烧伤小鼠IFIT1表达的初步观察

目的 观察烧伤小鼠干扰素诱导表达蛋白IFIT1的表达变化,初步探究其表达变化的原因.方法 实验小鼠致TBSA 15%Ⅱ度烧伤,1 d及7 d后处死,取肝、肺及脾组织.脂多糖掺入小鼠腹腔巨噬细胞株RAW264.7的培养基中,至终浓度0.1～1.0μg/ml,作用6 h.提取组织及细胞RNA,进行半定量逆转录-聚合酶链式反应,提取组织及细胞裂解上清,进行免疫印迹检测.结果 小鼠肝、肺、脾组织IFIT1的转录在烧伤后1 d升高,伤后7 d恢复至伤前水平;肝、肺、脾IFIT1的蛋白水平在伤后1 d一致升高,伤后7 d仍能检出升高.体外实验,细菌脂多糖显著激活RAW264.7细胞的IF-IT1转录及蛋白表达.结论 烧伤小鼠伤后早期IFIT1表达迅速升高,此变化与同期的内毒素血症引起的细胞应激有关.     

颈交感阻滞对烧伤早期小鼠各器官IFIT1表达的影响

目的：观察小鼠心、肝、脾、肺、肾等器官干扰素诱导蛋白IFIT1（Interferon—induced protein with tetratfieopetide repeats1）的表达情况,探讨颈交感神经阻滞（cervical sympathetic block,SB）对烧伤后早期小鼠各器官IFIT1表达状况的影响．方法：将雄性昆明小鼠18只随机分为正常对照组、烧伤组和颈交感神经阻滞（SB）治疗组、烧伤组和SB治疗组采用体表总面积（Total body surface area,TBSA）15％-20％Ⅲ度小鼠烧伤模型,SB治疗组于烧伤后即刻进行双侧颈交感神经阻滞,各组分别于4h后取心、肝、脾、肺、肾组织,提取RNA,以RT—PCR检测IFIT1表达情况．结果：RT—PCR显示IFIT1在各组的各器官均有表达,并存在差异．烧伤组IFIT1在心、肝、脾表达低于正常组,同时在肺、肾表达高于正常组,差异显著（P〈0．01）．SB治疗组IFIT1的表达均低于正常组（P〈0．01）;同时,SB治疗组IFIT1在心、肝、肺、肾的表达也低于烧伤组（P〈0．01）．另外,在各组内的不同器官的IFIT1表达量存在差异（P〈0．05）．结论：烧伤后早期小鼠各器官IFIT1表达有不同的变化,可能与不同器官在烧伤应激反应过程中损伤程度不同有关．SB可显著降低各器官IFIT1的表达．     

颈交感神经阻滞对烧伤早期小鼠肝脏干扰素诱导蛋白IFIT1表达的影响

目的检测干扰素诱导蛋白IFIT1(interferon-induced protein with tetratricopetide repeats1)在小鼠各器官组织的表达状况,并在此基础上探讨颈交感神经阻滞(SB)对烧伤后早期小鼠肝脏IFIT1表达的影响。方法雄性C57/129小鼠50只,分为对照组和SB治疗组,TBSA15%～20%Ⅲ度小鼠烧伤模型,分别于烧伤前、烧伤后1、6、12h和24h取肝组织,采用免疫印迹法(Western blot)观察IFIT1的蛋白表达情况,同时提取正常小鼠心、肝、脾、肺、肾、小肠、淋巴细胞和骨骼肌组织RNA,以RT-PCR检测IFIT1表达情况。结果RT-PCR结果显示IFIT1在正常小鼠各组织均有表达,但组织间的表达量存在差异。Western blot结果表明对照组烧伤后肝组织IFIT1表达显著增高(P<0.01),烧伤后SB治疗组IFIT1表达量较对照组相应时相点降低非常显著(P<0.01)。结论IFIT1在小鼠体内广泛表达。SB对严重创伤的治疗作用可能是通过抑制肝内IFIT1表达来实现的。     

安定-氯胺酮对严重烧伤小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达的影响

目的 观察严重烧伤早期小鼠腹腔巨噬细胞c-Jun激活区结合蛋白1(JAB1)蛋白表达变化,探讨安定-氯胺酮对其表达变化的影响.方法 将成年健康雄性昆明小鼠随机分为4组,即对照组、严重烧伤组、安定-氯胺酮组和严重烧伤后安定-氯胺酮处理组,以20%～30%体表总面积(TBSA)Ⅲ度烧伤作为严重烧伤模型,肌肉注射安定0.4mg/kg、氯胺酮10mg/kg给予麻醉.收集腹腔巨噬细胞提取总蛋白,运用Western blotting方法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平的变化.结果 在严重烧伤后30min,小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平与对照组相比明显降低(P<0.05),于6h时达到最低(P<0.01),严重烧伤后12h逐渐恢复至正常水平.然而,严重烧伤后应用安定-氯胺酮麻醉,小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平在各时相点变化差异无统计学意义.结论 严重烧伤可引起小鼠腹腔巨噬细胞JAB1蛋白表达水平的早期下降,而严重烧伤后应用安定-氯胺酮麻醉能显著抑制JAB1蛋白表达水平下调.     

烧伤小鼠早期P56与IFN mRNA表达变化及麻醉或KPV对其表达的影响

目的 探讨小鼠烧伤早期干扰素诱导蛋白P56、IFN-α mRNA-在肺、肝、脾、肾组织中的表达,以及烧伤后给予麻醉剂或KPV对其表达的影响.方法 选取健康昆明鼠40只,用随机排列表法分为4组:正常对照组、单纯烧伤组、烧伤 KPV组(简称KPV组)、烧伤 麻醉组(简称麻醉组),烧伤后3 h取肝、肺、肾、脾组织,提取RNA,用两步法RT-PCR检测P56、IFN-狻FN-的表达.结果 P56 mRNA在肝、脾、肺、肾组织中都有表达,且表达丰度较高.在肾组织中烧伤组和KPV组表达显著高于正常组(P<0.05),麻醉组P56 mRNA表达与正常组相似;IFN-在肝组织中不表达,而在脾、肺、肾组织中均有表达,但表达量不高,在肺组织中烧伤组和麻醉组表达显著增加(P<0.05),KPV组表达略微降低;IFN-在所有已测脏器中都有表达,在肾组织中烧伤组和KPV组较正常组表达显著增加(P<0.05),麻醉组增加不明显.结论 烧伤后干扰素表达增加,诱导P56表达增加,说明P56可能与早期创伤应激不良有关.     

氯胺酮对烧伤早期小鼠肝应激相关蛋白IFIT1和JAB1表达的影响

目的:观察小鼠应激相关蛋白IFIT1（Interferon-inducedproteinwithtetratricopetiderepeats1）和JAB1（c-Junactivationdomain-bindingprotein1）在肝脏的表达的细胞定位及氯胺酮对烧伤后早期肝脏IFIT1和JAB1表达的影响,初步探讨氯胺酮调节炎症反应的分子机制。方法:将15只健康C57/129小鼠随机分为3组（n=5）,正常对照组、烧伤组、烧伤+氯胺酮组。采用TBSA15²0%Ⅲ度小鼠烧伤模型;氯胺酮10mg/kg,肌肉注射,烧伤15min给予。分别于烧伤后4h脱臼处死,取肝。采用免疫印迹法（Westernblot）观察各组肝IFIT1和JAB1的表达情况。取正常对照组肝组织作病理切片,行免疫组织化学方法对IFIT1和JAB1的表达做细胞定位。结果:烧伤组IFIT1表达较正常对照组显著增高（P<0.01）,烧伤组JAB1表达较正常对照组显著降低（P<0.01）;氯胺酮治疗组IFIT1表达较正常对照组、烧伤对照组显著降低（P<0.01）,氯胺酮治疗组JAB1表达较正常对照组显著降低（P<0.05）、较烧伤组显著升高（P<0.05）。免疫组织化学方法显示,IFIT1在肝细胞胞浆表达为阳性,JAB1在肝细胞胞浆和胞核均表达为阳性。结论:烧伤早期小鼠肝组织IFIT1表达增高而JAB1表达降低,氯胺酮可降低烧伤早期小鼠肝组织IFIT1的高表达,增高JAB1表达;氯胺酮可通过调控严重烧伤应激中IFIT1和JAB1的表达而在全身炎性反应综合症（Systemicinflamma-toryresponsesyndromeSIRS）中发挥作用。     

Bcl-2蛋白及caspase-3基因表达与暴发性肝衰竭肝细胞凋亡关系的研究

目的：研究Bcl-2蛋白与caspase-3基因表达在实验性暴发性肝衰竭（FHF）中对肝细胞凋亡的作用。方法：用脂多糖和D-氨基半乳糖制备FHF小鼠模型；免疫组化法检测肝组织内Bcl-2蛋白表达；原位杂交法检测肝组织内ccqspcqse-3基因表达；缺口原位末端标记技术检测肝细胞凋亡。结果：模型组用药后2h Bcl-2有较多表达，4h表达最多，以后逐渐减少，4h与2h比较差别显著（P〈0．05），与8h、12h比较差别十分显著（P〈0．01）。模型组用药后2h caspase-3开始少量表达，8h达最高峰，并出现典型的肝细胞凋亡改变。12h表达下降，且同时存在肝细胞凋亡和坏死。Bcl-2与caspase-3表达及肝细胞凋亡均呈负相关。结论：在FHF中，肝细胞凋亡与caspase-3的激活有关；Bcl-2可能通过抑制caspase-3的活性而抑制肝细胞凋亡。     

严重烧伤后高迁移率族蛋白B1的变化及其与脓毒症的关系

目的动态观察严重烧伤患者血浆中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平的变化并探讨其与脓毒症及内毒素血症的关系。方法25例烧伤总体表面积大于30%患者,根据是否并发脓毒症分组(脓毒症组14例、非脓毒症组11例),采用酶联免疫吸附实验及改良基质显色法鲎实验分别检测患者伤后1、3、5、7、14、21、28d血浆HMGB1及内毒素含量的变化。结果严重烧伤患者伤后第1天血浆中HMGB1含量显著升高,其中伤后第7、21、28天脓毒症组HMGB1含量显著高于非脓毒症组(P<0.05)。脓毒症患者存活组伤后第3、21天HMGB1含量显著低于非存活组(P<0.05,P<0.01),血浆中HMGB1含量与是否易并发脓毒症有关,但与烧伤总体表面积无相关性(P>0.05)。伤后第3、5、7、21天血浆HMGB1与内毒素含量呈显著正相关(P<0.05,P<0.01)。结论HMGB1作为重要的晚期炎症介质参与严重烧伤后脓毒症的病理生理过程,其诱生与内毒素刺激密切相关,动态观察其水平有助于烧伤后病程监测及患者预后判断。     

胰腺癌细胞ASPC-1凋亡过程中caspase 1和2的表达

目的 :探讨细胞凋亡过程中 caspase- 1和 caspase- 2的表达及其意义。　方法 :胰腺癌细胞系 ASPC- 1无血清培养 2 4h后加入 IFN- γ,于 6、1 2和 2 4h收集细胞 ,检测细胞凋亡情况 (流式细胞法 )和 caspase- 1和 caspase- 2蛋白质表达 (western blot法 ) ,以不加 IFN -γ的细胞为对照组。　结果 :IFN-γ刺激可诱导 ASPC- 1细胞的凋亡 ,随着时间延长凋亡数量增多 ,2 4h达 9%。Caspase- 1和 caspase- 2表达随时间而增强 ,对照组轻度表达。　结论 :Caspase- 1和 cas-pase- 2在细胞凋亡过程中表达 ,是重要的凋亡调节基因     

严重烧伤后大鼠心肌组织水通道蛋白-1表达变化及其意义

目的 探讨大鼠严重烧伤后心肌组织中水通道蛋白-1(AQP-1)的表达变化及意义.方法 健康成年Wistar大鼠48只,分为正常对照组(n=6)、烫伤组(n=42);采用30%TBSAⅢ度烧伤大鼠模型,其中单纯烫伤组又分为2、4、8、12、24、48、72 h组,每个时相点为6只动物.用于湿重法和ELSIA方法 分别检测烧伤后不同时间段心肌组织含水量和AOP1的表达变化.结果 严重烧伤后2 h心肌组织含水量增加及AQP1表达增强;烧伤后12 h达到高峰,烧伤后48 h仍高于正常;统计学分析表明,AQP1的表达与心肌组织含水量呈显著正相关(r=0.844,P<0.01).结论 严重烧伤后AQP1蛋白表达明显增强可能导致心肌组织含水量的增加.试验提示AOP1可能参与介导烧伤后心肌水肿的病理进程.     

凋亡相关蛋白在大肠癌中的表达及其与凋亡关系的研究

目的 探讨大肠癌中survivin和caspase-3的表达及其与细胞凋亡的关系.方法 采用免疫组织化学法测定50例正常大肠黏膜和66例大肠癌组织中survivin和caspase-3的表达.结果 survivin在大肠癌中的表达明显高于正常大肠黏膜组织(48.5%vs0,P<0.01),与淋巴结转移和分化程度有关(P<0.05).caspase-3在大肠癌中的表达明显低于正常组织(46.9%vs80.0%,P<0.05),与Dukes分期有关(P<0.05).survivin和caspase-3的表达具有相关性(P<0.05).结论 survivin、caspase-3与大肠肿瘤的细胞凋亡密切相关,参与细胞凋亡的调节机制,在大肠癌恶变的过程中发挥重要的作用.     

毒性弥漫性甲状腺肿中α干扰素及其诱导蛋白IFIT1的作用

目的 探讨α干扰素(IFN-α)及其诱导蛋白IFIT1在毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病)发病中可能起到的作用.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应检测Graves病患者(GD组)和健康者(对照组)外周血单个核细胞(PBMC)中IFIT1 mRNA表达情况.根据IFIT1表达量分为高表达亚组(表达增高≥2倍,33例)、低表达亚组(表达增高＜2倍,21例),比较两组间相关临床指标.结果 GD组PBMC中IFIT1 mRNA的表达显著高于对照组(P＜0.05).GD组中,高表达亚组的血清促甲状腺激素受体抗体(TRAb)水平显著高于低表达亚组(P＜0.05).两亚组间其他临床指标的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).结论 IFN-α可能通过IFIT1影响TRAb的生成,在Graves病发病中发挥作用.     

大鼠肝再生过程中肝细胞caspase-3和caspase-8活性的变化

目的:研究大鼠肝再生过程中肝细胞caspase-3和caspase-8活性的变化规律.方法:雄性SD大鼠70%肝切除(PH),制作肝再生模型,制备肝匀浆液,经离心后用酶标仪分别测定肝再生过程中不同时期(共8个时间点),肝细胞的凋亡酶活性.结果:Caspase-3活性,与对照组相比,在PH后3、6、72、120 和168 h时显著性增高(P<0.001);而整个过程中Caspase-8的活性除了在PH后168 h时高于对照组外(P<0.05),其余时间点没有明显增高.结论:肝再生过程中肝细胞凋亡酶Caspase-3活性的升高可能主要是由内源性线粒体途径引起的.     

苦瓜蛋白诱导K562/A02细胞凋亡

目的：观察苦瓜蛋白对K562/A02细胞凋亡受抑逆转作用及其分子机制。方法：CCK-8法测定苦瓜蛋白对耐药细胞K562/A02的IC50值,细胞形态学和AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡,流式细胞法测定P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）表达及caspase-3和caspase-8活性。结果：苦瓜蛋白显著抑制K562/A02耐药细胞的增殖;经苦瓜蛋白处理后细胞形态上出现典型的凋亡改变,AnnexinV/PI双染法显示凋亡细胞明显增加;P-gp蛋白表达下降,caspase-3和caspase-8活性显著增强。结论：苦瓜蛋白能诱导K562/A02耐药细胞凋亡,逆转耐药白血病细胞P-gp高表达所介导的细胞凋亡抑制。     

Survivin在喉鳞状细胞癌组织中的表达及与caspase-3、P53相关性的初步研究

目的 研究凋亡抑制基因Survivin蛋白在喉癌中的表达及与caspase-3、P53表达的相关性。方法 采用免疫组化SP方法对46例喉鳞状细胞癌组织和16例正常喉黏膜组织中的Survivin蛋白与caspase-3蛋白、P53蛋白进行检测。结果 在喉癌组织中Survivin的阳性表达率为71.7%,其阳性表达率与临床分期、肿瘤的分化程度以及淋巴结转移无关;P53阳性表达率为65.1%,caspase-3阳性表达率为26.1%。在正常组织中Survivin蛋白与P53蛋白均不表达,但caspase-3蛋白全部表达;caspase-3与Survivin表达显著负性相关,P53与Survivin表达显著正性相关。结论Survivin在喉癌中高表达提示该基因在喉癌的发生发展中有着重要的作用,caspase-3的失表达、P53的突变与Survivin的阳性表达可能在喉癌的形成过程中起着协同作用。     

瑞芬太尼对大鼠肠缺血再灌注损伤时肝细胞凋亡及caspase-3的影响

目的 探讨瑞芬太尼对大鼠肠缺血再灌注损伤时肝细胞凋亡及caspase-3的影响. 方法 成年健康Wistar大鼠42只,随机分为3组:对照组(C组,n=6)、肠缺血再灌注组(IR组,n=18)、瑞芬太尼干预组(R组,n=18).各组根据再灌注时间分为1,3,6 h三个时相.通过夹闭肠系膜上动脉制作肠缺血再灌注损伤模型,实验结束后即刻取肝左叶做标本.用免疫组化法检测caspase-3蛋白表达量,TUNEL法检测肝细胞凋亡指数(AI). 结果与C组比较,IR组和R组肝组织caspase-3蛋白含量、AI均增加(P<0.05);与IR组比较,R组caspase-3蛋白表达和AI减少(P<0.05). 结论 瑞芬太尼可以下调大鼠肠缺血再灌注时caspase-3蛋白表达,使肝细胞凋亡减轻,从而对肝损伤有一定的保护作用.     

同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞Fas、caspase-8蛋白表达的研究

目的探索同型半胱氨酸诱导血管平滑肌细胞凋亡的途径。方法组织贴块法培养血管平滑肌细胞,免疫细胞化学Envision二步法和western blot对平滑肌细胞Fas、caspase-8蛋白的表达进行观察。结果在胞膜和胞浆中可见到Fas表达的阳性产物,而caspase-8蛋白则在胞浆和胞核中见到阳性表达产物,同型半胱氨酸使血管平滑肌细胞Fas、caspase-8蛋白的表达呈浓度和时间依赖性上调（P〈0.05）。western blot方法的检测结果与上述结果相符。结论同型半胱氨酸诱导人血管平滑肌细胞凋亡受体Fas表达增加,Fas可介导凋亡启动子caspase-8表达增加,这可能是同型半胱氨酸诱导血管平滑肌细胞凋亡的途径之一。