肺炎克雷伯菌耐药性及16种β-内酰胺酶基因分型研究

目的:了解20株肺炎克雷伯菌(KPN)耐药性及β-内酰胺酶产生状况.方法:对20株KPN菌进行了16种β-内酰胺酶基因(TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、PER、GES、VEB、CARB、DHA、ACT-1)检测.结果:20株KPN菌检出TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-9群、OXA-1群、DHA等6种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为85%、25%、25%、20%、25%、70%.20株KPN菌中有19株至少检出1种β-内酰胺酶基因,最多同时检出6种β-内酰胺酶基因.并在国内首次发现CTX-M-55型.结论:该20株KPN菌β-内酰胺类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶密切相关.     

1株携带6种β-内酰胺酶基因的肺炎克雷伯菌

目的了解对亚胺培南敏感的肺炎克雷伯菌（KPN）β-内酰胺酶产生状况。方法对1株KPN用PCR法进行了16种β-内酰胺酶基因（TEM、SHV、LEN、OKP、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、PER、GES、VEB、CARB、DHA、ACT-1）检测。结果检测显示TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-9群、OXA-1群、DHA等6种阳性。结论该株KPN同时携带6种β-内酰胺酶基因。     

大肠埃希菌老年患者分离株β-内酰胺酶基因与毒力基因研究

目的 了解大肠埃希菌(ECO)老年患者分离株β-内酰胺酶基因与毒力基因产生状况.方法 对20株ECO进行15种β-内酰胺酶基因(TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、PER、GES、VEB/CEF、CARB、DHA、ACT/MIR、LAT/CMY)及毒力基因(CNF-1、CNF-2)检验.结果 20株ECO检出TEM基因14株、SHV基因3株、CTX-M-1群基因1株,20株ECO中至少检出1种β-内酰胺酶基因,7株同时检出>2种β-内酰胺酶基因.结论 该20株ECO β-内酰胺类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶密切相关.     

肺炎克雷伯菌耐药性及16种β-内酰胺酶基因分型研究

目的：了解20株肺炎克雷伯菌（KPN）耐药性及β-内酰胺酶产生状况。方法：对20株KPN菌进行了16种β-内酰胺酶基因（TEM、SHV、CTX—M—1群、CTX—M-2群、CTX—M-9群、OXA—1群、OXA-2群、OXA—10群、PER、GES、VEB、CARB、DHA、ACT—1）检测。结果：20株KPN菌检出TEM、SHV、CTX-M—1群、CTX-M-9群、OXA-1群、DHA等6种β-内酰胺酶基因，阳性率分别为85％、25％、25％、20％、25％、70％。20株KPN菌中有19株至少检出1种β-内酰胺酶基因，最多同时检出6种β-内酰胺酶基因。并在国内首次发现CTX-M-55型。结论：该20株KPN菌β-内酰胺类抗菌药物耐药与产β-内酰胺酶密切相关。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶与Ⅰ类整合酶基因研究

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌中β-内酰胺酶和Ⅰ类整合酶(intⅠ1)基因存在状况。方法对35株肺炎克雷伯菌,采用聚合酶链反应(PCR)检测TEM、SHV、OKP、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、GES、PER、VEB、OXA-10、ACT-1、LEN、DHAi、ntⅠ1基因。结果35株肺炎克雷伯菌中检出β-内酰胺酶基因22株,阳性率62.9%;intⅠ1阳性21株,阳性率60.0%。结论产ESBLs肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因和intⅠ1基因携带率高。     

多药耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因及ompK36膜孔蛋白基因突变研究

目的了解多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKPN)所携带的β-内酰胺类药物耐药基因的状况。方法对20株MDRKPN进行了22种耐药基因的PCR法检测,包括A类β-内酰胺酶基因TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-8群、CTX-M-9群、CTX-M-25群、PER、GES、VEB、CARB、LAP、KPC;B类β-内酰胺酶基因IMP、VIM、NDM;C类β-内酰胺酶基因LEN、OKP、DHA群;D类β-内酰胺酶基因OXA-10群、OXA-48群和膜孔蛋白基因ompK36。结果 20株MDRKPN检出4种β-内酰胺酶基因,分别为A类TEM、CTX-M-1、LAP和C类DHA,其ompK36膜孔蛋白基因检测出4株为基因缺失和16株为基因突变。结论 20株MDRKPN除1株外均检出1~3种β-内酰胺酶基因;ompK36膜孔蛋白基因检测结果显示,该蛋白均有缺陷;提示该组MDR-KPN耐β-内酰胺类药物为产β-内酰胺酶和ompK36膜孔蛋白缺陷的双重作用。     

植生克雷伯菌与肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶编码基因研究

目的调查一组耐药克雷伯菌属β-内酰胺酶编码基因表达状况以及KPC型β-内酰胺酶编码基因与插入序列的关系,为临床治疗提供参考依据。方法收集医院2009年10月-2011年3月分离出的20株克雷伯菌属,采用K-B纸片扩散法进行抗菌药物敏感性判断;采用聚合酶链反应(PCR)法检测A、B、C、D等4类40种β-内酰胺酶基因,PCR法连锁检测KPC型β-内酰胺酶编码基因与插入序列,采用Chromas软件对PCR阳性产物测序结果进行读序,并对测序结果用Chromas直接作BLAST Search比对。结果 20株克雷伯菌属共检出5种A类β-内酰胺酶编码基因TEM、SHV、CTX-M-1群、LAP、KPC,1种C类β-内酰胺酶编码基因DHA,1种D类β-内酰胺酶编码基因OXA-1群,阳性检出率依次为SHV100.0%、TEM8 5.0%、DHA85.0%、CTX-M-1群55.0%、KPC45.0%、LAP10.0%和OXA-1群5%;9株KPC阳性菌株KPC-ISKpn6连锁检测均为阳性。结论产β-内酰胺酶是克雷伯菌属耐β-内酰胺类药物的重要成因之一,KPC型β-内酰胺酶编码基因由插入序列ISKpn6介导。     

变形杆菌β-内酰胺酶耐药基因分子特征

目的研究石家庄市2011—2014年食品及食物中毒分离的129株奇异变形杆菌(P.mirabilis)耐药及基因分子特征。方法选取BD Phoenix全自动细菌鉴定/药敏系统初筛可疑产β-内酰胺酶的奇异变形杆菌菌株,用PCR方法检测超广谱β-内酰胺酶基因(bla TEM、bla SHV、bla CTX-M-1、bla CTX-M-2、bla CTX-M-9、bla CTX-M-13)、Amp C基因(bla DHA、bla CMY)和碳青霉烯酶基因(bla VIM、bla IMP、bla OXA),并对其进行测序。结果 116株(占89.9%)奇异变形杆菌检出耐药基因,经DNA测序后最常见基因型为bla OXA-320(n=102),其次是bla CTX-M-14(n=61)、bla TEM-1(n=36)和bla CMY-2(n=11),其他耐药基因未检出。27株(占20.9%)奇异变形杆菌携带单一耐药基因,89株(占69.0%)携带两种及以上耐药基因。菌株ESBLs流行模式主要为CTX-M-14+OXA-320(占38.8%),其次是TEM-1+OXA-320(占18.6%),再次为OXA-320(占14.7%)。结论首次在变形杆菌中检出OXA-320型碳青霉烯酶,变形杆菌ESBL流行模式为CTX-M-14+OXA-320,单菌株可同时存在多种耐药机制。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌相关耐药基因研究

目的 了解常州地区大肠埃希菌耐药状况及β-内酰胺类耐药基因.方法 用琼脂稀释法检测氨苄西林、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头抱噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南和亚胺培南对大肠埃希菌的最低抑菌浓度,用聚合酶链反应(PCR)检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌TEM、SHV等17种耐药基因,并用DNA测序仪测序.结果 80株大肠埃希菌ESBLs检出率为46.3%,37株大肠埃希菌检出TEM、SHV、CTX-M-1群、OXA-1群和DHA 5种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为81.1%、78.4%、21.6%、10.8%、5.4%;37株菌中有36株至少检出1种β-内酰胺酶基因,24株同时检出>2种β-内酰胺酶基因,1株菌最多同时检出4种β-内酰胺酶基因,只有1株未检出β-内酰胺酶基因.结论 大肠埃希菌已携带多种β-内酰胺酶耐药基因,成为对β-内酰胺类抗菌药物耐药的重要原因之一.     

产ESBLs肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因检测

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌临床分离株中β-内酰胺酶(bla)基因流行状况。方法采用美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的的表型筛选与确证试验检测ESBLs,应用PCR扩增产ESBLs菌株bla(TEM)、bla(SHV)、bla(CTX-M)基因,并对PCR阳性产物进行克隆后测序确定其基因亚型。结果 46株产ESBLs肺炎克雷伯菌中,基因检出率分别为bla(TEM)11株,占23.9%;bla(SHV)13株,占28.3%;bla(CTX-M)43株,占93.5%;携带1种bla基因菌株21株,占45.7%;携带2种20株,占43.5%;携带3种3株,占6.5%;全部菌株bla(TEM)基因测序结果均为TEM-1亚型,bla(SHV)基因为SHV-11、12、28亚型;部分菌株bla(CTX-M)基因测序结果为CTX-M-15、24、38亚型。结论产ESBLs肺炎克雷伯菌中ESBLs基因型以CTX-M型为主,其次为SHV型,部分菌株同时携带广谱β-内酰胺酶基因TEM-1或SHV-11;监测产ESBLs细菌β-内酰胺酶基因流行状况,有助于指导临床合理应用抗生素。     

华南地区出现新型CMY型AmpCβ-内酰胺酶

目的分析多重耐药弗劳地柠檬酸杆菌29号试验菌株耐β-内酰胺抗生素的原因及耐药性的转移性。方法用双纸片扩散法和改良三相试验分析4株弗劳地柠檬酸杆菌所产β内酰胺酶,进行初步分类,再用聚合酶链反应(PCR)扩增和PCR产物测序方法确认β内酰胺酶基因。结果29号试验菌株产CMY与DHA型AmpC型β-内酰胺酶,同时还有TEM、SHV型超广谱β内酰胺酶。DNA测序表明该基因和CMY-2有97%的同源性,为一种新的CMY型头孢菌素酶。结论29号试验菌株耐β内酰胺抗生素的原因,可能是产生了可转移的CMY、DHA-1型AmpC及TEM、SHV型ESBLs,基因位于质粒上。     

鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解临床分离的鲍氏不动杆菌中β-内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶编码基因存在状况。方法自临床分离39株鲍氏不动杆菌,采用聚合酶链反应(PCR)检测耐药基因(TEM、SHV、PER、VEB、GES、CARB、CTX-M-1群、OXA-23群、OXA-24群、IMP、VIM、DHA、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ)。结果39株中TEM阳性13株(33.3%)、OXA-23群阳性20株(51.3%)、aac(3)-Ⅰ阳性25株(64.1%)、aac(6′)-Ⅰ阳性25株(64.1%)、ant(3″)-Ⅰ阳性29株(74.4%),其余基因均阴性。结论在绍兴临床分离的鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶编码基因携带率高。     

鲍氏不动杆菌耐药性与β-内酰胺酶基因型研究

目的了解鲍氏不动杆菌的耐药情况和β-内酰胺酶基因型分布。方法采用K-B纸片法对122株鲍氏不动杆菌临床分离株进行的药敏检测,并通过特异性的聚合酶链反应和DNA序列测定的方法,测定了这些菌株中的β-内酰胺酶相关基因分布。结果该菌除对亚胺培南和美罗培南的敏感率分别高达100.0%和88.5%;对含酶抑制剂的氨苄西林/舒巴坦和头孢哌酮/舒巴坦敏感率分别为52.5%和57.4%外,而对其他抗菌药物的敏感率均很低,对头孢三、四代药物的敏感率均<20.0%;122株鲍氏不动杆菌中,76株(62.3%)扩增到β-内酰胺酶基因,SHV、TEM、PER、CTX-M-1组、CTX-M-9组和VEB基因的检出率分别为19.7%、47.5%、13.9%、1.6%、4.1%和0.8%,未检测到CTX-M-2组、OXA-10和OXA-23基因;其中42.6%含单种基因,14.8%含两种基因,主要为SHV TEM基因(10株),其次为TEM CTX-M-9基因(3株)和TEM PER基因(3株);4.9%含3种基因,主要为SHV TEM PER基因;此外,序列测定结果显示各基因型分别为SHV-1b-Like、SHV-18-Like、TEM-1-Like、PER-1-Like、CTX-M-3-Like、CTX-M-14-Like、VEB-3-Like。结论临床分离的鲍氏不动杆菌多重耐药现象严重,并携带多种β-内酰胺酶相关基因。     

产ESBLs大肠埃希菌β-内酰胺酶基因检测与耐药性分析

目的 了解临床分离的产ESBLs大肠埃希菌耐药基因存在状况和菌株的耐药性关系.方法 自临床分离20株产ESBLs大肠埃希菌,采用聚合酶链反应(PCR)检测β-内酰胺酶基因TEM、SHV、LEN、CTX-M-1、CTX-M-9、VEB、GES、PER.结果 20株大肠埃希菌中β-内酰胺酶基因TEM、SHV、LEN、CTX-M-1、CTX-M-9、VEB、GES、PER阳性率分别为75.0%、20.0%、95.0%、15.0%、70.0%、5.0%、85.0%、70.0%,β-内酰胺类药物及含酶抑制剂药物的耐药率较高.结论 临床分离的产ESBLs大肠埃希菌TEM、LEN、CTX-M-9、GES、PER基因携带率高,β-内酰胺类药物耐药率较高可能与细菌携带β-内酰胺酶耐药基因有关,产ESBLs大肠埃希菌可导致克隆传播医院感染,并存在暴发性流行.     

4种非发酵糖革兰阴性杆菌β-内酰胺酶基因研究

目的分析解放军第98医院临床分离的4种非发酵糖革兰阴性杆菌中β-内酰胺酶基因存在状况。方法从临床分离鲍氏不动杆菌60株、铜绿假单胞菌30株、嗜麦芽寡养单胞菌19株和黄杆菌属15株,采用PCR及序列分析的方法分析9种(群)β-内酰胺酶基因TEM、SHV、OXA、CTX-M群、PER、VEB、IMP、VIM、GES。结果鲍氏不动杆菌和铜绿假单胞菌中TEM基因阳性率分别为100.0%和66.7%;鲍氏不动杆菌有18株(30.0%)SHV阳性,17株为SHV-12型ESBLs(GenBank登录号:AY259163),另1株为一种新亚型,被命名为SHV-48;铜绿假单胞菌有1株(3.3%)OXA阳性,为OXA-10型ESBLs;其余基因均阴性。结论我院非发酵糖革兰阴性杆菌中至少存在4种β-内酰胺酶基因,基因型分别为TEM-1、SHV-12、SHV-48和OXA-10。     

铜绿假单胞菌β-内酰胺酶及其相关耐药基因的检测分析

目的 了解医院临床分离的多药耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶产生情况,以及β-内酰胺类相关耐药基因的存在状况.方法 采用K-B法测定临床分离铜绿假单胞菌对17种抗菌药物的敏感性,筛选出135株多药耐药菌株;采用改良三维试验检测各种β-内酰胺酶;采用聚合酶链反应检测β-内酰胺酶编码基因及oprD2基因.结果 135株多药耐药铜绿假单胞菌所产β-内酰胺酶按检出率依次为AmpC酶占36.3％,ESBLs+ AmpC酶占14.8％,金属β-内酰胺酶占13.3％,ESBLs+ AmpC酶变异子占11.9％,AmpC酶变异子占5.2％,ESBLs占4.4％;β-内酰胺酶编码基因的检出率CTX-M-1群为45.9％、TEM为25.9％、CARB为12.6％、DHA为10.4％、IMP为3.7％,未检出SHV、OXA- 10群、PER、GES、VEB和VIM基因;oprD2基因的缺失率为69.6％.结论 多药耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺酶以AmpC酶为主,β-内酰胺类对抗菌药物的耐药主要与CTX-M-1群、TEM、CARB、DHA、IMP型耐药基因有关,对碳青霉烯类抗菌药物耐药主要与oprD2基因缺失有关.     

广州地区大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌CTX-M型产超广谱β-内酰胺酶基因分型的研究

目的 对肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌(ECO)CTX-M型产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株进行耐药基因分型,从而调查广州地区目前临床分离菌对抗菌药物的耐药性.方法 收集广州地区9所医院临床分离所获产ESBLs肺炎克雷伯菌(KPN)和ECO CTX-M型菌株,应用纸片扩散筛选法和纸片扩散确证法对菌株进行确认,然后用PCR方法对ESBLs进行基因分型.结果 92株产ESBLs ECO,对氨苄西林、哌拉西林和头孢呋辛均高度耐药,耐药率分别为97.5%、89.5%和89.5%;42株产ESBLs KPN对氨苄西林(100.0%)和哌拉西林(100.0%)也呈高度耐药;PCR及测序结果显示,CTX-M-1群阳性株包括ECO 7株、KPN 9株,阳性率分别为7.6%和21.4%,基因型分布在ECO为CTX-M-3、CTX-M-15和CTX-M-55型,而在KPN为CTX-M-3和CTX-M-15型.结论 广州地区9所医院临床分离的134株产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,对青霉素类和头孢菌素类抗菌药物的耐药率均达到很高水平,并且在广州地区首次分离获得CTX-M-55型耐药菌株.     

大肠埃希菌耐药性与β-内酰胺酶基因研究

目的:了解临床分离大肠埃希菌的耐药性和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和头孢菌素酶(AmpC)基因分布情况。方法:采用VITEK-60全自动细菌分析仪对657株大肠埃希菌临床分离株进行药敏检测,并通过PCR方法检测其中140株试验菌的ESBLs和AmpC酶相关基因,对部分ESBLs基因进行DNA测序。结果:140株大肠埃希菌中ESBLs表型试验阳性的有86株,阳性率为61.4%。86株ESBLs表型阳性菌株中检测到ESBLs基因阳性的有80株,占93.0%。其中有61株携带CTX-M-9型基因,30株携带CTX-M-1型基因,23株携带TEM型基因,1株携带SHV型基因。140株大肠埃希菌中检测到AmpC酶基因阳性的有18株,阳性率为12.9%,其中有10株携带DHA型基因,9株携带CIT型基因,1株携带FOX型基因。结论:临床分离大肠埃希菌耐药情况严重,其携带ESBLs基因以CTX-M-9型为主,AmpC酶基因以DHA和CIT为主。     

南京地区鲍氏不动杆菌AmpC酶、β-内酰胺酶基因研究

目的了解南京地区多药耐药鲍氏不动杆菌（ABA）临床分离株AmpC酶和β-内酰胺酶基因存在状况。方法自2007年7-10月南京地区住院患者标本中分离出20株多药耐药鲍氏不动杆菌,微量肉汤稀释法测定11种抗菌药物的敏感性,聚合酶链反应（PCR）法测定多药耐药鲍氏不动杆菌2种AmpC酶及18种β-内酰胺酶基因。结果20株ABA AmpC染色体型基因阳性14株（70.0%）、AmpC质粒型基因阳性1株（5.0%）;TEM基因阳性12株（60.0%）、SHV基因阳性1株（5.0%）、CTX-M-1群基因阳性2株（10.0%）、OXA-23群基因阳性1株（5.0%）、OXA-24群基因阳性1株（5.0%）,经测序BLASTn比对为OXA-72型;16、17号株测得AmpC（染色体型）DNA序列翻译成氨基酸序列与美国核酸库已登录的AmpC（染色体型）序列比较分别有两个和1个氨基酸差别,均为新亚型。结论南京地区ABA除可携带TEM、VEB、GESI、MP、VIM、OXA-10、OXA-23基因外,还可携带AmpC染色体型及AmpC质粒型、SHV、CTX-M-1群、OXA-24群基因。同时进行AmpC活性与AmpC染色体型、质粒型基因配对检测为国内首次。     

用多重PCR方法进行志贺菌超广谱β-内酰胺酶基因分型

目的 建立了一种志贺菌超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases,ESBLs)基因型分类的多重PCR方法,鉴别杭州市1998-2007年产ESBLs志贺菌散发菌株基因型.方法 用纸片扩散药敏法对1998-2007年杭州分离出的195株志贺菌进行产ESBLs筛选,利用多重PCR鉴定CTX-M、TEM、SHV、OXA-1等4个基因型别,并用8次单个PCR验证多重PCR结果.结果 在195株志贺菌中共筛选到17株产ESBLs菌株,阳性率为8.72%,与2005年全国监测点结果(阳性率为6.10%)比较,差异无统计学意义(χ2=1.464,P=0.226);多重PCR结果显示ESBLs基因型分别为:CTX-M型17株(CTX-M-9组亚型11株,CTX-M-1组亚型6株),TEM型2株,OXA-1型10株,无SHV型;多重PCR结果与8次单个PCR结果一致率为94.12%,其中1株OXA-1型结果不一致.结论建立了一种志贺菌ESBLs基因型分类的多重PCR方法,杭州市志贺菌中产ESBLs的比例与全国监测点水平相似,但存在上升的可能.