PDE5抑制剂对异丙肾上腺素诱导乳鼠心肌细胞肥大的作用

目的 探讨磷酸二酯酶5（PDE5）抑制剂对异丙肾上腺素（Iso）所致的乳鼠心肌细胞肥大的保护作用。 方法 分离大鼠乳鼠心肌细胞,分为对照（Con）组,Iso组及异丙肾上腺素+西地那非（Iso+Sil）组,通过检测各组细胞活力及乳酸脱氢酶（LDH）含量,确定Sil的后续实验浓度,通过RT-PCR检测心肌肥大指标心房钠尿肽(ANP)和β-肌球蛋白重链(β-MHC) mRNA含量、流式细胞计数检测凋亡情况及Western blot检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）水平。 结果 与Con组相比,Iso组细胞活力降低（P<0.01）,LDH的释放增加（P<0.05）。与Iso组相比,一定浓度Sil预处理可以提高细胞活力及减少LDH的释放（P<0.05）,在5 μmol/L Sil预处理时达到最大效应。与Con组相比,Iso组增加ANP和β-MHC mRNA的表达、上调凋亡比率以及增加GRP78和CHOP的蛋白水平。与Iso组相比,Sil预处理可以降低ANP和β-MHC mRNA的表达,下调凋亡比率以及抑制GRP78和CHOP的蛋白表达。 结论 PDE5抑制剂Sil可以有效抑制Iso诱导的乳鼠心肌细胞肥大,其机制可能与凋亡和内质网应激的下调有关。     

高糖对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞GLP-1受体表达影响及机制研究

目的 探索高糖对缺氧/复氧（H/R）乳鼠心肌细胞胰高血糖样肽-1受体（GLP-1R）表达的影响及其分子机制。 方法 培养乳鼠心肌细胞建立高糖H/R损伤模型,随机将心肌细胞分为对照（正常血糖）组、正常血糖＋H/R组、正常血糖＋GLP-1激动剂（Exentin-4）处理组、高糖组、高糖＋H/R组、高糖＋H/R＋Exentin-4处理组。Western blot观察高糖H/R后GLP-1R表达变化情况。RT-PCR和Western blot观察各组细胞H/R损伤的氧化应激标志物NOX4、p22phox表达变化;Western blot检测高糖条件下蛋白激酶C（PKC）表达,并观察PKC激动剂PMA和或PKC抑制剂Go 6983处理后GLP-1R表达及NOX4、p22phox表达变化。 结果 正常血糖条件下,H/R后心肌细胞氧化应激加重（P<0.05）,Exendin-4降低氧化应激损伤（P<0.05）;与正常血糖H/R组相比,高糖H/R组氧化应激损伤加重（P<0.05）,而Exendin-4对高糖条件下抗氧化应激作用无明显改善。与正常血糖组相比,高糖组PKC表达升高（P<0.05）,参与心肌细胞GLP-1R表达下降,抑制PKC活性可部分恢复Exendin-4高糖条件下抗氧化应激作用（P<0.05）。 结论 高糖条件下GLP-1R表达下降,PKC参与其表达下降,抑制PKC活性可部分恢复Exendin-4高糖条件下抗氧化应激作用。     

抑制鞘氨醇激酶-2活性加重血管紧张素II诱导的心肌细胞肥大

目的 本实验旨在明确鞘氨醇激酶（sphingosine kinase,SphK）2在血管紧张素（angiotensin,Ang）II诱导的心肌细胞肥大中的作用。方法 分离并体外培养SD乳鼠心肌细胞。给予AngII（10 μmol/L）处理24h诱导心肌细胞肥大。AngII刺激时分别给予溶媒或SphK2特异性抑制剂ABC294640（1 μmol/L）共处理。采用蛋白免疫印迹法检测心肌细胞SphK2蛋白表达。采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbant assay,ELISA）检测心肌细胞细胞核1-磷酸鞘氨醇（sphingosine 1-phosphate,S1P）水平。采用结晶紫染色观察AngII诱导的心肌细胞肥大程度。采用实时定量聚合酶链式反应（real time-polymerase chain reaction,RT-PCR）检测心肌细胞肥大标志基因心房钠尿肽（atrial natriuretic peptide,ANP）、脑钠尿肽（brain natriuretic peptide,BNP）和β-肌球蛋白重链（β-myosin heavy chain,β-MHC）mRNA表达水平。结果 与对照组比较,AngII处理上调心肌细胞SphK2蛋白表达和S1P浓度（均P<0.05）,并增加心肌细胞横截面积与ANP、BNP和β-MHC mRNA表达水平（均P<0.05）。与溶媒组比较,ABC294640处理显著降低了心肌细胞核S1P浓度,并进一步增加了AngII处理后的心肌细胞横截面积和肥大标志基因mRNA表达水平（均P<0.05）。结论 抑制SphK2活性加重AngII诱导的心肌细胞肥大。SphK2有可能成为治疗病理性心肌肥大的新靶点。     

胆固醇酯转运蛋白在家兔心脏肥大中表达的实验研究

目的 复制异丙肾上腺素致家兔心脏肥大模型,考察胆固醇酯转运蛋白（CETP）的表达变化。 方法 将雄性新西兰兔随机分为正常组和模型组。模型组采用腹腔注射异丙肾上腺素15 mg/(kg·d)（分早晚2次进行）建立家兔心脏肥大模型,正常组腹腔注射等体积的生理盐水,连续14 d后,取血、心脏和肺脏,分离左、右心室,考察脏器指数;HE染色观察心肌组织形态学改变;RT-PCR法检测心脏肥大相关胚胎基因ANP、β-MHC mRNA表达;检测血清TG、TC、LDL-C及HDL-C的含量;检测左心室CETP的mRNA水平、蛋白表达及含量。 结果 与正常组比较,模型组家兔心脏质量指数（HW/BW）和左心室质量指数（LVW/BW）显著增加（P<0.05）,右心室质量指数（RVW/BW）和肺脏质量指数（LW/BW）有增加的趋势,左心室心肌细胞体积明显增大,间质增宽,左心室ANP、β-MHC的mRNA表达显著上调（P<0.05）。与正常组比较,模型组家兔血清TG含量显著升高（P<0.05）,TC、LDL-C水平呈升高趋势,HDL-C水平呈下降趋势,模型组家兔左心室组织中CETP mRNA水平和蛋白表达均显著上调（P<0.05）,CETP含量显著增加（P<0.05）。 结论 在异丙肾上腺素诱导的家兔心脏肥大模型中,CETP表达上调,但其是否与心脏肥大有关还有待进一步深入研究。本研究结果为后续研究CETP与心脏肥大的关系提供了理想动物模型。     

微小RNA-34a调控高糖诱导H9c2心肌细胞凋亡的初步研究

目的探讨微小RNA-34a(miR-34a)对高糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响。方法将培养的H9c2心肌细胞随机分为3组:正常组(葡萄糖浓度5.5mmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度33mmol/L),抑制剂组(miR-34a抑制剂浓度50nmol/L+葡萄糖33mmol/L)。采用定量PCR检测miR-34a和凋亡相关基因Bcl-2基因表达的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2表达的变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡。结果与正常组比较,高糖组心肌H9c2细胞凋亡率明显升高(P<0.05),H9c2细胞miR-34a表达显著上调(P<0.05),H9c2细胞Bcl-2mRNA和蛋白表达减少(P<0.05)。与高糖组比较,抑制剂组H9c2细胞凋亡明显下降(P<0.05),H9c2细胞Bcl-2mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论 miR-34a能调控高糖所致的H9c2心肌细胞凋亡,可能是通过直接抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达而实现的。     

长链非编码RNA SNHG15可通过靶向miR-24-3p/Atg12减轻缺氧诱导的心肌细胞损伤

目的 探讨长链非编码RNA （lnc RNA） 小核仁RNA宿主基因15（SNHG15）通过miR-24-3p/Atg12对缺氧诱导的心肌细胞损伤的影响。 方法 采用RT-qPCR检测 SNHG15和miR-24-3p在缺氧诱导的心肌细胞中表达,细胞设为对照组、缺氧组、缺氧+si-SNHG15组、缺氧+si-NC组、缺氧+miR-24-3p inh组、缺氧+inh-NC组、si-SNHG15+miR-24-3p inh组。采用MTT法、流式细胞术、Caspase-3试剂盒和Transwell法检测SNHG15和miR-24-3p对心肌细胞增殖、凋亡和迁移的影响,目的基因预测与筛选、荧光素酶报告基因检测验证SNHG15和miR-24-3p下游目的基因,Western blot检测Atg12蛋白及相关自噬基因的表达。 结果 随着过氧化氢处理持续时间的延长,心肌细胞内SNHG15水平明显升高,miR-24-3p水平明显降低,且呈时间依赖性（P<0.05）;与对照组相比,缺氧组细胞活力、迁移和侵袭性明显降低（P<0.05）,Caspase-3活性和细胞凋亡率均明显增加（P<0.05） ;与缺氧组相比,缺氧+si-SNHG15组细胞活力、迁移和侵袭性明显升高（P<0.05）,Caspase-3活性和细胞凋亡率均明显降低（P<0.05） ;miR-24-3p与SNHG15呈负相关,通过在线软件预测miR24-3p与SNHG15、Atg12可能的靶点,并用荧光素酶检测,结果显示,miR-24-3p与SNHG15、Atg12存在靶向调控关系;与缺氧组相比,缺氧+miR-24-3p inh组细胞活力、迁移和侵袭性明显降低（P<0.05）,Caspase-3活性和凋亡率明显升高（P<0.05）;与缺氧+miR-24-3p inh组相比,si-SNHG15+miR-24-3p inh组细胞活力、迁移和侵袭性明显升高（P<0.05）,Caspase-3活性和凋亡率明显降低（P<0.05）;与对照组相比,缺氧组Atg12、LC3蛋白的表达明显上调,p62表达明显下调（P<0.05）;与缺氧组相比,缺氧+miR-24-3p inh组Atg12蛋白和LC3表达均明显上调,p62表达明显下调（P<0.05）,与缺氧+miR-24-3p inh组相比,si-SNHG15+miR-24-3p inh组Atg12蛋白和LC3表达均明显下调,p62表达明显上调（P<0.05）。 结论 lnc RNA SNHG15可以通过调控miR-24-3p/Atg12轴来调控心肌细胞的增殖,减轻缺氧诱导的心肌细胞损伤。     

过表达Fas激活的丝氨酸/苏氨酸激酶减轻缺氧/复氧损伤导致的心肌细胞线粒体呼吸功能障碍

目的 研究Fas激活的丝氨酸/苏氨酸激酶（Fas-activated serine/threonine kinase,FASTK）在缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation, H/R）损伤导致的心肌细胞线粒体呼吸功能障碍中的作用。 方法 分离(1?2)d的野生C57BL/6小鼠原代心肌细胞并进行体外培养。转染对照或FASTK过表达的腺病毒后,心肌细胞接受H/R损伤。分别采用Western blot和RT-PCR检测FASTK蛋白和mRNA表达水平,采用Seahorse能量分析仪检测心肌细胞线粒体呼吸功能,采用caspase-3活性检测试剂盒、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活性检测试剂盒、MTT细胞活力检测试剂盒评估心肌细胞存活情况。 结果 较常氧组,H/R损伤导致心肌细胞FASTK蛋白和mRNA表达显著降低（均P<0.01）。转染FASTK过表达腺病毒可显著上调心肌细胞FASTK蛋白和mRNA水平（均P<0.01）。H/R损伤抑制心肌细胞基础和最大线粒体氧耗率并降低三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）生成速率（均P<0.01）,而FASTK过表达可显著减轻H/R导致的线粒体呼吸功能障碍（均P<0.001）。FASTK过表达抑制了caspase-3活化,也显著减轻了H/R损伤导致的心肌细胞死亡和LDH释放（均P<0.001）。 结论 过表达FASTK可显著减轻H/R损伤导致的心肌细胞线粒体呼吸功能障碍。     

大鼠甲状旁腺素对体外培养心室肌细胞的促肥大作用

目的 观察不同浓度大鼠甲状旁腺素1-34（rat parathyroid hormone 1-34,rPTH1-34）对体外培养心室肌细胞的致肥大作用,观察细胞外信号调节激酶1/2（extracellular signal regulated kinases 1/2,ERK1/2）的变化。方法 体外培养新生大鼠心室肌细胞,以1×10-8～1×10-6 mol/L rPTH1-34分别孵育24 h,测定细胞直径、3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入率、心房钠尿肽（atrial natriuretic peptide,ANP）mRNA、ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达。结果 与正常组相比,1×10-8 mol/L rPTH 1-34可使体外培养的心肌细胞直径、细胞蛋白合成速率轻度增加,ANP mRNA表达轻度升高,但无统计学意义;1×10-7,1×10-6 mol/L rPTH1-34 均可显著增加心肌细胞直径（P<0.01）,细胞蛋白合成速率（P<0.01）和ANP mRNA表达（P<0.01）。与正常组比较,PTH呈浓度依赖性地增加了ERK1/2和p-ERK1/2的表达（P<0.01）。结论 1×10-7,1×10-6 mol/L rPTH1-34能在体外诱导新生大鼠心室肌细胞发生肥大反应,且呈一定的浓度依赖性;PTH能呈浓度依赖性地刺激心肌ERK1/2过度表达。     

Perilipin 5缺失导致线粒体功能异常加剧肥胖小鼠心肌的氧化应激损伤

目的 探讨Perilipin 5缺失是否会导致小鼠的线粒体功能异常,从而加剧肥胖小鼠心肌的氧化应激损伤。 方法 对各组小鼠心脏进行超声分析,对心肌组织进行HE染色观察心肌肥厚程度,检测心肌组织中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）水平,Western blot检测心肌组织线粒体以及胞质内 Cytochrome C蛋白的表达水平。 结果 与ob/ob小鼠对比,ob/ob/Plin5-/-小鼠心脏LVEF、LVIDd进一步降低（均P<0.05）,LVIDs进一步增大（P<0.01）,心肌细胞横截面积（P<0.05）和LVPWd进一步增大（P<0.05）,MDA进一步上升（P<0.01）,SOD进一步下降（P<0.05）,心肌线粒体 Cytochrome C蛋白表达明显降低（P<0.01）,胞质中 Cytochrome C蛋白表达明显升高（P<0.01）。 结论 Plin5的缺失可能通过干扰线粒体功能,加剧肥胖小鼠心肌的氧化应激损伤,进而引起小鼠心脏功能的进一步损害。     

敲低Spectrinβ Ⅱ加重棕榈酸诱导的心肌细胞损伤

目的 研究血影蛋白β Ⅱ（Spectrin βⅡ）在棕榈酸诱导的小鼠原代心肌细胞DNA损伤和细胞凋亡中的作用。 方法 ①Western blot检测棕榈酸处理后小鼠原代心肌细胞Spectrin β Ⅱ表达量变化。②分别用Ad-sh-scramble（对照组）和Ad-sh-Spectrin β Ⅱ（Spectrin β Ⅱ干涉组）的腺病毒感染小鼠原代心肌细胞,荧光显微镜下观察病毒的感染效率。利用Western blot和qPCR检测Spectrin β Ⅱ的干涉效率。③Western blot检测棕榈酸处理后Ad-sh-scramble组和Spectrin β Ⅱ干涉组小鼠原代心肌细胞DNA损伤指标γ-H2AX及凋亡蛋白剪切型半胱天冬酶3(cleaved-caspase 3)的表达,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡水平。 结果 ①给予棕榈酸处理的小鼠原代心肌细胞Spectrin β Ⅱ蛋白水平显著降低（P<0.05）。②与Ad-sh-scramble组相比,Ad-sh-Spectrin β Ⅱ组Spectrin β Ⅱ的蛋白和mRNA水平均显著降低（P<0.05）③给予棕榈酸处理后,与Ad-sh-scramble组相比,Ad-sh-Spectrin β Ⅱ组的γ-H2AX2和cleaved-caspase 3蛋白表达显著升高（P<0.05）,并且细胞凋亡率显著升高（P<0.05）。 结论 敲低Spectrin β Ⅱ加重棕榈酸诱导的小鼠原代心肌细胞DNA损伤和细胞凋亡。     

U50，488H抑制心肌细胞缺氧/复氧诱导Drp1线粒体转位的作用及机制

目的 研究κ-阿片受体（κ-OR）激动剂U50,488H对缺氧/复氧（H/R）原代心肌细胞Drp1线粒体转位的作用与机制。 方法 将心肌细胞共分为6组,分别为常氧（Control）组、H/R组、H/R+U50,488H组、Control+Scramble RNAi组、H/R+Scramble RNAi组、H/R+Mid51 RNAi组。利用CCK-8试剂盒检测细胞活力;AnnexinV、PI试剂盒检测细胞凋亡;采用激光共聚焦显微镜观察线粒体的形态变化和Drp1与线粒体共定位情况,Western blotting检测细胞内线粒体外膜Drp1相关结合蛋白（Fis1、Mff、Mid49和Mid51）的表达水平。 结果 与常氧组相比,H/R组细胞凋亡与死亡率明显增加（P<0.01）,线粒体分裂明显增加（P<0.01）,Drp1的线粒体转位明显增多,Mid51表达显著上调（P<0.01）,但Fis1、Mff与Mid49的表达无明显差异;而κ-OR激动剂U50,488H可降低H/R后细胞凋亡与死亡率（P<0.01）,抑制线粒体分裂（P<0.01）,减少Drp1与线粒体的结合同时下调Mid51的表达水平（P<0.01）,但Fis1、Mff与Mid49的表达无明显变化;进一步研究发现,敲低Mid51可降低H/R后细胞凋亡与死亡率（P<0.01,P<0.05）,抑制线粒体的分裂（P<0.01）,减少Drp1的线粒体的转位。 结论 H/R可引起线粒体分裂与心肌细胞损伤,激活κ-OR可通过下调Mid51抑制Drp1的线粒体转位,进而抑制线粒体分裂,从而减轻H/R损伤。     

视黄酸相关孤核受体α对脓毒症小鼠心肌损伤的影响

目的 本研究旨在探索视黄酸相关孤核受体α（RORα）对脓毒症炎症反应及其所致的心脏功能损害影响。 方法 通过腹腔注射脂多糖（LPS）建立小鼠脓毒症模型，通过LPS刺激巨噬细胞，建立脓毒症细胞模型，采用细胞转染和小鼠尾静脉注射过表达质粒，以在细胞和组织中过表达RORα，进而探究RORα在脓毒症炎症反应和脓毒症所致心肌损伤中的作用。采用实时定量PCR试验、蛋白免疫印记试验检测RORα、NF-κB p65和炎症因子的变化，采用酶联免疫试验、病理切片等检测脓毒症小鼠心肌损伤的变化。 结果 RORα在LPS刺激巨噬细胞中显著降低（P<0.05）；过表达RORα能够显著抑制LPS刺激巨噬细胞中炎症因子白介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子 (TNF)-α的表达（P<0.05）、NF-κB p65的核移位水平（P<0.05）、脓毒症小鼠血清中炎症因子IL-1β和TNF-α的释放、降低脓毒症小鼠肌酸激酶同工酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）的含量以及改善脓毒症所致的心肌病理损害。 结论 RORα能够通过抑制NF-κB p65的核移位进而负性调控LPS刺激巨噬细胞中的炎症反应，从而缓解脓毒症小鼠的炎症反应及心肌损害。     

辛伐他汀对高浓度葡萄糖诱导心肌细胞炎症反应的干预作用及机制研究

目的 （1）观察高浓度葡萄糖对心肌细胞的作用,探讨高浓度葡萄糖损伤心肌的可能机制;（2）观察辛伐他汀对高浓度葡萄糖刺激下心肌细胞炎症因子表达的影响,并探讨其可能机制。方法 （1）取SD乳鼠心肌细胞做原代培养。（2）阴性对照组（blank）:培养基中不加任何刺激物,培养72小时。（3）阳性对照组（positive control）:培养基中加入终浓度为25 mmol/L的高浓度葡萄糖刺激乳鼠心肌细胞,培养72小时。（4）甲羟戊酸对照组（MVA）:培养基中加入终浓度为25 mmol/L的高浓度葡萄糖和终浓度为200 umol/L的甲羟戊酸,培养72小时。（5）辛伐他汀干预组（Sim）:培养基内加入终浓度为25 mmol/L的高浓度葡萄糖,同时分为三组并分别加入浓度为10^-5 mol/L、10^-6mol/L、10^-7mol/L辛伐他汀培养72小时。（6）辛伐他汀+甲羟戊酸干预组（Sim+MVA）:培养基中加入终浓度为25mmol/L的高浓度葡萄糖,终浓度为10-5 mol/L的辛伐他汀和终浓度为200 umol/L的甲羟戊酸,培养72小时。（7）收集各组心肌细胞培养基上清液,用ELISA法测各组TNF-α、ICAM-1、MCP-1的表达;收集各组心肌细胞,用MTT法测定心肌细胞活力,RT-PCR法测心肌细胞AT1RmRNA、AT2R mRNA表达。结果 （1）与空白对照组比较,阳性对照组、MVA组心肌细胞活力显著下降（P<0.01）,TNF-α、ICAM-1、MCP-1表达均明显增加（P<0.01）。（2）与阳性对照组比较,辛伐他汀组心肌细胞活力明显提高（P<0.01）,TNF-oα、ICAM-1、MCP-1表达明显降低（P<0.05或P<0.01）,且呈浓度依赖性;加入甲羟戊酸后（Sim+MVA组）,上述指标与阳性对照组比较无统计学差异。（3）与阳性对照组比较,辛伐他汀组[Sim(10^-5mol/L)组和Sim(10^-6mol/L)组]心肌细胞AT1R mRNA表达显著降低（P<0.05）,AT2R mRNA表达轻度增加（P<0.05）。（4）AT1RmRNA表达与TNF-α表达呈正相?     

泛素蛋白酶体抑制剂抑制钙调神经磷酸酶依赖的心肌细胞肥大

目的 研究泛素蛋白酶体抑制剂MG262对钙调神经磷酸酶信号通路的影响,探讨其抑制心肌细胞肥大的机制。方法 在去甲肾上腺素诱导培养的乳鼠肥大心肌细胞中加入MG262,通过Phalloidin染色观察细胞的形态,RNA Dot Blot检测胚胎蛋白基因表达,Western blot检测细胞中钙调神经磷酸酶蛋白含量,免疫荧光标记观察活化T细胞核因子c4（NFATc4）蛋白在细胞内分布。结果 去甲肾上腺素使细胞面积增大近1.1倍,胚胎基因心房利钠因子（ANF）、脑钠肽（BNP）、β肌球蛋白重链（β-MHC）的mRNA表达上调,细胞核内NFATc4蛋白表达水平增加。MG262明显抑制去甲肾上腺素诱导的细胞肥大（P<0.05）和ANP、BNP、β-MHC的mRNA表达上调（P<0.05）,细胞面积下降了33%;同时MG262使去甲肾上腺素诱导的细胞钙调神经磷酸酶蛋白表达水平下降,抑制NFATc4核内转位。结论 MG262可能通过抑制钙调神经磷酸酶信号通路,减轻心肌细胞肥大。     

甲状旁腺素对新生大鼠心肌细胞肥大反应及其凋亡的影响

摘要：目的观察甲状旁腺素1-34（PTHl-34）对新生大鼠心肌细胞肥大反应和凋亡的影响。方法将原代培养新生大鼠心肌细胞分为对照组及低、中、高剂量组,对照组加入PBS缓冲液,低、中、高剂量组分别加人终浓度为0．1、1．0、10．0μmol／L的PTHl-34,孵育24h。采用LS-6500液体闪烁仪检测各组心肌细胞3 H-亮氨酸（Leu）掺人量,ELISA法检测心房利钠尿肽（ANP）和Caspase-3,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果与对照组比较,低剂量组’H-Leu掺人量和ANP水平升高,中、高剂量组’H-Lea掺入量、ANP水平、Caspase-3水平、凋亡率升高（P均〈0．05）;与中剂量组比较,高剂量组3H-Leu掺入量、ANP水平降低,Caspase-3水平、凋亡率升高（P均〈0．05）。结论低浓度PTHl-34可诱导新生大鼠心肌细胞肥大反应,较高浓度PTHl-34还可诱导心肌细胞凋亡。     

MEK信号通路参与PTEN对心肌细胞肥大的负性调控

目的探讨第10号染色体上同源丢失的磷酸酶张力蛋白（PTEN）基因的过度表达对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌肥大的负性调控机制。方法通过携带野生型PTEN基因的腺病毒（Ad-PTEN）感染,构建过度表达PTEN的原代培养的心肌细胞模型。以AngⅡ为促心肌肥大的刺激剂,采用RT-PCR检测受感染细胞内心房钠尿肽（ANP）、β肌球蛋白重链（β-MHC）mRNA的表达,用Western blot检测细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）和磷酸化ERK1/2（pERK1/2）蛋白的表达。结果Ad-PTEN感染后,心肌细胞内过度表达的PTEN mRNA和其蛋白,可明显抑制AngⅡ刺激所致心肌细胞肥大标志基因的表达。AngⅡ刺激可使ERK1/2与pERK1/2蛋白的表达明显增高;但PTEN的过度表达能明显抑制AngⅡ引起的ERK1/2与pERK1/2蛋白的表达。结论PTEN能够负性调控AngⅡ刺激引起的心肌细胞肥大,MEK1/ERK1/2信号通路可能参与了PTEN的负性调控过程。     

微小RNA-1负性调控L-钙通道β_2亚基抑制心肌细胞肥大的机制研究

目的:研究微小RNA-1(miR-1)对L-钙通道β2亚基的调控作用及对心肌细胞肥大的影响。方法:ISO诱导心肌细胞肥大。qRT-PCR和Western blot法分别检测心肌细胞ANP、β-MHC、miR-1和β2亚基mRNA和蛋白表达水平。应用Targetscan预测miR-1的靶基因。构建的重组质粒和miR-1共转染HEK293细胞。转染miR-1mimic使其过表达。RNAi干扰β2蛋白表达。激光共聚焦显微镜检测心肌细胞内钙离子浓度。结果:①ISO诱导心肌细胞肥大时,miR-1表达明显降低;转染miR-1mimic使其过表达,心肌细胞表面积、ANP和β-MHC mRNA表达均显著降低。②Targetscan预测显示,L-钙通道β2亚基为miR-1的潜在靶基因;将miR-1和含β23′UTR报告基因共转染HEK293细胞,其萤光值显著降低;转染miR-1mimic使其过表达,可明显抑制β2蛋白的表达。③ISO诱导心肌细胞肥大时,β2蛋白表达明显增加;RNAi干扰β2蛋白表达可明显抑制心肌细胞表面积、ANP和β-MHC mRNA表达的增加;④转染miR-1mimic使其过表达或RNAi干扰β2蛋白表达,心肌细胞内钙离子浓度均明显降低。结论:L-钙通道β2亚基为miR-1的靶基因。MiR-1可能通过负性调控L-钙通道β2亚基的表达,降低细胞内钙离子浓度,抑制心肌细胞肥大。     

微小RNA-146a转染的H9c2心肌细胞高糖培养下核因子-κcBp65和Ⅰ型胶原的表达

目的 观察微小RNA（miRNA）-146a转染H9c2心肌细胞高糖培养下NF-κBp65和Ι型胶原表达。 方法 高糖培养H9c2细胞系,分为增强组（EC）、阴性对照组（NC）、空白对照组（BC）。采用Lipofectamine 2000 Transfection Reagent分别转染miRNA-146a增敏剂（50 nmol/L）、错义链（50 nmol/L）、PBS,于48 h后Real-time PCR测定miRNA-146a水平,Western-blot测定NF-κBp65和Ⅰ型胶原水平。 结果 转染后,EC组H9c2细胞miRNA-146a水平高于NC组和BC组（P〈0.05）,NF-κBp65和Ⅰ型胶原蛋白表达量低于NC组和BC组（P〈0.05）。 结论 miRNA-146a参与了高糖培养H9c2心肌细胞纤维化,其机制与NF-κBp65和Ι型胶原表达有关。