葛根素后处理对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞的影响

目的观察葛根素后处理对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白的影响。方法 SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、葛根素后处理组,每组8只。制备大鼠心肌缺血再灌注模型,假手术组只穿线,不结扎左冠状动脉;缺血再灌注组缺血45 min,后再灌注120 min;葛根素后处理组,结扎左冠状动脉45 min,后再灌注120 min。再灌注前3 min和再灌注后2min内静脉注入葛根素1.25 mg/kg。应用免疫组化SP法观察Bcl-2和Bax蛋白表达率,采用TUNEL法观察各组心肌细胞的凋亡率,并在光镜及电镜下观察细胞形态学变化。结果与心肌缺血再灌注组相比,假手术组和葛根素后处理组心肌凋亡细胞数较低(P0.05),Bax表达较低(P0.05),Bcl-2表达较高(P0.05)。结论葛根素后处理可以影响心肌细胞Bcl-2、Bax的表达,抑制心肌细胞的凋亡,对缺血再灌注损伤心肌细胞有保护作用。     

miR-92a在大鼠缺血再灌注心肌组织中的表达及对心肌细胞凋亡的影响

目的研究miR-92a在大鼠缺血再灌注(I/R)心肌组织中的表达及对心肌细胞凋亡的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为I/R组和假手术组,采用夹闭冠状动脉法将I/R组大鼠制备成心肌缺血再灌注模型,采用新生SD乳鼠制备原代心肌细胞并制备缺氧/复氧(H/R)细胞模型,以Lipofectimane2000脂质体干扰心肌细胞中miR-92a的表达,以定量PCR检测miR-92a在心肌组织中的表达,流式细胞仪检测miR-92a对心肌细胞凋亡的影响,Western印迹检测凋亡相关蛋白淋巴瘤/白血病(Bcl)-2和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3的表达。结果 miR-92a在I/R心肌组织中的表达与假手术组相比显著升高(P0. 05),在H/R组心肌细胞中的表达也显著高于常氧组细胞(P0. 05)。与对照组(未进行转染)相比,miR-92a NC组(转染miR-92a阴性对照)细胞中miR-92a的相对表达差异无统计学意义(P0. 05),而miR-92a inhibitor组(转染miR-92a抑制剂)细胞中miR-92a的相对表达量显著升高(P0. 05)。与对照组相比,I/R组细胞凋亡率显著升高(P0. 05); I/R+miR-92a inhibitor组细胞凋亡率较I/R组显著降低(P0. 05)。与对照组相比,I/R组细胞中Bcl-2蛋白的相对表达量显著降低(P0. 05),酶切Caspase-3蛋白的相对表达量显著升高(P0. 05);与H/R组相比,I/R+miR-92a inhibitor组细胞中Bcl-2蛋白的相对表达量显著升高(P0. 05),酶切Caspase-3蛋白的相对表达量显著降低(P0. 05)。结论 miR-92a在缺血再灌注后心肌组织和细胞中呈现高表达,下调miR-92a表达后能够减弱缺血再灌注引起的细胞凋亡,其作用机制可能与调控Bcl-2和酶切Caspase-3蛋白的表达有关。     

Rho激酶信号通路与大鼠心肌细胞凋亡的关系

目的探讨Rho激酶信号通路在心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡组织中的表达变化及对心肌细胞凋亡的影响作用。方法选取健康雄性Wistar大鼠,通过结扎左前降支建立大鼠心肌梗死模型,将24 h后仍然存活的大鼠选取30只,随机分为模型组和治疗组(法舒地尔5 mg/kg,2次/d)各15只,并另外选取健康雄性大鼠15只作为假手术组,假手术组和模型组给予等量生理盐水处理,比较4 w后3组心肌梗死面积及Rho激酶mRNA、蛋白等指标的表达差异。结果 3组左心室收缩压(LVSP)、左室舒张压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)差异均有统计学意义(P0.05),模型组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax显著低于治疗组和假手术组(P0.05),LVEDP显著高于治疗组和假手术组(P0.05),治疗组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax显著低于假手术组(P0.05),LVEDP显著高于假手术组(P0.05)。治疗组心肌缺血面积低于模型组但差异不显著(P0.05);治疗组心梗面积显著低于模型组(P0.05)。3组Rho激酶mRNA、Bax蛋白、Bcl-2蛋白表达差异有统计学意义(P0.05);组间差异均有统计学意义(P0.05)。结论心肌梗死大鼠心肌组织中的Rho激酶mRNA、Bax蛋白达显著增加,同时Bcl-2蛋白表达降低,法舒地尔能够降低Rho激酶mRNA表达,减少心肌细胞凋亡,减轻心肌梗死面积。     

不同时间左心室注射地尔硫对大鼠顿抑心肌功能的影响

目的观测不同时间左心室注射地尔硫对大鼠顿抑心肌功能的影响。方法 Wistar雄性大鼠25只,随机分为5组,假手术组(A组)、顿抑心肌组(B组)、缺血期注射地尔硫组(C组)、再灌注早期注射地尔硫组(D组),再灌注晚期注射地尔硫组(E组),每组5只,观察心率(HR)、左心室收缩末期压(LVESP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室内压最大上升速率及最大下降速率(±dp/dt_(max))的变化。结果与A组大鼠比较,除C组再灌注30、60、90、120 min,D组再灌注60、90、120 min时,其他各组在缺血及再灌注后均出现HR增快,LVESP、LVEDP、±dp/dt_(max)降低(P<0.05);C组再灌注30 min、D组再灌注90 min时HR、LVESP、LVEDP、±dp/dt_(max)已恢复至术前水平。与B组大鼠比较,C组再灌注15、30、60、90、120 min,D组再灌注90、120 min HR下降,LVESP、LVEDP、±dp/dt_(max)明显改善(P<0.05)。结论在缺血和再灌注早期左心室注射地尔硫可促进顿抑心肌功能的恢复,而再灌注晚期应用则无明显作用。     

白藜芦醇对大鼠缺血心肌的保护及对凋亡的抑制作用

目的 探讨白藜芦醇对大鼠缺血再灌注心肌的保护及对心肌细胞凋亡的影响,并分析与PI3K-Akt信号通路的关系.方法 50只成年雄性SD大鼠,随机分为5组,即假手术组(SH组)、缺血再灌注组(I/R组)、白藜芦醇预处理组(Res组)、白藜芦醇预处理+渥曼青霉素组(Res+Wom组)、缺血再灌注+渥曼青霉素组(I/R +Wom组);结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血模型;监测血流动力学,记录左心室收缩压(LVSP)、左室舒张末期压(LVEDP)、左心室变化速率最大值(±dp/dtmax)在缺血前、缺血30 min、再灌注60、90、120 min等几个时间点的变化情况,并同步监测肢体Ⅱ导联心电图;测定再灌注心肌组织中一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)的含量,并用TUNEL方法测定细胞凋亡,免疫组化测定心肌组织中Bcl-2、Bax蛋白的表达,利用Western印迹测定蛋白激酶B(又称PKB)及磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)含量.结果 与I/R组及Res+ Wom组比较,Res组NOS及NO表达增加,显著减轻心肌细胞凋亡,Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax/Bcl-2降低,Res组P-Akt蛋白表达明显增加(P＜0.05).结论 白藜芦醇对缺血而再灌注心肌有较好的保护作用,能够抑制再灌注所引起的细胞凋亡,其作用机制可能与PI3K-A kt信号通路活化有关.     

miR-214在大鼠心肌缺血再灌注损伤及缺血后适应中的表达及机制探讨

目的探讨miR-214在心肌缺血再灌注损伤及缺血后适应心脏保护作用中的变化及可能机制。方法 30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和缺血后适应组。通过颈动脉插管测定不同组的血流动力学指标,采用伊文思兰和TTC染色法测定缺血和梗死面积,并通过实时定量PCR方法测定再灌注2h缺血心肌miR-214及预测的靶基因HIF1AN(hypoxia-inducible factor1alpha subunit inhibitor)的变化。结果与大鼠心肌缺血再灌注组相比,缺血后适应处理可以显著改善再灌注后左室收缩压(LVSP)、左室舒张末期压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)以及最大下降速率(-dp/dtmax),并降低了心肌梗死面积;与假手术组相比,心肌缺血再灌注组大鼠心肌组织缺血区的miR-214表达显著下调,缺血后适应组心肌组织缺血区miR-214的表达较缺血再灌注组明显升高;通过生物信息学分析预测miR-214在HIF1AN的3'-UTR上存在结合位点,与假手术组相比,HIF1AN mRNA水平在缺血再灌注组中显著增加,而缺血后适应组与缺血再灌组相比,HIF1AN的mRNA水平显著减...     

灯盏花素对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及STAT表达的影响

目的 观察灯盏花素对大鼠心肌缺血再灌注细胞凋亡和信号转导及转录激活因子(STAT)表达的影响,初步探讨其可能的作用机制.方法 采用结扎大鼠左冠状动脉前降支方法制备心肌缺血再灌注模型.将40只SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组,灯盏花素1组[25 mg/(kg,d)],灯盏花素2组[50 mg/(kg·d)].缺血30min、再灌注2h后,原位末端标记法测定组织中心肌细胞凋亡率,免疫组化SP法检测心肌组织中STAT蛋白的表达.结果 与假手术组相比,缺血再灌注组细胞凋亡率明显升高(P＜0.01),SP染色见STAT1蛋白表达显著增强(P＜0.05或＜0.01),但STAT3蛋白表达显著减少(P＜0.05或＜0.01);与缺血再灌注组相比,灯盏花素1、2组细胞凋亡率明显下降(P＜0.01),STAT1蛋白表达显著减少(P＜0.05或＜0.01),但STAT3蛋白表达显著增强(P＜0.05或＜0.01).结论 灯盏花素能够减轻缺血再灌注造成的心肌损伤,其机制可能与灯盏花素干预STAT蛋白表达,从而减少心肌细胞凋亡有关;STAT途径可能是灯盏花素抑制细胞凋亡的途径之一.     

钠尿肽嵌合体CNAAC抗大鼠缺血/再灌注心肌损伤的作用

目的 探讨钠尿肽嵌合体C_NAA_C在抗缺血/再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)心肌损伤中的作用及可能机制。方法 将SD大鼠随机分为三组,即假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)、缺血/再灌注+C_NAA_C组(I/R+C_NAA_C组),缺血30 min,再灌注120 min。再灌注结束后观察并检测各组大鼠心肌组织结构、心肌细胞超微结构、心肌细胞凋亡、体液因子和相关蛋白表达的变化。结果 与Sham组相比,I/R组大鼠心肌细胞出现肿胀、炎性浸润,心肌线粒体分裂增加,细胞色素C的表达、心肌细胞凋亡增多(P<0.01),心肌梗死面积、血清LDH、CK-MB和c TnT的水平显著增加(P<0.01),心肌PI3K、磷酸化Akt(Ser473)表达显著减少(P<0.01);与I/R组相比,I/R+C_NAA_C组大鼠心肌细胞炎性浸润减少、心肌排列整齐,心肌线粒体分裂被抑制,细胞色素...     

心肌细胞内Livin蛋白过表达对大鼠心肌缺血再灌注中细胞凋亡的影响

目的:观察大鼠心肌缺血再灌注损伤过程中心肌细胞内黑色素瘤凋亡蛋白抑制剂(Livin)蛋白表达变化及Livin蛋白过表达对心肌细胞凋亡的影响。方法:健康SD大鼠80只,随机分为假手术组、缺血再灌注组、注射表达Livin蛋白的逆转录病毒载体组(Livin组)和空载体组,其中Livin组和空载体组分别向开胸心肌内注射表达Livin的逆转录病毒载体或空载体,24h后行缺血再灌注过程,以实时荧光定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)测定心肌组织内Livin和天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)信使核糖核酸(mRNA)的表达,免疫组织化学方法检测Caspase-3的表达,以原位缺口末端标记(TUNEL)法测定凋亡心肌细胞。结果:①实时荧光定量RT-PCR扩增结果LivinmRNA相对表达水平:与假手术组比较Livin组显著增高(P0.01);与缺血再灌注组比较Livin组升高(P0.01)。Caspaes-3mRNA相对表达水平:与假手术组相比缺血再灌注组、Livin组、空载体组均增高(P0.01);与缺血再灌注组比较Livin组降低,差异有统计学意义(P0.01)。②免疫组化显示:与假手术组比较缺血再灌注组、Livin组、空载体组缺血再灌注过程中Caspase-3的表达明显增加(P0.05);与缺血再灌注组比较Livin组表达减少(P0.05),差异均有统计学意义。③TUNEL法检测:与缺血再灌注组比较假手术组、Livin组凋亡细胞数明显减少,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:心肌Livin蛋白过表达可以抑制缺血再灌注心肌Caspase-3表达,抑制缺血再灌注心肌细胞凋亡的发生。     

MG-132抑制大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡

目的观察蛋白酶体抑制剂MG-132对急性缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法建立大鼠心肌缺血再灌注模型,治疗组及治疗对照组于再灌注前5min静脉注射MG-132(0.75mg/kg),缺血再灌注组及假手术组注射生理盐水,观察各组心肌组织炎症细胞浸润及心肌细胞凋亡情况。结果MG-132能显著抑制心肌梗死周围组织嗜中性粒细胞的浸润;与缺血再灌注组相比,治疗组核因子κBmRNA水平和蛋白水平显著降低(P<0.05);治疗组再灌注2h、6h及24h亚组凋亡指数较缺血再灌注组同时间点显著下降;与缺血再灌注组相比,Bax的积分光密度值降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平明显上调,Bcl-2/Bax比值显著增加。结论蛋白酶体抑制剂能够抑制急性缺血再灌注心肌的凋亡,具有心肌保护作用。