度依赖性（1、10及30μmol／L）（均P〈0．05）。结论 阿托伐他汀可抑制OX-LDL诱导的HUVECs MMP-1 mRNA的表达，并呈浓度依赖性；具有抗炎作用，其机制可能与抑制MMP-l的表达有关。     

氧化低密度脂蛋白对人单核细胞组织因子和基质金属蛋白酶-9活性的影响以及阿托伐他汀的干预作用

目的:探讨他汀类降脂药阿托伐他汀潜在的降脂外机制。方法:人单核细胞来源的巨噬细胞,加入50mg/L氧化低密度脂蛋白(oxLDL)共培养10d,加或不加入不同浓度的阿托伐他汀(浓度范围0.01~0.5μmol/L);酶谱学分析基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的活性;一期凝固法测定组织因子(TF)的促凝活性。结果:阿托伐他汀可抑制单核-巨噬细胞的增殖,呈现一定的剂量依赖关系(P<0.05),加入100μmol/L羟甲戊酸后,这种抑制作用消失;0.1μmol/L的阿托伐他汀可显著抑制单核-巨噬细胞表达MMP-9的活性;阿托伐他汀可呈剂量依赖性抑制TF的促凝活性(P<0.05)。结论:阿托伐他汀不仅可抑制单核-巨噬细胞的增殖,而且可抑制单核巨噬细胞活化下表达的MMP-9的活性以及TF的促凝活性。     

同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶1活性的影响

观察同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶1活性的影响，并探讨其作用机制。采用体外培养的大鼠血管平滑肌细胞，加入不同浓度的同型半胱氨酸作用48h，通过酶谱分析和半定量逆转录聚合酶链反应的方法观察同型半胱氨酸对基质金属蛋白酶1活性及其mRNA表达的影响。结果发现，同型半胱氨酸抑制基质金属蛋白酶1活性，下调其mRNA表达，并有剂量依赖效应。提示同型半胱氨酸通过减少基质金属蛋白酶1的合成，抑制其活性，从而减少胶原降解而使胶原蓄积。表明同型半胱氨酸减少胶原降解可能是致动脉粥样硬化的发病机制之一。     

低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和氧化型高密度脂蛋白对THP-1单核细胞ABC1 mRNA表达的影响

为探讨低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、氧化型高密度脂蛋白对THP-1单核巨噬细胞ABCl表达的影响，用40μg/L佛波酯作用48h，将单核细胞诱导成巨噬细胞，再分别与20mg/L、120mg/L的低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、氧化型高密度脂蛋白作用24h，提取细胞中总RNA，用逆转录聚合酶链反应法检测其ABCl mRNA的表达。结果发现，小剂量的低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白和氧化型高密度脂蛋白可引起THP-1细胞ABClmRNA不同程度的表达增高，小剂量的高密度脂蛋白对ABCl表达无明显影响；而大剂量的低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、高密度脂蛋白和氧化型高密度脂蛋白可使THP-1细胞ABClmRNA的表达不同程度降低，其中高密度脂蛋白组轻微降低。结果提示，不同浓度脂蛋白和氧化型脂蛋白对血中单核细胞ABCl表达水平的影响可能在动脉粥样硬化的发生发展过程起重要作用。     

辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体的表达

目的观察辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达的作用。方法培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,随机分组:对照组、低密度脂蛋白(25 mg/L)组、氧化型低密度脂蛋白(255、0和100 mg/L)组和氧化型低密度脂蛋白(50 mg/L) 辛伐他汀(1和10μmol/L)组,通过逆转录聚合酶链反应和Western blot蛋白印迹分析检测血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体mRNA和蛋白的表达,并在相差显微镜下观察细胞形态变化。结果氧化型低密度脂蛋白上调血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达(P<0.01),并呈浓度依赖性(P<0.05)。辛伐他汀明显抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体表达(P<0.05),且高浓度组较低浓度组的抑制作用更强(P<0.05)。结论氧化型低密度脂蛋白可能通过血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体导致内皮功能障碍,辛伐他汀抑制氧化型低密度脂蛋白诱导血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体的表达是其非调脂抗动脉粥样硬化机制之一。     

粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子对人内皮细胞基质金属蛋白酶分泌及活性的影响

为探讨粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子对人内皮细胞基质金属蛋白酶分泌及活性的影响，体外培养人脐静脉内皮细胞，分别应用蛋白印迹法和酶谱法检测基质金属蛋白酶2的含量和活性。结果发现，与对照组相比，不同浓度(5、25和50μg/L)粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子可使人内皮细胞基质金属蛋白酶2的蛋白表达和活性增强，且随粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子剂量增加而增强。提示粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子可通过刺激人内皮细胞基质金属蛋白酶2蛋白的表达，并增强其活性，促进内皮细胞对细胞外基质的降解，从而易于动脉粥样硬化斑块内炎性细胞的渗入，内皮细胞的迁移及新血管的形成，从而对斑块的稳定性产生影响。     

普罗布考对巨噬细胞分泌基质金属蛋白酶9的抑制作用

通过观察普罗布考对THP 1细胞基质金属蛋白酶 9表达的影响 ,初步探讨普罗布考稳定斑块的分子机制。运用逆转录聚合酶链反应、免疫印迹、明胶酶图等方法 ,检测氧化型低密度脂蛋白诱导后的人单核细胞 巨噬细胞系THP 1细胞基质金属蛋白酶 9mRNA表达、蛋白分泌和酶活性。实验发现 ,在氧化型低密度脂蛋白 (80mg L)刺激下 ,THP 1细胞基质金属蛋白酶 9的表达和酶活性明显增强 ;予普罗布考 2 0、4 0、6 0 μmol L处理 ,均能在对细胞活性无影响的前提下 ,显著抑制基质金属蛋白酶 9的蛋白分泌量及明胶降解活性 ,且这种作用呈浓度依赖性增强 ,其中 6 0 μmol L的普罗布考抑制基质金属蛋白酶 9的蛋白分泌和明胶降解活性分别达 74 .0 %± 2 .4 %和 4 8.0 %±5 .1% (P <0 .0 5 )。实验结果说明 ,普罗布考能有效抑制巨噬细胞的基质金属蛋白酶 9的蛋白分泌及其活性 ,这一作用可能是其抗动脉粥样硬化和稳定斑块的重要机制之一。     

糖基化终产物对凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响

目的 研究长期高血糖所致糖基化终产物对巨噬细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1表达的影响.方法 U937细胞经佛波酯诱导分化,并将不同浓度或同一浓度糖基化终产物与诱导分化48 h后的U937细胞共同孵育,用Western Blotting法检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白的表达.同时应用ELISA法测定24例2型糖尿病患者及22例正常对照者血清可溶性氧化型低密度脂蛋白受体1的含量.结果 100、200和400 mg/L 糖基化终产物刺激后细胞表面凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白表达量分别是对照组的1.85、3.22和4.65倍(P<0.05);400 mg/L的糖基化终产物作用12、24、48 h后,U937巨噬细胞该受体蛋白表达量分别为0 h的2.85、3.89和4.3倍(P<0.05).糖尿病患者血清氧化型低密度脂蛋白受体1及糖基化终产物含量较正常对照者显著升高(P<0.01),两者呈正相关(P<0.001). 结论糖基化终产物可增加U937巨噬细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1蛋白表达且呈浓度和时间依赖性.这可能与糖尿病患者加速泡沫细胞形成而易致动脉粥样硬化有关.     

低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白对HepG2细胞肝脂酶活性及肝脂酶mRNA表达的影响

为观察低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白对肝脂酶合成和肝脂酶活性的影响 ,将不同浓度的低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白与人肝癌细胞株HepG2细胞共同培养 ,用MTT法测定细胞增殖抑制率 ,用组织化学法测定细胞肝脂酶活性 ,用逆转录聚合酶链反应测定细胞肝脂酶mRNA的表达水平。结果发现 ,低密度脂蛋白浓度在 2 7.4 7、5 4 .95mg/L时HepG2细胞逆转录聚合酶链反应产物的吸光度值分别是细胞对照的 2 .8倍和 2 .3倍 ,浓度在 10 9.89mg/L时逆转录聚合酶链反应产物的吸光度值与细胞对照比较降低 2 0 %。细胞肝脂酶活性随低密度脂蛋白浓度增加而降低 ,两者呈负相关 (r=- 0 .95 6 14 ,P <0 .0 5 ) ;低密度脂蛋白浓度在 5 4 .95mg/L时开始产生细胞增殖抑制作用 ,其细胞增殖抑制率与低密度脂蛋白浓度呈正相关 (r=0 .91199,P <0 .0 5 )。不同浓度的氧化型低密度脂蛋白处理HepG2细胞其肝脂酶mRNA逆转录聚合酶链反应产物的吸光度值均低于细胞对照孔 ;脂蛋白浓度为2 7.4 7、5 4 .95及 10 9.89mg/L时低密度脂蛋白组细胞肝脂酶活性是氧化型低密度脂蛋白组的 3～ 4倍 ;浓度在 5 4 .95mg/L时氧化型低密度脂蛋白对细胞的增殖抑制作用是低密度脂蛋白的 2倍。结果提示 ,低密度脂蛋白在一定浓度范围能诱导HepG2细胞肝脂酶mRNA     

氧化低密度和极低密度脂蛋白对单核细胞的趋化性研究

用改良的Boyden小室微孔滤膜法检测低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及氧化低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白对人血单核细胞的趋化作用。结果表明,低密度脂蛋白对单核细胞具有趋化活性,而且当其被氧化后,对单核细胞的趋化活性明显增强。极低密度脂蛋白对单核细胞无趋化活性,而氧化极低密度脂蛋白对单核细胞有明显的趋化活性。     

ox-LDL对血小板基质金属蛋白酶诱导剂释放的影响

目的 探讨氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）对血小板基质金属蛋白酶诱导剂（EMMPRIN,又名CD147）释放的影响。方法 分别以终浓度25 mg/L、50 mg/L和100 mg/L ox-LDL,对照组（磷酸盐,PBS）和100 mg/L天然LDL体外刺激洗涤血小板,以流式细胞仪检测血小板上CD147、α颗粒膜糖蛋白（CD62P）的表达,酶联免疫吸附法检测血小板上清液中可溶性CD147（sCD147）含量,共聚焦显微镜、透射电子显微镜观察血小板形态改变及颗粒释放。同时,阻断LOX-1受体后,再以流式细胞仪检测ox-LDL（50 mg/L和100 mg/L）刺激的血小板CD147表达。结果 25 mg/L、50 mg/L和100 mg/L ox-LDL处理组血小板CD147相对平均荧光强度（rMFI）（1.01±0.06、1.18±0.07、1.24±0.08）均高于对照组（0.86±0.10, P<0.01）和天然LDL组（0.89±0.11, P<0.01）。LOX-1阻断后,ox-LDL（50 mg/L和100 mg/L）处理组血小板CD147 rMFI（0.96±0.08、1.05±0.07）均下降（P<0.001）。ox-LDL处理后,血小板形态明显改变,并伴随颗粒释放。结论 ox-LDL通过与LOX-1结合诱导了血小板CD147的释放。     

激活视黄醇类X受体对氧化型低密度脂蛋白诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7凋亡的影响

目的探讨激活视黄醇类X受体对氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡的影响及其机制。方法小鼠巨噬细胞系RAW264.7经氧化型低密度脂蛋白处理24h诱导凋亡,同时观察给予视黄醇类X受体特异性配体9-cisRA或SR11237对氧化型低密度脂蛋白诱导凋亡的干预作用,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪PI单染法和DAPI染色检测细胞凋亡,CM-H2DCFDA荧光探针测定细胞内活性氧浓度。结果RAW264.7细胞经氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理24h后细胞活力较对照组下降约60,细胞凋亡百分率较对照组升高约75,10-8mol/L和10-7mol/L9-cisRA及10-7mol/LSR11237能够显著抑制氧化型低密度脂蛋白诱导引起的细胞活力下降和凋亡(P<0.05)。给予氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)4h后细胞内活性氧水平显著升高约17倍以上,如联合给予9-cisRA(10-7mol/L)或SR11237(10-6mol/L),平均荧光强度分别下降约52和28,较氧化型低密度脂蛋白单独处理组有显著性差异(P<0.05)。结论激活视黄醇类X受体能够抑制氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞凋亡,其机制可能与减轻细胞氧化应激损伤有关。     

非对称二甲基精氨酸促进大鼠主动脉氧化型低密度脂蛋白受体表达

目的观察非对称二甲基精氨酸对大鼠主动脉氧化型低密度脂蛋白受体表达的影响,探讨其在动脉粥样硬化中的作用。方法健康成年Wistar大鼠34只随机分为四组:①对照组(n=7)正常饲料喂养,正常饮水。②高脂饲料组(n=9)用高脂饲料喂养,正常饮水。③非对称二甲基精氨酸(简称甲基精氨酸)组(n=9)用高脂饲料喂养,饮水中按体重加入非对称二甲基精氨酸[0.2 mg/(kg.d)]。④L精氨酸组(n=9)用高脂饲料喂养,饮水中按体重加入非对称二甲基精氨酸[0.2 mg/(kg.d)]和L精氨酸[12 mg/(kg.d)]。18周后麻醉大鼠,取主动脉,以RT-PCR和Western blotting检测主动脉氧化型低密度脂蛋白受体mRNA和蛋白表达。结果①甲基精氨酸组氧化型低密度脂蛋白受体mRNA表达量(1.608±0.114)较对照组(0.363±0.027)和高脂饲料组(0.480±0.065)增加(P均<0.001),L精氨酸组氧化型低密度脂蛋白受体mRNA表达量(0.902±0.037)较甲基精氨酸组降低(P<0.01);②甲基精氨酸组氧化型低密度脂蛋白受体蛋白表达量(0.662±0.063)较对照组(0.111±0.022)和高脂饲料组(0.251±0.004)增加(P均<0.001),L精氨酸组(0.364±0.117)较甲基精氨酸组氧化型低密度脂蛋白受体蛋白表达降低(P<0.05)。结论非对称二甲基精氨酸促进大鼠主动脉氧化型低密度脂蛋白受体基因和蛋白表达,可能与非对称二甲基精氨酸促进动脉粥样硬化有关。     

凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1与糖尿病大血管病变

糖尿病患者倾向于早期发生广泛弥漫的动脉粥样硬化,而其确切机制尚未完全阐明.有研究提示低密度脂蛋白的氧化加速了糖尿病大血管病变的进程,凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1是一种新型氧化型低密度脂蛋白受体,糖尿病中血管内皮细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1呈表达上调状态,而且可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1有可能成为血管性疾病的生物学指标.多项研究提示治疗2型糖尿病的相关药物可抑制凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1的表达.本文就凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1在糖尿病大血管病变中的作用、调节机制及干预措施作一综述.