凝血酶对牛主动脉内皮细胞组织因子活性的影响及其与PKC传？…

目的 探讨凝血酶对内皮细胞组织因子（ＴＦ）活性的刺激作用及其与人蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）传导系统的关系。方法 传代培养新生牛主动脉血管内皮细胞,取刺激或未受刺激的第４－８代细胞冻融液测定共ＴＦ活性。结果 体外培养的血管内皮细胞在静息状态下ＴＦ活性极低（４．２０±１．１９）与对照组相比,凝血酶的刺激使内皮细胞ＴＦ活性明显升高（ｎ＝８,Ｐ〈０．００１）,且呈剂量依赖性关系（ｒ＝０．７８,Ｐ〈０．０５）和时     

急性冠状动脉综合征患者血浆组织因子及组织因子途径抑制物变化及意义

急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)是严重威胁人类健康的心血管急症,包括不稳定型心绞痛(UAP)、急性心肌梗死(AMI)和心源性猝死。目前认为在冠状动脉破裂基础上血栓形成是引起ACS的主要原因。组织因子(tissue factor,TF)是脂质核心内促血栓形成最重要的活性因子     

丹参提取物单体对肿瘤坏死因子诱导内皮细胞组织因子表达的干预作用

背景：目前认为肿瘤坏死因子—α(TNF—α)可诱导人内皮细胞(HUVECs)组织因子基因的表达，而丹参提取物单体(764—3)对其干预作用如何?其机制有待于进一步探讨。目的：研究764-3对TNF—α诱导HUVEs组织因子基因表达的干预作用，及单个内皮细胞内游离钙([Ca^2+]i)水平的影响，以探讨764—3对防止心血管血栓栓塞性疾病的可能机制。设计：随机对照的实验研究。单位：协和医科大学基础医学研究所病理生理学系的实验室。材料：实验于1998-05／1999-09在中国医学科学院，中国协和医科大学基础医学研究所病理生理学系实验室完成。脐带取自北京妇产医院。干预：进行体外培养ECV304细胞株和人脐静脉内皮细胞．采用限制性内切酶法构建含有人TF基因不同上游调控序列的荧光素酶报告基因质粒，经脂质体法转染内皮细胞，用TNF—α(100U／mL)及764-3(30mg／L)处理细胞。主要观察指标：测定细胞裂解物中荧光素酶及β半乳糖苷酶的活性。以Fluo-3／AM为荧光指示剂，用激光共聚焦显像系统观测[Ca^2+]i的改变。结果：在TF基因上游序列-244／+121bp存在下，TNF—α可使转染内皮细胞荧光素酶表达量较对照组明显增加，764-3使这种增加有所降低(P&;lt;0．05)。而-111／+121bp存在时，TNF-α组较对照组荧光素酶表达量无明显差异，均比-244／+121bp存在时明显降低，此时，764-3并未引起荧光素酶表达量明显改变。激光扫描共聚焦显像，TNF-α可引起人内皮细胞[Ca^2+]i持续缓慢升高，加入764-3后[Ca^2+]i迅速大幅度降低，逐渐恢复到基线水平。结论：764-3可抑制TNF-α诱导的HUVECs TF基因表达的增强，这种作用依赖于该基因上游序列-244／+121bp的存在，推测胞内游离钙离子可能参与此抑制作用。     

组织因子途径抑制物活性变化在肝硬化患者中的意义

组织因子途径抑制物 (ＴＦＰＩ)是一种新发现的、在正常生理条件下血液中存在的天然抗凝物质 ,主要作用于依赖组织因子 (ＴＦ)的外源性凝血途径 ,对体内凝血系统有重要调节作用 ,是近年来凝血途径抑制物研究中较为活跃的一个领域。目前国内外研究日益增多 ,有关肝脏疾病ＴＦＰＩ变化的报道存在着不同看法。本文检测一组肝硬化患者血中ＴＦＰＩ活性 ,以探讨其临床意义。1　对象与方法1.1　对象及分组　肝硬化患者 5 1例 ,均为本院住院病人 ,男 33例 ,女 18例 ,平均年龄 5 1.7岁 ,诊断符合 1995年 5月北京第五次全国传染病寄生虫病学术会议讨…     

丹参提取物单体对肿瘤坏死因子诱导内皮细胞组织因子表达的干预作用

背景目前认为肿瘤坏死因子-α(TNF-α)可诱导人内皮细胞(HUVECs)组织因子基因的表达,而丹参提取物单体(764-3)对其干预作用如何?其机制有待于进一步探讨.目的研究764-3对TNF-α诱导HUVECs组织因子基因表达的干预作用,及单个内皮细胞内游离钙([Ca2+]1)水平的影响,以探讨764-3对防止心血管血栓栓塞性疾病的可能机制.设计随机对照的实验研究.单位协和医科大学基础医学研究所病理生理学系的实验室.材料实验于1998-05/1999-09在中国医学科学院,中国协和医科大学基础医学研究所病理生理学系实验室完成.脐带取自北京妇产医院.干预进行体外培养ECV304细胞株和人脐静脉内皮细胞,采用限制性内切酶法构建含有人TF基因不同上游调控序列的荧光素酶报告基因质粒,经脂质体法转染内皮细胞,用TNF-α(100 U/mL)及764-3(30 mg/L)处理细胞.主要观察指标测定细胞裂解物中荧光素酶及β半乳糖苷酶的活性.以Fluo-3/AM为荧光指示剂,用激光共聚焦显像系统观测[Ca2+]i的改变.结果在TF基因上游序列-244/+121 bp存在下,TNF-α可使转染内皮细胞荧光素酶表达量较对照组明显增加,764-3使这种增加有所降低(P＜0.05).而-111/+121 bp存在时,TNF-α组较对照组荧光素酶表达量无明显差异,均比-244/+121 bp存在时明显降低,此时,764-3并未引起荧光素酶表达量明显改变.激光扫描共聚焦显像,TNF-α可引起人内皮细胞[Ca2+]i持续缓慢升高,加入764-3后[Ca2+]i迅速大幅度降低,逐渐恢复到基线水平.结论764-3可抑制TNF-α诱导的HUVECs TF基因表达的增强,这种作用依赖于该基因上游序列-244/+121 bp的存在,推测胞内游离钙离子可能参与此抑制作用.     

重组组织因子途径抑制物对兔髂动脉粥样硬化新生内膜增生的抑制

目的：探讨兔髂动脉球囊剥脱术后局部灌注重组组织因子途径抑制物蛋白对血管内膜增生的抑制作用。方法：实验于2003—02／2004-11在哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心及心内科完成。选择雄性日本大耳白兔24只，随机分为2组，重组组织因子途径抑制物组12只和生理盐水组12只。①建立髂动脉球囊损伤模型：将3．0～3．5mm OTW球囊导管沿导丝送人左髂动脉，使球囊近端距腹主动脉远端1cm。以606kPa扩张球囊，反复推拉3次，以剥脱血管内膜。撤出导丝，经OTW球囊按分组分别注入重组组织因子途径抑制物蛋白300峭和生理盐水1．5mL。球囊压力50kPa，保留20min后撤除。术后给予动物高胆固醇饮食（胆固醇、蛋黄粉、脂肪）4周。②测定横切面管腔面积、内弹力板内管腔面积、外弹力板内管腔面积、计算新生内膜面积（内膜面积=内弹力板内管腔面积-横切面管腔面积）、中膜面积（中膜面积=外弹力板内管腔面积-内弹力板内管腔面积）和新生内膜与中膜面积比，采用组织病理学方法，利用计算机图像处理。每段血管的数值均由2名人员读取3张切片（间隔30μm）数值计算均值而得。观察局部血管组织病理学变化，观察实验血管段新生内膜增生情况。结果：2组24只动物均进入结果分析，实验过程中无脱失值。①造膜结果：经过2周高胆固醇饮食饲养后兔血清总胆固醇水平高于饲养前[（17．73&;#177;7．42），（1．10&;#177;0．26）mmol／L，P〈0．01]，经形态学观察确认为典型的髂动脉粥样硬化损伤模型。②组织病理图像分析：重组组织因子途径抑制物组外弹力板内管腔面积、内弹力板内管腔面积、横切面管腔面积分别高于生理盐水组[（1．59&;#177;0．41），（1．21&;#177;0．40），（0．80&;#177;0．22）mm^2，（1．16&;#177;0．36），（0．79&;#177;0．47），（0．24&;#177;0．19）mm^2,P〈0．01]。重组组织因子途径抑制物组新生内膜面积、新生内膜与中膜面积比显著少于生理盐水组[（0.23&;#177;0.21）mm^2，0．74&;#177;0．64，（0．55&;#177;0．24）mm^2，1．61&;#177;0．79，P〈0．01]。结论：应用重组组织因子途径抑制物灌注的方法，经病理学验证可以有效地抑制兔髂动脉球囊损伤后动脉粥样硬化血管的新生内膜增生。     

葛根素对急性冠状动脉综合征患者外周血组织因子和组织因子途径抑制物含量的影响

目的观察葛根素对急性冠状动脉综合征（ACS）患者外周血组织因子（TF）、组织因子途径抑制物（TFPI）的影响,从临床角度探讨葛根素在ACS防治中的作用。方法临床入选52例ACS患者随机分为两组：常规治疗组[n=22,男13例,女9例,平均年龄（63.45±5.23）岁]和常规治疗加葛根素组[n=30,男18例,女12例,平均年龄（65.82±8.16）岁],两组患者均治疗10d。采用酶联免疫吸附法测定两组患者治疗前后外周血TF、TFPI水平。结果 （1）常规治疗组和葛根素组患者治疗前外周血TF、TFPI含量分别为（57.91±9.92）pg/ml和（56.22±8.71）pg/ml、（158.32±19.71）ng/ml和（156.86±20.50）ng/ml,组间差异无统计学意义（P〉0.05）。（2）治疗后常规治疗组和葛根素组患者外周血TF、TFPI含量分别为（47.19±10.20）pg/ml和（39.81±6.93）pg/ml、（191.85±21.82）ng/ml和（207.92±23.36）ng/ml,与治疗前相比及组间比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论葛根素可以降低ACS患者外周血TF的水平,促进TFPI的表达,可能具有稳定斑块,减少血栓形成的作用。     

糖胺聚糖对受刺激内皮细胞组织因子和凝血酶调节蛋白表达 …

目的 研究由玉足海参撮以的糖胺聚糖（ＧＡＧ）抗血栓形成作用的机制。方法 分别用１ｍｇ／Ｌ,５ｍｇ／Ｌ,１０ｍｇ／Ｌ的ＧＡＧ和５ｍｇ／Ｌ３肝素与经１ｍｇ／Ｌ细菌脂多糖（ＬＰＳ）诱导的人脐静脉内皮细胞孵育,６ｈ后观察内皮细胞的促凝活性,组织因子（ＴＦ）和凝血酶调节蛋白（ＴＭ）抗原的表达及ＴＦ和ＴＭ ｍＲＮＡ转录的变化。     

大鼠组织因子基因克隆及其在C6细胞系中的表达

目的:克隆大鼠组织因子(tissue factor,TF)基因,构建真核表达载体pEGFP-N1-TF,转染C6大鼠神经胶质瘤细胞并检测转染细胞内TF表达水平.方法:采用RT-PCR法从Wistar大鼠肺组织中扩增TF基因,克隆到真核表达载体pEGFP-N1上.通过测序鉴定重组质粒中插入TF的完整性和可靠性.应用脂质体法将鉴定正确的重组质粒转入C6细胞中,荧光显微镜下观察EGFP报告基因的表达强度和转染效率,并对转染细胞的TF-eGFP融合蛋白进行Western blot检测.结果:成功构建pEGFP-N1-TF真核表达载体,转染C6细胞24 h后,在荧光显微镜下可以观测到荧光,并通过Western blot技术检测到TF-eGFP融合蛋白的表达.结论:重组真核表达载体pEGFP-N1-TF构建成功,转染C6细胞后获得了良好的瞬时表达.     

重组组织因子途径抑制物对兔髂动脉粥样硬化新生内膜增生的抑制

目的:探讨兔髂动脉球囊剥脱术后局部灌注重组组织因子途径抑制物蛋白对血管内膜增生的抑制作用。方法:实验于2003-02/2004-11在哈尔滨医科大学附属第二医院实验动物中心及心内科完成。选择雄性日本大耳白兔24只,随机分为2组,重组组织因子途径抑制物组12只和生理盐水组12只。①建立髂动脉球囊损伤模型:将3.0～3.5mmOTW球囊导管沿导丝送入左髂动脉,使球囊近端距腹主动脉远端1cm。以606kPa扩张球囊,反复推拉3次,以剥脱血管内膜。撤出导丝,经OTW球囊按分组分别注入重组组织因子途径抑制物蛋白300μg和生理盐水1.5mL。球囊压力50kPa,保留20min后撤除。术后给予动物高胆固醇饮食(胆固醇、蛋黄粉、脂肪)4周。②测定横切面管腔面积、内弹力板内管腔面积、外弹力板内管腔面积、计算新生内膜面积(内膜面积=内弹力板内管腔面积-横切面管腔面积)、中膜面积(中膜面积=外弹力板内管腔面积-内弹力板内管腔面积)和新生内膜与中膜面积比,采用组织病理学方法,利用计算机图像处理。每段血管的数值均由2名人员读取3张切片(间隔30μm)数值计算均值而得。观察局部血管组织病理学变化,观察实验血管段新生内膜增生情况。结果:2组24只动物均进入结果分析,实验过程中无脱失值。①造膜结果:经过2周高胆固醇饮食饲养后兔血清总胆固醇水平高于饲养前犤(17.73±7.42),(1.10±0.26)mmol/L,P<0.01犦,经形态学观察确认为典型的髂动脉粥样硬化损伤模型。②组织病理图像分析:重组组织因子途径抑制物组外弹力板内管腔面积、内弹力板内管腔面积、横切面管腔面积分别高于生理盐水组犤(1.59±0.41),(1.21±0.40),(0.80±0.22)mm2,(1.16±0.36),(0.79±0.47),(0.24±0.19)mm2,P<0.01犦。重组组织因子途径抑制物组新生内膜面积、新生内膜与中膜面积比显著少于生理盐水组犤(0.23±0.21)mm2,0.74±0.64,(0.55±0.24)mm2,1.61±0.79,P<0.01犦。结论:应用重组组织因子途径抑制物灌注的方法,经病理学验证可以有效地抑制兔髂动脉球囊损伤后动脉粥样硬化血管的新生内膜增生。     

Effect of thrombin on the fibrinolytic activity of cultured bovine endothelial cells.

The vascular endothelium is a rich source of plasminogen activator (PA) and thus of blood vessel-associated fibrinolytic activity. Cultured bovine aortic endothelial cells were employed to determine if components of the coagulation system interact with the endothelium to modify expression of this activity. The addition of thrombin to these cultures led to a rapid decline in intracellular PA activity, with as little as 3 ng/ml, or 0.1 nM thrombin causing a 50% decrease within 30 min. Thrombin inactivated with diisopropylflurophosphate or hirudin did not elicit the response. Although control cultures secreted high levels of PA, no PA activity could be detected in the media surrounding the thrombin-treated cells. This loss of activity did not appear to result from direct inactivation of PA by thrombin. These observations indicate that the fibrinolytic potential of cultured endothelial cells is rapidly suppressed by trace amounts of thrombin. The generation of thrombin at sites of vascular injury may have a similar effect on the endothelium.     

血小板活化因子诱导大鼠肺微血管内皮细胞Src抑制的蛋白激酶C底物基因表达

目的 研究血小板活化因子(PAF)对大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC)中Src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)mRNA表达的影响及其信号转导途径.方法 体外培养RPMVEC,采用细胞原位杂交技术检测不同刺激条件下RPMVEC中SSeCKS mRNA的表达变化.结果 正常RPMVEC中有少量SSeCKSmRNA表达,为棕黄色细颗粒状杂交信号,分布于胞质;用10~(-10)、10~(-9)、10~(-8)、10~(-7) mol/L的PAF分别孵育RPMVEC 1.5 h,SSeCKS mRNA表达随其浓度增加而升高(分别为0.054 9±0.000 7、0.059 9±0.001 8、0.069 0±0.001 8、0.075 4±0.001 9),与正常对照组(0.036 8±0.003 7)比较差异均有统计学意义(均P<0.05);10~(-7) mol/L PAF刺激RPMVEC 0.5、1.5、3、6、12、24 h,SSeCKS mRNA表达水平于0.5 h即显著升高(0.071 0±0.001 5),1.5 h达峰值(0.075 6±0.001 7),之后逐渐下降,24 h时(0.043 9±0.001 0)仍高于正常对照组(0.038 2±0.004 1,均P<0.05);10 μmol/L核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二巯基氨甲酸(PDTC)预处理RPMVEC 1 h可显著下调Par对SSeCKS mRNA的诱导效应(0.049 7±0.003 2比0.071 9±0.001 9,P<0.05),而蛋白激酶C(PKC)抑制剂双吲哚基顺丁烯二酰亚胺(BIM)预处理RPMVEC0.5 h则不影响此效应(0.069 7±0.002 1比0.071 9±0.001 9,P>0.05).结论 PAF呈浓度和时间依赖的方式上调RPMVEC中SSeCKS基因转录;NF-κB信号通路而非PKC参与了PAF的诱导效应.     

重组人组织因子途径抑制物-1对兔急性心肌梗死的作用

目的 研究静脉应用重组人组织因子途径抑制物-1(reconthinant tissue factor pathway inhibitor-1,rTFPI-1)对兔急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)冠状动脉再通后预防血栓形成,挽救存活心肌的作用.方法 40只新西兰大白兔,结扎回旋支中段120 min,再灌注60 min.再灌注即刻随机分为对照组、大、中、小剂量rTFPI-1组,每组10只,活体Evan'S蓝染色测定缺血面积,离体心肌切片TTC染色测定心肌梗死面积.心肌缺血及梗死严重程度分别用缺血面积及梗死面积与左室壁心肌面积的比值表示.各组间基本情况、心肌缺血及梗死严重程度比较用完全随机设计单因素方差分析,均数两两比较采用LSD-t检验.结果 大剂量rTFPI一1组心肌梗死严重程度较中、小剂量rTFPI.1组均明显减轻(P<0.05或P<0.01);中剂量rTFPI-1组心肌梗死严重程度较小剂量rTFPI-1组和对照组明显减轻(P<0.01);小剂量rTFPI.1组和对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 兔闭塞冠状动脉再灌注治疗时予rTFPI-1静点可显著减轻心肌梗死严重程度,挽救存活心肌.

Abstract：

Objective To observe the function of recombinant human tissue factor pathway inhibitor1(rTFPI-1)in acute myocardial infarction in rabbit. Method Forty New Zealand White rabbits were subjected to coronary artery occlusion for 120 min and followed by reperfusion for 60 min,then they were ranlow dose rTFPI-1 group(n=10/group).The extent of ischemic area and the extent of myocardial infarction area were measured by Evan's blue stain and TTC stain,respectively.The degrees of infarction severity and ischemic severity were expressed as the ratios of the total left ventrieular wall area.The degrees of infarction severity and ischemic severity in different groups were compared by using one-way ANOVA and then followed by LSD procedure.Results The degree of infarction severity in the larger dose rTFPI-1 group was significantly lessened than that in low dose RTFPI-1 group and control group(P<0.001),and than that in modcrate dose rTFPI-1 group as well(P<0.05).The degree of infarction severity in the moderate dose rTFPI1 group was significantly lessened than that in low dose rTFPI-1 group and control group(P<0.001).There was no significant difference in degree of infarction severity between low dose rTFPI-1 group and control group(P>0.05).Conclusions Human rTFPI-1 might decrease myocardial infarction severity and save the survival myocardial tissue.     

内皮生长因子对低温冻存内皮生长晕细胞增殖及黏附能力的影响

目的:探讨不同浓度血管内皮生长因子(vessel endothelial growth factor,VEGF)对内皮生长晕细胞(endothelial outgrowth cell,EOC)低温冻存过程中细胞生物学功能的保护作用.方法:采用密度梯度离心法分离脐血中的单个核细胞,培养扩增EOC,免疫组化、荧光染色及流式细胞仪检测其内皮细胞特性.第2代细胞用含0、10、25、50ng/mLVEGF的冻存液冻存,24 h后复苏,CCK-8法检测增殖能力;差速贴壁法检测黏附能力.结果:CD34+、KDR+、VE-Cadherin+细胞分别为(61.17±0.44)％、(34.79±6.31)％、(74.64±6.96)％.10ng/mLVEGF组与空白对照组相比,其增殖能力无统计学差异,而黏附能力得到一定程度的保护.25 ng/mLVEGF和50ng/mL VEGF组细胞复苏后的细胞增殖能力与黏附能力均较空白对照组增强.结论:VEGF能够不同程度地保护EOC在低温冻存中的生物学功能.     

Notch信号和血管内皮生长因子基因对大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化后内皮细胞功能的影响

目的 探讨Notch信号和血管内皮生长因子(VEGF165)基因对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)诱导分化后内皮细胞功能的影响.方法 分离、培养大鼠MSCs,用含VEGF165和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的细胞培养液培养大鼠MSCs 2周诱导其向内皮细胞分化;用脂质体将携带有VEGF165基因的质粒转染诱导内皮细胞并对转染效果进行鉴定,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染前后细胞上Notch信号受体Notch 1和配体Jagged 1的表达变化;用γ-内分泌酶抑制剂L-685458阻断细胞Notch信号通路的转导,划痕实验检测细胞迁移能力;将细胞接种在半固体培养基上,观察其形成毛细血管样结构的能力.结果 转染VEGF165基因的内皮细胞上表达有VEGF165 mRNA,说明实验成功地将VEGF165基因导入诱导后内皮细胞中.转染VEGF165基因后,细胞上Notch信号配体Jagged1 mRNA表达增强(1.08±0.01比1.01±0.02,P＜0.01),Notch1 mRNA表达无明显变化(0.60±0.02比0.59±0.01,P＞0.05);细胞的迁移能力增强(划痕空白处细胞个数:46.45±4.46比41.61±1.42,P＜0.05),形成毛细血管样结构能力无明显变化(细胞分级:3.00±0.89比2.00±0.89,P＞0.05).内皮细胞转染VEGF165基因后,以γ-内分泌酶抑制剂L-685458阻断细胞Notch信号通路的转导,则细胞迁移能力(划痕空白处细胞个数:51.72±3.47比46.45±4.46)和形成毛细血管样结构能力(细胞分级:4.17±0.75比3.00±0.89)均进一步增强(均P＜0.05).结论 转染VEGF165基因可增强大鼠MSCs诱导分化内皮细胞的功能,在此基础上阻断Notch信号通路转导可进一步增强细胞功能.     

凝血酶诱导VEC和U937细胞TF与uPAR mRNA表达的差异

比较凝血酶对培养的人血管内皮细胞（ＶＣＥ）和Ｕ９３７细胞表达组织因子和尿激酶型纤淀粉产原激活剂受体（ｕＰＡＲ）ｍＲＮＡ的影响,并探讨其机制。方法在凝血酶,无活性的凝血酶（ＤＦＰ－Ｔ）和）（或）抗凝血酶受体（ＴＲ）１４肽多抗作用下,以ＲＴ－ＰＣＲ法测定培养细胞ＴＦ和ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ,进行分析比较。