苦参碱对前列腺癌PC-3M细胞生长抑制和凋亡的影响

目的:探讨苦参碱治疗前列腺癌的可行性及机制。方法:用不同药物浓度苦参碱诱导PC-3M细胞不同时间后,在相差倒置显微镜观察细胞形态;用MTT法测细胞的增殖抑制情况;用流式细胞仪(FCM)进行细胞凋亡率检测;RT-PCR法检测PC-3M细胞内bcl-2、bax基因表达水平。结果:用苦参碱干预后随着药物浓度增加PC-3M细胞株生长明显受抑制;在FCM上可见凋亡率逐渐增加;PC-3M细胞中bcl-2 mRNA表达水平逐渐下调,bax mRNA表达水平逐渐上调,且呈时间-浓度依赖性。结论:苦参碱体外能有效抑制前列腺癌细胞株生长,其机制可能与诱导细胞凋亡、下调bcl-2表达及上调bax水平有关。     

双氢青蒿素诱导前列腺癌 PC-3 细胞凋亡及其机制研究

目的 研究双氢青蒿素对前列腺癌 PC-3 细胞的凋亡诱导作用,并探讨其可能的机制。方法 MTT 法测定不同浓度双氢青蒿素对 PC-3 细胞增殖的影响,流式细胞仪 (FCM)、透射电镜 (TEM) 观察双氢青蒿素对 PC-3 细胞的凋亡诱导作用,免疫组化 (SP) 检测双氢青蒿素对 PC-3 细胞内 Bax、Bcl-2 蛋白阳性表达的影响。结果 双氢青蒿素对 PC-3 细胞有明显增殖抑制效应,能诱导 PC-3 细胞凋亡且具有浓度-时间依赖性,导致 PC-3 细胞线粒体肿胀、核碎裂、凋亡小体形成;随着双氢青蒿素浓度的增加,Bcl-2 蛋白阳性表达降低,而 Bax 蛋白阳性表达增加。结论 双氢青蒿素可能通过上调 Bax,下调 Bcl-2 蛋白表达诱导前列腺癌 PC-3 细胞凋亡。     

熊果酸诱导前列腺癌细胞株PC-3凋亡的实验研究

目的:探讨熊果酸(Ursolic acid,UA)对人前列腺癌细胞株PC-3细胞周期、凋亡的影响及其作用机制.方法:人前列腺癌细胞株PC-3以不同浓度的UA作用不同的时间后,分别使用四甲基偶氮唑蓝比色法(4 methyl thiazolyl tetrazolium assay,MTT),免疫组织化学SP法,流式细胞术(Flow cytometry,FCM),Western blot等实验方法检测PC-3细胞的增殖抑制情况,细胞周期和凋亡率的变化,以及细胞内bcl-2、bax 2个重要的细胞凋亡相关基因和细胞凋亡相关特殊蛋白cox-2、caspase 3表达的变化.结果:UA对PC-3细胞有增殖抑制作用,其作用随着药物浓度和作用时间的增加而增强.24、48 h和72 h 3个时间段UA分别作用于PC-3细胞后的IC_(50)分别为50.87、37.91 μmol/L和27.86μmol/L;熊果酸作用后PC-3细胞周期的主要特点是大量细胞累积于G_1期,进入S期的细胞减少.UA能够诱导PC-3细胞凋亡,经过24、48 h和72h 3个时间段UA浓度50μmol/L作用后,细胞凋亡率为6.21%、7.81%和13.31%;细胞内bcl-2和cox-2的表达随着药物浓度增加逐渐减少;bax和caspase 3蛋白的表达随着药物浓度增加逐渐增加.结论:UA能够抑制PC-3细胞的增殖,并使细胞大量累积于G_1期,进入s期的细胞减少.可能通过使bcl-2和cox-2的表达减少、bax和caspase 3蛋白的表达增加来诱导细胞凋亡.     

Bcl-2反义核酸增强青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡

目的:研究bcl-2反义核酸增强青蒿琥酯对人慢性粒细胞白血病K562细胞株诱导凋亡效应. 方法:合成bcl-2反义核酸(ASON)导入K562细胞,应用Western blot法检测bcl-2蛋白的表达,TUNEL技术、流式细胞仪法(FCM法)检测细胞凋亡. 结果:bcl-2反义核酸(ASON)能明显抑制bcl-2蛋白的表达. 青蒿琥酯在1～7 mg/L浓度范围内能分别明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性, 7 mg/L青蒿琥酯作用72 h的K562细胞株A值最低. 原位细胞凋亡检测可见细胞变小,核固缩为一个或多个染色质团块,与未经ASON转染的K562细胞株相比,经bcl-2 ASON转染的K562细胞株对青蒿琥酯的诱导凋亡作用更加明显;FCM法出现低于G1期DNA含量的亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡主要发生在G1/S期,与未经ASON转染的K562细胞株相比,经bcl-2 ASON转染的K562细胞凋亡率显著增加. 结论:青蒿琥酯在体外一定浓度范围内可诱导K562细胞株凋亡,bcl-2反义核酸可增强青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡的作用.     

三氧化二砷对胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察三氧化二砷(As2O3)对胆管癌癌细胞株QBC939的增殖抑制作用并初步探讨其机制。方法 胆管癌细胞株QBC939用不同浓度As2O3处理，活细胞计数和细胞克隆试验观察As2O3对细胞动力学的影响；丫啶橙荧光染色、透射电镜，TUNEL观察细胞凋亡；流式细胞仪测定细胞凋亡和细胞周期变化；增殖细胞核抗原(PCNA)、bcl-2单抗SABC免疫组化染色。结果 在0．75-6μmol/L范围内，As2O3明显抑制QBC939细胞增殖和诱导细胞凋亡，其作用随As2O3浓度增加和作用时间延长而增强；相应地PCNA和bcl-2表达减弱。流式细胞仪检测可见明显的凋亡峰，并阻滞细胞周期的G2-M期。结论 As2O3可明显抑制胆管癌细胞株QBC939的生长、诱导癌细胞凋亡，有临床治疗胆管癌的潜在价值。     

动脉粥样硬化斑块中平滑肌细胞凋亡及p53、bcl-2、c-myc基因的表达

目的　探讨动脉血管平滑肌细胞凋亡在动脉粥样硬化发生、发展中的作用及细胞凋亡与 p5 3、bcl- 2、c- m yc表达的内在联系 ,为动脉粥样硬化的防治提供新的思路。　方法　(1)选择因动脉粥样硬化住院手术患者 2 0例为观察组 ,因意外伤害手术患者的正常动脉 10例为对照组。两组标本均经病理切片证实。 (2 )采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记 (TU NEL)技术比较两组动脉平滑肌细胞凋亡的差异。 (3)应用免疫组织化学方法检测动脉平滑肌细胞 c- myc、bcl- 2和 p5 3等凋亡相关基因表达的差异。 (4 )应用透射电镜观察动脉粥样硬化及对照组动脉平滑肌细胞形态学差异。　结果　动脉粥样硬化组动脉平滑肌细胞凋亡率明显增加 ,C- m yc蛋白、P5 3蛋白表达明显升高 ,Bcl- 2蛋白表达明显降低 (P<0 .0 0 1)。　结论　动脉平滑肌细胞凋亡与增生共同参与动脉粥样硬化的发生、发展。c- myc基因和 p5 3基因促进细胞凋亡 ,而 bcl- 2基因抑制细胞凋亡     

急性弓形虫感染小鼠睾丸组织细胞凋亡基因表达的初步观察

为探讨急性弓形虫感染小鼠睾丸组织中细胞凋亡基因 p53、bcl- 2、bax.、c- myc等的表达情况 ,应用免疫组化方法对弓形虫感染小鼠 (1× 10 3,3d)的睾丸组织进行凋亡基因 p53、bcl- 2、bax.、c- myc等的检测。结果 ,急性弓形虫感染小鼠睾丸组织的 bcl- 2表达增高 ,感染小鼠生精细胞胞质及核内均有 c- myc表达 ,且表达增加 ,但与正常对照小鼠相比较均无统计学差异。未查见 bax与 p53蛋白在小鼠睾丸组织中的表达急性弓形虫感染小鼠睾丸组织细胞凋亡基因表达的初步观察@周永华$江苏省寄生虫病防治研究所 @卢慎$昆山市第一人民!医院弓形虫感染;…     

熊果酸诱导子宫内膜癌细胞HHUA凋亡的研究

目的探讨三萜类化合物熊果酸(ursolic acid,UA)诱导子宫内膜癌细胞HHUA的凋亡作用。方法采用细胞培养技术,用不同浓度的药物在一定的时间内处理细胞株,采用MTT法、活细胞荧光染色技术、流式细胞技术（FCM）、RT-PCR、细胞免疫化学技术,研究UA对HHUA细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。结果UA抑制HHUA细胞增殖,且呈时间和浓度依赖性,并使细胞呈典型的凋亡形态学特征,核质浓集,出现凋亡小体,使细胞周期阻滞在G0/G1期,并诱导人半胱天冬蛋白酶3（caspase-3）蛋白表达增加,bcl-2蛋白表达减少。结论UA诱导HHUA细胞凋亡,其机制涉及caspase-3和bcl-2依赖性凋亡调节通路。     

三羟基异黄酮诱导食管癌EC-109细胞凋亡的研究

目的探讨三羟基异黄酮诱导食管癌EC-109细胞发生凋亡的可能性,揭示该凋亡发生与bcl-2和bax之间的关系。方法采用MTT比色法测定三羟基异黄酮对EC-109细胞的生长抑制率;以透射电镜和TUNEL染色法研究三羟基异黄酮与EC-109细胞凋亡的关系;通过免疫组织化学法和RT-PCR法检测bcl-2和bax的表达。结果三羟基异黄酮对EC-109细胞有明显抑制作用,随浓度增加和培养时间的延长而增强;三羟基异黄酮诱导EC-109细胞出现凋亡细胞形态;TUNEL染色法可见,经三羟基异黄酮处理24、48、72、96h后,EC-109细胞凋亡数随时间明显增加。免疫组织化学发现经处理24、48、72、96h后,EC-109细胞的bcl-2蛋白阳性率减少,bax蛋白阳性率增加。RT-PCR也发现经处理24、48、72、96h后,EC-109细胞的bcl-2mRNA条带密度降低,bax mRNA条带密度加强。结论三羟基异黄酮可能通过下调bcl-2的表达和上调bax的表达而诱导食管癌EC-109细胞发生凋亡。     

白英提取物诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡过程中bax和bcl-2基因表达

目的探讨中药白英提取物对肝癌SMMC7721细胞中细胞凋亡相关基因的影响。方法用不同浓度的白英提取物处理肝癌SMMC7721细胞,利用TUNEL法检测其细胞凋亡;通过原位杂交法、免疫组化法,研究白英提取物诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡时,凋亡促进基因bax和凋亡抑制基因bcl-2的mRNA和蛋白表达。结果 IPP图像分析表明,bax表达显著增高,bcl-2显著下降。结论白英提取物通过调节细胞凋亡促进基因和抑制基因,从而诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡。     

c-myc反义核苷酸对淋巴瘤细胞系CA46凋亡的作用

目的 研究c—myc反义核苷酸对体外培养的淋巴瘤细胞系CA46基因表达及诱导凋亡的作用。方法 c—myc反义核苷酸(ASPO)为人工合成的针对c—myc基因的一段外源性基因片段，以无义的寡核苷酸作为对照，导入CA46细胞后观察其基因表达及诱导凋亡的作用。流式细胞仪检测c—myc基因产物表达，荧光染色观察CA46细胞的凋亡形态，流式细胞仪定量检测凋亡百分率，TUNEL检测加用VP16后的CA46原位凋亡。结果 c—myc反义核苷酸(ASPO)作用CA46细胞后，RT—PCR示c—myc mRNA表达降低。荧光染色ASPO组细胞胞体缩小，胞膜完整，核质浓缩，出现黄绿色不规则或局部致密荧光，凋亡细胞约占23．3％，而SPO组及空白组未见明显凋亡细胞，细胞呈均匀绿色荧光。流式细胞仪检测仅用VP16 10mg／L 3d，ASPO作用2d后加VP16 10mg／L 1d及ASPO作用3d均出现凋亡峰，凋亡率分别为16％，72％及52％，而SPO组及空白但均未见凋亡峰。流式细胞仪检测CA46细胞c—myc蛋白为95．3％，经ASPO作用后降为23．7％，同时SPO组c—myc表达率为90．6％，TUNEL检测ASPO组凋亡细胞为25．5％，加用VP16后的CA46凋亡率为36．7％。结论 体外实验中CA46特异地被c—myc反义核酸抑制生长，细胞出现凋亡表现，c—myc mRNA癌基因表达降低。     

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞相关基因的DNA拷贝和基因表达的影响

目的探讨8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞wtp53、c-myc、bcl-2基因的扩增、表达以及VEGF表达的影响.方法将贴壁培养的Eca-109细胞随机分成3组,Br组加8-Br-cAMP至终浓度为2×105 mol/L;Q组加槲皮素至终浓度为43 μmol/L;C组不加任何药物,只加入新培养液培养.3组细胞同时培养48h.以cDNA 阵列技术显示Eca-109细胞凋亡中wtp53、c-myc、bcl-2 DNA拷贝和mRNA的表达,以免疫组化法显示VEGF的表达.结果Br组和Q组与C组相比wtp53 DNA拷贝和mRNA信号较强,c-myc、bcl-2 DNA拷贝和mRNA信号较弱,VEGF表达较弱.结论8-Br-cAMP和槲皮素皆可通过上调wtp53,下调bcl-2、c-myc基因的扩增和表达,下调VEGF的表达,而诱导Eca-109细胞凋亡.     

VP-16诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡的研究

为研究ＶＰ－１６对雄激素非依赖性前列腺癌细胞ＰＣ－３凋亡的诱导作用,应用ＨＥ染色观察细胞的形态学改变,以ＤＮＡ凝胶电泳和流式细胞术（ＦＣＭ）分析细胞凋亡和细胞周期分布,同时应用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法研究ＶＰ－１６对ＰＣ－３细胞ＤＮＡ合成的影响。结果表明,（１）凋亡的ＰＣ－３细胞呈明显的形态学改变;（２）ＤＮＡ断裂呈梯形变化;（３）ＰＣ－３细胞凋亡率随ＶＰ－１６作用浓度增加和时间延长逐渐增高;（４）ＶＰ－１６能够明显抑制ＰＣ－３细胞ＤＮＡ的合成。提示ＶＰ－１６可诱导前列腺肿瘤细胞凋亡。     

视网膜母细胞瘤中p53、bcl-2和c-myc蛋白表达相关性研究

目的 :探讨凋亡相关基因p5 3、bcl 2及c myc蛋白产物在视网膜母细胞瘤中的表达及其意义。方法 :采用LSAB免疫组化方法 ,对 40例 (4 0眼 )RB组织及 10例 (10眼 )正常眼球组织进行p5 3、bcl 2和c myc检测 ,并进行三者的相关性分析。结果 :10例正常视网膜组织p5 3表达阴性 ,bcl 2、c myc分别有 6例及 2例弱阳性表达。 40例RB组织中p5 3、bcl 2、c myc的阳性率分别为 :67 5 %、87 5 %及 80 % ,与正常视网膜相比 ,前者表达明显增强。 40例RB组织中有 17例p5 3和bcl 2、c myc蛋白均为阳性表达 ,其同步表达率为 42 5 % ,10 0 %组织中有一种或一种以上蛋白阳性表达。结论 :p5 3突变 ,bcl 2、c myc的过度表达均与RB的发生有关     

8-Br-cAMP对肺癌NSCLC-3细胞凋亡相关基因表达的影响

目的:观察8-Br-cAMP对人肺癌NSCLC-3细胞凋亡相关基因表达的影响.方法:将体外培育的NSCLC-3细胞分为实验组和对照组,采用原位杂交方法观察8-Br-cAMP对NSCLC-3细胞c-myc、bcl-2基因表达的影响.结果:8-Br-cAMP处理后的实验组较未加8-Br-cAMP的对照组c-myc、bcl-2基因表达降低(P＜0.01).结论:8-Br-cAMP可下调与NSCLC-3细胞凋亡相关的c-myc、bcl-2基因表达.     

Effects of anti- HPV16E6- ribozyme on phenotype and gene expression of a cervical cancer cell line

Objective To investigate the effects of anti- HPV16E6- ribozyme (HRz) on phenotype and gene expression of a cervical cancer cell line. Methods HRz was designed by computer programs.HRz’s activity was identified by cleavage experiments in vitro.HRz and empty eukaryotic plasmids were transfected into CaSKi cells with lipofectin, then renamed CaSKi- R and CaSKi- P, respectively. The expression of ribozyme in transfected cells was observed by RNA dot blot.The amounts of E6 mRNA in three kinds of cells lines were detected by Northern blot.Cell growth curves and soft agar forming ability were studied.The ability of each cell line to form tumors was assessed in nude mice.Apoptosis rates and expression of c- myc, bcl- 2, p53 and Fas were detected by flow cytometry (FCM).Antigens of tumor cells, HLA- 1, HLA- 2, B7- 1 and B7- 2 were also detected.NK, LAK, and CD3AK cells were induced.Their cytotoxicities were detected in CaSKi- R, CaSKi- P, and CaSKi cells. Results In vitro cleavage reaction demonstrated that HRz could cleave HPV16E6 mRNA in a site- specific manner.HRz could be expressed stably in transfected CaSKi cells.Northern blot analysis showed that E6 mRNA levels were lower in CaSKi- R than in CaSKi.The growth rate of CaSKi- R was slower than those of CaSKi and CaSKi- P.The soft agar- forming rate of CaSKi- R was lower compared with those of CaSKi and CaSKi- P cells.The ability of CaSKi- R to form tumors in nude mice was also poor.The apoptosis rate of CaSKi- R cells was much higher than those of CaSKi and CaSKi- P.HRz could reduce the expression of E6, c- myc and bcl- 2 proteins, and increase the expression of p53 as well.HRz could increase the expression of HLA- 2, B7- 1 and B7- 2 antigens.The cytotoxicity of NK, LAK and CD3AK cells was much higher in CaSKi- R than in CaSKi- P and CaSKi cells.Conclusion HRz not only reverses the malignant phenotype of CaSKi cells partially, but also induces apoptosis in the cells, and increases sensitivity of CaSKi cells to immune cells.     

苦参碱诱导人肝癌细胞系HepG2凋亡的研究

目的 观察苦参碱是否能诱导人肝癌细胞系HepG2凋亡及凋亡相关基因的变化。方法 0－3.0g/L苦参碱处理HepG2细胞,光镜和电镜下观察细胞形态;TUNEL法原位检测DNA断裂;流式细胞仪检测凋亡峰;AnnexinV-FITC/PI双标记检测早期凋亡;免疫组化和原位杂交法检测wp53,bcl-2,bax,c-myc,Fas等凋亡相关基因的表达,采用真彩色图像分析仪定量检测。结果 1.5-3.0g/L苦参碱可诱导HepG2凋亡,并且使凋亡相关基因wp53,bax,Fas表达上调,而抗调亡基因bcl-2,c-myc表达下调。结论 一定浓度的苦参碱可诱导人肝癌细胞HepG2凋亡,并且该凋亡与凋亡相关基因表达增强和抗凋亡相关基因表达减弱有关。     

IFN-α及其联合GMCSF对CML患者骨髓细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 :探讨IFN α及IFN α联合GM CSF调节慢性期慢性粒细胞白血病 (CML CP)患者骨髓单个核细胞(MNCs) bcr abl,bcl 2 和 c myc基因表达的影响。方法 :淋巴细胞分离液离心富集 14例CML CP患者骨髓MNCs,经干扰素 α(IFN α)及IFN α联合粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)培养 2 4h后 ,采用相对定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)及扩增片段光密度扫描分析bcr abl,bcl 2 ,c myc及β actin 基因表达水平 ,配对t检验统计分析组间差异。结果 :IFN α(2 0 0U·ml-1)及IFN α(2 0 0U·ml-1)联合GM CSF(10ng·ml-1)均显著抑制bcr abl基因表达 ;IFN α部分抑制 c myc及 bcl 2 基因表达 ;GM CSF在IFN α作用的基础上部分促进 bcr abl及 c myc基因表达和显著抑制 bcl 2 基因表达。结论 :IFN α及IFN α联合GM CSF均可抑制抗凋亡基因bcr abl和bcl 2基因表达 ,并调节c myc基因表达水平。通过促进细胞凋亡而抑制恶性克隆增长是IFN α或IFN α联合GM CSF治疗CML的可能作用机制。     

铁剥夺对化疗药物诱导HL-60细胞凋亡的影响

目的 :探讨铁剥夺诱导HL 60细胞及对化疗药物诱导HL 60细胞凋亡的影响。方法 :HL 60细胞与不同浓度的铁螯合剂 去铁胺 (DFO)、DFO加化疗药物、化疗药物、DFO加化疗药物及三氯化铁、三氯化铁共同培养 6h、12h、2 4h、48h。通过测定细胞活力 ,观察细胞形态学变化 ,应用流式细胞仪检测和DNA凝胶电泳等方法观察细胞凋亡 ;通过亲和免疫组化方法检测c myc基因表达 ,从而确定DFO及DFO与化疗药物联合应用对HL 60细胞的作用。结果 :DFO单用可降低HL 60细胞活力 ,抑制HL 60细胞增殖 ,诱导HL 60凋亡 ,并可使c myc基因表达增加 ,其作用强度随培养时间延长及DFO浓度增加而增加 ;DFO与化疗药物联合时 ,可增加化疗药物HL 60细胞凋亡的作用 ,该作用可被等摩尔的三氯化铁抵消。结论 :铁剥夺可影响HL 60细胞DNA的合成 ,诱导其凋亡 ,并提高HL 60细胞对化疗药物的敏感性。因此 ,铁剥夺可作为临床上白血病治疗或辅助治疗的方法之一 ,不适当补铁或升高血红蛋白将影响化疗疗效