CCR5基因32个碱基缺失突变的分子流行病学调查

目的 调查蒙古、藏、维吾尔、壮、彝、傣族6个少数民族人群CCR5-Δ32等位基因的突变率和CCR5基因在细胞表面的表达，及其在汉族人群中的分布状况。方法 每个民族抽取10份标本，采用全血基因组DNA提取方法提取DNA，运用PCR法检测CCR5-Δ32等位基因突变率和流式细胞术检测CCR5基因在细胞表面的表达，运用0ne—way ANOVA(SPSS l0．0)进行统计学分析。结果 70份不同民族标本中，发现1例杂合子(维吾尔族)，其余均为野生型纯合子。傣族人群的CD3^ CCR5^ 和CD4^ CCR5^ 表达百分数明显高于其他6个民族(P＜0．01)。结论 7个民族人群中CCR5-Δ32等位基因突变率很低，提示该人群对嗜巨噬细胞的HIV—1感染的遗传易感性较强，尤以傣族人群更易感。     

趋化因子受体7基因绿色荧光慢病毒载体构建及在未成熟树突状细胞中的表达

背景：趋化因子受体7（chemokine receptor-7,CCR7）是树突状细胞从外周迁移至淋巴系统发挥作用的最重要的启动和调节者,但未成熟树突状细胞表面不表达CCR7,因此利用携带CCR7基因的未成熟树突状细胞可以更好地诱导免疫耐受。目的：构建携带小鼠CCR7基因的绿色荧光蛋白重组慢病毒载体,观察其在未成熟树突状细胞中的表达。方法：采用RT-PCR扩增小鼠CCR7基因并克隆至pCR-Blunt载体。将CCR7DNA片段及IRES-GFP连入慢病毒转移质粒LV-Lac,生成重组慢病毒质粒LV-CCR7。采用脂质体转染法将慢病毒系统3质粒（重组慢病毒质粒LV-CCR7、包装质粒ΔNRF及包膜质粒pVSVG）共转染包装慢病毒,重组慢病毒感染未成熟树突状细胞,光学显微镜观察细胞状态,流式细胞术鉴定CCR7蛋白的表达。结果与结论：实验成功扩增出小鼠CCR7DNA片段并克隆至pCR-Blunt载体,亚克隆构建慢病毒表达载体LV-CCR7,经3质粒包装系统感染293FT细胞后,24h于荧光显微镜下均观察到绿色荧光蛋白阳性表达,病毒滴度为108U/L以上,获得携带CCR7基因的重组慢病毒。慢病毒颗粒可有效感染未成熟树突状细胞,荧光显微镜可见大量GFP蛋白表达,阳性细胞达50%,流式细胞术检测到CCR7蛋白表达,LV-CCR7基因修饰的未成熟树突状细胞仍保持在未成熟状态。结果证实,实验成功构建携带小鼠CCR7基因绿色荧光慢病毒载体LV-CCR7,并可在未成熟树突状细胞细胞中表达。     

趋化因子受体7基因绿色荧光慢病毒载体构建及在未成熟树突状细胞中的表达

背景:趋化因子受体7(chemokine receptor-7,CCR7)是树突状细胞从外周迁移至淋巴系统发挥作用的最重要的启动和调节者,但未成熟树突状细胞表面不表达CCR7,因此利用携带CCR7基因的未成熟树突状细胞可以更好地诱导免疫耐受。目的:构建携带小鼠CCR7基因的绿色荧光蛋白重组慢病毒载体,观察其在未成熟树突状细胞中的表达。方法:采用RT-PCR扩增小鼠CCR7基因并克隆至pCR-Blunt载体。将CCR7DNA片段及IRES-GFP连入慢病毒转移质粒LV-Lac,生成重组慢病毒质粒LV-CCR7。采用脂质体转染法将慢病毒系统3质粒(重组慢病毒质粒LV-CCR7、包装质粒ΔNRF及包膜质粒pVSVG)共转染包装慢病毒,重组慢病毒感染未成熟树突状细胞,光学显微镜观察细胞状态,流式细胞术鉴定CCR7蛋白的表达。结果与结论:实验成功扩增出小鼠CCR7DNA片段并克隆至pCR-Blunt载体,亚克隆构建慢病毒表达载体LV-CCR7,经3质粒包装系统感染293FT细胞后,24h于荧光显微镜下均观察到绿色荧光蛋白阳性表达,病毒滴度为108U/L以上,获得携带CCR7基因的重组慢病毒。慢病毒颗粒可有效感染未成熟树突状细胞,荧光显微镜可见大量GFP蛋白表达,阳性细胞达50%,流式细胞术检测到CCR7蛋白表达,LV-CCR7基因修饰的未成熟树突状细胞仍保持在未成熟状态。结果证实,实验成功构建携带小鼠CCR7基因绿色荧光慢病毒载体LV-CCR7,并可在未成熟树突状细胞细胞中表达。     

趋化因子受体CCR5与移植物抗宿主病

趋化因子受体CCR5(CC chemokine receptor 5)是G蛋白偶联受体超家族的一员,主要表达在机体多种免疫细胞表面。CCR5依赖与其特异性配体的结合而发挥生物学作用,在细胞的生长、活化、分化、粘附及定向迁移等方面起着重要作用。CCR5是人免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type-1,HIV-1)入侵人体的重要辅助受体之一,参与病毒与T细胞结合的过程。靶向CCR5的治疗不仅具有抗病毒作用,还具有免疫调节作用。研究发现,CCR5不仅在AIDS、自身免疫病、动脉粥样硬化等疾病的致病机制中起作用,在异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,a GVHD)发生发展过程中,同样扮演着重要的角色。大量动物实验证实,CCR5及其配体介导了效应T细胞向GVHD靶器官的迁移与募集。因此,本文就CCR5的结构和功能、内化途径、信号转导通路及其与allo-HSCT后a GVHD的关系作一综述。     

CCR10通过NRF2抑制结直肠癌细胞铁死亡的机制研究

目的 探究C-C趋化因子受体10(C-C chemokine receptor 10,CCR10)在结直肠癌(colorectal cancer, CRC)中对细胞增殖和铁死亡的影响,并探究其影响铁死亡的机制。方法 在GEPIA数据库(Gene Expression Profiling Interactive Analysis)共表达分析CCR10与铁死亡关键基因的相关性。构建慢病毒介导的CCR10过表达(CCR10-OE)、敲除(CCR10-KO)及其阴性对照(NC)稳转HCT116细胞,采用细胞活力(CCK8)、克隆形成和裸鼠成瘤实验检测CCR10过表达或敲除后的细胞增殖。利用CCK8法、流式细胞术检测细胞铁死亡和脂质过氧化,评估CCR10过表达及敲除后细胞对铁死亡诱导剂erastin和rsl3的耐受。利用WB检测CCR10过表达和敲除后铁死亡关键蛋白质的表达。在CCR10敲除细胞株瞬时转染核因子E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,NRF2)质粒,鉴定铁死亡表型以及其下游分子溶质载体家族7成员11(solute Carrier Family 7 Membe...     

在小鼠骨髓移植中CCR5与急性移植物抗宿主病的相关性研究

本研究评价供者CCR5在经过强化预处理的骨髓移植动物模型受者体内的作用,为今后的异基因造血干细胞移植的临床应用提供科学依据.经过致死剂量照射的BALB/c小鼠接受异基因C57BL/6小鼠的骨髓移植.根据回输的细胞不同实验分为4组:B6 CCR5 KO组,受者接受C57BL/6 CCR5-/-小鼠骨髓和脾脏细胞;B6 WT组,受者接受野生型C57BL/6小鼠骨髓和脾脏细胞;B6 CCR5 KO BMC组,受者只接受C57BL/6 CCR5-/-小鼠骨髓细胞;B6 WT BMC组,受者只接受野生型C57BL/6小鼠骨髓细胞.结果表明:较之B6 WT组,B6 CCR5 KO组小鼠以更快的速度死于急性GVHD;其受者体内的CD8+T细胞更大量的增殖;其T细胞恢复后产生更多的INF-γ和TNF-α并且由于其T细胞有丝分裂原刀豆素水平处于较高水平,从而进一步促进T细胞的增殖,提示CCR5的作用之一是下调参与排异反应的供者CD8+T细胞的增殖.组织学评价提示,移植剔除CCR5基因受者细胞的小鼠肾脏出现了病理损伤并且肝脏存在有更为严重的病理变化.结论:剔除CCR5基因的异基因骨髓移植使GVHD发病率的增加,供者CD8+T细胞在受者体内增殖增加以及肝肾损害加重,这提示CCR5在异基因骨髓移植中起着重要作用.     

感染

马里兰急诊医学必知
　　（ Maryland Emergency Medicine Pearls）
　　HIV与动脉粥样硬化
　　Semhar Tewelde
　　抗逆转录病毒治疗的进展显著增加了HIV患者的预期寿命, AIDS相关的死亡自从2005年达到高峰后目前已下降了30％。 HIV感染使机体倾向于一种慢性炎症及免疫失调状态,随后的高效抗逆转录病毒疗法（ HAART）也可导致代谢改变及血脂异常。在高效抗逆转录治疗后期,冠状动脉疾病被认为是导致HIV病毒感染患者心的主要原因,已超过以前最常见的病因,心肌炎及机会性感染。除年龄小外,冠状动脉疾病在HIV感染患者中的表现与一般人群大致相同,一些抗逆转录病毒的特异度蛋白酶抑制剂通常与脂质代谢紊乱有关,并使HIV感染患者的病情进一步复杂化。最近的研究指出, C-C趋化因子受体5（ CCR5）拮抗剂已成为抗逆转录药物治疗以及抗动脉粥样硬化的潜在靶点,但需要更多的研究。     

HIV-慢病毒载体有效转导人肺动脉平滑肌细胞的实验研究

目的使用不同的HIV-载体感染人肺动脉平滑肌细胞,并使用HIV慢病毒载体将外源基因转入人肺动脉平滑肌细胞。方法应用ADA/Luc、HXB2/Luc、VSV-G/Luc和VSV-G/GFP感染人肺动脉平滑肌细胞U87.CD4.CCR5和U87.CD4.CX-CR4。结果ADA/Luc和HXB2/Luc均能感染具有相应复合受体的U87.CD4,但不能感染人肺动脉平滑肌细胞。VSV-G/Luc和VSV-G/GFP能有效转导至人肺动脉平滑肌细胞中,于感染第3天,表达VSV-G/GFP的人肺动脉平滑肌细胞的阳性率为18%。结论应用HIV慢病毒载体能够向人肺动脉平滑肌细胞中导入外源基因。     

病毒感染相关Toll样受体及其基因多态性的种族差异研究进展

Toll样受体（toll-like receptors,TLRs）是哺乳动物先天性模式识别受体,识别病原谱广泛,在人类多个系统感染性疾病中参与信号传递,激活抗感染免疫反应,在感染相关性疾病中发挥重要作用。TLRs参与了天然免疫系统对病毒的识别,在抗病毒感染中发挥重要的作用;近年来对TLRs的表达及在病毒等感染性疾病中的基因多态性、基因变异因种族而异。     

CD81和趋化因子CC受体5与丙型肝炎合并人类免疫缺陷病毒感染的相关性研究

目的 检测外周血CD4＋及CD8＋T淋巴细胞表面CD81、CCR5的表达,探讨与丙型肝炎病毒（HCV）单纯感染、人类免疫缺陷病毒（HIV）单纯感染和HCV/HIV合并感染的关系.方法 采用流式细胞术,检测HCV感染组（n=21）、HIV感染组（n=14）、HCV/HIV感染组（n=28）及正常对照组（n=30）人外周血CD4＋及CD8＋T淋巴细胞表面CD81和CCR5的表达.结果 与正常对照组相比,外周血CD4＋T淋巴细胞表面CD81,在HCV感染组表达变化不明显,而在HIV感染组和HCV/HIV合并感染组中低表达;CD8＋T淋巴细胞表面CD81,在HCV感染组、HIV感染组和HCV/HIV合并感染组中都呈高表达.外周血CD4＋T和CD8＋T淋巴细胞表面CCR5,在HIV感染组高表达,而在HCV感染组和HCV/HIV合并感染组中低表达.结论 HCV/HIV合并感染中,影响外周血CD4＋及CD8＋T淋巴细胞表面CCR5表达的主要因素是HCV感染;而合并感染对CD4＋及CD8＋T淋巴细胞表面CD81的表达,其影响作用是不相同的.     

HIV感染患者CXCR5、HCY、RANTES的表达及相关性分析

目的 分析趋化因子CXCR受体5(CXCR5)、同型半胱氨酸（HCY）、调节活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子（RANTES）在人类免疫缺陷病毒（HIV）感染患者中的表达及相关性。方法 选取HIV感染患者73名为HIV感染组,同期选取70名体检者为对照组。检测两组CXCR5、HCY、RANTES表达,分析CXCR5、HCY、RANTES在HIV感染中相关性。结果 HIV感染组患者血清CXCR5水平低于对照组,血清HCY、RANTES表达高于对照组,差异具有统计学意义（t分别=27.88、-26.48、-66.23,P均<0.05）。TNM分期、分化程度、淋巴结转移、CXCR5、HCY、RANTES为HIV感染发生的影响因素（OR分别=5.07、4.38、5.04、4.88、4.34、5.01,P均<0.05）。CXCR5与HCY、RANTES呈负相关（r分别=-0.10、-0.87,P均<0.05）,HCY与RANTES呈正相关（r=0.33,P<0.05）。结论 CXCR5、HCY、RANTES水平表达与HIV感染存在密切关系,且存在一定相关性。CXCR5、H...     

3种同种异基因混合骨髓移植小鼠〔A＋B＋C→A）的模型

本研究目的为建立 3种异基因小鼠 (BALB/c ,H 2 d;C5 7BL/ 6 ,H 2 b 和CBA/N ,H 2 k)混合骨髓移植模型(A +B +C→A) ,观察此模型能否延长骨髓移植后受体鼠的存活时间。采用受致死量照射的小鼠接受同基因与 2种异基因 3种混合 (比例为 1∶4∶4 )的骨髓移植。同时还观察了 3种混合淋巴细胞培养及 2种不同抗原混合刺激的迟发型超敏反应。结果显示 ,混合骨髓移植的小鼠存活时间明显长于单纯异基因移植的小鼠 ,混合移植组平均存活时间为 5 6 .6± 2 7天 ,最长者为 10 3天 ,而单纯异基因移植的对照组存活时间为 15± 5天 ,两组比较有显著性差异(P <0 .0 0 1) ;3种混合的淋巴细胞培养 ,不管是 2种反应细胞与 1种刺激细胞混合培养 ,还是 1种反应细胞与 2种刺激细胞混合培养 ,均表现明显低于一对一的混合淋巴细胞反应 ,2种混合细胞刺激的迟发型超敏反应亦明显低于1种抗原刺激的反应。结论 :同基因与 2种异基因 3种混合的骨髓移植可使受髓小鼠存活时间明显延长。     

CC族趋化因子受体基因多态性在乙型肝炎肝硬化中的作用

目的 研究CC族趋化因子受体基因多态性与乙型肝炎肝硬化之间的关联及其在乙型肝炎肝硬化发生、发展中的作用.方法 采用聚合酶链反应(PCR)扩增及聚合酶链反应一限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测技术,对121例乙型肝炎肝硬化患者和138例正常人群中CCR5△32、CCR2-64I、CCR5-promoter-59029G/A的基因多态性分布差异进行检测.结果 CCR5△32等位基因突变在肝硬化和正常人群中均很少发生,在121例肝硬化和138例正常人群中均未发现CCR5△32等位基因突变个体.CCR5-promoter-59029A/A基因型的比例在肝硬化人群中较正常人群高(22.3%vs 14.5%,P＜0.05),而对照组中,CCR5-promoter-59029G/G基因型的比例较肝硬化组高(42.O%vs 31.4%,P＜0.05).在肝硬化组中CCR5-promoter-59029G/A基因型的分布在丙氨酸转氨酶(ALT)正常和异常组问的差别具有统计学意义:正常组CCR5-promoter-59029G/G基因型的比例高于酶学异常组(40.4%vs23.4%,P＜0.05),CCR5-promoter-59029A/A基因型的比例较酶学异常组低(15.8%vs 28.1%,P＜0.05).CCR2-64I基因多态性在肝硬化和正常人群中的差异无统计学意义.结论 CCR5-promoter-59029A/A基因型对于肝硬化是不利因素,它增强细胞免疫反应并导致肝细胞炎症加重(ALT升高)从而促进肝硬化的发展.     

羊水细胞低密度脂蛋白受体基因突变分析在家族性高胆固醇血症产前诊断中应用

目的探讨羊水细胞低密度脂蛋白受体（low density lipoprotein receptor,LDLR）基因突变分析在家族性高胆固醇血症（familial hypercholesterolemia,FH）产前诊断中的应用价值。方法 3例曾生育FH重症患儿并再次妊娠的妇女及其核心家系成员,提取其外周血基因组DNA,筛查LDLR基因突变;于妊娠16～20周在超声引导下行羊膜腔穿刺术抽取羊水,提取胎儿脱落细胞DNA,分别对家系存在的LDLR基因突变进行检测,判断胎儿是否为重症FH。结果 3个家系均符合FH诊断,并分别在LDLR基因检测到2个互不相同的杂合突变位点;胎儿LDLR基因核苷酸序列分析证实,1号家系胎儿仅携带该家系1个突变位点判断为杂合（轻症）,2号家系胎儿携带该家系2个突变位点判断为复合杂合（重症）,3号家系胎儿未检到该家系的突变位点推测为正常个体。结论 FH孕妇羊水脱落细胞LDLR基因分析安全有效,可尽早发现FH纯合子患儿。     

趋化因子受体5基因启动子单核苷酸多态性与HIV易感性关系的Meta分析

目的:探讨趋化因子受体5(CCR5)基因启动子单核苷酸多态性(SNPs)与HIV易感性的关系。方法:在Pubmed等数据库检索有关CCR5基因启动子SNPs与HIV易感性的病例对照研究,选取文献,提取相关数据,用Stata10.0对数据进行Meta分析。结果:按照纳入和排除标准,共纳入8个病例对照研究,病例组共983例,对照组共1274例。分析的CCR5基因启动子SNPs位点共4个(59029A/G、59353T/C、59356C/T和59402A/G)。59029A/G和59353T/C位点的研究间异质性较小,使用固定效应模型。59029G等位突变的合并OR值及其95%CI是1.07(0.90～1.07),59353C等位突变合并的OR值及其95%CI是0.95(0.81～1.11)。59356C/T和59402A/G位点的研究间异质性较大,使用随机效应模型。59356T等位突变的合并OR值及其95%CI是1.34(0.86～2.11),59402G等位突变合并的OR值及其95%CI是0.88(0.63～1.23)。结论:CCR5基因启动子的SNPs与HIV的易感性可能没有关系。     

更昔洛韦防治异基因骨髓移植巨细胞病毒感染

目的探讨更昔洛韦防治异基因骨髓移植(alloBMT)术后巨细胞病毒(CMV)感染的临床效果。方法对6例alloBMT病人使用更昔洛韦防治CMV感染,预防用药,更昔洛韦5mg/(kg·次),q12h,于术前-9～-1d使用;治疗用药,更昔洛韦5mg/(kg·次),q12h,14～21d,而后每周用药5d维持2～3周。结果6例alloBMT患者术后有3例出现CMV感染,均治愈,随访3～9个月未再出现CMV感染。结论更昔洛韦防治异基因造血干细胞移植术后CMV感染效果良好,早期诊断和治疗更为重要。     

异基因骨髓移植小鼠联合输注IL-3/IL-6双基因转导的骨髓基质细胞促进造血恢复

探讨用逆转录病毒载体转入IL 3和IL 6双基因的骨髓基质细胞系QXMSC1IL 3/IL 6对异基因骨髓移植小鼠造血功能的促进作用。用逆转录病毒载体 (含小鼠IL 3cDNA ,人IL 6cDNA)分别转导到骨髓基质细胞系QXMSC1(H 2 d) ,构建骨髓基质细胞系QXMSC1IL 3/IL 6。供体小鼠BALB/c(H 2 d)骨髓去除骨髓中T细胞 ,受体小鼠C57BL/6(H 2 b)经γ射线致死量照射后 ,输入去除T细胞的供体骨髓 (1× 1 0 7/鼠 )的同时输入骨髓基质细胞QXMSC1IL 3/IL 6(5× 1 0 5/鼠 )。在骨髓移植后 2 0和 40天 ,分别检测骨髓移植小鼠外周血RBC ,WBC和骨髓有核细胞数及骨髓中CFU S ,CFU GM ,CFU E和CFU GEMM数。结果 :异基因骨髓移植共输入QXMSC1IL 3/IL 6基质细胞系可使异基因骨髓移植小鼠外周血RBC ,WBC数明显恢复 ,骨髓中有核细胞数 ,CFU S ,CFU GM ,CFU E和CFU GEMM明显增加。基质细胞系QXMSC1可作为有效的基因载体促进骨髓移植后造血功能重建。结论 :基质细胞转入细胞因子IL 3或IL 6基因可以进一步促进骨髓移植后造血功能重建 ,联合转导IL 3和IL 6有协同作用     

欧洲骨髓移植的情况(欧洲骨髓移植小组关于欧洲骨髓移植年会的报告)

1.关于白血病的骨髓移植工作部分到1982年12月止,32个移植小组为治疗白血病进行了487例骨髓移植,其中:急性粒细胞白血病(AML)229例;急性淋巴细胞白血病(ALL)192例;慢性粒细胞白血病(CML)66例。90%的病人接受的是HLA一致、MLC阳性的同胞兄弟姐妹的同种异基因骨髓。5%接受的同基因骨髓,另外5%接受了家族成员的单倍体相同的骨髓(HLA不相配)。同种骨髓移植的病人接受氨甲喋呤(60%)、环孢霉素A(25%)、OKT_3或ATG预防GVHD。全部病人中GVHD的发生率占61%;用不同方法诊断的GVHD无差别。轻度GVHD占22%,中度20%,重度18%。急性GVHD的     

KIR基因多态性与HIV/AIDS关联性研究的Meta分析

目的系统评价杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因多态性与HIV感染/AIDS的相关性。方法通过文献检索Medline和中国生物医学文献(CBM)数据库等,收集KIR基因多态性与HIV感染/AIDS关系的全文文献,剔除不符合要求者,在全面回顾文献的基础上对各病例对照研究结果进行Meta分析。结果 6篇有关KIR基因多态性与HIV/AIDS关系的研究认为KIR3DS1基因是HIV感染或(和)艾滋病的保护基因(P<0.05),其合并OR值为0.65,95%CI为0.48～0.88。结论携带KIR3DS1基因可能降低HIV/AIDS的危险性,其他KIR基因与HIV/AIDS之间的关联无显著性。     

构建携带p73α基因的慢病毒表达载体及检测其在卵巢癌细胞中的表达

目的:构建携带p73α基因的慢病毒系统表达载体,成功感染人卵巢癌细胞PEO1后检测其蛋白质的表达。方法:将采用PCR技术获得全长p73α基因亚克隆到pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP中,构建慢病毒表达质粒PCDH-p73α,验证成功后与包装质粒pPACKH1-GAG、pPACKH1-REV、Pvsv-G共转293T细胞,获得重组慢病毒Lenti p73α后感染靶细胞人卵巢癌细胞PEO1(p73α基因表达缺失)后,RT-PCR和Western Blotting验证PEO1细胞中Lenti p73α的表达。结果:经酶切鉴定及基因测序证实PCDH-p73α中携带正确的p73α基因序列,与GenBank中序列一致;转染包装细胞293T后产生慢病毒颗粒能有效感染靶细胞PEO1,转导效率约为60%,并且存在p73α基因mRNA和蛋白水平的高表达。结论:本实验成功构建了PCDH-p73α慢病毒表达载体,包装成功后能有效感染卵巢癌PEO1细胞。