大肠埃希菌的耐药性及耐消毒剂基因研究

目的 了解大肠埃希菌的耐药性,同时了解产ESBLs大肠埃希菌耐消毒剂基因qacE△1-sul1的流行情况,揭示大肠埃希菌的耐药机制.方法 2007年1月-2011年11月医院分离的3688株大肠埃希菌用VITEK-32GNI+鉴定,GNS-448检测对氨基糖苷类、(p-)内酰胺类、喹诺酮类等15种抗菌药物的耐药性,并对其中36株产ESBLs大肠埃希菌用PCR法检测耐消毒剂基因qacE△1-sul1的流行状况.结果 3688株大肠埃希菌中共检出1660株产ESBLs菌株,检出率为45.0％;大肠埃希菌除对阿米卡星、亚胺培南、美罗培南、头孢西丁、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦耐药率较低外,对其他抗菌药物均产生了一定的耐药性,36株产ESBLs大肠埃希菌对氨苄西林、头孢唑林、头孢呋辛、庆大霉素全耐药,未检出亚胺培南、美罗培南耐药株;36株产ESBLs大肠埃希菌耐消毒剂基因qacE△1-sul1检测结果22株阳性,检出率为61.1％.结论 大肠埃希菌耐药性严重,但近几年基本稳定,产ESBLs大肠埃希菌存在多药耐药性;产ESBLs大肠埃希菌耐消毒剂基因qacE△1-sul1检出率较高,且与多药耐药关系密切.     

肺炎克雷伯菌中Ⅰ类整合子与qacE△1-sul1基因的研究

目的 了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子和qacE△1-sul1耐消毒剂基因的携带情况.方法 收集临床住院患者分离出的产ESBLs肺炎克雷伯菌108株;采用K-B法测定抗菌药物的敏感性;聚合酶链反应(PCR)检测Ⅰ类整合子和qacE△1-sul1基因.结果 Ⅰ类整合子基因总检出率为53.70％,qacE△1 -sul1基因总检出率为63.89％;产ESBLs肺炎克雷伯株Ⅰ类整合子阳性株除对氨苄西林和哌拉西林的耐药率与Ⅰ类整合子阴性株差异无统计学意义以外,对其他抗菌药物的耐药率均明显高于整合子阴性株,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 医院产ESBLs肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子和qacE△ 1-sulⅠ耐消毒剂基因携带率均较高,应进一步加强Ⅰ类整合子和耐消毒剂基因菌株的流行病学监测,并根据耐消毒剂状况,在消毒剂的使用上作出相应的调整.     

大肠埃希菌Ⅰ类整合子与消毒剂抗性的研究

目的了解医院大肠埃希菌的Ⅰ类整合子遗传标记qacEΔ1-sul1基因存在状况。方法对临床分离的34株大肠埃希菌,采用PCR方法检测Ⅰ类整合子遗传标记qacEΔ1-sul1基因。结果 34株大肠埃希菌qacEΔ1-sul1基因阳性有28株(82.4%)。结论 34株大肠埃希菌药敏试验结果显示,β-内酰胺酶和氨基糖苷类抗菌药物耐药性高与Ⅰ类整合子遗传标记qacEΔ1-sul1基因高检出率有关。     

新疆地区鲍氏不动杆菌qacE△1-sull基因检测及临床意义

目的 研究乌鲁木齐地区住院患者中分离的鲍氏不动杆菌qacE△1-sull耐药基因,以了解此基因在新疆地区的分布及差异性.方法 采用API系统鉴定分离菌株,根据CLSI的标准采用K-B法和微量稀释法测定抗菌药物的敏感性;最后采用聚合酶链反应检测qacE△1-sull基因并在基因库上比对.结果 耐药表型显示鲍氏不动杆菌对三代的头孢噻肟和四环素耐药率最高,均达到100.0%,头孢派酮/舒巴坦等加酶抑制剂耐药率最低,鲍氏不动杆菌携带qacE△1-sull耐药基因高达52.5%.结论 新疆地区鲍氏不动杆菌耐药产生率较高;qacE△1-sull耐药基因携带率高;应进一步加强由整合子携带耐药基因进行耐药传播的菌株的流行病学监测.     

大肠埃希菌Ⅰ类整合子与多药耐药的相关性探讨

目的探讨临床分离多药耐药大肠埃希菌(ECO)的Ⅰ类整合子流行分布及与多药耐药之间可能存在的关系。方法采用纸片扩散法(K-B法)检测71株大肠埃希菌对3类4种常用抗菌药物的药敏率;PCR方法检测Ⅰ类整合子3个不同部位的基因。结果 71株大肠埃希菌耐庆大霉素47株为66.20%、耐左氧氟沙星45株为63.38%、耐头孢噻肟42株为59.15%、耐头孢他啶13株为18.31%,多药耐药率为32.39%;Ⅰ类整合子的总检出率为88.73%,整合子阳性与阴性株对庆大霉素、左氧氟沙星、头孢噻肟的药敏分布差异有统计学意义(P<0.05),多药耐药菌株中Ⅰ类整合子基因的阳性率为100.0%,耐多药菌株与全敏感菌株差异有统计学意义(P<0.05)。结论大肠埃希菌的Ⅰ类整合子的检出率高,且与其多药耐药性密切相关。     

健康人大肠埃希菌中Ⅰ类整合酶基因IntI1定位分析

目的:了解健康人大肠埃希菌中I类整合子基因定位情况,探讨其在细菌耐药性获得与传递中的作用.方法:采用质粒接合实验和斑点杂交实验.结果:64.3%的整合子位于接合性质粒上,35.7%位于染色体或其他非接合性质粒中.结论:本文研究的整合子阳性菌株对耐药基因的捕获主要是通过接合性质粒介导的,造成耐药基因的水平播敞.     

Ⅰ类整合酶与大肠埃希菌耐药关系的初步研究

目的 了解医院大肠埃希菌临床分离株的耐药性变迁及Ⅰ类整合酶在产与非产ESBLs大肠埃希菌中的分布状况,分析和评估Ⅰ类整合酶在该菌耐药中的作用.方法 按CLSI 2010年标准,用K-B法进行药敏试验,双纸片协同法检测产ESBLs株,PCR法扩增Ⅰ类整合酶基因;数据经x2检验进行统计学分析.结果 2006-2010年大肠埃希菌对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、呋喃妥因等耐药性较低,对其他各类的药物表现出较高的耐药率,未检出亚胺培南耐药株;部分菌株对氨基糖苷类药物的耐药性有稍下降的趋势;150株大肠埃希菌中104株Ⅰ类整合酶扩增阳性,产ESBLs菌株中Ⅰ类整合酶的检出率为71.8％,非产ESBLs菌株中检出率为66.6％,差异无统计学意义;Ⅰ类整合酶阳性菌株和阴性株对氨基糖苷类抗菌药物耐药率比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 医院大肠埃希菌5年中耐药性多呈轻度升高趋势,Ⅰ类整合酶与产ESBLs耐药无关,Ⅰ类整合酶阳性株对多种抗菌药物的耐药率大于整合酶阴性菌株,建议临床加强对大肠埃希菌耐药性的监测.     

铜绿假单胞菌烧伤患者分离株qacE△1-sull基因检测及临床意义

目的 了解分离自烧伤病房患者的铜绿假单胞菌中消毒剂-磺胺耐药qacE△1-sull基因的存在状况.方法 采用GNS-448药敏卡及K-B法测定抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)测定qacE△1-sull基因并进行序列分析.结果 32株铜绿假单胞菌对氨苄西林、头孢呋辛、头孢西丁、复方新诺明完全耐药,对阿米卡星的敏感率最高为68.0%,对庆大霉素的敏感率为46.9%,而对亚胺培南、美罗培南的耐药率分别达到68.8%、59.4%;16株(50.0%)qacE△1-sull基因阳性.结论 分离自烧伤患者的铜绿假单胞菌耐药严重,qacE△1-sull基因携带率较高.     

不同标本来源大肠埃希菌分布菌毛及基因分型研究

目的 调查医院不同标本分离大肠埃希菌P菌毛基因分型,探究基因分型与标本来源之间的关系.方法 收集2009年1-12月温州医学院附属第二医院分离大肠埃希菌120株,采用Microscan Walk away 96SI微生物鉴定仪进行鉴定和药敏试验,按CLSI 2009年标准判定;用PCR法检测P菌毛和Ⅰ型菌毛基因;采用X2检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 papC基因阳性率为39.19％,其中尿液分离株阳性率为54.50％,显著高于痰液、引流液以及脓液分离株(P＜0.05);pa pG分型率为64.20％,pa pGⅡ型检出率为46.67％,其中尿液分离株阳性率为70.54％,显著高于痰液和血液分离株(P＜0.05);pa pGⅢ型检出率为17.50％,其中尿液分离株阳性率为25.00％,显著高于痰液分离株(P＜0.05);未检测出pa pG Ⅰ型.结论 不同标本分离大肠埃希菌pa pC基因携带率不同,尿液中肾盂肾炎大肠埃希菌(UPEC)的分离率最高,pa pG分型以pa pGⅡ型为主,存在部分pa pGⅢ型.     

肠出血性大肠埃希菌1类整合子与耐药性关系

目的研究48株(国内28株，美国20株)肠出血性大肠埃希菌(EHEC)的耐药特点以及1类整合子的分布，探讨整合子中耐药基因盒的种类及与细菌耐药性的相互关系。方法琼脂稀释法对18种抗生素进行耐药性监测和分析；PCR法鉴定1类整合子阳性株；PCR产物测序及分析。结果48株肠出血性大肠埃希菌中23株为O157：H7；2个地域的肠出血性大肠埃希菌对抗生素的耐药情况大多无差别，只存在对氨苄西林和红霉素耐药率的差异，前者为国内分离株(60．7％)高于美国分离株(30％)，后者为美国分离株(95％)高于国内分离株(60.7％)。耐3种以上抗生素的肠出血性大肠埃希菌18株(美国3，中国15)。48株分离株中有11株(22．9％)鉴定出1类整合子，PCR产物测序分析可见，9株携带aadA1基因盒，2株携带aadA2基因盒，传递对氨基糖苷类抗生素的耐药性。结论1类整合子及其相关的基因盒广泛存在于肠出血性大肠埃希菌中，而且决定着对氨基糖苷类抗生素的耐药性。     

qacE△1-sull阳性多药耐药革兰阴性杆菌的临床分布特征

目的 了解携带耐消毒剂磺胺复合物基因qacE△1-sull的多药耐药革兰阴性杆菌临床分布状况,为多药耐药革兰阴性杆菌医院感染预防控制提供依据.方法 采用聚合酶链反应(PCR)检测多药耐药革兰阴性杆菌qacE△1-sull基因,分析其阳性菌株的分布特点.结果 182株qacE△1-sull基因阳性多药耐药革兰阴性杆菌临床分布以重症监护病房(ICU)最多(55株,30.22%),其次为普外科(38株,20.88%);标本分布以痰标本检出率最高(52.20%).结论 耐消毒剂基因qacE△1-sull多药耐药革兰阴性杆菌分布以ICU、普外科较高,应作为防范重点,加强医院环境微生物监测,防止感染携带耐消毒剂基因多药耐药菌感染的局部流行和暴发.     

大肠埃希菌β-内酰胺酶、质粒AmpC酶与Ⅰ类整合酶基因研究

目的探讨大肠埃希菌β-内酰胺酶、质粒AmpC酶与Ⅰ类整合酶基因的存在状况。方法采用M-H药敏平板对40株临床分离的大肠埃希菌进行抗菌药物敏感试验,PCR方法检测8种β-内酰胺酶基因、2种质粒AmpC酶与Ⅰ类整合酶基因。结果40株大肠埃希菌呈多重耐药,β-内酰胺酶基因TEM、SHV、LEN、CTX-M-1、CTX-M-9、VEB、GES、PER阳性率分别为55.0%、7.5%、55.0%、12.5%、45.0%、5.0%、45.0%、35.0%,质粒AmpC酶基因ACT-1、DHA阳性率分别为57.5%、40.0%,Ⅰ类整合酶基因intⅠ1阳性率为47.5%。结论临床分离的大肠埃希菌多重耐药严重,β-内酰胺酶基因、质粒AmpC酶基因、Ⅰ类整合酶基因携带率高。     

产志贺样毒素大肠埃希菌Ⅰ类整合子的鉴定和分析

目的阐明各种来源的产志贺样毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-producing E. coli,STEC)中I类耐药整合子的分布、特征、所含基因盒的状况以及所表达的耐药信息.方法常规分离出大肠埃希菌、血清学分型,PCR法鉴定产stx1-2毒素性菌株;纸片扩散法对17种抗菌药物进行耐药性监测和分析;PCR法鉴定I类整合子阳性株;PCR产物测序并对结果进行分析.结果各种标本中共鉴定出46株产志贺样毒素大肠埃希菌,其中23株为O157:H7;全部STEC对复方新诺明耐药,对链霉素耐药率为28.3%,氨苄西林为30.4%,而且有5株对至少＞4种抗菌药物多重耐药,耐药谱为复方新诺明-链霉素-氨苄西林-庆大霉素;46株分离株中有11株(23.9%)鉴定出I类整合子,PCR产物测序得知9株携带aadA1基因盒,2株携带aadA2基因盒,均来自氨基糖苷类抗菌药物耐药菌株(39.3%),传递对氨基糖苷类抗菌药物的耐药性.结论I类整合子存在于各种来源的产志贺样毒素大肠埃希菌中,并携带相应的基因盒,决定着对氨基糖苷类抗菌药物的耐药性.     

大肠埃希菌新的氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解大肠埃希菌（ECO）新的氨基糖苷类修饰酶基因存在状况。方法用聚合酶链反应（PCR）法对34株分离自患者的ECO进行aac（6’）-Ⅰb、aac（6’）-Ⅱ、aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅰ、ant（3”）-Ⅰ、ant（2”）-Ⅰ等6种氨基糖苷类修饰酶基因检测研究。结果34株ECO中氨基糖苷类修饰酶基因aac（6’）-Ⅰb阳性8株（23．5％）、aac（3）-Ⅱ阳性27株（39．4％）、ant（3”）-Ⅰ阳性3株（8．8％），其余基因均阴性。结论氨基糖苷类高耐药性与氨基糖苷类修饰酶基因高检出率（85．3％）有关；在同-所医院的ECO中同时检出aac（6’）-Ⅰb和aac（6’）-Ⅰb-cr两种亚型，为国内外首次报道。     

致泌尿系统感染中大肠埃希菌Ⅰ类整合子的研究

目的：分析泌尿系统感染中大肠埃希菌Ⅰ类整合子的流行情况和分子特征。方法：应用全自动细菌分析仪Microgcan WalkAway40和纸片扩散法，对40株大肠埃希菌进行抗生索敏感性测定，PCR扩增细菌总DNA上的Ⅰ类整合子。对扩增产物进行测序。并分析其中的基因盒。利用脉冲场电泳（PFGE）对菌株进行分子分型。结果：22株细菌含有Ⅰ类整合子，整合子大小为1000、1200、1700和3000bp，22株细菌各含1-2个整合子。1000bp整合子含基因盒aadA1。1200bp整合子含基因盒dfr1—OFRx，1700bp整合予含基因盒dfr17-aadA5，3000bp整合子两端分别含基因盒aadB、cmlA1，40株细菌被分为不同的基因型，在不同基因型菌株中发现了相同的整合子。结论：整合子在泌尿系统感染大肠埃希中广泛存在，整合子是介导细菌耐药性的重要分子机制，基因分型结果提示整合子在细菌种内水平传播。     

致血液系统感染大肠埃希菌中Ⅰ类整合子参与耐药的研究

目的：探讨致血液系统感染大肠埃希菌中Ⅰ类整合子介导耐药性的分子机制。方法：应用全自动细菌分析仪Microscan WalkAway40和纸片扩散法，对16株大肠埃希菌进行抗生素敏感性测定，PCR扩增细菌总DNA上的Ⅰ类整合子，对扩增产物测序并分析其中的基因盒。结果：8株细菌含有Ⅰ类整合子，整合子大小分别为600bp、1700bp和2500bp，600bp整合子含基因盒dfr2d，1700bp整合子含基因盒dfr17-aadm5。结论：整合子在介导细菌耐药性方面发挥着重要作用。     

老年患者大肠埃希菌分离株Ⅰ类整合子的研究

目的了解老年患者大肠埃希菌分离株Ⅰ类整合子遗传标记携带情况。方法采用微量稀释法做耐药菌株的药敏试验,聚合酶链反应(PCR)扩增检测intⅠ1、intⅠ2、intⅠ3基因,扩增产物纯化后基因测序。结果大肠埃希菌对阿米卡星耐药率为60.0%,对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶耐药率为95.0%,对第三代头孢菌素耐药率为100.0%(均为产ESBLs菌株),且与Ⅰ类整合子的存在密切相关,intⅠ1基因的阳性16株(80.0%),intⅠ2、intⅠ3基因均阴性。结论大肠埃希菌的耐药与耐药基因传递机制-整合子密切相关,Ⅰ类整合子的存在加快了细菌耐药性的传播。     

多重耐药革兰阴性杆菌耐消毒剂基因qacE△1 sul1监测

目的了解某院临床常见革兰阴性(G-)杆菌多重耐药株耐消毒剂基因qacE△1 sul1的产生情况。方法收集临床分离的G-杆菌235株,包括155株多重耐药株和80株敏感株,采用聚合酶链反应（PCR）法检测qacE△1 sul1基因,并进行DNA测序。结果在50株产超广谱β 内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌、27株产ESBLs肺炎克雷伯菌、50株多重耐药的铜绿假单胞菌和28株多重耐药的鲍曼不动杆菌中,检出qacE△1 sul1 株分别为37、24、46、28株,检出率分别为74.00％、88.89%、92.00%和100.00％,总的检出率为87.10％;在非产ESBLs的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌以及铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的敏感株（各20株）中,分别检出qacE△1 sul1株 16、7、5、13株,检出率分别为80.00％、35.00%、25.00%和65.00％,总的检出率为51.25％。结论该院G-杆菌多重耐药株耐消毒剂基因qacE△1 sul1的携带率较高,加强多重耐药菌对消毒剂耐药性的监测,对临床合理使用消毒剂具有重要意义。     

污水中大肠埃希菌携带第1类整合子的鉴定和特征分析

目的：探讨污水中大肠埃希菌携带第1类耐药整合子的分布、特征及所含基因盒的种类。方法：常规方法分离大肠埃希菌；纸片扩散法对9种抗生素进行耐药性监测和分析；PIER鉴定1类整合子阳性株；PCR产物测序并对结果进行分析。结果：42份标本中分离出24株大肠埃希菌，为多重耐药菌株，耐药谱为氨苄西林-复方磺胺-红霉素-四环素-链霉素-庆大霉素。有3株（12．5％）鉴定出1．6kb 1类整合子，PCR产物测序得知携带pse-1-aadA1、pse-1-aadA2、pse-1-aacA1基因盒，传递对β-内酰胺类-氨基糖苷类抗生素的耐药性。结论：1类整合子存在于污水来源的大肠埃希菌中，并携带相应的耐药基因盒，决定着对β-内酰胺类-氨基糖苷类抗生素的耐药性。     

食品中大肠埃希菌整合子与耐药性的关系研究

目的：研究食品中大肠埃希菌的整合子携带情况及其与耐药性之间的关系。方法：PCR检测细菌总DNA中1、2、3类整合酶基因，确定细菌携带整合子的情况。阳性菌株进一步检测整合子的可变区，分析插入基因盒的序列。结果：50株大肠杆菌中19株携带1类整合子，2株携带2类整合子，集中分布在对4种以上抗生素耐药的菌株中。插入基因盒主要是dfr和aadA类基因盒，各种基因盒组合中最常见的是dfr17-aadA5。结论：细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致，但是单个菌株的耐药谱与整合子的耐药基因盒缺乏对应关系。