不同造血生长因子对脐血有核细胞体外扩增作用的实验研究

目的：探讨造血生长因子不同组合方式对脐血有核细胞的扩增作用以及脐血扩增后Ｔ淋巴细胞和ＨＬＡ－ＡＢ、ＤＲ阳性细胞变化情况。方法：在脐血有核细胞体外培养体系中分别加入不同组合的细胞因子，观察细胞数、ＣＤ３４＋细胞、ＣＦＵ－ＧＭ、Ｔ４（ＣＤ４＋ＣＤ８－ＣＤ３＋）细胞、Ｔ８（ＣＤ４－ＣＤ８＋ＣＤ３＋）细胞以及ＨＬＡ－ＡＢ、ＤＲ阳性细胞的变化。结果：脐血有核细胞在体外液体培养体系中，经重组人干细胞因子（ｒｈＳＣＦ）、白细胞介素（ＩＬ）－３、ＩＬ－６、粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和红细胞生成素（Ｅｐｏ）的作用下扩增效果最佳。结论：脐血有核细胞在各种造血生长因子的协同作用下可以在体外扩增。脐血扩增后Ｔ４、Ｔ８细胞减少，可能会降低脐血移植急性ＧＶＨＤ发生，但ＨＬＡ－ＡＢ和ＨＬＡ－ＤＲ阳性细胞数急剧上升，增加了免疫排斥的可能性。     

脐血CD34^＋细胞体外扩增的研究

采用ＤｙｎａｌＭ－４５０ＣＤ＿（３４）免疫磁珠分离纯化脐血ＣＤ＿（３４）￣＋细胞，并探讨了不同细胞因子［干细胞因子（ＳＣＦ）、白细胞介素６（ＩＬ－６）、白细胞介素３（ＩＬ－３）及红细胞生成素（Ｅｐｏ）］组合对脐血ＣＤ＿（３４）￣＋细胞的体外培养和扩增作用。结果表明：①经ＤｙｎａｌＭ－４５０ＣＤ＿（３４）免疫磁珠分离的脐血ＣＤ＿（３４）￣＋细胞，其纯度达８５％～。９５％；②甲基纤维素培养体系中，在不同组合的细胞因子作用下，脐血ＣＤ＿（３４）￣＋细胞的集落产率明显不同，单用ＩＬ－６最低，ＳＣＦ、ＩＬ－６、ＩＬ－３及Ｅｐｏ联用产率最高；③在低氧液体培养体系中，ＩＬ－６和ＩＬ６＋Ｅｐｏ不能有效地扩增脐血ＣＤ＿（３４）￣＋细胞，而其它细胞因子组合均可产生明显的扩增作用；其中加Ｅｐｏ的组合扩增效果显著高于无Ｅｐｏ的相应组合。脐血ＣＤ＿（３４）￣＋细胞分离、纯化及其体外扩增的研究对于脐血造血细胞库的建立，脐血造血细胞移植和基因导入的研究均具有重要意义。     

单个CD34^＋CD38^＋和CD34^＋CD38^—l细胞的增殖与分化性能

为深入探讨ＣＤ３４＾＋细胞亚群的不均一性及单个细胞的增殖分化特性，利用ＦＡＣＳ Ｖａｎｔａｇｅ自动细胞分选系统（ＡＣＤＵ）分选出单个ＣＤ３４＾＋亚群细胞：ＣＤ３４＾＋ＣＤ３８＾＋和ＣＤ３４＾＋ＣＤ３８＾－，在９６孔板无血清培养体系中，经ＳＣＦ、ＩＬ－３、ＩＬ－６、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｇ－ＣＳＦ和Ｅｐｏ刺激，１４－１８天后扩增形成原代集藩。单个ＣＤ３４＾＋ＣＤ３８＾＋细胞形成原代集落的比例为３８．０％±９     

体外扩增脐血CD34+细胞的实验研究

目的 探讨体外扩增脐血干／祖细胞用于成人脐血移植的可能性。方法 从１０份新鲜的脐血标本中纯化的ＣＤ３４＾＋细胞接种于含体积分数为２０％的胎牛血清（ＦＢＳ）的ＩＭＤＭ培养基的悬 培养体系中,分别加入由ＳＣＦ、Ｆｌｔ－３Ｌｉｇａｎｄ（ＦＬ）与ＩＬ－１β、ＩＬ－３、ＩＬ－６、Ｇ－ＣＳＦ、Ｅｐｏ（合称１３６ＧＥ）组成的３组细胞因子（Ａ组：１３６ＧＥ＋ＦＬ;Ｂ组：ＳＣＦ＋１３６ＧＥ;Ｃ组：ＦＬ＋ＳＣＦ＋１３     

扩增人脐血造血干/祖细胞重建SCID小鼠造血的实验研究

目的　探讨Ｆｌｔ３ 配基（ＦＬ） 、Ｔｐｏ、ＳＣＦ等细胞因子组合对人脐血干／ 祖细胞的扩增及自我更新能力的维持作用。方法　用ＦＬ＋ Ｔｐｏ＋ ＳＣＦ＋ＩＬ６ ＋ＩＬ３＋ ＧＣＳＦ组合,体外扩增脐血ＣＤ３４ ＋ 细胞１４天,将其移植给亚致死剂量照射的ＳＣＩＤ小鼠。结果　扩增的脐血造血细胞可顺利植入ＳＣＩＤ小鼠并重建造血,１８ 只小鼠移植后存活６ 周的有８ 只,其骨髓中仍可检测到人的造血细胞,死亡率５６ ％ ,与对照组（ 死亡率１００％） 比较,χ２ ＝１０．０８,Ｐ＜０．０１。结论　ＦＬ＋ Ｔｐｏ＋ ＳＣＦ＋ＩＬ６ ＋ＩＬ３ ＋ ＧＣＳＦ组合在有效扩增造血细胞的同时可保留造血干／祖细胞的自我更新及造血重建能力。     

FLT3配基—FL研究进展

ＦＬＴ３配基（ＦＬ）是一种新近发现的与造血调控密切相关的细胞因子。在体外单独ＦＬ对造血的调控作用有限，但ＦＬ可与ＩＬ－３，Ｇ－ＣＳＦ，ＣＳＦ－１，ＧＭ－ＣＳＦ，ＳＣＦ及ＩＬ－６协同促进骨髓及脐血ＣＤ３４＾＋细胞形成粒－巨噬细胞集落，粒细胞集落或巨噬细胞集落；可与ＳＣＦ，ＩＬ－７或ＩＬ－１１协同促进Ｂ淋巴祖细胞的增殖与分化。ＦＬ有望用作造血干祖细胞体外扩增的辅助因子，在临床上用作造血细胞动员剂、免疫     

圹增人脐血造血干／祖细胞重建SCID小鼠造血的实验研究

目的 探讨Ｆｌｔ－３配基（ＦＬ）、Ｔｐｏ、ＳＣＦ等细胞因子组合对人脐血干／祖细胞的扩增及自我更新能力的维持作用。方法 用ＦＬ＋Ｔｐｏ＋ＳＣＦ－ＩＬ－６＋ＩＬ－３＋Ｇ－ＣＳＦ组合,体外扩增脐血ＣＤ３４＾＋细胞１４天,将其移植给亚致死剂量照射的ＳＣＩＤ小鼠。结果 扩增的脐血造血细胞可顺利植入ＳＣＩＤ小鼠并重建造血,１８只小鼠移植后存活６周的有８只,其骨髓中仍可检测到人的造血细胞,死亡率５６％,与对照组     

小鼠c-kit~＋Sca-1~＋和c-kit~＋Sca-1~－细胞代表不同分化阶段的造血干／祖细胞

为深入研究造血干细胞（ＨＳＣ）的生物学功能，根据表面标志，采用流式细胞仪分离和富集了小鼠骨髓中两类不同特征的ＨＳＣ亚群ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋和ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１－细胞。体外集落培养表明ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋细胞对ＩＬ－３或ＧＭ－ＣＳＦ单独刺激无反应，而ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１－细胞则可形成大小不等的细胞集落。多种造血生长因子［ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋ＧＭ－ＣＳＦ＋Ｇ－ＣＳＦ＋Ｅｐｏ＋干细胞生长因子（ＳＣＦ）］联合可诱导ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋细胞形成大的细胞集落，但在培养１２天时尚无ＢＦＵ－Ｅ和粒、单核、红和巨核系细胞集落（ＣＦＵ－ＧＥＭＭ）形成；而同样条件下，ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１－细胞可形成ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＥＭＭ以及其它各类集落。体内实验表明ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋细胞在培养８天时无脾集落（ＣＦＵ－Ｓ）形成，与ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１－细胞显著不同（Ｐ＜０．０１）。相反，ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋细胞包含了骨髓造血重建活性细胞，而ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１－细胞则缺乏。结果提示ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋细胞为早期的具重建长期造血功能的干细胞，而ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１－细胞则为相对分化后期的造血祖细胞。     

CD34+造血祖细胞的定向诱导分化研究

目的：探讨不同细胞因子组合定向诱导ＣＤ３４＋细胞向红系、粒系、巨核系及树突状细胞（ＤＣ）分化的能力。方法：利用免疫磁珠法（ＭＡＣＳ）分离纯化脐血ＣＤ３４＋细胞，在液体培养体系中经不同细胞因子组合的诱导，检测各系祖细胞及ＤＣ的扩增倍数。结果：干细胞因子、白细胞介素（ＩＬ）３、ＩＬ６、粒巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）、粒细胞集落刺激因子、红细胞生成素、血小板生成素的不同组合，可使红系、粒系或巨核系细胞优势生长，其祖细胞可分别被扩增１４．９７±２．８９，１４．４６±３．１９及３４．６７±４．６２倍，ＣＤ４１ａ＋细胞增加了１７．２９±２．３４倍，ＦＬＴ３配基＋ＧＭＣＳＦ＋ＩＬ４＋肿瘤坏死因子α的组合可诱导ＣＤ３４＋细胞形成大量树突状细胞，ＣＤ１ａ＋细胞的比例增至２４．２８％±２．１４％（对照组为０．３６％±０．２８％）。结论：不同细胞因子组合可定向诱导ＣＤ３４＋细胞向红系、粒系、巨核系及树突状细胞分化，这在造血调控研究、造血细胞支持治疗及肿瘤免疫治疗中具有广阔的应用前景     

骨髓增生异常综合征CD34^＋细胞对不同生长因子的反应性研究

目的：更准确地研究造血生长因子对骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）造血干、祖细胞的影响及临床治疗效果。方法：利用吸附单克隆抗体的免疫磁珠分离系统分离纯化ＭＤＳ患者ＣＤ３４＋细胞，在体外半固体培养体系中，研究ＭＤＳＣＤ３４＋细胞对粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、白细胞介素３（ＩＬ－３）、红细胞生成素（Ｅｐｏ）、干细胞因子（ＳＣＦ）单独及联合应用的反应。结果：ＭＤＳＣＤ３４＋细胞在增殖分化过程中存在一定程度缺陷，单独应用生长因子不能有效地改善其缺陷，ＳＣＦ与ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３、Ｅｐｏ等生长因子的联合应用可提高一部分患者造血祖细胞的集落形成能力，但在ＭＤＳ高危组，部分患者在正常集落形成能力改善的同时，白血病细胞集落也有不同程度的增长。结论：治疗ＭＤＳ患者须合理地联合应用造血生长因子。