AG490及5-Aza对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及分子机制

【摘要】 目的 探讨JAK2/STAT3通路抑制剂AG490及DNA甲基化抑制剂5-Aza对血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖的影响及意义。方法 采用CCK8检测不同浓度AG490及5-Aza对PDGF-BB诱导PASMCs增殖的影响;将细胞分为对照组（正常的PASMCs）、0μM 组（予30 μg/L PDGF-BB 孵育48h)和25μM/1μM组、50μM/3μM组、100μM/5μM组（25μM/1μM组、50μM/3μM组、100μM/5μM组分别给予25/1、50/3、100/5μmol/L AG490/5-Aza共同孵育细胞）。采用RT-qPCR检测IL-6、GATA6、JAK2及STAT3 mRNA表达水平;Western blot检测GATA6、p-JAK2及p-STAT3蛋白的表达。结果 与对照组比较,0 μM AG490组IL-6、JAK2、STAT3mRNA表达均增加,GATA6mRNA及蛋白水平降低,p-JAK2/JAK2和p-STAT3/STAT3表达升高（P＜0.05）。与0μM AG490组比较,25、50、100μM AG490组细胞增殖减少,IL-6、JAK2和STAT3mRNA的表达均降低,GATA6mRNA及蛋白表达升高,p-JAK2/JAK2水平降低（均P＜0.05）,50和100μM组中p-STAT3/STAT3水平降低（均P＜0.05）;与0μM 5-Aza组相比,1μM、3μM、5μM 5-Aza组细胞增殖减少,IL-6mRNA表达降低,GATA6蛋白、p STAT3/STAT3表达增高,p-JAK2/JAK2水平降低（均P＜0.05）,JAK2、STAT3mRNA水平无显著差异（P＞0.05）;3μM和5μM 5-Aza组中GATA6mRNA表达增高(P＜0.05)。结论 AG490及5-Aza对 PDGF-BB诱导的PASMCs增殖具有抑制作用,该作用可能与阻断JAK2/STAT3信号通路,抑制IL-6调节GATA6启动子甲基化有关。     

JAK2/STAT3通路在肝癌细胞侵袭及血管生成拟态中的作用

目的 探讨JAK2/STAT3通路在肝癌细胞QGY-7701侵袭及血管生成拟态中的作用.方法 JAK2抑制剂AG490(5、10 μmol/L)处理肝癌细胞48 h,Transwell小室、体外成管实验分别检测各组细胞的体外侵袭能力和成管能力,RT-PCR检测Twist1及MMP-2 mRNA表达差异,Western blot检测STAT3、p-STAT3、Twistl和MMP-2蛋白表达差异.结果 与对照组相比,Transwell小室穿膜细胞数减少,形成管道结构数目减少,Twist1及MMP-2 mRNA表达减少,Twist1、MMP-2和p-STAT3蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P＜0.05),STAT3蛋白表达无差异(P＞0.05).结论 AG490能有效抑制肝癌细胞侵袭及成管的能力,JAK2/STAT3通路在肝癌细胞侵袭及血管生成拟态中起促进作用.     

黄芩苷通过抑制JAK2/STAT3信号通路减轻脂多糖诱导的心肌细胞凋亡

目的 探讨黄芩苷对脂多糖（LPS）诱导的大鼠心肌细胞凋亡及Janus激酶2（JAK2）/信号转导和转录启动因子3（STAT3）信号通路的调控作用。方法 体外培养大鼠心肌H9C2细胞,分为对照组（不做干预）、LPS组（1 μg/mL LPS）和LPS+5、10、20、40 μmol/L黄芩苷组（1 μg/mL LPS+5、10、20、40 μmol/L黄芩苷）;酶联免疫吸附试验（ELISA）和活细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法测定炎症因子［白细胞介素（IL）-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）］表达水平和细胞活力,筛选出最适浓度黄芩苷后,再次分组：对照组、LPS组、LPS+10 μmol/L黄芩苷组、LPS+AG490组、LPS+10 μmol/L黄芩苷+AG490组和LPS+10 μmol/L黄芩苷+colivelin组。用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷、Hoechst33258染色法、实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法分别检测细胞增殖、凋亡、mRNA［细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）］表达及相关蛋白表达水平。结果 与对照组相比,LPS组细胞炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达水平显著升高,24和48 h细胞活力显著降低（P＜0.05）;与LPS组相比,LPS+10、20和40μmol/L黄芩苷组炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α显著降低（P＜0.05）,干预24 h LPS+10 μmol/L黄芩苷组细胞活力显著升高（P＜0.05）,选择干预24 h的LPS+10 μmol/L黄芩苷组进一步实验。与对照组相比,LPS组细胞增殖率、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率、Caspase-3 mRNA及蛋白表达、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达显著升高（P＜0.05）;与LPS组相比,LPS+10 μmol/L黄芩苷组和LPS+AG490组显著逆转了上述指标的变化（P＜0.05）;与LPS+10 μmol/L黄芩苷组相比,加入JAK2/STAT3通路抑制剂后,上述指标变化更为显著（P＜0.05）,LPS+10 μmol/L黄芩苷+colivelin组则与LPS+10 μmol/L黄芩苷+AG490组结果相反（P＜0.05）。结论 黄芩苷可抑制LPS诱导的大鼠心肌H9C2细胞的凋亡及炎症,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3通路的信号转导相关     

miR-155-5p mimic靶向HIF-1α对非小细胞肺癌A549细胞生长和运动能力的调节作用和机制

【摘要】 目的 探讨miR-155-5p mimic靶向缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）对非小细胞肺癌A549细胞生长和运动能力的调节作用和机制。 方法 取对数期生长的A549细胞,将未经转染的细胞设为Control组,miR-155 mimic及HIF-1α分别转染至A549细胞,设为miR 155 mimic组和HIF-1α组;再将两者共同转染于A549细胞,设为mimic+HIF-1α组。采用荧光素酶报告基因检测miR 375与SLC7A11的靶向关系,利用RT PCR检测各组细胞miR 155-5p及HIF-1α mRNA表达水平,Edu染色检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室实验检测细胞侵袭,Western blot检测细胞中各蛋白表达。结果 HIF-1α是miR 155-5p-mimic的靶向基因。与Control组相比,miR-155-mimic组HIF-1α-mRNA水平、HIF-1α和Ki67蛋白表达量及增殖细胞数、侵袭细胞数及划痕愈合率均降低（P＜0.05）,HIF-1α组HIF-1α mRNA水平、HIF-1α和Ki67蛋白表达量及增殖细胞数、侵袭细胞数及划痕愈合率均升高（P＜0.05）。与HIF-1α组相比,mimic+HIF-1α组HIF-1α mRNA水平、HIF-1α和Ki67蛋白表达量及增殖细胞数、侵袭细胞数及划痕愈合率均降低（P＜0.05）。与Control组相比,miR-155-mimic组N cadherin、VEGF、VEGFR2、P38蛋白表达量降低,E cadherin蛋白表达量升高（P＜0.05）,HIF-1α组N cadherin、VEGF、VEGFR2、P38蛋白表达量升高,E cadherin蛋白表达量降低（P＜0.05）。与HIF-1α组相比,mimic+HIF-1α组N cadherin、VEGF、VEGFR2、P38蛋白表达量降低,E cadherin蛋白表达量升高（P＜0.05）。结论 miR-155-5p可通过靶向抑制HIF-1α表达抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭及迁移,其作用机制可能与抑制上皮间质转化及VEGF/P38通路相关。     

低分子量肝素抑制JAK2/STAT3信号通路缓解高糖诱导的足细胞损伤

目的 探究低分子量肝素（LMH）对高糖环境诱导的人肾小球足细胞（HGPC）功能的调节作用及Janus激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活因子3 (STAT3)信号通路变化的机制。方法 体外培养HGPC,以30 mmol/L D-葡萄糖诱导细胞建立体外足细胞损伤模型,并分别以1、5、10、15、20μmol/L LMH进行干预,细胞计数试剂盒-8筛选出最佳的药物浓度进行后续研究。将细胞分为对照组、HG组、20μmol/L LMH组、JAK2/STAT3通路抑制剂（AG490）组、20μmol/L LMH+AG490组、20μmol/L LMH+JAK2/STAT3通路激活剂（C-A1）组。5-乙炔基-2’-脱氧尿苷（EDU）法检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹法检测HGPC细胞中JAK2、磷酸化（p）-JAK2、STAT3、p-STAT3、波形蛋白（Vimentin）、纤连蛋白（FN）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的蛋白表达水平。结果 20μmol/L LMH为干预细胞活力的最佳剂量;与对照组比较...     

2型糖尿病大血管病变患者血清诱导的人脐静脉内皮细胞中JAK2/STAT3信号通路的表达

目的 探讨Janus蛋白酪氨酸激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路在2型糖尿病大血管病变发病机制中的作用.方法 取健康志愿者、单纯2型糖尿病患者和2型糖尿病大血管病变患者的血清孵育人脐静脉内皮细胞(HUVEC)24 h,通过给予JAK2特异性抑制剂AG490阻断JAK2/STAT3信号通路,并将细胞按不同处理方式分为对照组(NC组)、单纯糖尿病组(DM组)、糖尿病大血管病变组(DV组)、单纯糖尿病+AG490组(DM+AG490组)及糖尿病大血管病变+AG490组(DV+AG490组),各30例.采用实时定量PCR技术检测各组细胞JAK2、STA T3、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体(FLT1)mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测JAK2、STAT3和磷酸化STAT3 (p-STAT3)蛋白表达量.结果 与NC组比较,DM组和DV组HUVEC细胞内JAK2、STA T3mRNA和JAK2、p-STAT3的蛋白表达水平均上调(P＜0.05),且DV组JAK2、STA T3 mRNA和JAK2、p-STAT3蛋白表达水平均高于DM组(P＜0.05).DM+AG490组和DV+AG490组的JAK2、STA T3 rnRNA和JAK2、p-STAT3蛋白表达水平分别低于DM组、DV组(P＜0.05).与NC组和DM组比较,DV组VEF和FLT1 mRNA的表达水平上调(P＜0.05);而与DV组比较,DV+AG490组VEGF和FLT1 mRNA的表达水平均下调(P＜0.05).结论 JAK2/STAT3信号通路可能参与2型糖尿病大血管病变的发病过程.     

Janus激酶抑制剂对高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化的作用

目的 评估Janus激酶抑制剂AG490对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化及转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响。方法 体外培养人肾近曲小管上皮细胞株（HKC）,分别给予高糖和高糖＋AG490干预,Westernblot检测平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-钙粘素（E—Cadherin）及信号蛋白STAT1、STAT3、磷酸化STAT1（p-STAT1）和p-STAT3的表达,酶联免疫吸附法测定细胞上清液中TGF-β1和Ⅰ型胶原的分泌,逆转录聚合酶链反应检测TGF—β1mRNA表达。结果 与低糖对照组比较,高糖培养的HKC中α-SMA、P—STAT1和P—STAT3表达明显上调,E—Cadherin表达明显下调,TGF—β1mRNA表达增加,细胞培养上清液中TGF—β1和Ⅰ型胶原分泌增加。AG490明显下调P—STAT1和P—STAT3表达的同时,明显抑制高糖刺激HKC中α-SMA表达的升高,减轻E—Cadherin表达下降程度,降低TGF—β1mRNA表达及TGF—β1和Ⅰ型胶原的分泌。结论 JAK参与了高糖诱导的HKC转分化,并刺激TGF—β1和细胞外基质分泌,JAK抑制剂AG490能有效拮抗其作用。     

大蒜素对高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 探讨大蒜素对高糖诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）转分化的影响。方法 复苏并传代培养HK-2细胞,分为正常糖对照组（NG,5.5mmol/L）、高糖组（HG,25mmol/L）、高糖+不同剂量的大蒜素干预组（HG+2.5、5、10、20μg/ml Allicn）、高糖+JAK2抑制剂AG490组（HG+10μmol/L AG490）。倒置显微镜下观察高糖对细胞形态的影响,细胞免疫荧光检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E钙黏蛋白（E-cadherin）、Ⅰ型胶原蛋白（collagen Ⅰ）的表达变化,荧光定量PCR检测 TGF-β1 mRNA的表达变化,Western blot法检测TGF-β1、p-STAT3、STAT3蛋白的表达变化。结果 与正常对照组相比,高糖刺激后的HK-2细胞的形态发生明显的长梭形改变,上皮细胞标志物E-cadherin表达明显减少,而间充质细胞标志物ɑ-SMA及collagen Ⅰ的表达明显升高（P<0.01）;TGF-β1及p-STAT3的表达明显增高（P<0.05）;而加入大蒜素或JAK2抑制剂AG490后,均能不同程度抑制高糖诱导的HK-2细胞转分化,而且大蒜素可明显抑制TGF-β1及p-STAT3的表达,以20μg/ml尤为显著（P<0.05）。结论 大蒜素可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路活化,从而抑制高糖诱导的HK-2细胞转分化。     

AG490对人胃癌裸鼠移植瘤中瘦素、JAK2/STAT3信号通路的影响

目的探讨在AG490干预下,瘦素(leptin)和JAK2/STAT3信号通路对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响,以及与其基因表达水平之间的关系。方法建立人胃癌SGC-7901细胞BALB/c-nu雄性裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机平均分为4组,A组为空白对照组,B组腹腔注射AG490,C组腹腔注射AG490和碧生源牌减肥茶灌胃,D组腹腔注射5-FU。记录各组裸鼠肿瘤重量,计算肿瘤生长抑制率,RT-PCR检测肿瘤中leptin、JAK2、STAT3 mRNA表达水平。结果AG490、5-FU可抑制人胃癌移植瘤的生长,同时均可降低leptin表达水平;AG490可同时降低JAK2、STAT3mRNA的表达水平,而5-FU不能降低JAK2、STAT3mRNA的表达;碧生源牌减肥茶对瘤重和leptin、JAK2、STAT3mRNA表达水平无影响。结论 AG490可能通过阻断JAK2/STAT3信号通路降低leptin的表达,进一步抑制胃癌细胞增殖。leptin的调控除了JAK2/STAT3信号通路外可能还存在其他途径。     

基于JAK2/STAT3通路探讨阿奇霉素对脂多糖诱导肺泡上皮细胞的保护作用

目的 探究阿奇霉素(AZI)对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞增殖生长、迁移的作用及相关机制。方法 体外培养人肺泡上皮细胞A549,分为对照组(不做干预)、LPS组(10μg/ml LPS处理24 h)、低/中/高剂量实验组(10μg/ml LPS+2、4、8μg/ml AZI)、AZI组(10μg/ml LPS+4μg/ml AZI)、抑制剂组(10μg/ml LPS+50μmol/L JAK2/STAT3通路抑制剂AG490)、AZI+抑制剂组(10μg/ml LPS+4μg/ml AZI+50μmol/L AG490)、AZI+激活剂组(10μg/ml LPS+4μg/ml AZI+0.5μmol/L JAK2/STAT3通路激活剂Colivelin)。干预24 h后,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、倒置显微镜、划痕法、蛋白免疫印迹(WB)法检测炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6表达水平、细胞生长、迁移率、上皮间质转化(EMT)及JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达水平。结果 LPS组细胞活力较对照组下降(P<0.05)。中/高剂量实验组细胞活力较LPS组上升(P<0.05)。因此选择有显著差异的较低浓度(4μg/ml AZI)作为AZI组进行后续实验。与对照组相比,LPS组细胞生长受抑制,TNF-α、IL-1β、IL-6、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达降低(P<0.05),细胞迁移率、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维粘连蛋白(FN)、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达升高(P<0.05)。与LPS组相比,AZI组和抑制剂组显著扭转了上述指标的变化(P<0.05)。与AZI组相比,AZI+抑制剂组细胞生长状态较好,E-cadherin蛋白表达进一步升高(P<0.05),细胞迁移率、TNF-α、IL-1β、IL-6、N-cadherin、Vimentin、FN、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达进一步降低(P<0.05),AZI+激活剂组则显著逆转了上述指标的变化(P<0.05)。结论 阿奇霉素能够通过抑制JAK2/STAT3信号通路减轻对A549细胞的炎症损伤,促进细胞生长,并抑制其迁移与上皮间质转化(EMT)进程。     

外源性IL-6 通过STAT3 通路促进卵巢癌细胞对顺铂 耐药

目的:探讨外源性白细胞介素-6（IL-6）诱导卵巢癌（OvCa）对顺铂（Cisplatin）耐药的作用。方法:6孔板接种A2780 细胞, 分为对照（Control）组、AG490 组、重组人IL-6（rhIL-6）组和rhIL-6+AG490 组,应用Western 印迹检测rhIL-6 对A2780（顺铂敏 感OvCa 细胞株）的磷酸化信号转导与转录激活因子3（p-STAT3）蛋白表达的影响。96 孔板接种A2780 细胞,分为Control 组、 AG490 组、顺铂（Cisplatin）组、AG490+Cisplatin 组、rhIL-6 组、rhIL-6+AG490 组、rhIL-6+Cisplatin 组和rhIL-6+AG490+Cisplatin 组,CCK8 实验检测rhIL-6 对A2780 细胞增殖的影响。12 孔板接种A2780 细胞, 分为Control 组、AG490 组、Cisplatin 组、 AG490+Cisplatin 组、rhIL-6 组、rhIL-6+AG490 组、rhIL-6+Cisplatin 组和rhIL-6+AG490+Cisplatin 组, 细胞凋亡实验检测rhIL-6 对A2780细胞顺铂耐药的影响。以36 只雌性裸鼠为研究对象,随机分为Control 组、rhIL-6 组、Cisplatin 组、AG490 组、rhIL-6+ Cisplatin 组和rhIL-6+AG490+Cisplatin组, 每组6只。腹腔注射A2780细胞, 给药4 周后颈椎脱臼处死小鼠, 检测rhIL-6 对 OvCa 腹腔种植瘤耐药的影响。结果:Western 印迹结果显示,与Control 组相比,rhIL-6 组p-STAT3 蛋白表达显著增加（t=6.55, P<0.01）;CCK8 实验结果显示,与Control 组相比,rhIL-6 组细胞增殖增加（t=4.148,P<0.05）;细胞凋亡实验发现,与Cisplatin 组 相比,rhIL-6+Cisplatin 组细胞凋亡显著降低（t=20.03,P<0.001）,与rhIL-6+Cisplatin 组相比,rhIL-6+Cisplatin+AG490 组细胞凋 亡显著增加（t=22.16,P<0.001）;小鼠体内实验结果发现,与Cisplatin 组相比,rhIL-6+Cisplatin 组瘤结节数量和重量显著增加（t= 2.783,P<0.05）,与rhIL-6+Cisplatin组相比,rhIL-6+Cisplatin+AG490 组瘤结节数量和重量显著降低（t=3.306,P<0.05）。结论:外 源性IL-6通过STAT3通路诱导OvCa 对顺铂耐药。     

JAK2/STAT3通路在脑缺血再灌注损伤炎性反应中的作用

【摘要】 目的 研究JAK2/STAT3通路在脑缺血再灌注损伤炎性反应中的作用。方法 采用线栓法建立SD大鼠脑缺血再灌注模型,造模成功后将其随机分为模型组、AG490组,每组各24只,根据再灌注时间分为再灌注后6 h、12 h、 24 h、72 h四个亚组,每个亚组动物6只,同时随机挑选24只正常SD大鼠经假手术处理为假手术组。分别于再灌注后6 h、12 h、24 h、72 h四个时间点进行神经功能缺损评分;在相应时间点处死后取脑组织,采用免疫组化测定脑组织中JAK2、STAT3、IL 1β、TNF α蛋白水平。结果〓假手术组各个时间点比较,神经功能缺损评分及JAK2、STAT3、IL 1β、TNF α蛋白表达均无明显差异;模型组神经功能缺损评分及上述蛋白表达在24小时内呈上升趋势,并于24小时达最高峰,72小时降低;AG490组神经功能缺损评分及上述蛋白表达则一直呈下降趋势,并且神经功能缺损评分再灌注后24 h、72 h均低于模型组（P＜005）。AG490组4个时间点JAK2、STAT3、IL 1β、TNF α的蛋白表达均低于模型组（P＜001）,高于假手术组（P＜001）。结论 脑缺血再灌注后激活JAK2/STAT3通路能通过增加IL 1β及TNF α的表达促进炎性反应,加重脑缺血再灌注损伤;AG490能通过降低脑缺血再灌注损伤后JAK2、STAT3、IL 1β、TNF α蛋白水平,保护神经功能。     

JAK2/STAT3通路在表皮生长因子诱导结肠癌细胞侵袭迁移中的作用

目的探讨JAK2/STAT3通路在表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导结肠癌细胞侵袭迁移中的作用。方法以人结肠癌细胞株LoVo为研究对象,分为对照组、表皮生长因子处理组(EGF组)、表皮生长因子与JAK2激酶抑制剂AG490共处理组(EGF+AG490组)。采用免疫荧光和Western blot检测各组LoVo细胞E钙粘素蛋白、磷酸化STAT3表达水平;Transwell法检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果细胞划痕实验对照组细胞划痕闭合约38%,EGF+AG490组细胞划痕闭合约40%,而EGF组闭合约80%。EGF组显著高于另2组(P<0.05);体外侵袭实验显示对照组透膜细胞数为(21.24±2.65)/视野,EGF+AG490组为(23.19±3.50)/视野,EGF组为(55.08±2.14)/视野。EGF组显著高于另2组(P<0.05);与EGF+AG490组结肠癌LoVo细胞相比,EGF组细胞P-STAT3表达增加72.4%,E-cadherin蛋白表达降低68.5%(P<0.05);免疫荧光显示EGF组细胞E-cadherin向细胞质内移位...     

AGEs通过JAK2/STAT3信号通路诱导结肠癌SW480细胞增殖、侵袭及上皮间质转化

目的 观察糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及上皮间质转化的影响,并探讨其相关机制.方法 将结肠癌SW480细胞分为对照组、AGEs组(200 μg/mL AGEs)、AGEs(200 μg/mL)+AG490(50 μmol/L)组,CCK-8检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期、凋亡,Transwell实验检测细胞体外侵袭能力,划痕实验检测细胞体外迁移能力.不同浓度(0、50、100、200 μg/mL) AGEs和200 μg/mL AGEs、50 μmol/L AG490单独处理及二者联合处理SW480细胞后,Western blot检测上皮间质转化相关分子标志物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin及JAK2/STAT3信号通路相关分子的变化.结果 与对照组比较,AGEs能明显促进结肠癌SW480细胞的增殖,减少G1/S期阻滞,抑制凋亡,增强体外的侵袭、迁移能力(P＜0.05).与AGEs组比较,AGEs+ AG490组结肠癌SW480细胞增殖减少,G1/S期阻滞增加,凋亡增加,侵袭、迁移能力降低,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测结果显示,AGEs处理结肠癌SW480细胞后E-cadherin表达降低,N-cadherin、Vimentin、p-STAT3、p-JAK2表达升高,而AG490可逆转AGEs对结肠癌SW480细胞的作用.结论 AGEs能够通过JAK2/STAT3信号通路促进结肠癌SW480细胞的增殖,抑制凋亡,增强侵袭、迁移能力,促进上皮间质转化.     

足细胞损伤中JAK2/STAT3通路与TRPC6相互作用的机制探讨

目的 研究在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的足细胞损伤中,JAK2/STAT3通路与瞬时受体电位非选择性阳离子通道蛋白6(TRPC6)相互作用的机制.方法 将小鼠足细胞分为对照、AngⅡ损伤、AngⅡ+氯沙坦、AngⅡ+AG490、AngⅡ+SKF96365组等,通过Western blot、qRT-PCR检测各分组的TRPC6、JAK2/STAT3通道蛋白及mRNA表达水平,通过ELISA检测各分组的肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6的分泌水平.结果 与对照组比较,AngⅡ损伤组的JAK2/STAT3、TRPC6、TNF-α和IL-6表达水平增高(P<0.05);与AngⅡ损伤组比较,AngⅡ+氯沙坦组的JAK2/STAT3、TRPC6、TNF-α和IL-6表达水平降低(P<0.05);AngⅡ+AG490组的JAK2/STAT3、TRPC6、TNF-α和IL-6表达水平降低(P<0.05);AngⅡ+SKF96365组的JAK2/STAT3、TRPC6、TNF-α和IL-6表达水平降低(P<0.05).结论 AngⅡ能够介导TRPC6通道蛋白激活JAK2/STAT3信号通路,抑制JAK2/STAT3信号通路也能下调TRPC6通道蛋白的表达,两者之间存在正反馈机制.     

TGF-β1通过JAK2/STAT3信号对胃癌细胞侵袭和转移的影响

目的 探讨TGF-β1通过JAK2/STAT3信号对胃癌细胞侵袭和转移的影响。 方法 将10%FBS/F12 配制成的0 μg/L（0 μg/L组）、1.0 μg/L（1.0 μg/L组）、10 μg/L（10 μg/L组）、50 μg/L（50 μg/L组）四种浓度的 TGF-β1加入BGC-823细胞中,根据HE染色观察细胞的形态,RT-PCR、Westernblot法检测JAK2 、STAT3表达与蛋白的变化。流式细胞术、细胞克隆实验检测细胞凋亡情况,细胞克隆情况。 结果 在0 μg /L组中,细胞核呈椭圆形,形状规则,且细胞排列松散。随着TGF-β1浓度增加,细胞开始逐渐增多,细胞多为圆形,多个细胞聚集,出现巨核细胞或多核细胞,50 μg/L组与其他组相比细胞数量最多（P＜0.05）。经0、1.0、10、50 μg/L的TGF-β1处理后细胞中JAK2与STAT3的表达水平,发现0 μg/L组JAK2、STAT3表达最低（P＜0.05）,随着TGF-β1的浓度增加,JAK2、STAT3表达也增加（P＜0.05）。0 μg/L组JAK2与STAT3蛋白表达最低,50 μg/L组JAK2与STAT3蛋白表达最高,随着TGF-β1浓度增加JAK2与STAT3蛋白也明显上升,蛋白表达与浓度成正比（P＜0.05）。不同浓度TGF-β1处理后,0 μg/L组细胞凋亡最多,50 μg/L组细胞凋亡最少,随浓度增加依次减少（P＜0.05）。细胞克隆实验检测发现在0 μg/L组BGC-823的单克隆群数最少,而50 μg/L组细胞单克隆群数显著增加,随着TGF-β1浓度增加BGC-823单克隆形成率有上升趋势（P＜0.05）。结论 TGF-β1通过活化JAK2/STAT3信号传输路径,增强胃癌细胞的浸润和转移。     

Janus激酶抑制剂AG490对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移的影响

目的 研究Janus激酶抑制剂AG490对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移能力的影响,探讨JAK2/STAT3信号通路在肝癌侵袭调控中的作用。方法实验分为对照组、实验组（5、10 μmol/L AG490处理的SMMC-7721细胞）。采用Transwell小室检测肝癌细胞的侵袭能力,RT-PCR检测MMP-2 m...     

鱼藤酮通过调控JAK/STAT3通路对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响

目的：探究鱼藤酮通过调控酪氨酸激酶/信号转导和转录活化因子3(JAK/STAT3)通路对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响。方法：将口腔鳞状细胞癌SCC25细胞分为对照组、低浓度鱼藤酮组(5μmol/L)、中浓度鱼藤酮组(10μmol/L)、高浓度鱼藤酮组(20μmol/L)、JAK2抑制剂AG490组(40μmol/L AG490)。MTT法检测各组SCC25细胞活力;克隆形成实验检测SCC25细胞增殖情况;流式细胞术检测SCC25细胞凋亡情况;Western blotting检测SCC25细胞中增殖、凋亡及通路相关蛋白表达情况。结果：与对照组比较,低浓度鱼藤酮组、中浓度鱼藤酮组、高浓度鱼藤酮组SCC25细胞存活率、克隆细胞数、c-Myc、CyclinD1、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达水平呈剂量依赖性显著降低,而凋亡率、caspase-3、Bax表达水平呈剂量依赖性显著增加(P<0.05～P<0.01),AG490组SCC25细胞存活率、克隆细胞数、c-Myc、CyclinD1、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达水平显著降低,...     

AG490对缺血性脑损伤后炎症反应的影响

目的：研究AG490对大鼠缺血性脑损伤（ ischemic brain injury ）后TNF-α,IL-6表达的影响。方法健康雄性SD大鼠120只,随机分为假手术组、IBI-isotonic saline 组和IBI-AG490干预组,各组依次分为6h,12h,24h,72h 4个亚组;采用线栓法制作MCAO动物模型,AG490干预组于伤后1h腹腔注射AG490（5mg/kg）,假手术组、IBI-isotonic saline组腹腔注射等渗盐水（5ml/kg）;Real time PCR法测定TNF-αmRNA,IL-6mRNA,ELISA法测定TNF-α,IL-6含量。结果 TNF-αmRNA,IL-6 mRNA在缺血发生后表达程度均增高,给予AG490干预可降低其表达水平,与假手术组相比差异具有统计学意义（P＜0．05）,TNF-α,IL-6检测显示相似结果。结论缺血性脑损伤后给予AG490能降低受伤脑组织的炎症反应,其机制可能与JAK/STAT途径有关。