应用PCR－SSCP法探讨外周血B细胞参与多发性骨髓瘤的发病

为探讨多发性骨髓瘤（ＭＭ）的克隆起源，经形态学及ＡＢＣ法筛选１８例外周血无浆细胞污染的ＭＭ患者，采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增免疫球蛋白重链ＣＤＲ３区编码基因，并经单链构象多态性（ＳＳＣＰ）法分析其单链构象多态性。经平行检测患者外周血（ＰＢ）和骨髓（ＢＭ）标本，发现１５例ＢＭ及１１例ＰＢ获得预期的克隆特异性ＰＣＲ产物为８０～１１０ｂｐ，其中９例ＰＢ和ＢＭ获得相同的ＰＣＲ产物，８例为１条扩增条带，其ＳＳＣＰ分析可见２条单链，另１例ＰＣＲ产物为２条扩增条带，其ＳＳＣＰ分析可见３条单链，同一患者ＰＢ与ＢＭ标本的单链泳动速度一致。提示至少６０％ＭＭ患者ＰＢ和ＢＭ不仅ＰＣＲ产物一致，其单链构象也一致，研究结果证实了外周血Ｂ细胞参与ＭＭ的发病。     

DNA链构象多态性分析在骨髓移植配型中的应用

ＤＮＡ链构象多态性分析在骨髓移植配型中的应用刘广贤孔繁华孙玉英孙成文陈兴国不同大小的ＤＮＡ序列在聚丙烯酰胺凝胶电泳中有不同的迁移率，相同大小的ＤＮＡ单链由于碱基组成不同，形成的二级结构不同，电泳迁移率不同，其多态性分析被称为单链构象多态性（ＳＳＣＰ）...     

银染多聚酶链反应－单链构象多态性方法的探讨

银染多聚酶链反应－单链构象多态性方法的探讨王丽辉，武淑兰，陈勖琦，薛海鹏，朱平近年发展起来的多聚酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法［ｏｎｃｏｇｅｍ，１９９０，５：１０３７］，虽然在研究基因点突变中具有快速、敏感、无假阳性等特点，适合大样...     

多基因单链构象多态性技术在大肠癌多基因突变联合测定中的应用

多基因单链构象多态性（ＭＳＳＣＰ）是一种与多基因聚合酶链反应（ＰＣＲ）联合应用，一次性快速测定多基因突变的方法［１］。本研究建立了测定ＡＰＣ基因突变聚集区域（ＭＣＲ）和Ｋｒａｓ第１２／１３密码子突变的ＭＳＳＣＰ技术。一、材料与方法１样本收集：收集...     

定量不对称PCR－SSCP检测携带N－ras基因点突变的微量残留白血病细胞

定量不对称ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测携带Ｎ－ｒａｓ基因点突变的微量残留白血病细胞蔡辉国，陈佩贞，张立冬，马双，王立，杨天楹我们采用多聚酶链反应－单链ＤＮＡ构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析检测携带Ｎ－ｒａｓ基因点突变的微量残留白血病细胞（ＭＲＬＣ），其灵敏...     

骨髓增生异常综合征p53基因突变的临床意义

骨髓增生异常综合征ｐ５３基因突变的临床意义江继发潘祥林朱平王正起王应福王岩我们采用多聚酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析方法检测了６７例骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）患者的ｐ５３基因点突变，结合向白血病转化，观察该基因在转变中相对危险性和...     

银染单链构象多态性技术检测原发性肝癌p53基因的突变

建立银染单链构象多态性技术检测原发性肝癌ｐ５３基因突变。方法用银染及单链构象多态性技术检测１６９例原发性肝癌的癌变及癌旁正常组织Ｐ５３基因第７，８外显子的突变，并进行了ＤＮＡ顺序，鉴定突变位点。４例患者Ｐ５３基因Ｅ７中第２４９叫密码子第３号碱基发生了Ｇ：Ｃ→Ｔ：Ａ的颠换，２例患者Ｅ８中第２７３号密码子第１号碱基发生了Ｃ：Ｇ→Ｔ：Ａ的转换，总的突变率达３８％；６例Ｐ５３基因突变的癌变组织中乙型肝炎病     

聚合酶链反应—单链构象多态性分析与反向杂交法进行骨髓移植…

用聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增骨髓移植（ＢＭＴ）受者及７８例无关供者ＨＬＡ－ＤＰＢ１基因，作单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析，初步选出与受者ＨＬＡ－ＤＰＢ１ＳＳＣＰ带型相同者；最后进行反向杂交检测，确定ＨＬＡ－ＤＰＢ１更为相容的供者。应用上述技术，从７８例无关供者中选择出１例与ＢＭＴ受者基因相同的供者。整个过程快速、经济、准确性高。     

HLA-DQA反相杂交法分型与多聚酶链反应－单链构象多态性配型的比较

为了验证多聚酶链反应－单链构象多态性方法在骨髓移植配型中的可靠性和准确性，采用掺入生物素的多聚酶链反应对ＨＬＡ－ＤＱＡ位点基因进行了特异性扩增。将所选区分ＨＬＡ－ＤＱＡ位点等位基因的特异性探针点于尼龙膜上，用标记的扩增产物与膜上探针杂交，并用碱性磷酸酶显色法检测杂交信号，确定待测标本的基因型。对２０对异基因骨髓移植的供、受者进行ＨＬＡ－ＤＱＡ位点的基因分型，并与多聚酶链反应－单链构象多态性配型作比较。结果表明，２０对供、受者的多聚酶链反应－单链构象多态性配型结果与该反相杂交法基因分型结果一致。多聚酶链反应－单链构象多态性方法是一种骨髓移植的供、受者配型，快速可靠的方法     

p16基因异常与慢性粒细胞白血病关系的研究

我们采用半定量多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）和ＰＣＲ单链构象多态性（ＳＳＣＰ）检测了４８例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）患者ｐ１６基因纯合缺失和点突变，以期从分子生物学水平探讨ｐ１６基因分子生物学异常与ＣＭＬ的关系。对象和方法１　对象　１２名正常人，男性７名，女性５名，平均年龄３１．６岁。４８例ＣＭＬ患者，其中慢性期２０例，急粒变１６例，急淋变１２例（所有病例原始淋巴细胞＋幼稚淋巴细胞≥０．２０，组织化学染色都表现为糖原染色过碘酸反应强阳性，ＰＯＸ阴性），男性３３例，女性１５例，平均年龄３３．６岁。Ｋ…     

非同位素银染单链构象多态性技术筛查葡萄糖激酶基因突变

目的 建立银染单链构象多态性（ＳＳＣＰ）技术筛查葡萄糖激酶基因点突变，方法 收集１０个ＮＩＤＤＭ家系的１１２例基因组（ＤＮＡ），经多聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增葡萄糖激酶基因第２～１０号外显子，ＳＳＣＰ电泳，硝酸银染色筛查点突变，结果 发现３个家系，９例受试者第５，６号外显子出现异常ＤＮＡ片段条带，经顺序分析证实为第５号内含子１２位碱基Ｃ→Ｇ突变，结论 非同位素ＳＳＣＰ技术是一种简便，经济，快速，准     

提高银染PCR－SSCP敏感性及分辨力的方法初探

提高银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ敏感性及分辨力的方法初探李家良，杨光华，李甘地（成都华西医科大学第一临床医学院病理教研室６１００４１）自１９８９年Ｏｒｉｔａ等［１］首次报道单链构象多态性（ｓｉｎｇｌｅｓｔａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ...     

非同位素银染单链构象多态性技术筛查葡萄糖激酶基因突变

目的建立银染单链构象多态性（ＳＳＣＰ）技术筛查葡萄糖激酶基因点突变。方法收集１０个ＮＩＤＤＭ家系的１１２例基因组（ＤＮＡ），经多聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增葡萄糖激酶基因第２～１０号外显子，ＳＳＣＰ电泳，硝酸银染色筛查点突变。结果发现３个家系，９例受试者第５，６号外显子出现异常ＤＮＡ片段条带，经顺序分析证实为第５号内含子１２位碱基Ｃ→Ｇ突变。结论非同位素ＳＳＣＰ技术是一种简便、经济、快速、准确和有效的筛查基因点突变的方法。     

恶性肿瘤组织抑癌基因Rb单链构象多态性分析的实验研究

单链构象多态性分析已成为检测基因突变的重要手段。结合ＰＣＲ技术对肿瘤组织抑癌基因Ｒｂ的存在状态进行检测，具有重要的临床基因诊断意义。该研究主要建立了ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－银染方法，并对获得ＳＳＣＰ最佳图型的实验条件进行了研究。     

应用PCR－SSCP技术检测B淋巴细胞恶性肿瘤患者骨髓中微量肿瘤细胞

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测Ｂ淋巴细胞恶性肿瘤患者骨髓中微量肿瘤细胞于力，刘敬忠，孙燕，刘春蕙，汪月增我们把多聚酶链反应（ＰＣＲ）与ＤＮＡ单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）相结合，建立了一种检测方法，对骨髓中微量肿瘤细胞进行了检测。材料和方法１标...     

应用单链构象多态性技术鉴别多种念珠菌的探讨

目的建立快速鉴别念珠菌的方法。方法以聚合酶链反应对多种念珠菌进行扩增，而后采用单链构象多态性（ＳＳＣＰ）技术对６种念珠菌的扩增产物进行分析。结果所试６种３８株念珠菌均扩增出一条６８５ｂｐ的特异ＤＮＡ片段，经ＳＳＣＰ分析在聚丙烯酰胺凝胶电泳中不同种念珠菌的ＳＳＣＰ图谱呈明显多态性，能够相互区别。结论该方法灵敏、快速、简便，有助于对念珠菌种的及早确认。     

聚合酶链反应-单链构象多态性银染后胶回收在基因改变检测中的应用

目的:探讨聚合酶链反应-单链构象多态性银染后胶回收的方法在基因改变检测中的应用。方法:实验于2004-09/2005-10在南方医院心内科实验室完成。样本来源:于2004-09/2005-08选择南方医院心内科收治的冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者123例,均符合WHO冠心病诊断标准,并经心电图、超声心动图、CT确诊。患者均知情同意。聚合酶链反应-单链构象多态性银染方法检测冠心病患者三磷酸腺苷结合盒转运体A1基因改变,对1例怀疑存在基因改变样本的聚丙烯酰胺凝胶采用银染后单链胶回收,以胶回收后的单链聚合酶链反应产物为模板重复聚合酶链反应后进行测序。结果:在对三磷酸腺苷结合盒转运体A1基因Exon7进行单链构象多态性检测时,发现一样本泳带异常,对其样本进行银染后胶回收,结合限制性内切酶酶切,证实此样本存在碱基改变,从而验证了非变性聚丙烯酰胺凝胶银染后胶回收的准确性和可行性。结论:经聚合酶链反应-单链构象多态性银染后的非变性聚丙烯酰胺凝胶胶也可进行胶回收。聚合酶链反应-单链构象多态性银染后胶回收在基因改变检测中可以增强单链构象多态性基因突变检测的准确性,由于其无毒性、成本低及操作简单等优点,更易被实验人员所接受。     

凝胶中的甘油对聚合酶链反应-单链构象多态性技术的影响

单链构象多态性（ＳＳＣＰ）是一种快速、简便、敏感性高的检测基因突变与ＤＮＡ多态性的技术。为探讨凝胶中的甘油是否对这一技术产生影响，我们应用该技术结合银染法检测肺癌中Ｐ５３基因第５～８外显子可能存在的点突变，考察了凝胶中甘油的作用。一、材料与方法１１...     

冠状动脉粥样硬化性心脏病新致病基因MEF2A第7外显子突变的检测

目的：检测中国冠状动脉粥样硬化性心脏病患者MEF2A基因第7外显子是否存在新突变位点。 方法：从1995-03／1996—08在武汉同济医院和武汉协和医院对来自湖北、黑龙江、河南、湖南等省的怀疑冠状动脉粥样硬化性心脏病的患者156例进行临床调查。利用聚合酶链反应-单链构象多态性分析结合变性高效液相色谱分析对所有对象的MEF2A基因第7外显子进行筛查，然后选取变性高效液相色谱分析图谱的峰型出现双或多峰者以及聚合酶链反应-单链构象多态性分析图谱条带数目或位置与对照有差异者的片段进行DNA直接测序，测序结果与正常序列对照确定是否存在突变。 结果：参与实验的患者156例全部进入结果分析。①MEF2A基因第7外显子区域有4例患者变性高效液相色谱分析图谱呈双峰或多峰，结果疑为异常。②有7例患者的单链构象多态性分析电泳出现异常条带。即泳动比正常多出．条带或移动速度与对照有差异，表明这7例可能出现MEF2A基因突变。③所有异常标本的DNA直接测序结果与正常序列对照未发现第7外显子区域基因突变。 结论：冠状动脉粥样硬化性心脏病患者在MEF2A基因第7外显子未发现新的突变。变性高效液相色谱分析和聚合酶链反应-单链构象多态性结果与DNA测序结果并非平行关系，单链构象多态性分析同样存在假阳性。     

遗传性对称性色素异常症DSRAD基因突变检测

收集患有遗传性对称性色素异常症一个家系,采用RT-PCR方法从人外周血中获得DSRAD基因c DNA,并筛选出合适的基因序列与人类基因库中的相应基因进行对比分析,采用单链构象多态性技术进行新突变验证。PCR结合单链构象多态性技术发现患者家系中患者均存在DSRAD基因的异常:发现第3335位和3336位发生AT缺失突变,经单链构象多态性分析证明该突变只存在于该家系患者,家系中未患病者及无关正常人未发现相应突变。该突变可能导致患者皮肤色素异常改变,其具体的机制尚需进一步研究。