线粒体DNA T1095C突变的耳聋患者的临床特征及mtDNA序列分析

目的分析3例携带线粒体12S rRNA基因T1095C突变的耳聋患者的临床特征、其线粒体基因组的全序列特征以及T1095C突变与对非综合征型-耳聋之间的关系.方法对从门诊收集的188例耳聋患者的血样进行线粒体DNA12S rRNA基因突变筛查,发现三例携带T1095C突变,推测T1095C突变所引起的12S rRNA二级结构变化及其可能的线粒体功能的变化.对这三例患者的线粒体基因组进行全序列测定,同时对其临床资料进行分析.结果从门诊收集的188例患者的血样中,发现3例患者携带线粒体12S rRNAT1095C突变,临床表现型的评估表明,这些患者的听力损失(包括发病年龄,听力图)的类型不一.序列分析表明这三个患者的线粒体基因组除都有T1095C的突变之外,其线粒体DNA的多态位点还显示独特的多态性.在364个国人的正常对照组中,没有发现该突变.结论T1095C在这些遗传背景不同的有听力损失的家庭中出现强烈的提示这个突变是导致听力损失的致病因素,T1095C突变可能与非综合征型耳聋有关.在这些线粒体DNA中,还有一些碱基突变,如16S rRNA中的A2238G和T2885C以及在CO2(氧化磷酸化复合体2)基因中的第175位氨基酸由Ile变成Val,在ATP合成酶6基因中的第16位氨基酸由Phe变成Leu,以及在ND6基因中的第112位氨基酸由Val变成Met都位于进化上高度保守的区域,这些突变可能对这3位患者耳聋的临床表型起了一部分作用.     

军事噪声性听力损失群体中线粒体DNA T1095C基因变异研究

目的:分析5例携带线粒体12SrRNA基因T1095C突变的听力损失患者的临床特征、其线粒体基因组的全序列特征及T1095C突变与军事噪声性听力损失之间的关系。方法:利用中国云南某部和北京某部接触军事噪声性易感者(165例)和耐受者(139例)外周血标本共304例,进行线粒体DNA基因突变筛查。对携带T1095C突变的线粒体基因组进行全序列测定,同时对其临床资料进行分析。结果:在实验组165例患者的外周血样中,发现5例受试者携带线粒体12SrRNA T1095C突变,在对照组中没有发现,2组差异有统计学意义(P<0.05)。5例受试者均有军事噪声接触史,均表现为程度不一的感音神经性聋。序列分析表明这5例受试者的线粒体基因组除都有T1095C的突变之外,其线粒体DNA的多态位点还显示有独特的多态性。结论:T1095C在这些遗传背景不同、有接触军事噪声、有听力损失的受试者中出现,提示该突变是导致听力损失的致病因素之一,可在携带者接触军事噪声后发病,T1095C突变可能与军事噪声性听力损失的易感性有关。     

非综合征性耳聋分子病因学分析——线粒体基因组T7511C突变筛查报告

目的筛查非综合征性耳聋患者中线粒体基因组tRNA^ser（UCN）基因T7511C突变发生情况。方法对30例氨基糖甙类抗生素致聋患者、55例非综合征性耳聋家系先证者、131例散发的非综合征性耳聋患者和53例正常人对照,以聚合酶链反应结合限制性内切酶酶解法检测线粒体基因组T7511C的突变情况。结果全部受检者线粒体基因组未检测到tRNA^ser（UCN）基因T7511C突变。结论本组受检者线粒体基因组无T7511C突变的发生,此结果对临床开展非综合征性耳聋的相关基因诊断及遗传咨询有指导意义。     

新疆药物性耳聋相关线粒体突变研究

目的分析新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市特教学校非综合征性耳聋mtDNA A1555G和C1494T突变情况。方法对194例耳聋学生进行临床资料采集,外周静脉血抽取。血样经基因组DNA提取,进行线粒体DNA12S rRNA A1555G和C1494T突变的直接测序检测。结果194例患者中共发现A1555G突变者18例,C1494T突变者2例,携带率分别为9.28%（18/194）和1.03%（2/194）。有明确氨基糖甙类抗生素应用史的学生中mtDNA A1555G携带率为6.52%（3/46）,和没有氨基糖甙类抗生素应用史的患者（15/148）相比差别无统计学意义。新疆两个主要民族汉族和维族mtDNA A1555G携带率无显著性差异。结论mtDNA A1555G突变在新疆地区非综合征性耳聋患者中阳性率很高,高于其他国内外相关报道。mtDNA C1494T突变在新疆耳聋人群中的发生频率很低,可以不考虑列为聋病基因的一线常规检测位点。     

线粒体基因A1555G突变检测试剂盒在药物性耳聋分子诊断中的应用

目的 探讨应用试剂盒方法在大规模耳聋患者群中检测线粒体基因A15556突变的可行性。方法 采用线粒体基因A15556突变检测试剂盒分析324例个体，其中属于25个母系遗传耳聋家系的有56个耳聋患者。散发性耳聋患者257个，正常个体11个，母系遗传耳聋家系中的耳聋患者多有氨基糖甙类抗生素接触史，部分检测结果以Alw26酶切和测序方法验证试剂盒检测的准确性。结果 线粒体基因A15556突变检测试剂盒检测结果证实24个家系中55个耳聋患者携带有A15556突变。另1个耳聋家系中的一名耳聋患者不携带此突变，11个正常个体及257个散发性耳聋患者中无此突变，试剂盒检测方法与Alw261酶切法和测序结果完全吻合。讨论 线粒体基因A15556突变是氨基糖甙类抗生素致聋的主要原因，其患者多分布于母系遗传特点的家系，线粒体基因A15556突变检测试剂盒在分析线粒体基因A15556突变方面具有简单．低耗．结果直观的特点，最短检测周期为3小时30分钟，适合A15556突变的大规模筛查或用药前预防性检查。     

线粒体DNA1555位点突变、非综合征性聋与氨基糖甙类抗生素关系研究

氨基糖甙类抗生素致聋是导致儿童重度感音神经性聋的主要原因，而且具有家族聚集性与易感性。目前认为线粒体DNA1555位点突变是导致氨基糖甙类所致非综合征聋的主要遗传基础。本文试图从线粒体基因1555位点突变结构特点、发病机理、突变的外显率、临床意义等方向作一综述。     

携带线粒体基因突变非综合征型聋患者听力学和遗传学分析

目的　探讨修饰因子对线粒体A1555G突变相关非综合征型聋的影响。方法　对携带线粒体A1555G突变的27个家系69例非综合征型聋患者进行听力学和分子遗传学评估。结果　27个家系平均听力损失患者发病年龄11.96岁,排除氨基糖甙类抗生素接触史者,年龄上升为15.21岁;家系3代内平均听力损失外显率40.96%,排除有氨基糖甙类抗生素接触史者,外显率降至33.45%。27个家系分属8种不同单倍型,并携带tRNAIleA4317G、tRNAGlnC4387T、tRNASer（UCN）T7492C和tRNAThrC15910T四个继发突变。检测到2例GJB2 235 delC纯和突变,1例GJB2 235 delC杂合突变。此外,患者主要表现为轻、中度高频听力损失类型,多为语后聋。结论　氨基糖甙类抗生素、线粒体单倍型及继发突变、GJB2和发病年龄等因素可能参与了携带线粒体A1555G突变者的表型修饰。     

氨基糖甙类抗生素致聋家系线粒体DNA12S和16S rRNA基因突变分析

目的 研究线粒体rRNA基因突变与氨基糖甙类抗生素致聋遗传易感性的关系，为建立相应的基因诊断方法提供依据。方法 收集了五个有明确氨基糖甙类抗生素应用史的耳聋家系共27名成员的外周静脉血标本。从白细胞中提取DNA，PCR扩增线粒体DNA片段。Alw26I限制性内切酶分析和DNA序列分析检测A1555G点突变，并对其中一个家系进行了线粒体DNAl2S和16SrRNA基因的全序列分析。结果家系A．C．D和E的2l份样品均为A1555G点突变阳性，家系B的6份样品为A1555G点突变阴性。家系B线粒体DNAl2S和16SrRNA基因全序列分析显示该家系存在16SrRNA基因第2227位“AA”插入突变。结论 本研究发现了一个A1555G点突变阴性的氨基糖甙类抗生素致聋家系，说明线粒体DNA A1555G点突变不是氨基糖甙类抗生素遗传易感性唯一的分子基础，对氨基糖甙类抗生素致聋遗传易感性的预测仅检测A1555G点突变是不够的。应与mtDNA其它相关突变位点的检测结合起来。     

与氨基糖甙类抗生素耳毒性相关的线粒体12S rRNA突变的流行病学特征

线粒体DNA（mtDNA）12SrRNA是氨基糖甙类抗生素导致的非综合征型听力损失的一个突变热点区域。在这些突变位点中，位于12SrRNA高度保守的解码区的同质性的A1555G和C1494T突变与耳聋相关，这两个突变导致很多患者的氨基糖甙类抗生素中毒性耳聋。A1555G突变和C1494T突变会在12SrRNA的高度保守的A位形成新的1494C—G1555或1494U—A1555碱基对。这些改变使得12SrRNA在二级结构上与细菌的16srRNA的相应区域的二级结构更加相似．因此．由于C1494T和A1555G突变在12SrRNA形成U—A和G—C配对使得氨基糖甙类抗生素的结合更加容易，这就是为何携带这些突变的人在接触了氨基糖甙类抗生素时会出现或加重耳聋的原因。携带C1494T和A1555G突变的细胞的生化特征是线粒体蛋白质合成的异常并随之引起细胞的呼吸功能异常。而且，当用含高浓度的巴龙霉素或新霉素的DMEM培养基来培养携带这两个突变的细胞系时，可以观察到这些细胞与对照细胞系相比会出现生长缺陷和线粒体内蛋白的翻译异常。这些观察为以下结论提供了直接的遗传和生化方面的证据．即A1555G和C1494T突变是导致氨基糖甙类抗生素诱导的非综合征型耳聋的致病性的mtDNA突变。而且，这些研究数据还为我们进行以下预测提供了有价值的信息和方法：（1）哪些患者有耳毒性风险；（2）提高使用氨基糖甙类抗生素治疗时的安全性；（3）逐渐减少耳聋的发生率。     

非综合征型耳聋线粒体基因A1555G突变分析

目的通过分析内蒙古鄂尔多斯市特殊教育学校中非综合征型耳聋患者群体中线粒体基因12S rRNA A1555G突变,以探讨该群体与线粒体突变的关系。方法对鄂尔多斯市特殊教育学校102名非综合征型耳聋患者进行耳聋病因问卷调查、纯音听阈测试、声导抗测试及线粒体A1555G基因突变检测。结果102名非综合征型耳聋患者全部为感音神经性耳聋,54例有明确的氨基糖甙类抗生素用药史,7例（6.9%）存在线粒体基因A1555G位点突变。结论mtDNA 12S rRNA A1555G 在该研究群体中有较高的发生频率,携带有该突变的个体对氨基糖甙类抗生素的耳毒作用有高度易感性。     

蒙古族耳聋患者中常见致聋基因突变分析

目的探讨常见耳聋基因GJB2、线粒体DNA12SrRNA基因SLC26A4在蒙古族耳聋患者中的突变特点。方法收集64例蒙古族耳聋先证者进行GJB2、SLC26A4、mtDNA12SRNA三种常见的耳聋致病基因分子流行病学调查和基因型分析。结果 2例GJB2基因纯合突变均为235delC/235delC,复合杂合突变2例,杂合突变1例;SLC26A4基因纯合突变4例均为919-2A>G/919-2A>G,复合杂合突变4例,杂合突变7例。线粒体DNA12SrRNA1494和1555位点未检测到突变。64例蒙古族耳聋先证者GJB2、SLC26A4和线粒体DNA12SrRNA三种基因突变携带率分别为7.81%(5/64)、23.44%(15/64)和0。突变率最高的基因为SLC26A4(75%,15/20),而在突变基因中GJB2基因占25%(5/20)。结论本组蒙古族非综合征型聋患者三种常见聋病基因中突变率最高的基因是SLC26A4,其次为GJB2基因,而线粒体DNA12SrRNA基因未检出突变。     

广西地区222例感音神经性聋患者常见耳聋基因筛查结果分析

目的：分析广西地区222例感音神经性聋患者常见耳聋基因的突变特点,为临床防聋及治聋提供参考。方法采用晶芯.十五项遗传性聋基因检测试剂盒（微阵列芯片法）对广西地区222例感音神经性聋患者进行常见的4种耳聋基因的15个突变位点检测：GJB2（35del G、235delC、176del16、299del AT ）、SLC26A4（2168A＞G、IVS7－2A＞G、1174A＞T、1226G＞A、1229C＞T、1975G＞C、2027T＞A、IVS15＋5 G＞A）、线粒体DNA12SrRNA （1494C＞T、1555A＞G）和GJB3（538C＞T）,对未确诊的阳性结果进行基因全序列分析。结果222例患者中23例（10．36％,23／222）被检测出耳聋基因突变,其中,GJB2235delC 纯合突变3例（1．35％）,杂合突变8例（3．60％）,GJB235delG杂合突变2例（0．90％）,GJB2235delC／109A＞G 复合杂合突变2例（0．90％）;SLC26A4 IVS7－2 A＞G杂合突变2例（0．90％）,SLC26A41229C＞T纯合突变2例（0．90％）,IVS7－2A＞G／IVS11＋47T＞C／1548insC复合杂合突变2例（0．90％）;GJB3538C＞T 杂合突变1例（0．45％）;线粒体DNA12SrRNA 1555A＞G异质突变1例（0．45％）;1例（0．45％）同时携带GJB2235delC杂合突变及SLC26A41226G＞A杂合突变。结论本组广西地区感音神经性聋患者耳聋基因突变率低于全国水平,主要以 GJB2基因突变为主,其次是SLC26 A4基因突变。     

耳聋-掌跖皮肤角化综合征的连接蛋白基因型和表型分析

目的GJB2、GJB6、GJB3基因与遗传性耳聋及角化病有关，以GJB2、GJB6、GJB3基因为候选基因，研究1例伴有掌跖角化病的综合征型耳聋先证者的分子病因，探讨其表型及遗传特征。方法 采集先证者及其父母外周血并提取DNA，对GJB2、GJB6、GJB3基因编码区进行PCR扩增，以直接测序的方法进行突变分析。结果 先证者及其父母GJB3、GJB6基因测序未发现突变。先证者携带GJB2基因R75W单等位基因突变，其父母未携带此突变，在证实先证者与其父亲的亲子关系后明确先证者携带的R75W为新生突变。301名中国正常对照中未发现GJB2基因R75W突变。结论 在中国首次发现了GJB2基因新生突变R75W，此突变可能以显性方式遗传，导致耳聋-掌跖皮肤角化综合征。在不同种族R75W导致的耳聋多为双侧重度到极重度感音神经性聋。而皮肤表型的严重程度有所不同。     

耳聋基因panel在耳聋基因诊断中的临床应用

目的探讨耳聋基因panel技术在耳聋患者基因诊断中的应用。方法40例耳聋患者首先采用荧光定量PCR结合Sanger测序法检测4个常见耳聋基因的25个位点突变,初检结果单杂合致病突变者行耳聋基因单基因测序或耳聋基因panel检测;初检结果未发现耳聋基因致病性突变者直接行耳聋基因panel检测。16例患者行父母耳聋基因溯源验证。结果40例患者中,耳聋基因筛查检出GJB2基因纯合或复合杂合突变8例、单杂合突变2例,SLC26A4基因纯合突变1例、单杂合突变2例。4例单杂合突变检出者接受进一步的耳聋单基因或耳聋基因panel测序,其中2例分别检出GJB2基因c.235delC/c.610delC及c.235delC/c.109G>A复合杂合突变,2例检出SLC26A4基因c.919-2A>G/c.1548_1549insC复合杂合突变。27例初检结果阴性患者接受了进一步的耳聋基因panel检测,检出GJB2基因c.109G>A纯合突变4例和c.571T>C/c.G109A复合杂合突变1例,MYO7A基因c.397dupC/c.3484A>T复合杂合突变1例,MYO15A基因c.4779+2T>C/c.5008-2A>G复合杂合突变1例,ACTG1基因c.118C>T单杂合突变1例,CDH23基因c.1765G>A/c.6504T>A及c.6049G>A/c.7225-1G>A复合杂合突变各1例。在16例行父母溯源的耳聋患者中,15例患者耳聋基因突变分别遗传自其父母。结论对于耳聋基因热点突变检测结果阴性的耳聋患者,应用耳聋基因panel能有效提高遗传性致病基因检出效率,为其遗传学诊断和临床治疗提供依据。     

山西太原129例重度非综合征型感音神经性耳聋基因的筛查

目的应用耳聋基因芯片对重度极重度非综合征型感音神经性耳聋患者进行筛查。方法采集本地区聋哑学校和门诊散发的重度极重度非综合征型感音神经性耳聋患者129人的外周血并提取DNA,应用耳聋基因芯片检测GJB2,GJB3,SLC26A4,线粒体DNA(mitochondrial,mtDNA)12SrRNA热点突变位点。结果该耳聋人群中与筛查位点有关的耳聋比例占41.09%,共检出GJB2基因突变26例(20.16%);mtDNA突变8例(6.2%);SLC26A4基因突变21例(16.28%);未检出GJB3基因突变。结论本组耳聋人群中与筛查位点有关的耳聋比例高达41.09%,GJB2突变是该人群遗传性聋的最常见病因,SLC26A4突变为第二常见病因。     

APPLICATION OF GENETIC DEAFNESS GENE CHIP FOR DETECTION OF GENE MUTATION OF DEAFNESS IN PREGNANT WOMEN

Objective The study is to identify the carrier rate of common deafness mutation in Chinese pregnant women via detecting deafness gene mutations with gene chip. Methods The pregnant women in obstetric clinic without hearing impairment and hearing disorders family history were selected. The informed consent was signed. Peripheral blood was taken to extract genom- ic DNA. Application of genetic deafness gene chip for detecting 9 mutational hot spot of the most common 4 Chinese deafness genes, namely GJB2 （35delG, 176del16bp, 235delC, 299delAT）, GJB3 （C538T） ,SLC26A4 （ IVS72A〉G, A2168G） and mito- chondrial DNA 12S rRNA （A1555G, C1494T） . Further genetic testing were provided to the spouses and newborns of the screened carriers. Results Peripheral blood of 430 pregnant women were detected, detection of deafness gene mutation carri- ers in 24 cases（4.2%）, including 13 cases of the GJB2 heterozygous mutation, 3 cases of SLC26A4 heterozygous mutation, 1 cases of GJB3 heterozygous mutation, and 1 case of mitochondrial 12S rRNA mutation. 18 spouses and 17 newborns took further genetic tests, and 6 newborns inherited the mutation from their mother. Conclusion The common deafness genes muta- tion has a high carrier rate in pregnant women group, 235delC and IVS7-2A〉G heterozygous mutations are common.     

未通过新生儿听力筛查的婴幼儿耳聋基因与AABR联合筛查结果分析

目的 探讨耳聋基因与听力联合筛查对婴幼儿听力损失诊断的意义.方法 对2015年10月至2016年12月未通过新生儿听力筛查转诊至合肥市妇幼保健所的505例婴幼儿进行AABR复筛,同时采集足跟血制成千滤纸片,对常见的4个耳聋基因的9个位点进行筛查,包括:GJB2 (235delC、299delAT、176del16、35delG)、GJB3(538C＞T)、SLC26A4 (IVS7-2A＞G、2168A＞G)、线粒体12SrRNA(1555A＞G、1494C＞T).结果 505例婴幼儿中有69例(13.7％,69/505)携带耳聋易感基因突变,其中GJB2基因突变56例(81.16％,56/69),SLC26A4基因突变10例(14.49％,10/69),线粒体12 SrRNA基因突变3例(4.35％,3/69),未检出GJB3基因突变.505例中,AABR筛查未通过376例,未通过率为74.46％;69例耳聋基因突变婴幼儿中有37例进行了ABR检测,其中32例(86.49％)存在不同程度听力损失.结论 本组婴幼儿耳聋基因突变类型以GJB2基因为主,其次为SLC26A4基因,耳聋基因筛查是听力筛查的有效补充,两者联合筛查有利于婴幼儿听力损失的早期发现和干预.     

内蒙古赤峰市特教学校耳聋患者线粒体12SrRNA基因突变分析

目的利用基因筛查的方法调查内蒙古赤峰市特教学校耳聋患者的分子学病因,着重进行线粒体12SrRNA基因序列突变分析。方法调查对象来自赤峰市特教学校耳聋患者134例,对照组为中国北方听力正常者75例。所有受检患者均采集外周血并提取DNA,应用特定引物进行线粒体12SrRNA基因测序,对发现携带线粒体12SrRNA基因突变的患者行详细的病史调查、临床资料分析。结果134例耳聋患者中,1例携带线粒体12SrRNA基因1555A>G突变,3例携带1095T>C变异,所有4例突变携带者均有明确的氨基糖苷类药物应用史。对照组中1例携带1095T>C变异。结论线粒体12S rRNA基因在中国北方散发耳聋人群中具有一定的突变比例,赤峰地区聋哑人群的耳聋病因与线粒体12SrRNA突变关系较密切,1095T>C变异很可能和1555A>G突变一样与母系遗传氨基糖苷类药物性聋有密切关系。     

中国西北地区线粒体DNA12SrRNAA1555G和GJB2基因突变

目的研究mtDNA 12SrRNA A1555G突变和GJB2突变在西北地区非综合征型感音神经性聋患者中的流行情况,探讨GJB2基因与mtDNA A1555G点突变的关系。方法收集本地区221例非综合征感音神经性聋患者的基因组DNA,多聚酶链反应扩增线粒体DNA和GJB2基因目的片断,Alw26Ⅰ限制性内切酶检测A1555G点突变,对酶切阳性病例和全部的GJB2基因的PCR产物进行DNA测序。结果21例患者检出mtDNA 12SrRNA A1555G突变;发现GJB2基因11种序列改变,有44例患者检出GJB2致病突变,235delC占携带致病突变患者的54．54％：在21例A1555G突变患者中,11例为GJB2基因多态改变,9例未检出GJB2基因序列改变,1例为109G→A（V371）突变。结论mDNA 12SrRNA A1555G在这一地区人群中有较高的发生频率．235delC是本地区GJB2基因突变的主要形式,GJB2基因突变不是mtDNA A1555G突变致聋的主要修饰因素。     

安阳市特教学校重度感音性聋分子病因学分析--GJB2 235delC突变和线粒体DNA 12SrRNA A1555G突变筛查报告

目的 调查河南省安阳地区重度感音神经性耳聋聋病分子病因学情况。方法对安阳市聋哑学校160名学生进行耳聋病因问卷调查、纯音听阈测试。对其中154名非综合征性感音神经性耳聋患者进行线粒体DNA 12SrDNA A1555G点突变检测和G朋12基因突变检测。结果 8例（5．19％）存在线粒体DNA 12SrDNA A1555G点突变；11例（7．14％）存在GJB2 235delC纯合突变；13例（8．44％）存在GJB2 235delC杂合突变。在分子水平能够明确诊断者占20．77％。结论 安阳地区耳聋患者存在较高的遗传性耳聋发生率。特别是线粒体DNA A1555G突变发生率高于全国平均水平，通过聋病分子诊断，可达到防聋、指导聋儿康复及评估耳聋预后等积极效果。