丹蒌片通过Keap1-Nrf2/HO-1信号通路缓解视网膜缺血-再灌注损伤

目的：探讨丹蒌片对小鼠视网膜缺血-再灌注损伤(RIRI)的保护作用及其机制。

方法：将40只ApoE^-/-小鼠给予高脂饲料喂养6 wk,通过前房灌注加压法建立RIRI模型,分为对照组(给予生理盐水灌胃8 wk)、RIRI模型组(给予生理盐水灌胃8 wk)及丹蒌片低、中、高剂量组\〖分别给予丹蒌片溶液1、2、4 g/(kg·d)灌胃8 wk\〗。采用苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠视网膜组织形态学变化情况,TUNEL染色检测各组小鼠视网膜细胞凋亡情况,Western-blot法检测各组小鼠视网膜组织中Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、转录因子核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、超氧化物歧化酶(Sod2)蛋白表达情况。

结果：与对照组比较,RIRI模型组小鼠视网膜萎缩,厚度变薄,细胞凋亡增加,视网膜组织中Sod2蛋白表达下调,Keap1蛋白表达上调(均P<0.01); 与RIRI模型组比较,丹蒌片中、高剂量组小鼠视网膜厚度增加(均P<0.01),丹蒌片低、中、高剂量组小鼠视网膜细胞凋亡降低(均P<0.05),丹蒌片低剂量组小鼠视网膜组织中Keap1和HO-1蛋白表达水平无明显差异(P>0.05),丹蒌片中、高剂量组小鼠视网膜组织中Sod2、Nrf2、HO-1蛋白表达上调,Keap1蛋白表达下调(均P<0.05)。

结论：丹蒌片能缓解RIRI小鼠模型视网膜萎缩变薄,减少视网膜细胞凋亡,其作用是通过调控Keap1-Nrf2/HO-1信号通路降低RIRI氧化应激反应来实现。     

小分子RNA干扰HIF-1α对糖尿病视网膜病变小鼠视网膜的保护作用及机制

目的：探讨小分子RNA干扰HIF-1α对糖尿病视网膜病变小鼠视网膜的保护作用及机制。

方法：C57BL/6雄性小鼠40只随机分为正常组、糖尿病组、siRNA-HIF-1α组、siRNA-NC组,制备糖尿病模型。观察各组小鼠视网膜组织病理学变化,免疫组织化学检测微血管密度(MVD),实时荧光定量PCR检测各组小鼠视网膜组织中HIF-1α、VEGF、NF-κB、IL-1、IL-6、TNF-α mRNA表达,Western blot法检测各组小鼠视网膜组织中HIF-1α、ET-1、vWF蛋白表达。

结果：糖尿病组、siRNA-NC组和siRNA-HIF-1α组大鼠的体质量低于正常组,而血糖水平高于正常组(均P<0.05); 糖尿病组和siRNA-NC组小鼠视网膜组织中MVD高于正常组,而siRNA-HIF-1α组低于糖尿病组和siRNA-NC组(均P<0.05); 与糖尿病组和siRNA-NC组相比,siRNA-HIF-1α组小鼠视网膜组织中HIF-1α、VEGF、NF-κB、IL-1、IL-6、TNF-α mRNA相对表达量降低(均P<0.05); 与糖尿病组和siRNA-NC组相比,siRNA-HIF-1α组小鼠视网膜组织中HIF-1α、ET-1、vWF蛋白相对表达量降低(均P<0.05)。

结论：特异性沉默HIF-1α基因可保护DR小鼠视网膜,其机制可能通过减少血管新生和血管内皮损伤有关。     

17-β雌二醇和他莫昔芬对小鼠慢性高眼压模型的作用研究

目的：探讨17-β雌二醇(17-β-estradiol,E2)和他莫昔芬(tamoxifen,TAM)在慢性高眼压小鼠模型中的调节作用。

方法：通过前房注射磁珠堵塞房角构建小鼠慢性高眼压模型。将C57BL/6成年小鼠随机分为对照组、Beads组、E2组和E2+TAM组。采用眼压计监测各组眼内压(intraocular pressure, IOP)的变化; HE染色观察并测量中央视网膜厚度; Brn3a免疫组织化学染色观察并计数存活的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs); Western blot法检测视网膜中胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达。

结果：造模后2wk内,Beads组小鼠平均眼压显著高于对照组,而E2组和E2+TAM组眼压均明显低于Beads组,差异均有统计学意义(P<0.05),且E2+TAM组小鼠平均眼压较E2组更低。造模2wk后,Beads组小鼠视网膜RGCs数量较对照组显著减少(P<0.05),而皮下注射E2+TAM可明显抑制该现象。造模2wk后,各组小鼠中央视网膜厚度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot结果显示,Beads组小鼠视网膜GFAP蛋白表达量升高,注射E2和E2+TAM后,GFAP蛋白表达量显著下降(P<0.05)。

结论：皮下注射E2和E2+TAM均能降低慢性高眼压模型小鼠眼内压,增加RGCs存活数量,且降低视网膜GFAP蛋白表达量,表明E2和TAM在青光眼的发生发展过程中具有一定的保护作用。     

苏州某社区高血压患者视网膜病变与尿白蛋白/肌酐的关系

目的：探讨苏州某社区高血压患者视网膜动脉狭窄的危险因素及与尿白蛋白/肌酐的(UACR)关系,为靶器官损害的预防、延缓提供一定依据。

方法：本研究采用横断面调查的方法,纳入高血压患者1 983例,根据眼底检测情况分成正常组944例,狭窄组1 039例。收集基线资料及进行尿白蛋白/尿肌酐测定,分析视网膜动脉狭窄危险因素及与UACR的关系。

结果：两组患者年龄、糖尿病水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05); 年龄(OR=1.013,P=0.011)、糖尿病(OR=1.352,P=0.008)为视网膜动脉狭窄的危险因素; 高血压视网膜病变(HR)检出率为95.56%,其中以Ⅰ级和Ⅱ级轻度病变为主; 两组患者白蛋白尿分组差异有统计学意义(P<0.05),其中眼底狭窄组大量白蛋白尿占比65.59%,高于微量白蛋白尿54.21%,高于正常组50.52%。

结论：年龄和糖尿病是高血压患者视网膜动脉狭窄的危险因素,视网膜病变与UACR有关系,社区应加强健康宣教,早期进行视网膜、肾脏筛查,预防、延缓病情进展。     

膳食诱导的肥胖型C57BL/6小鼠视网膜神经节细胞凋亡的机制

目的：探讨高脂饮食诱导的C57BL/6肥胖小鼠视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡的机制。

方法：高脂饲料喂养19wk后,小鼠分为肥胖抵抗(DIO-R)组和肥胖倾向(DIO)组,同时对照组(CON)小鼠给予基础饲料。TUNEL法检测各组小鼠RGCs的凋亡情况,并应用激光共聚焦显微镜检测RGCs内钙离子的浓度。

结果：TUNEL法凋亡检测结果显示,DIO组小鼠视网膜神经节细胞层可见较多黄色着染的凋亡细胞,其凋亡指数为(6.7±1.2)%,显著高于对照组和DIO-R组(P<0.01,P<0.05); 对照组和DIO-R组间比较无显著差异(P>0.05)。激光共聚焦结果显示,与对照组和DIO-R组比较,DIO组小鼠视网膜神经节细胞内Ca²⁺荧光染色明显增强,其荧光染色强度比值显著升高(均P<0.01); 对照组和DIO-R组视网膜神经节细胞内Ca²⁺荧光染色强度无明显差异(P>0.05)。

结论：细胞内钙离子超载可能介导了肥胖型C57BL/6小鼠视网膜神经节细胞的凋亡过程。     

DHA玻璃体注射对ARMD大鼠模型光感受器细胞凋亡和PI3K/Akt通路的影响

目的：探讨二十二碳六烯酸(DHA)玻璃体注射对年龄相关性黄斑变性(ARMD)大鼠光感受器细胞凋亡和磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)通路的影响。

方法：大鼠随机分为空白对照组、模型组、低剂量DHA组(L-DHA组)、中剂量DHA组(M-DHA组)和高剂量DHA组(H-DHA组)。采用光损伤法建立干性ARMD大鼠模型。HE染色观察视网膜病理变化,TUNEL法检测视网膜细胞凋亡情况,透射电镜观察视网膜神经节细胞超微结构,酶联免疫吸附法测定视网膜组织TNF-α和IL-6水平,Western Blot检测视网膜组织p-PI3K、p-Akt、Bax、Bcl-2、p-NF-κBp65和cleved-caspase-3蛋白表达。

结果：与空白对照组比较,模型组大鼠视网膜总厚度、外核层和内核层厚度、视网膜组织p-PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达均降低(P<0.05),神经节细胞层和外核层细胞凋亡指数、视网膜组织TNF-α和IL-6水平、Bax、p-NF-κBp65和cleved-caspase-3蛋白表达均升高(P<0.05)。与模型组比较,M-DHA组和H-DHA组大鼠视网膜总厚度、外核层和内核层厚度、视网膜组织p-PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达均升高(P<0.05),神经节细胞层和外核层细胞凋亡指数、视网膜组织TNF-α和IL-6水平、Bax、p-NF-κBp65和cleved-caspase-3蛋白表达均降低(P<0.05)。

结论：DHA可能通过激活PI3K/Akt通路抑制ARMD大鼠光感受器细胞凋亡。     

PEDF对氧诱导视网膜病变小鼠视网膜MCP-1表达的影响

目的：观察色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)在氧诱导视网膜病变(oxygen-induced retinopathy,OIR)中对小鼠视网膜新生血管(retinal neovascularization,RNV)和单核细胞趋化因子-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)表达的影响,探讨PEDF对缺血缺氧性视网膜病变的保护作用和机制。

方法：取7日龄C57BL/6J新生小鼠160只,将120只7日龄小鼠与哺乳母鼠共同置于氧浓度为(75±2)%的氧环境内饲养5d,然后返回正常氧环境中饲养5d,建立OIR模型; 40只小鼠始终置于正常氧环境饲养。分别于12日龄和14日龄给予PEDF药物治疗组小鼠右眼玻璃体腔注射PEDF(2μg/μL)各1μL,给予PBS治疗对照组和正常对照组小鼠右眼玻璃体腔注射等量的磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)。所有小鼠于17日龄麻醉处死后取视网膜,采用视网膜铺片和Lectin染色法观察各组小鼠病理性新生血管的生成情况; Western-blot检测PEDF和MCP-1蛋白在各组小鼠视网膜的表达; 实时荧光定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测各组小鼠视网膜PEDF和MCP-1 mRNA的表达。

结果：视网膜铺片和Lectin染色结果显示OIR模型组RNV面积较正常组显著增大,差异有统计意义(P<0.01),PEDF药物治疗组RNV面积较PBS治疗对照组明显减小,差异有统计意义(P<0.01)。Western-blot和RT-PCR结果显示,OIR模型组MCP-1蛋白和mRNA的表达水平均明显高于正常组,差异有统计意义(均P<0.05); OIR模型组PEDF蛋白和mRNA的表达水平均明显低于正常组,差异有统计意义(均P<0.01); PEDF药物治疗组MCP-1蛋白和mRNA的表达量较PBS治疗对照组均显著减少,差异有统计意义(均P<0.05); PEDF药物治疗组MCP-1蛋白和mRNA的表达量较正常对照组升高,但差异均无统计学意义(均P>0.05)。

结论：PEDF能够抑制OIR小鼠视网膜新生血管形成,同时下调MCP-1在OIR小鼠视网膜的表达,后者可能是其抑制新生血管形成从而发挥视网膜保护作用的机制之一。     

健脾补肾益视方对小鼠干性年龄相关性黄斑变性的保护作用及其机制

目的：探讨健脾补肾益视方对碘酸钠诱导的小鼠干性年龄相关性黄斑变性(dARMD)的保护作用及其机制。

方法：将27只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组和中药组,每组各9只,通过苏木精-伊红(HE)染色观察视网膜的结构形态,二氢乙锭(DHE)荧光染色观察小鼠视网膜细胞内活性氧(ROS)水平,生化试剂盒检测小鼠视网膜丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)表达水平,Western blot检测小鼠视网膜沉默信息调节因子相关蛋白1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1-α(PGC-1α)蛋白表达。

结果：视网膜结构形态：模型组视网膜结构见外核层细胞数量轻微或轻度减少,外核层局部区域变薄,外界膜分界不明显,视网膜色素上皮细胞轻微或轻度肿胀,视网膜细胞排列轻微或轻度紊乱; 中药组视网膜色素上皮细胞层及光感受器层明显改善。氧化应激：DHE荧光染色结果显示,造模14 d后,模型组的ROS水平明显高于空白组(P<0.01); 中药组的ROS水平明显低于模型组(P<0.001)。ELISA结果显示,造模14 d后,模型组与空白组相比,SOD水平明显降低(P<0.01),MDA水平明显升高(P<0.01); 中药组与模型组比较,SOD水平明显升高(P<0.01),MDA水平明显降低(P<0.01)。SIRT1/PGC-1α蛋白表达：Western blot结果显示,造模7、14 d,与空白组比较,模型组SIRT1和PGC-1α表达均显著降低(P<0.01); 与模型组比较,中药组SIRT1和PGC-1α表达均显著升高(P<0.01)。

结论：中药健脾补肾益视方可改善碘酸钠诱导的小鼠视网膜氧化应激状态,减少对视网膜组织的损伤,可能是通过PGC-1α/SIRT1信号通路发挥抗氧化应激作用。     

小鼠视神经损伤后视网膜中TLR-9与MyD88表达变化

目的：探讨Toll样受体-9(TLR-9)与髓样分化因子(MyD88)在小鼠视神经损伤(ONI)后视网膜中的表达变化。

方法：选取8周大小的雄性C57BL/6J小鼠36只,随机分为6组：空白对照组(未做任何处理)、ONI 1d组(视神经损伤后1d取材)、ONI 3d组(视神经损伤后3d取材)、ONI 5d组(视神经损伤后5d取材)、ONI 7d组(视神经损伤后7d取材)、ONI 14d组(视神经损伤后14d取材)。分组后通过视神经夹持的方法制作小鼠视神经损伤模型,利用RT-qPCR与Western-blot检测各组小鼠视网膜中TLR-9与MyD88的mRNA和蛋白水平。

结果：ONI 1d组视网膜中TLR-9与MyD88的mRNA和蛋白水平与空白对照组比较无差异(P>0.05); ONI 3d、ONI 5d、ONI 7d、ONI 14d组视网膜中TLR-9与MyD88的mRNA和蛋白水平与空白对照组比较均明显增加(P<0.01)。与空白对照组比较视网膜中TLR-9与MyD88的mRNA和蛋白水平在小鼠ONI 3d开始升高(P<0.01),ONI 5d达到峰值(P<0.001),ONI 7d开始逐渐下降(P<0.01)。

结论：小鼠视神经损伤能够激活视网膜中TLR-9与MyD88表达,TLR-9与MyD88可能在视神经损伤的进程中起重要作用。     

miR-373靶向VEGFA对糖尿病视网膜病变大鼠的作用

目的：探讨miR-373靶向血管内皮生长因子A(VEGFA)对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠的作用。

方法：将40只大鼠随机分为对照组(n=10)和DR组(n=30),造模成功后的DR组大鼠分为模型组(n=10)、miR-373 agomir组(n=10)、agomir-NC组(n=10),右眼玻璃体腔分别注射200μL生理盐水、miR-373 agomir(200nmol)、agomir-NC(200nmol),每周1次,共处理12wk。通过RT-qPCR检测各组大鼠视网膜组织中miR-373和VEGFA mRNA表达水平,双荧光素酶实验验证miR-373与VEGFA靶向关系,Western-blot检测各组大鼠视网膜组织中VEGFA、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化-磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)、磷酸化-丝苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)蛋白表达水平。

结果：与对照组比,模型组和agomir-NC组大鼠视网膜组织miR-373及Bcl-2蛋白表达水平显著下降,VEGFA mRNA、Bax、p-PI3K和p-AKT蛋白表达量显著升高(均P<0.05)。与agomir-NC组比,miR-373 agomir组大鼠视网膜组织miR-373及Bcl-2蛋白表达水平显著升高,VEGFA mRNA及蛋白、Bax、p-PI3K和p-AKT蛋白表达量显著下降(均P<0.05)。双荧光素酶实验证实VEGFA是miR-373的靶基因。

结论：miR-373通过靶向VEGFA抑制糖尿病视网膜病变,其机制可能与miR-373抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

黄芩苷对高糖诱导的人晶状体上皮细胞凋亡和氧化应激的影响及其可能机制

目的 探讨黄芩苷对高糖诱导的人晶状体上皮细胞凋亡和氧化应激的影响,并探讨其可能机制.方法 以人晶状体上皮细胞系HLE-B3为研究对象,用不同浓度黄芩苷处理后,采用CCK-8法检测细胞活力以筛选黄芩苷最佳作用浓度用于后续实验.将细胞随机分为正常组、高糖组、黄芩苷组,采用CCK-8法检测各组细胞活力,流式细胞术检测各组细胞...     

核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1信号通路介导的氧化应激反应对早期小鼠视网膜爆震伤的影响及其作用机制

目的　探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路介导的氧化应激反应对早期小鼠视网膜爆震伤的影响及其作用机制。方法　取雄性C57BL/6小鼠60只随机分为对照组和模型组,对照组小鼠常规饲养,模型组小鼠接受爆震冲击处理。去除建模过程中5只死亡小鼠,最终纳入对照组16只小鼠、6 h模型组19只小鼠、48 h模型组20只小鼠。分别于建模后6 h、48 h腹腔注射200 g·L^-1戊巴比妥钠过量麻醉处死小鼠,解剖取材。对各组小鼠视网膜组织进行HE染色,计数视网膜神经节细胞（RGC）并测量视网膜神经纤维层（RNFL）厚度。免疫组织化学染色检测各组小鼠视网膜组织Nrf2蛋白、HO-1蛋白、超氧化物歧化酶2(SOD2)蛋白表达情况。Western blot检测各组小鼠视网膜组织Nrf2蛋白、HO-1蛋白、SOD2蛋白、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白、黑色素瘤分化相关基因5（MDA5）蛋白的相对表达量。结果　与对照组相比,6 h模型组小鼠视网膜组织结构疏松,细胞排列紊乱,神经节细胞层、内核层及外核层出现核浓缩和空泡现象;RGC数减少(P<0.05),RNFL厚度增加(P<0.05);48 h模型组小鼠视网膜组织细胞排列更为杂乱疏松,RGC数明显减少(P<0.05),RNFL进一步增厚(P<0.05),并伴有新生血管生成。与对照组［(7.85±1.16)%］相比,6 h模型组小鼠视网膜组织Nrf2蛋白阳性细胞表达率升高至(16.78±1.38)%;48 h模型组进一步升高至(20.01±1.48)%,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与对照组［(4.67±0.98)%、(4.15±1.11)%］相比,6 h模型组小鼠视网膜组织HO-1蛋白、SOD2蛋白阳性细胞表达率分别升高至(7.95±1.27)%和(6.14±0.90)%;48 h模型组继续升高,分别为(12.34±1.48)%、(10.25±1.46)%,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与对照组相比,6 h模型组小鼠视网膜组织Nrf2蛋白、HO-1蛋白、SOD2蛋白、iNOS蛋白、MDA5蛋白相对表达量均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);48 h模型组进一步升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论　Nrf2/HO-1信号通路介导的氧化应激反应参与早期视网膜爆震伤的发生,其作用机制与上调SOD2蛋白、MDA5蛋白、iNOS蛋白表达有关。     

5,6-二氢环戊烯并1,2-二硫杂环戊烯-3-硫酮对2型糖尿病大鼠视网膜核因子NF-E2相关因子及血红素氧合酶-1表达的影响

目的 观察Ⅱ相酶诱导剂5,6-二氢环戊烯并1,2-二硫杂环戊烯-3-硫酮（CPDT）对2型糖尿病大鼠视网膜核因子NF-E2相关因子/抗氧化反应元件（Nrf2/ARE）信号通路及氧化应激的影响,探讨CPDT保护糖尿病大鼠视网膜的机制。方法 35只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、造模组2个组,造模组中造模成功者再随机分为糖尿病组、CPDT干预组2个组。正常组、造模组分别有8、27只大鼠。糖尿病组和CPDT干预组给予高脂高糖饲料饲养2个月,大鼠空腹12 h后按体重35 mg/kg腹腔注射链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠模型。CPDT干预组成模后1周开始在高脂高糖饲料中添加CPDT。8周后检测3组大鼠血糖、血清丙二醛（MDA）含量,检测正常组和糖尿病组大鼠血脂含量。逆转录聚合酶链反应检测3组大鼠视网膜Nrf2、血红素氧合酶-1（HO-1） mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测Nrf2、HO-1蛋白表达,免疫组织化学法检测Nrf2、HO-1在视网膜的表达。结果 25只大鼠成功建立2型糖尿病大鼠模型,成功率为92.6%。糖尿病组大鼠血脂水平较正常组显著升高（F_总胆固醇=65.866,F_甘油三酯=25.441,F_{低密度脂蛋白}=38.889,P=0.000）。各组间大鼠血糖值比较,差异有统计学意义（χ²=25.812,P=0.000）,且糖尿病组大鼠血糖显著高于正常组和CPDT干预组。各组间大鼠血清MDA含量比较,差异有统计学意义（F=59.545,P=0.000）,糖尿病组大鼠血清MDA高于正常组（t=10.523,P=0.000）和CPDT干预组（t=7.766,P=0.000）。各组大鼠视网膜Nrf2、HO-1 mRNA比较,差异有统计学意义（F_Nrf2=19.503,P_Nrf2=0.000;F _HO-1=9.737,P _HO-1=0.001）。与糖尿病组相比,CPDT干预组大鼠视网膜Nrf2、HO-1 mRNA表达明显增高（t_Nrf2=3.399,P _Nrf2=0.002;t_HO-1=2.167,P _HO-1=0.039）。各组大鼠视网膜Nrf2、HO-1蛋白比较,差异有统计学意义（F_Nrf2=112.823,F _HO-1=119.361,P=0.000）。与糖尿病组相比,CPDT干预组大鼠视网膜Nrf2、HO-1蛋白表达明显增高（t_Nrf2=6.203,t _HO-1=6.388,P=0.000）。免疫组织化学检测结果显示,Nrf2、HO-1蛋白主要表达于视网膜神经节细胞层、内丛状层、内核层,各组大鼠视网膜Nrf2、HO-1蛋白表达量比较,差异有统计学意义（F _Nrf2=16.206,F _HO-1=46.790,P=0.000）。CPDT干预组大鼠视网膜Nrf2、HO-1蛋白的表达量高于糖尿病组（t_Nrf2=3.172,P _Nrf2=0.003;t_HO-1=6.321,P _HO-1=0.000）,糖尿病组高于正常组（t _Nrf2=2.679,P _Nrf2=0.011;t _HO-1=3.482,P_HO-1=0.001）。结论 CPDT可能通过激活Nrf2/ARE信号通路,诱导Nrf2和HO-1的表达,降低血糖、血清MDA含量,从而减轻2型糖尿病大鼠视网膜的氧化应激损伤。     

慢病毒介导聚嘧啶束结合蛋白相关剪接因子对氧诱导视网膜病变小鼠视网膜新生血管的抑制作用

目的观察慢病毒介导聚嘧啶束结合蛋白相关剪接因子(PSF)对氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠视网膜新生血管的抑制作用。方法5日龄C57BL/6J小鼠112只随机分为正常对照组、单纯OIR模型组、OIR模型+慢病毒空载体处理组(以下简称Vec组)及OIR模型+PSF慢病毒处理组(以下简称PSF组),分别为16、32、32、32只。小鼠7日龄时,正常对照组小鼠常规环境饲养;单纯OIR模型组、Vec组及PSF组小鼠建立OIR模型。小鼠12日龄时,Vec组、PSF组小鼠玻璃体腔分别注射滴度为1×1011 TU/ml的空载体病毒或PSF慢病毒1μl。正常对照组和单纯OIR模型组小鼠不再做任何处理。小鼠17日龄时,采用HE染色计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核;作视网膜铺片,测量各组小鼠视网膜无灌注区相对面积;采用实时定量PCR检测各组小鼠视网膜中NF-E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧合酶1(HO-1)的mRNA相对表达量;采用Western blot检测各组小鼠视网膜中Nrf2、HO-1及PSF的蛋白相对表达量。组间比较采用单因素方差分析。结果正常对照组、单纯OIR模型组、Vec组、PSF组小鼠突破内界膜的血管内皮细胞核数分别为0.00、14.36±5.50、15.67±4.96、8.13±2.09个;视网膜无灌注区面积分别为0.00%、(35.71±2.81)%、(36.57±4.53)%、(15.33±4.75)%。4组间小鼠突破内界膜的血管内皮细胞核数及视网膜无灌注区面积比较,差异均有统计学意义(F=24.87、165.70,P<0.05)。组间两两比较,单纯OIR模型组、Vec组较正常对照组突破内界膜的血管内皮细胞核数增多,视网膜无灌注区面积增大;PSF组较单纯OIR模型组、Vec组突破内界膜的血管内皮细胞核数减少,视网膜无灌注区面积减小,差异均有统计学意义(P<0.05)。实时定量PCR及Western blot检测结果显示,4组间小鼠视网膜Nrf2、PSF mRNA相对表达量(F=53.66、83.54)以及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相对表达量(F=58.38、52.69、24.79)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。组间两两比较,单纯OIR模型组、Vec组小鼠视网膜Nrf2、PSF mRNA相对表达量及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相对表达量较正常对照组明显降低,PSF组小鼠视网膜Nrf2、PSF mRNA相对表达量及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相对表达量较单纯OIR模型组、Vec组明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论慢病毒介导的PSF可通过上调Nrf2及HO-1的表达抑制OIR小鼠视网膜新生血管形成。     

葛根素对大鼠糖尿病视网膜病变的抑制作用

目的　探讨葛根素对大鼠糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）的抑制作用。方法　取SPF级健康Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组20只、模型组20只和葛根素组20只,模型组和葛根素组大鼠均接受链脲佐菌素左下腹腔注射建立糖尿病模型,正常对照组大鼠注射同样体积的枸橼酸盐溶液。造模后1周,葛根素组大鼠每天给予100 mg·kg^-1葛根素单侧腹腔注射治疗,连续治疗6周。正常对照组和模型组大鼠每天给予等量生理盐水腹腔注射。观察并比较各组大鼠体质量、血糖及血-视网膜屏障的损伤情况。应用TUNEL法检测大鼠的视网膜组织神经节细胞凋亡情况;采用ELISA检测各组大鼠白细胞介素1（interleukin-1,IL-1)β、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α)的水平;采用硫代巴比妥酸法检测丙二醛 （malonaldehyde,MDA）水平;采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）水平;Western blot法检测磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶（phospho-extracellular signal-regulated kinase,p-ERK）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、E2核因子相关因子2（nuclear factor-erythroid 2-related factor-2,Nrf2）、细胞外调节p-ERK的总蛋白（t-ERK）及P53的表达情况。结果　模型组大鼠的体质量低于正常对照组,血糖高于正常对照组（P＜0.05）;而葛根素组大鼠体质量高于模型组,血糖低于模型组（P＜0.05）。模型组大鼠视网膜组织伊凡斯兰渗透量为（10.63±3.21）μg·g^-1,高于正常对照组［（2.87±1.09）μg·g^-1］,差异有统计学意义（P＜0.05）;而葛根素组伊凡斯兰渗透量为（5.56±2.71）μg·g^-1,低于模型组,但高于正常对照组,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。模型组大鼠神经节细胞凋亡指数高于正常对照组,而葛根素组低于模型组,但高于正常对照组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。模型组大鼠视网膜组织中IL-1β、TNF-α及MDA水平高于正常对照组,SOD水平低于正常对照组,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。而葛根素组大鼠视网膜组织中IL-1β、TNF-α及MDA水平低于模型组,SOD水平高于模型组,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。模型组大鼠Nrf2、p-ERK蛋白的表达水平高于正常对照组,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。而葛根素组大鼠Nrf2、p-ERK的表达水平低于模型组,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。各组大鼠t-ERK 的蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。模型组大鼠的Bcl-2表达水平低于正常对照组,P53高于正常对照组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;葛根素组大鼠Bcl-2表达水平高于模型组,P53低于模型组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　葛根素可有效减缓2型糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的凋亡,改善2型DR的进程,其机制可能与抑制Nrf2/ERK通路的激活,减轻视网膜组织的炎性反应及氧化应激损伤有关。     

驻景丸加减方对形觉剥夺性近视小鼠视网膜厚度及细胞凋亡的影响

目的：探讨驻景丸加减方对形觉剥夺性近视小鼠视网膜厚度及细胞凋亡的影响。

方法：将72只3周龄C57BL/6J小鼠随机分为对照组1、模型组1、干预组1、对照组2、模型组2及干预组2,每组12只小鼠,前三组实验进行3wk,后三组实验进行6wk,除对照组1和对照组2外,所有小鼠均用半透明眼罩遮盖右眼诱导形觉剥夺性近视动物模型,干预组1在造模同时而干预组2则在实验3wk后灌胃驻景丸加减方混悬液0.546g/(kg·d)(0.1mL/d),其余组小鼠灌胃等量生理盐水0.1mL/d,实验前后均测眼轴,实验结束时取小鼠视网膜行HE染色用于观察视网膜各层厚度改变,免疫组织化学(IHC)和western blotting(WB)用于检测Bcl-2和Caspase3蛋白的表达。

结果：在实验结束时模型组1的眼轴比对照组1显著增加(P<0.01),干预组1的眼轴显著低于模型组1(P<0.01),模型组2的眼轴比对照组2显著增加(P<0.01),干预组2的眼轴明显低于模型组2(P<0.01); 模型组1的NFL和ONL的厚度比对照组1显著变薄(P<0.01),模型组1的INL厚度比对照组1显著变薄(P<0.05),干预组1的NFL、INL和ONL厚度较模型组1显著增加(P<0.05); 模型组2的NFL、INL和ONL的厚度比对照组1显著变薄(P<0.01); IHC检测显示Bcl-2蛋白平均光密度模型组1显著低于对照组1(P<0.05),干预组1显著高于模型组1(P<0.01),模型组2显著低于对照组2(P<0.01),干预组2显著高于模型组2(P<0.01); Caspase3蛋白平均光密度模型组1显著高于对照组1(P<0.01),干预组1显著低于模型组1(P<0.01),模型组2显著高于对照组2(P<0.05),干预组2显著低于模型组2(P<0.01); WB检测证明,Bcl-2的蛋白相对表达水平模型组1显著低于对照组1(P<0.01),干预组1显著高于模型组1(P<0.01),模型组2显著低于对照组2(P<0.01),干预组2显著高于模型组2(P<0.01); Caspase3的蛋白相对表达水平模型组1显著高于对照组1(P<0.01),干预组1显著低于模型组1(P<0.01),干预组2显著低于模型组2(P<0.05)。

结论：驻景丸加减方可通过调控凋亡相关蛋白Bcl-2和Caspase3的表达,减轻近视形成过程中及已形成近视小鼠视网膜细胞凋亡,从而起到干预形觉剥夺近视小鼠视网膜厚度变薄的作用。     

槲皮素对转化生长因子β1介导的视网膜色素上皮细胞上皮-间质转化过程的影响

目的 探讨槲皮素对转化生长因子β1(TGF-β1)介导的视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖、迁移、I型胶原蛋白含量、上皮-间质转化相关标志物表达以及Smad信号通路的影响.方法 取人RPE细胞系(ARPE-19细胞)进行培养,依据干预药物浓度筛选结果设置4个组:对照组、10.0 mg·L-1 TGF-β1组、10.0 m...     

Effects of aminoguanidine on retinal apoptosis in mice with oxygen-induced retinopathy

AIM: To explore the protective effects of aminoguanidine (AG) on retinal apoptosis in mice with oxygen-induced retinopathy (OIR).METHODS:A total of 80 C57BL/6J mice, aged 7 days, were randomly divided into four groups:normal, high oxygen, high oxygen saline and high oxygen treated with AG. In the normal group, mice were housed in normoxic conditions from postnatal day P7 to P17. Mice in the other 3 groups were placed under hyperoxic conditions (75±2%O2) in an oxygen-regulated chamber for 5 days and subsequently placed in normoxic conditions for 5 days. Mice in the AG group were treated once daily, from P12 to P17, with AG hemisulfate (100mg/kg body weight, intraperitoneally) dissolved in physiological saline. An equivalent amount of 0.9% physiological saline was administered, as above, to mice in the high oxygen saline group. Ten mice were randomly selected from each group on P14 and on P17, euthanized and the retinas examined. Apoptotic cells in the retina were detected using the terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling (TUNEL) method. The expression of nitric oxide synthase (iNOS) in the retina was detected by immunohistochemistry and changes in rod cells were observed using electron microscopy.RESULTS:TUNEL-positive cells and iNOS immunoreactive neurons were present in the inner nuclear and ganglion cell retinal layers of mice in the high oxygen group. The number of TUNEL-positive cells was significantly greater in the high oxygen group compared with the normal group (t=-20.81, P14d <0.05; t=-15.05, P17d<0.05). However, the number of TUNEL-positive cells in the AG treatment group was significantly lower (t=-13.21, P14d<0.05; t=-6.61,P17d <0.05) compared with the high oxygen group. The expression of iNOS was significantly higher in the high oxygen group compared with the normal group (t=-21.95, P14d<0.05; t=-17.30, P17d<0.05). However, the expression of iNOS in the AG treatment group was significantly lower (t=-12.17,P14d<0.05; t=-10.30,P17d<0.05) compared with the high oxygen group. The outer segments of the rods were disorganized and short in the high oxygen group. Rod morphology appeared to be slightly improved in the AG group.CONCLUSION:AG may protect retinal neurons in OIR by inhibiting apoptosis. The mechanism may be related to iNOS.     

槲皮素对H2O2诱导人RPE细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：探讨槲皮素对H2 O2诱导的人视网膜色素上皮细胞( retina pigment epithelium,RPE)氧化应激损伤的保护作用及可能机制。
　　方法：RPE细胞传代培养,分为阴性对照组：以正常培养液培养;氧化损伤组：100μmol/L的H2 O2作用12h;槲皮素低浓度组：100μmol/L 槲皮素孵育24h 后,加入 H2 O2作用12 h;槲皮素高浓度组：500μmol/L槲皮素孵育24 h后,加入H2 O2作用12h。 MTT比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率, Hochest33258染色观察凋亡细胞形态,比色法检测细胞中过氧化氢酶( catalase,CAT)、超氧化物歧化酶( superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶( glutathione peroxidase,GSH-Px)活性。
　　结果：槲皮素能明显抑制H2 O2诱导的RPE细胞活力的下降,用不同浓度槲皮素处理后,RPE细胞活性分别提高到79.67%±4.98%和83.00%±3.60%,与氧化损伤组(48.93%±3.39%)比较,差异具有统计学意义(P<0.05);经不同浓度槲皮素处理后, RPE细胞凋亡率分别下降至23.23%±3.29%和16.23%±1.94%,与氧化损伤组(38.03%±4.76%)比较,差异具有统计学意义(P<0.05);此外,槲皮素还能增加细胞中CAT、SOD、GSH-Px活性,与氧化损伤组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。
　　结论：槲皮素通过改善细胞中抗氧化酶活性有效抑制了H2 O2对RPE细胞的损伤,从而为其用于治疗RPE细胞损伤提供可靠的实验±据。