吗啡依赖大鼠脑细胞色素C氧化酶活性的改变

探讨吗啡依赖大鼠脑线粒体细胞色素Ｃ氧化酶活性的变化。方法；采用药参食法培养大鼠吗啡模型，通过差速离心法分离线粒体。采用分光不镀及化学发乐等方法测定ＣＯＸ活性，心磷脂含量，膜流动性，超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量。ＣＯＸ活性，ＣＬ含量，ＭＦ及ＳＯＤ活性都明显降低，ＭＤＡ含量明显升高。结论：吗啡依赖大鼠脑线粒体ＣＯＸ活性降低，这与ＳＯＤ活性降低导致的脂这氧化水平升高有关。     

氰化钾对人精子线粒体细胞色素氧化酶作用的研究

目的了解氰化钾(KCN)对人精子线粒体内细胞色素氧化酶的阻断作用。方法用不同浓度的KCN作用于活力正常的精子,阻断精子内细胞色素氧化酶的活性,观察其活性被阻断的情况。结果低至8.3×10-3mol／L的KCN即可完全阻断精子内的细胞色素氧化酶。结论实验结果提示,8.3×10-3mol／L的KCN可能是阻断精子线粒体内细胞色素氧化酶活性的最低浓度。     

微波对大鼠脑线粒体细胞色素C氧化酶亚基转录水平的影响

目的 观察微波辐照对大鼠大脑皮层和海马组织线粒体编码基因COX I和核编码基因COXⅣmRNA表达水平的影响，探讨微波辐照是否影响线粒体能量代谢。方法 平均功牢密度为3mW／cm^3和30mW／cm^2微波急性辐照大鼠1h后，应用RT-PCR检测大鼠大脑皮层和海马组织COXI和COXⅣ基因转录水平的变化。结果 3mW／cm^2微波辐照后0、3、24h，大鼠脑海马和大恼皮层COXI、COXⅣ mRNA表达无显著变化。30mW/cm^2微波辐照后0、3、24h，大鼠脑海马和大恼皮层COXI mRNA表达均明显降低，而COXⅣ mRNA表达无显著变化。结论 微波辐照下调大鼠大脑皮层和海马线粒体编码基因COXI mRNA表达，并存在剂量依赖关系，表明微波辐照可能会引起线粒体能量代谢障碍。     

雌激素神经元保护作用的机制

雌激素(estrogen)对神经细胞具有多方面的作用。包括：激活细胞的核内受体(estrogen receptor,ER),提高抗凋亡蛋白的表达;通过第二信使级联途径,改变谷氨酸类递质受体的活性,保持细胞内钙离子浓度的动态平衡,抗氧化作用。所表现的这几种神经细胞保护机制可以提高神经细胞的存活,然而雌激素提高神经细胞存活的具体作用机制还有待进一步的阐明。现就最近关于雌激素神经细胞保护机制的一些观点综述如下。     

雌激素对血管内皮细胞线粒体的保护作用

目的 探讨雌激素对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)线粒体的保护作用.方法 采用过氧化氢(H2O2)作用于HUVEC制备氧化应激细胞模型,观察17β-雌二醇(E2)对氧化应激内皮细胞线粒体的保护作用.实验分A组(空白组)、B组(250 μmol/L H2O2刺激组)、C组(250 μmol/L H2O2 0.1 μmol/L E2组)及D组(250 μmol/L H2O2 0.1 μmol/L E2 10μmol/L ICI182780组).刺激4 h后,检测细胞线粒体细胞色素C氧化酶活性、细胞内ATP水平、细胞内活性氧(ROS)水平及细胞活力.结果 与A组比较,B组细胞中线粒体细胞色素C氧化酶活性下降,ATP水平下降,细胞内活性氧增加,细胞活力下降;C组细胞上述指标与B组细胞相比程度减轻;D组细胞上述指标与B组细胞变化相似.结论 E2可通过受体机制对氧化应激HUVEC的线粒体产生保护作用.     

小鼠脑组织细胞色素Ｃ氧化酶活性、线粒体细胞色素含量与年龄关系

目的：研究小鼠脑细胞色素C氧化酶（Cytochrome C oxidase,CCO）活性、线粒体细胞色素C（Cytochrome C,Cyt C）含量与年龄的关系,为法医学年龄推断提供新的思路。方法：利用紫外分光光度法检测了1、3、6、9、12月龄昆明小鼠的脑组织CCO活性及线粒体Cyt C含量。结果：小鼠脑组织CCO活性、线粒体Cyt C含量,随着年龄增大而逐渐降低。结论：脑组织CCO活性及线粒体Cyt C含量有望用于年龄推断。     

过氧化氢导致线粒体DNA编码细胞色素C氧化酶基因突变与其编码蛋白结构与功能关系的研究

目的探讨过氧化氢(H2O2)导致线粒体DNA(mtDNA)编码细胞色素C氧化酶(COX)基因损伤(突变)后对其编码蛋白结构与功能的影响及两者之间的关系.方法采用生物信息学技术,运用计算机同源模建的方法模拟人天然COX亚单位和其突变体的空间结构,并利用已有的实验数据,结合模建的结果进行了结构、功能的分析、研究.结果在COX Ⅰ的三维结构中突变的部位(残基297～306)位于分子的最外部,而该区域参与了与B亚基(相当于COXⅡ亚基)的作用,该部位的突变使突变部位附近残基的侧链结构环境发生了极大的变化,导致附近的电荷性质、亲疏水性质和空间特性出现变化,这些变化对酶复合物的形成有直接的影响;COXⅡ突变后,组成分子结构的"椅靠"部分和"椅面"部分之间的夹角略有增大,而"椅靠"和"椅面"之间的夹角的变化将会影响整个酶分子的稳定性.结论H2O2导致的mtDNA编码COX Ⅰ、COXⅡ亚基基因突变使其编码的COX蛋白空间结构发生改变,这种改变是其功能改变(如酶蛋白活性下降)的主要原因.     

雌激素对C6神经胶质瘤细胞的作用

目的　从细胞与分子水平观察雌激素受体 (ER)α,β2种亚型在C6神经胶质瘤细胞的表达 ,初步研究雌激素对大鼠C6星形神经胶质瘤细胞的细胞活性、增殖活动和细胞[Ca2 + ]i 水平的影响 .方法　应用细胞培养、免疫细胞化学、RT PCR技术、MTT法、3 H TdR掺入法和激光扫描共聚焦技术 .结果　①C6细胞中检测到ERβ免疫反应阳性物质 ,未发现ERα免疫反应阳性物质 ;②ERβmRNA在C6细胞中有表达 ,未检测到ERαmRNA ;③ 17β estradiol (10 -7～ 10 -5mol·L-1)可显著提高C6细胞活力 ,但对细胞增殖程度无明显的影响 ;④ 17β estradiol (10 -6mol·L-1)作用后数 10s后C6细胞 [Ca2 + ]i荧光强度显著增强 .结论　C6细胞表达ERβ的mRNA与蛋白 ,在神经胶质瘤细胞中ERβ可能是介导雌激素信号传递的关键环节 ;雌激素可发挥细胞保护作用 ;雌激素使细胞 [Ca2 + ]i增加 .     

雌激素对血管平滑肌细胞作用机制的研究进展

雌激素(estrogen,E)是一种主要由卵巢分泌产生的女性激素,它具有改善血液循环、抗动脉粥样硬化、抗心律失常等保护心血管系统方面的效应,同时,对妇女正常心血管功能的维持和调节也具有重要的意义。因此,探讨雌激素对血管平滑肌细胞的作用机制对心血管疾病的预防及绝经后妇女雌激素替代疗法都具有一定的临床指导意义。     

耗竭运动时线粒体心磷脂含量和细胞色素C氧化酶活性的改变

本实验结果显示,大鼠耗竭游泳时,心肌和股四头肌线粒体脂质过氧化水平升高,心磷脂含量下降,并同时测定到细胞色素C氧化酶活性的降低。     

老年性聋大鼠耳蜗COX活性的研究

目的:探讨线粒体呼吸链细胞色素C氧化酶(COX)活性异常在老年性聋发病中的作用机制.方法:免疫组化法检测老年性聋大鼠耳蜗COX活性.结果:与正常对照组相比,实验组老年性聋大鼠耳蜗中COX活性降低.结论:耳蜗组织中COX活性降低在老年性聋的发病中起一定作用.     

阿尔茨海默病转线粒体DNA细胞模型胞质钙稳态的改变

目的观察阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)转线粒体DNA细胞模型胞质游离钙水平,探讨线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)缺陷在AD发病中的作用。方法 将正常青年人、正常老年人和AD患者的血小板分别与无mtDNA细胞融合,建立转mtDNA细胞模型。采用微测量法测定细胞色素C氧化酶(cytochrome C oxidase,COX)的活性;用荧光探针Fluo-3标记胞质内游离钙离子,激光共聚焦显微镜和流式细胞仪观察细胞胞质钙离子荧光强度。结果 AD转mtDNA细胞COX活性与正常老年对照相比差异有统计学意义(P<0.05);静息状态胞质钙离子浓度升高,氧化磷酸化解耦联剂CCCP刺激后胞质钙离子的调节能力明显降低。结论 AD患者线粒体存在COX缺陷,使线粒体钙库功能下降,导致细胞内胞质钙稳态失衡。     

雌激素调节能量代谢的神经元保护作用

大量研究表明雌激素水平降低与老年性痴呆的发生和发展有密切关系。雌激素具有神经保护作用,但其机制尚不明确。本文主要从能量代谢角度,综述了雌激素改善葡萄糖代谢,调节大脑代谢及提高线粒体功能,有效保护神经细胞。应用雌激素或雌激素替代物维护神经系统的功能和防治阿尔茨海默病将是今后一个较长时期的研究课题。     

氯霉素处理对急性缺氧大鼠脑线粒体氧化呼吸功能变化研究

目的通过观察氯霉素处理大鼠急性缺氧暴露后脑线粒体呼吸功能和细胞色素氧化酶(COX)活性变化,了解线粒体基因组表达在缺氧引起线粒体呼吸功能改变中的作用.方法以成年雄性Wistar大鼠建立氯霉素药物处理及高原缺氧模型.应用差速离心法提取脑皮质线粒体,Clark氧电极法测定线粒体呼吸功能,及细胞色素C氧化酶(COX)的活性.结果①急性缺氧24 h后大鼠脑线粒体Ⅲ态呼吸(ST3)、呼吸控制率(RCR)显著降低,呼吸Ⅳ态(ST4)较对照组显著升高;②氯霉素处理加缺氧组大鼠脑线粒体ST3较对照组显著降低,ST4较对照组、单纯缺氧、氯霉素组比较均显著降低,RCR与对照组比较显著降低,但高于单纯缺氧、氯霉素组;③单纯缺氧、氯霉素处理组脑组织COX活性显著降低,而氯霉素处理加缺氧组较单纯缺氧组COX活性从正常组的65.7%恢复至86.5%.结论①线粒体蛋白合成的抑制可导致线粒体氧化功能障碍,提示线粒体基因组的完整表达在其呼吸功能发挥中的重要作用;②氯霉素处理对缺氧造成的线粒体功能障碍具有保护作用.     

雌激素介导线粒体途径的神经保护作用研究

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是多因素引起的神经退行性疾病,以认知障碍、执行力障碍为主要的临床表现,发病机制有β淀粉样蛋白（β-amyloid,Aβ）级联和tau 蛋白异常学说等。流行病学调查显示绝经后妇女较同龄男性AD 发病率高1.5~3.0 倍,认为与女性绝经后雌激素降低相关,并且研究表明雌激素有神经元保护作用,雌激素或直接或间接地影响线粒体。除此之外,由于线粒体被视为细胞的能量体、兴奋性毒性期间神经元生存力的关键调节剂,因而AD 线粒体机制也成为AD 发病机制的研究领域。Aβ可直接与线粒体膜结合,从而改变线粒体动力学和功能,导致能量代谢异常,最终引起细胞凋亡等一系列链式反应。研究表明线粒体功能障碍会加剧Aβ沉积和tau 蛋白异常磷酸化,而这两种病理反过来又能促进线粒体损伤,通过线粒体依赖性凋亡通路来诱导细胞凋亡。该文就AD 情况下,雌激素通过介导线粒体途径发挥神经保护作用作一综述,以期为AD 防治提供一定的基础理论思路。     

子宫腺肌病雌激素相关发病机制研究进展

子宫腺肌病是一类雌激素相关性疾病.雌激素效应的异常在子宫内膜组织异位于肌层的过程中起重要作用.与雌激素作用相关的因素包括雌激素受体亚型( ERα、ERβ)、孕激素受体亚型(PR-A、PR-B)、雌激素代谢相关酶17-β羟类固醇脱氢酶Ⅰ、芳香化酶细胞色素P450、以及COX2-PGE2-P450arom-雌激素生成存在的...     

线粒体在肝细胞凋亡中的作用及中药对其保护作用

肝细胞凋亡在肝纤维化中有着非常重要的作用,而许多促细胞凋亡信号作用于线粒体,能够改变线粒体通透性,继而导致其蛋白释放入胞质,由此构成线粒体介导的凋亡途径。中药及其有效成分能够从抗氧化、稳定线粒体膜流动性、抑制线粒体膜通透性转变及维持线粒体膜电位稳定等方面发挥线粒体保护作用,从而减少肝细胞的凋亡而发挥抗肝纤维化的作用。现就肝细胞凋亡的线粒体途径及中药保护进行综述。     

Inhibition of microvascular endothelial cell apoptosis by angiopoietin-1 and the involvement of cytochrome C

Background Angiopoietin-1 （Ang-1） is an endothelial-specific growth factor that can promote angiogenesis. Studies demonstrated that Ang-1 can inhibit apoptosis of umbilical endothelial cells, but so far little is known about its effects on apoptosis of microvascular endothelial cells. With the apoptotic model of murine- cerebral-derived microvascular endothelial cells （bEnd.3） induced by serum-free culture,we attempted to clarify the molecular mechanism of bEnd.3 apoptosis, particularly its relation to cytochrome C （Cyt C）. Methods The cultured microvascular endothelial cell strain, bEnd.3 cell, was employed. An apoptotic model of bEnd.3 was established by serum-free culture. Flow cytometry after Annexin labeling and PI staining were used to assess the apoptotic effects of Ang-1 on bEnd.3, and the expression of Bax/Bcl-2, caspase 8, caspase 3, and Cyt C were detected with Western blotting and ELISA. Results The apoptotic rate of bEnd.3 cells after stimulation with Ang-1 （100 ng/L） in serum-free medium was significantly higher than that in control group. Ang-1 inhibited early-stage apoptosis more than late-stage apoptosis provided by propidium iodide （PI） and AnnexinV double staining. The inhibition of Ang-1 on bEnd.3 cell apoptosis was strengthened with the increase in concentration （0-400 ng/ml）. Ang-1 could decrease the expression of Bax, caspase3 and 8, and increase that of Bcl-2. The results of ELISA indicated that Ang-1 significantly decreased CytC content in cytoplasm and increase that in mitochondria. Conclusions Ang-1 could inhibit bEnd.3 apoptosis induced by serum-free medium culture. The apoptosis was associated with decreased Bax expression, increased Bcl-2 expression, which result in Cyt C transferring from mitochondria to cytoplasm, and then caspases activation are reduced and cell apoptosis is suppressed.