大黄素通过抑制p38 MAPK活化下调H2O2诱导PC12细胞COX-2表达的实验研究

目的探讨大黄素能否通过抑制p38 MAPK活化下调H2O2诱导的PC12细胞COX-2表达。方法将神经元PC12细胞分为3组:对照组(Control组)、大黄素+H2O2组(Emodin+H2O2组)和H2O2组。在300μM的H2O2干预4小时后使用RT-PCR法和western blot法对各组PC 12细胞COX-2mRNA和蛋白的表达水平进行检测;并使用western blot法对PC12细胞p38MAPK磷酸化水平(Phospho-p38MAPK/total p38MAPK比值)进行测量。结果与对照组相比较,在300μM的H2O2干预4小时后PC12细胞COX-2mRNA和蛋白的表达水平以及p38 MAPK磷酸化水平均明显升高,差异均有统计学意义(P均<0.05);但H2O2组较Emodin+H2O2组COX-2mRNA和蛋白的表达的升高以及p38 MAPK磷酸化水平的增加更加显著,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论大黄素可以有效抑制H2O2诱导的PC12细胞COX-2表达,并与下调p38 MAPK活化水平密切相关。     

LXA4通过p38MAPK/Nrf2信号通路诱导H9c2心肌细胞HO-1高表达

目的:探讨脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)诱导心肌细胞H9c2中血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)-1表达可能涉及的信号转导通路?方法:分别用核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2 related factor 2,Nrf2)的抑制剂ATRA?p38MAPK的抑制剂SB203580?LXA4联合ATRA?LXA4联合SB03580预处理H9c2细胞后进行缺氧/复氧处理,RT-PCR?Western blot?免疫荧光等检测HO-1?Nrf2以及p38MAPK mRNA和蛋白表达的变化?结果:与只行缺氧/复氧处理的细胞相比,LXA4预处理的H9c2细胞HO-1 mRNA和蛋白的表达明显升高(P < 0.05),而ATRA?SB203580分别抑制了Nrf2的聚集和p38MAPK的磷酸化(P < 0.05),从而抑制了LXA4对HO-1的诱导(P < 0.05)?结论:LXA4预处理诱导心肌细胞H9c2的HO-1高表达,具有抗缺氧/复氧损伤的作用,其机制与p38MAPK/Nrf2信号通路有关?     

P38MAPK通路在BMP9诱导C3H10T1/2干细胞向心肌样细胞分化中的作用

目的:研究P38丝裂原活化蛋白激酶(P38mitogen-activated protein kinases,P38MAPK)通路在骨形态发生蛋白9(Bonemorphogenetic protein 9,BMP9)诱导C3H10T1/2干细胞向心肌样细胞分化中的作用。方法:免疫印迹检测经pAdEasyBMP9诱导24 h的C3H10T1/2干细胞磷酸化P38MAPK和P38MAPK表达水平,免疫荧光定位磷酸化P38MAPK;SB203580抑制C3H10T1/2干细胞磷酸化P38MAPK活性,pAdEasyBMP9诱导21 d时免疫印迹检测心肌特异性蛋白CX43、cTnT表达,免疫荧光检测心肌特异性蛋白cTnT、α-MHC表达,RT-qPCR检测心肌特异性基因GATA4、MEF2C表达。结果:pAdEasyBMP9促进磷酸化P38MAPK表达增高,却不影响P38MAPK表达水平;磷酸化P38MAPK有表达于胞浆和胞核、仅表达于胞核的不同状态。SB203580可显著性地抑制由pAdEasyBMP9诱导的C3H10T1/2干细胞CX43、cTnT、α-MHC、GATA4、MEF2C表达。结论:pAdEasyBMP9诱导C3H10T1/2干细胞能激活P38MAPK通路,并促进其向心肌样细胞分化。     

NALP3炎性复合体及p38 MAPK信号通路在氧化应激中的作用及阿魏酸钠的干预机制

目的探讨氧化应激时成纤维细胞（NIH-3T3）中NALP3炎性复合体、p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）的变化及阿魏酸钠的干预机制。方法将NIH-3T3细胞分为6组:对照组;H2O2 （200 μmol/L）刺激组;阿魏酸钠（400 μg/mL）组;H2O2 +N-乙酰半胱氨酸（H2O2 200 μmol/L+ NAC 5 mmol/L）组（抗氧化组）;H2O2 + p38 MAPK抑制剂（H2O2 200 μmol/L+ SB203580 5 μmol/L）组（p38 MAPK阻断剂组）;阿魏酸钠干预(H2O2 200 μmol/L+阿魏酸钠 400 μg/mL)组。培养24 h后,荧光定量PCR检测各组NIH-3T3细胞中NALP3、Caspase-1及P38α mRNA的表达;培养48 h后,Western blot检测各组NIH-3T3细胞中NALP3、p-p38和p38蛋白的表达量（p-p38为p38活化表示形式,p38 MAPK信号通路的活化用p-p38/p38表示);培养24 h后,ELISA检测各组细胞的上清液中白细胞介素（IL）-1β的含量。结果相比于对照组,H2O2 的刺激可以上调NIH-3T3细胞中NALP3、Caspase-1及P38α mRNA的表达,NALP3及p-p38/p38蛋白的表达量,以及IL-1β分泌均增加（P均＜0.05）;抗氧化组、p38 MAPK阻断剂组及阿魏酸钠干预组相较于H2O2 刺激组,NALP3、Caspase-1及P38α mRNA的表达量以及NALP3、p-p38/p38蛋白的表达量均降低,IL-1β的释放也减少（P均＜0.05）;而抗氧化组、p38 MAPK阻断剂组及阿魏酸钠干预组间上述指标的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论阿魏酸钠可能通过抑制p38 MAPK通路的活化降低NALP3炎性复合体、Caspase-1和IL-1β的表达,从而下调炎症级联反应。     

右美托咪定调控Nrf2/HO-1通路对H2O2诱导心肌细胞氧化应激损伤的作用研究

目的 探讨右美托咪定调控核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)通路对过氧化氢(H₂O₂)诱导心肌细胞氧化应激损伤的作用。方法 体外培养大鼠H9C2心肌细胞,设置对照组、H₂O₂组、1μmol右美托咪定+H₂O₂组、5μmol右美托咪定+H₂O₂组、10μmol右美托咪定+H₂O₂组。CCK-8法检测各组H9C2细胞增殖情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组H9C2细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测各组H9C2细胞Nrf2、HO-1 mRNA相对表达量;Western blotting检测各组H9C2细胞Nrf2、HO-1蛋白相对表达量。结果 与对照组比较,H₂O₂组H9C2细胞存活率、SOD水平、Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白相对...     

P38MAPK通路在BMP9诱导C3H10T1/2干细胞向心肌样细胞分化中的作用

目的：研究P38丝裂原活化蛋白激酶（P38 mitogen-activated protein kinases,P38MAPK）通路在骨形态发生蛋白9（Bone morphogenetic protein 9,BMP9）诱导 C3H10T1/2干细胞向心肌样细胞分化中的作用。方法：免疫印迹检测经pAdEasyBMP9诱导24 h的C3H10T1/2干细胞磷酸化P38MAPK和P38MAPK表达水平,免疫荧光定位磷酸化P38MAPK;SB203580抑制C3H10T1/2干细胞磷酸化P38MAPK活性,pAdEasyBMP9诱导21 d时免疫印迹检测心肌特异性蛋白CX43、cTnT表达,免疫荧光检测心肌特异性蛋白cTnT、α-MHC表达,RT-qPCR检测心肌特异性基因GATA4、MEF2C表达。结果：pAdEasyBMP9促进磷酸化P38MAPK表达增高,却不影响P38MAPK表达水平;磷酸化P38MAPK有表达于胞浆和胞核、仅表达于胞核的不同状态。SB203580可显著性地抑制由pAdEasyBMP9诱导的C3H10T1/2干细胞CX43、cTnT、α-MHC、GATA4、MEF2C表达。结论：pAdEasyBMP9诱导C3H10T1/2干细胞能激活P38MAPK通路,并促进其向心肌样细胞分化。     

花旗松素对H9C2细胞氧化应激保护作用机制研究

背景　氧化应激（OS）与缺血性心脏病（IHD）的发生发展密切相关,抗OS损伤在IHD防治中至关重要。花旗松素（Tax）具有抗炎、抗肿瘤、抗OS作用,但其抗OS机制尚未完全明了。目的　探讨Tax对过氧化氢（H2O2）诱导的H9C2心肌细胞OS损伤的保护机制,为OS损伤性疾病的新药研发提供基础依据。方法　2017年3月—2018年3月,将H9C2细胞随机分为对照组〔仅加入0.1%二甲基亚砜（DMSO）〕、H2O2处理组（加入200 μmol/ml H2O2处理12 h）、Tax+H2O2处理组（加入100 μmol/ml Tax预处理6 h,换液后加入200 μmol/ml H2O2处理12 h）、Tax处理组（加入100 μmol/ml Tax处理6 h）。对于对照组、H2O2处理组、Tax+H2O2处理组,采用光学显微镜观察细胞形态,荧光倒置显微镜观察细胞染色情况,RT-PCR法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、骨桥蛋白（OPN）、高迁移率族蛋白1（HMGB1）mRNA表达水平。采用Western blotting法检测对照组、Tax处理组丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路p38、磷酸化p38（p-p38）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）1/2、磷酸化ERK（p-ERK）1/2、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、磷酸化JNK（p-JNK）表达水平。结果　与对照组相比,H2O2处理组细胞出现肥大,呈圆形及不规则形状,而Tax+H2O2处理组细胞形态接近梭形,细胞变圆及肥大程度较H2O2处理组轻,不规则形态细胞数量减少。H2O2处理组绿色荧光量较对照组明显增多且亮度增强,而Tax+H2O2处理组较H2O2处理组绿色荧光量及亮度减弱。Tax+H2O2处理组iNOS mRNA、OPN mRNA表达水平低于对照组、H2O2处理组（P<0.05）;Tax+H2O2处理组HMGB1 mRNA表达水平高于对照组、H2O2处理组（P<0.05）。Tax处理组MAPK信号通路p38表达水平低于对照组,p-p38、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK表达水平高于对照组（P<0.05）。结论　Tax可以改善H2O2对细胞造成的形态学改变并减少细胞内OS水平,其机制可能通过激活MAPK信号通路,激活HMGB1表达,抑制OS相关基因iNOS、OPN的表达来发挥抗OS作用。     

紫檀芪抗H2O2诱导H9C2心肌细胞肥大

目的 探讨紫檀芪（pterostilbene,PTE）对H2O2诱导H9C2心肌细胞肥大的影响。方法 培养H9C2心肌细胞,使用50μmol/L的H2O2诱导心肌肥大,随机将其分为对照组（control组,C组）、心肌肥大组（hypertrophy组,H组）和心肌肥大+PTE组（H+PTE组）。干预48h后,采用细胞免疫荧光法检测H9C2心肌细胞表面积,采用蛋白免疫印迹法检测p62和p-mTOR蛋白表达。结果 与C组比较,H组心肌细胞的表面积显著增大,p62表达显著升高,p-mTOR/mTOR表达显著降低（P<0.05）。与H组比较,H+PTE组心肌细胞的表面积显著减小,p62表达显著降低,p-mTOR/mTOR表达显著升高（P<0.05）。结论 PTE通过抑制mTOR信号通路调节自噬进而减轻H2O2诱导的H9C2心肌细胞肥大。     

褐藻素通过调控Nrf2/Keap1通路缓解糖尿病大鼠心肌肥大

目的 探索褐藻素（FX）对糖尿病心肌病的保护效应和作用机制。方法 腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,进行分组：糖尿病组（DM）、褐藻素干预糖尿病组（DM+FX）和二甲双胍干预糖尿病组（DM+Met）,另取正常大鼠给予正常喂养作为正常组（Con）。造模成功后连续12周每日灌胃给药,褐藻素组每日给予200 mg/kg褐藻素灌胃,二甲双胍组每日给予230 mg/kg灌胃,糖尿病组同步灌胃生理盐水。HE染色观察各组大鼠心脏细胞肥大情况;Western blot法检测大鼠心脏中纤维化蛋白TGF-β1和FN蛋白表达水平。H9C2细胞分为3组：正常糖组（NG,5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（HG,45 mmol/L葡萄糖）和褐藻素干预高糖组（HG+1 μmol/L FX）。FITC标记的鬼笔环肽检测大鼠心肌细胞H9C2表面积变化;qRT-PCR法测定各组细胞肥大因子ANP、BNP和β-MHC基因表达变化;Western blot法检测各组大鼠心脏组织和H9C2细胞中Nrf2、Keap1、HO-1、SOD1蛋白表达水平;DCFH-DA探针检测细胞内活性氧水平变化。结果 褐藻素改善糖尿病大鼠心肌纤维化和心肌细胞肥大,同时上调心脏组织中Nrf2和HO-1蛋白表达,抑制Keap1蛋白表达（P<0.05）。褐藻素可抑制高糖诱导H9C2心肌细胞表面积增加,降低ANP、BNP和β-MHC的mRNA表达水平（P<0.05）。褐藻素可促进高糖诱导的H9C2细胞中Nrf2入核,上调下游靶蛋白SOD1和HO-1蛋白表达（P<0.05）来增强细胞抗氧化能力,降低细胞内活性氧的水平。结论 褐藻素具有良好的抗糖尿病心肌纤维化和心肌细胞肥大作用,同时上调Nrf2信号通路并促进下游抗氧化蛋白SOD1和HO-1的表达,降低活性氧水平。     

下调lncRNA KCNQ1OT1抑制 H2O2诱导的心肌细胞凋亡和氧化损伤

摘要:目的 探讨下调长链非编码 RNA(lncRNA)KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)对过氧化氢(H2O2)诱导的 心肌细胞凋亡和氧化损伤的影响。方法 心肌细胞 H9c2分成 Control组、H2O2组(H2O2 处理)、si-NC 组(转染siRNA control,H2O2 处 理)、si-KCNQ1OT1 组 (转 染 KCNQ1OT1siRNA,H2O2 处 理)、si-KCNQ1OT1+LiCl组 (转 染 KCNQ1OT1siRNA,Wnt信号激活剂 LiCl和 H2O2处理)。CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,硫代巴比 妥酸法检测丙二醛(MDA)水平、黄嘌呤氧化法检测超氧化物歧化酶(SOD)水平、微量法检测过氧化氢酶(CAT)水平、比 色法检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,Westernblot法检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 3(CCaspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(C-Caspase-9)、β-连环蛋白(β-catenin)、原癌基因(c-Myc)蛋白表 达水平。结果 与 Control组比较,H2O2组心肌细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中 C-Caspase-3、C-Caspase-9、βcatenin、c-Myc蛋白表达水平升高,MDA 水平升高,SOD、CAT、GSH-Px水平降低。与si-NC 组比较,si-KCNQ1OT1组 心肌细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,细胞中 C-Caspase-3、C-Caspase-9、β-catenin、c-Myc蛋白表达水平降低,MDA 水 平降低,SOD、CAT、GSH-Px水平升高。与si-KCNQ1OT1组比较,si-KCNQ1OT1+LiCl组心肌细胞存活率降低,细胞 凋亡率升高,细胞中 C-Caspase-3、C-Caspase-9、β-catenin、c-Myc蛋白表达水平升高,MDA 水平升高,SOD、CAT、GSH-Px 水平降低。结论 下调 KCNQ1OT1可以抑制 H2O2诱导的心肌细胞凋亡和氧化损伤,其机制与抑制 Wnt信号通路有关。     

H2O2对平滑肌细胞凋亡及p38MAPK活性的影响

目的 :了解H2 O2 对兔血管平滑肌细胞 (VSMC)p38蛋白激酶 (p38MAPK)磷酸化的影响及其与细胞凋亡的关系。方法 :取兔主动脉血管平滑肌细胞培养 ,加或不加H2 O2 孵育 ,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应 (MTT)法检测平滑肌细胞活性 ,以Western杂交检测p38MAPK磷酸化。结果 :①随着H2 O2 浓度增加 ,VSMC活性呈剂量依赖性降低 ;②磷酸化p38MAPK的表达随H2 O2 浓度的增高而增加 ,且磷酸化的p38MAPK在H2 O2 作用后 15min时达到峰值。③加用特异性的p38MAPK抑制剂SB2 0 35 80后可显著降低p38MAPK的活化 ,并能逆转H2 O2 诱导细胞凋亡的作用。结论 :H2 O2 通过激活p38MAPK而使平滑肌细胞凋亡增加 ,这也许是糖尿病患者更易患心血管疾病的原因之一     

H2O2对平滑肌细胞凋亡及p38MAPK活性的影响

目的：了解H2O2对兔血管平滑肌细胞（VSMC）p38蛋白激酶（p38MAPK)磷酸化的影响及其与细胞凋亡的关系。方法：取兔主动脉血管平浮雕肌细胞培养，加或不加H2O2孵育，用四甲基偶氮唑盐微量酶反应（MTT）法检测平滑肌细胞活性。以Western杂交检测p38MAPK磷酸化。结果：（1）随着H2O2浓度增加，VSMC活性呈剂量依赖性降低；（2）磷酸化p38MAPK的表达随H2O2浓度的增高而增加，且磷酸化的p38MAPK在H2O2作用后15min时达到峰值。（3）加用特异性的p38MAPK抑制剂SB203580后可显著降低p38MAPK的活化，并能逆转H2O2诱导细胞凋亡的作用。结论：H2O2通过激活p38MAPK而使平滑肌细胞凋亡增加，这也许是糖尿病患者更易患心血管疾病的原因之一。     

心肌营养素-1预处理减轻缺氧复氧对心肌细胞损伤的机制研究

目的观察心肌营养素-1(CT-1)预处理对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型细胞损伤、凋亡及血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响,进一步探讨其心肌保护机制。方法选择H9C2大鼠心肌细胞株,实验分为对照组、缺氧复氧组(H2/R24组)、各浓度CT-1预处理组,酶标仪检测细胞上清中LDH释放率,RT-qPCR检测HO-1 mRNA,Western Bolt检测活Cleaved Caspase3及HO-1蛋白。设计合成靶向HO-1的特异性siRNA片段,通过脂质体转染至H9C2细胞中,48 h后给予CT-1预处理及缺氧复氧(si-HO-1组)并重复检查HO-1 mRNA及蛋白的表达、LDH释放率、Cleaved Caspase3表达验证干扰效果。结果与H2/R24组相比,各浓度CT-1预处理组细胞上清LDH释放率下降,Cleaved Caspase3表达减少,而HO-1 mRNA及蛋白表达水平与H2/R24相比均明显增加。经siRNA干扰后,si-HO-1组HO-1表达水平与对照组相当,较H2/R24组、CT-1组则明显减少;而LDH释放率、Cleaved Caspase3蛋白表达较H2/R24组下降,而较CT-1组升高。结论 CT-1能通过上调HO-1表达,减轻心肌细胞缺氧复氧损伤。     

一氧化碳释放分子2通过影响HMGB1分布及表达减轻心肌细胞缺氧损伤

目的:探讨一氧化碳释放分子(CORM-2)对心肌细胞缺氧的保护作用及其机制。方法:将大鼠心肌细胞H9C2分为4组:正常组(H9C2)、缺氧组(Hypoxia+H9C2)、CORM-2组(CORM-2+Hypoxia+H9C2)和iCORM-2组(iCORM-2+Hypoxia+H9C2)。CCK-8和流式细胞术分别检测心肌细胞活性和凋亡情况;免疫荧光检测HMGB1核浆分布情况;Western Blot检测心肌细胞胞浆内HMGB1表达和总HMGB1的表达情况,以及相关凋亡蛋白表达。结果:缺氧组与正常组比较,细胞活性下降,凋亡率增高(9.5%vs 27.4%,P<0.05),胞浆HMGB1迁移增加,细胞总HMGB1及凋亡相关蛋白表达增加(P<0.05)。CORM-2组与缺氧组相比,细胞的活性升高(P<0.05),凋亡率降低至14.1%,胞浆HMGB1释放量及总表达量减少,Cleaved Caspase-3表达降低,ICORM-2组与缺氧组无明显变化。结论:CORM-2通过影响HMGB1分布及表达减轻心肌细胞缺氧损伤。     

ERK1/2在H2S后处理缺氧复氧心肌细胞中的表达及意义

目的:探讨细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)在硫化氢后处理缺氧复氧心肌细胞中的表达及意义。方法:建立心肌细胞株H9C2缺氧复氧模型并进行硫化氢后处理。实验分5组:缺氧复氧组(H/R)、硫化氢后处理组(H2S)、硫化氢后处理并ERK抑制剂组(H2S+PD)、ERK抑制剂组(PD)和对照组(Control)。各组心肌细胞使用real-time PCR检测ERK1/2 m RNA的表达,Western blot检测细胞ERK1/2蛋白的表达,细胞增殖-毒性检测法(cell counting Kit-8,CCK-8)检测细胞的增殖率,并通过流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:real-time PCR结果显示ERK1/2 m RNA基因表达在H2S组(1.374±0.270)心肌细胞与H/R组(0.590±0.046)、H2S+PD组(0.895±0.106)以及PD组(0.211±0.025)比较差异有统计学意义(F=23.000,P=0.000);H2S组(1.374±0.270)大鼠H9C2细胞ERK1/2m RNA出现相对明显表达(P=0.005),而H2S+PD组(0.895±0.106)较H/R组(0.590±0.046)表达明显(P=0.027);同样ERK1/2蛋白表达在H2S组(ERK1:1.986±0.184;ERK2:1.993±0.175)的心肌细胞与H/R组(ERK1:1.317±0.179;ERK2:1.062±0.161)、H2S+PD组(ERK1:1.615±0.12;ERK2:1.328±0.047)以及PD组(ERK1:0.925±0.42;ERK2:0.735±0.369)表达组间差异有统计学意义(F1=5.15,P1=0.016,F2=5.44,P2=0.045);在CCK-8法检测结果显示H2S组的心肌细胞较其余各组增殖率明显增加;流式细胞仪检测结果提示H2S组的心肌细胞凋亡率较其余各组明显降低。结论:经硫化氢后处理的缺氧复氧心肌细胞ERK m RNA以及ERK蛋白表达明显上调,增殖率明显提高,凋亡率差异明显。可能是由于加入外源性信号因子硫化氢激活缺氧复氧心肌细胞ERK1/2信号转导通路,有利于心肌细胞损伤的修复,进而产生心肌保护作用。     

右美托咪定对H9C2细胞内质网应激性损伤的影响及机制研究

目的研究右美托咪定（DEX）对H9C2心肌细胞内质网应激反应（ERS）的影响,探讨可能的发生机制。方法取正常培养的大鼠H9C2细胞,同时进行对照培养和缺氧/复氧（H/R）培养,其中H/R条件为5%CO2和95%N2密闭缺氧装置中缺氧3h后,常氧条件下培养3h。以含有1滋mol/LDEX和1mmol/L4-苯基丁酸（4-PBA）的培养基提前孵育细胞1h和24h。采用低损伤法检测各组细胞上清液的乳酸脱氢酶（LDH）浓度、CCK-8法检测细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡率,以及RT-PCR和Westernblot法检测内质网应激特异性分子葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）、Caspase-12的mRNA及蛋白表达情况。将H9C2细胞分设Control组、毒胡萝卜素（TG）组、4-PBA组以及p38丝裂素活化蛋白激酶（p38MAPK）抑制剂（SB202190）组并进行相应的干预,Westernblot法检测各组p38MAPK和p-p38MAPK的表达,以及GRP78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达情况。结果与Control组相比,H/R组的H9C2细胞活力减低,细胞上清液LDH浓度增加,细胞凋亡率增加（P＜0.05）;与H/R组比较,DEX+H/R组的细胞活力明显增加,细胞上清液LDH浓度明显下降,细胞凋亡率下降（P＜0.05）;与DEX+H/R组比较,4-PBA+DEX+H/R组的H9C2细胞损伤被逆转,GRP78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达也进一步升高。在Control组、TG组和DEX+TG组之间,p38MAPK的表达均无统计学差异,但是TG组的p-p38MAPK表达明显增加,DEX能够抑制p-p38MAPK表达增加（P＜0.05）;与TG组比较,DEX+TG组的GRP78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白表达被抑制,但是DEX+SB202190+TG组的GRP78、CHOP、Caspase-12mRNA及蛋白表达被逆转增高。结论DEX对H/R损伤下的H9C2心肌细胞具有保护作用,其作用机制与抑制细胞ERS有关,通过调控p38MAPK能够减轻细胞损伤和凋亡。     

BMP2诱导C3H10T1／2细胞成软骨分化的分子机制研究

目的：探讨骨形态发生蛋白2（BMP2）诱导鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1／2向成软骨分化的可能分子机制。方法：20μg／mLBMP2诱导C3H10TI／2细胞0,4h,1,3,6,10,13,15d后,RT—PCR检测BMP信号通路中关键分子BMPRI,BMPRII,Smadl／5／8的表达,Westernblot检测smad蛋白及MAPK信号通路中p38磷酸化水平变化,QRT—PCR检测成软骨标志基因aggrecan,Col2a1以及成软骨相关转录因子FGFR3,Sox9表达水平,同时用Alcine Blue染色,观测C3H10T1／2细胞成软骨分化情况。结果：经BMP2诱导后,C3H10T1／2细胞表现出成软骨分化,smad蛋白及p38磷酸化水平有所上升,同时成软骨标志基因col2a1以及成软骨相关转录因子FGFR3,Sox9表达水平都有增加。与未诱导组相比,Col2a1,FGFR3,Sox9在3d的表达与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）,FGFR3,Sox9在6d的表达与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：在一定培养条件下,BMP2具有诱导C3H10T1／2细胞成软骨分化能力。     

调控ERK1/2通路在H2S保护心肌细胞对抗阿霉素损伤中的作用

【目的】探讨胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在阿霉素心肌毒性中的作用及硫化氢(H2S)是否通过调控ERK1/2通路抑制阿霉素的心肌毒性。【方法】应用阿霉素处理H9c2心肌细胞建立心肌细胞毒性损伤模型;CCK-8比色法测定细胞存活率;蛋白印迹法(Western blot)检测ERK1/2蛋白的表达水平;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相测定细胞内的活性氧(ROS)水平;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照相检测线粒体膜电位(MMP)。【结果】5μmol/L阿霉素呈时间依赖性地上调磷酸化(p)ERK1/2表达水平;硫氢化钠(NaHS,为H2S的供体)预处理心肌细胞30 min明显地抑制阿霉素对p-ERK1/2表达的上调作用;400μmol/L NaHS和10μmol/L PD-98059(ERK1/2抑制剂)预处理30 min,均能对抗阿霉素引起的心肌细胞损伤,分别使H9c2的存活率增加,胞内ROS堆积和MMP丢失均减少。【结论】ERK1/2通路介导阿霉素的心肌毒性作用;通过抑制ERK1/2通路可能是H2S保护心肌细胞对抗阿霉素心肌毒性的作用机制之一。     

过表达C3G对高糖诱导H9C2心肌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨过表达C3G对高糖诱导 H9C2心肌细胞增殖和凋亡的影响.方法 分别用 pCXN2-Flag(空质粒)、pCXN2-Flag-hC3G(人过表达C3G mRNA)质粒通过瞬时转染 H9C2心肌细胞,并进行高糖干预.实验分为空白组、空载体组、过表达C3G组、空白+高糖组、空载体+高糖组、过表达C3G+高糖组,分别检测各组H9C2心肌细胞的C3G蛋白表达、增殖率及凋亡率.结果 空白+高糖组、空载体+高糖组较空白组、空载体组细胞增殖率均明显降低,凋亡率均明显升高.过表达C3G组较空白组与空载体组,过表达C3G+高糖组较空白+高糖组与空载体+高糖组H9C2心肌细胞的C3G蛋白表达增加,增殖率升高,凋亡率明显降低.结论 高糖抑制H9C2心肌细胞增殖、促进H9C2心肌细胞凋亡;过表达C3G可逆转高糖诱导H9C2心肌细胞增殖率的降低、凋亡率的升高.过表达C3G能促进高糖诱导H9C2心肌细胞的生存力.     

miR-1通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对高糖诱导的H9c2心肌细胞自噬的影响

目的 探讨miR-1对高糖诱导的H9c2心肌细胞自噬及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。方法H9c2细胞随机分为4组。正常组使用普通培养基培养,未转染;诱导组使用含33 mmol/L葡萄糖的培养基诱导,未转染;miR-1 NC组使用含33 mmol/L葡萄糖的培养基诱导,转染miR-1 NC;miR-1 inhibitor组使用含33 mmol/L葡萄糖的培养基诱导,转染miR-1 inhibitor。在加入葡萄糖诱导前48 h,使用Lipofectamine 3000转染试剂盒进行转染。实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测H9c2细胞和高糖诱导的H9c2细胞中miR-1表达水平;CCK-8法检测各组H9c2细胞增殖活性;蛋白免疫印记法（Western blot）检测各组H9c2细胞中Beclin1、p65、PI3K蛋白表达水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值以及AKT、mTOR蛋白磷酸化水平;生物信息学预测和双萤光素酶验证miR-1和PI3K的靶向关系。结果与正常组相比,诱导组的H9c2细胞中,miR-1表达水平显著升高（P<0.05）,PI3K蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。与正常组相比,诱导组H9c2细胞Beclin1蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高,自噬小体增多,细胞增殖率、p62蛋白表达以及PI3K、Akt、mTOR蛋白磷酸化水平显著降低（P<0.05）;与诱导组和miR-1 NC组相比,miR-1 inhibitor组H9c2细胞miR-1水平、Beclin1蛋白表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著降低,自噬小体减少,细胞增殖率、p62蛋白表达以及PI3K、Akt、mTOR蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.05）;miR-1和PI3K间存在靶向关系。结论在高糖诱导的H9c2细胞中,miR-1表达水平升高,抑制miR-1,可通过靶向激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,抑制高糖诱导的H9c2心肌细胞自噬。