凉血化瘀方对肝衰竭小鼠肝细胞凋亡和相关基因作用机制的初步研究

目的:研究凉血化瘀方对内毒素脂多糖(Lipoplysaccaride,LPS)诱导的肝细胞凋亡的干预效应,以及对半胱天冬酶-3(caspase-3)mRNA、Fas相关死亡区蛋白(FADD)mRNA表达的影响,探讨凉血化瘀方防治肝衰竭的作用机制。方法:腹腔注射LPS于D-氨基半乳糖(D-galactosamine,GalN)致敏的小鼠,造成暴发性肝衰竭模型,用脱氧核苷酸转移酶介导的缺口原位末端标记技术(TUNEL法)、HE染色观察肝细胞凋亡和病理损伤情况及药物的干预作用。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量分析caspase-3mRNA、FADDmRNA表达情况,同时观察药物的作用。结果:造模6小时模型组有大量凋亡阳性细胞表达,治疗组则明显减少(P<0.01)。至24小时肝细胞损害以坏死为主,其程度与细胞凋亡相一致。造模3小时肝细胞caspase-3mRNA明显表达,治疗组83%,模型组141%,6小时两组表达水平相近。FADDmRNA表达在造模3小时模型组和治疗组肝组织中分别为110%、100%,至6小时模型组的表达增加(124%)而治疗组的表达下调(81%)。结论:凉血化瘀方能延缓内毒素肝损伤肝细胞caspase-3mRNA表达和下调FADDmRNA表达并抑制其凋亡效应。凉血化瘀方对肝衰竭的治疗作用可能与其阻断LPS诱导的肝细胞凋亡信号转导,从而抑制肝细胞凋亡有关。     

益气化瘀方调控颈椎间盘细胞基因表达谱的研究

目的：分析正常、退变SD大鼠颈椎间盘基因表达水平的变化，研究益气化瘀方对大鼠退变颈椎间盘基因表达谱的调节作用。方法：建立动、静力失衡性大鼠颈椎间盘退变模型，分别从正常、退变和益气化瘀方组大鼠颈椎间盘中抽提mRNA，经反转录后分别用Cy3、Cy5荧光标记，获得动物椎间盘cDNA的探针，再与512点cDNA基因表达谱芯片杂交，激光扫描仪扫描并进行图像分析、标准化处理、ratio值分析、聚类分析。结果：模型组与对照组比较，共筛选出18条表达有差异的基因，11条基因表达量明显下降(ratio＜0．4)，7条基因表达量明显上升(ratio＞2．5)。益气化瘀方与模型组比较，共筛选出22条表达有差异的基因，益气化瘀方上调18条基因(ratio＞2．5)，下调4条基因(ratio＜0．4)。其中在上述检测中表达最明显的是信号传导类基因，益气化瘀方能够上调多数细胞信号传导类基因(如PTK等)。结论：初步筛选出大鼠迟变椎间盘中相关基因，与已报道基因在颈椎间盘退变的表达模式类似，说明大鼠椎间盘退变受到各种基因的调控，初步阐明了颈椎病在基因水平上的发病机理。益气化瘀方参与了椎间盘细胞内相关基因的调控，参与椎间盘细胞内外的信号传导过程，从基因表达角度解释了中药治疗颈椎病的药效机理，丰富了中医气血理论。     

凉血化瘀方对急性肝损伤大鼠线粒体和内质网应激凋亡途径的影响

目的观察凉血化瘀方对大鼠急性肝损伤的保护作用,并探讨其机制。方法SD健康雄性大鼠50只,随机分为正常对照组,D一氨基半乳糖（GalN）＋脂多糖（LPS）模型组,凉血化瘀方高、中、低剂量治疗组。末次给药后1h除正常组外其余4组按0．1midl0g腹腔注射D—GalN（50mg／mL）加LPS（0．48~tg／mL）,造成大鼠急性肝损伤模型。用HE染色,观察肝组织病理变化;电镜观察肝细胞形态及结构;TUNEL法检测肝细胞凋亡;Westernblot检测细胞凋亡蛋白Caspase-9、Caspase-3、Bcl-2、Chop的表达情况。结果各剂量凉血化瘀方均改善肝组织病理损伤;凉血化瘀方各剂量组细胞凋亡蛋白Caspase-9、Caspase-3、Chop的表达下调（P均〈0．05或0．01）,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达上调,肝细胞形态改善明显。结论凉血化瘀方能抑制肝细胞凋亡。机制主要与调控线粒体和内质网应激途径诱导的细胞凋亡相关。     

凉血化瘀方拮抗内质网应激引起的L02肝细胞凋亡作用及机制研究

内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS) 启动的细胞凋亡是近年才发现的一种新的凋亡途径,本研究从ERS途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α(TNF-α)和D-氨基半乳糖 (D-GalN)所致肝细胞凋亡的保护作用。研究发现,TNF-α和D-GalN可明显抑制L02肝细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞质内游离钙离子含量明显上升,并使ERS凋亡相关信号分子磷酸化PERK,磷酸化elF2α,cleaved Caspase-12,GRP78,CHOP的蛋白表达显著增加。不同浓度的凉血化瘀方作用后,与TNF-α/GalN损伤组相比,可显著减轻L02肝细胞的增殖抑制、减少细胞的凋亡,抑制细胞质内游离钙离子含量的增高,并使磷酸化PERK,磷酸化elF2α,cleaved Caspase-12,GRP78,CHOP的蛋白表达量呈逐渐下降的趋势。这些发现说明:凉血化瘀方对TNF-α和D-GalN所诱导的肝细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与维持内质网腔钙稳态平衡和下调ERS凋亡相关信号分子磷酸化PERK,磷酸化elF2α,cleaved Caspase-12,GRP78,CHOP的表达有关。     

清热解毒、凉血化瘀中药联合干细胞移植对急性肝衰竭大鼠肝脏细胞凋亡的影响

目的:探讨清热解毒、凉血化瘀中药联合大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对急性肝衰竭大鼠(ALF)肝脏细胞凋亡的影响。方法:40只清洁级雄性SD大鼠,随机分为空白组5只,造模组35只,造模组采用D-氨基半乳糖(D-Gal N,1.2 g·kg~(-1))联合脂多糖(LPS,5μg·kg~(-1))建立急性肝衰竭大鼠模型,造模后12 h取存活大鼠随机分为模型组、复方甘草酸苷组、茵陈四苓颗粒组、干细胞移植组及茵陈四苓颗粒联合干细胞移植组(联合组),联合组给予干细胞门静脉移植及茵陈四苓颗粒灌胃(每次1.5 g·kg~(-1)),干细胞组给予单纯干细胞门静脉移植(1.0×106个/m L),余各组给予等体积生理盐水门静脉注射,茵陈四苓颗粒组给予茵陈四苓颗粒灌胃,复方甘草酸苷组给予复方甘草酸苷灌胃(每次7.5 mg·kg~(-1)),余各组给予等体积生理盐水灌胃,干预后120 h处死大鼠。检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),总胆红素(TIBL)变化,苏木-伊红(HE)染色观察肝组织病理改变,计算肝脏炎症活动度,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肝脏细胞凋亡指数(AI),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)测定肝组织中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA的表达。结果:急性肝衰竭大鼠造模后肝功能异常,联合组与模型组、复方甘草酸苷组、茵陈四苓颗粒组及干细胞移植组比较,大鼠血清AST,ALT,TBIL降低,肝炎活动度及凋亡指数明显降低(P0.05);联合组大鼠肝组织内Caspase-3蛋白的表达明显降低,Bax mRNA的表达降低,Bcl-2 mRNA表达明显升高,与模型组及各干预组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:清热解毒凉血化瘀中药联合干细胞移植能够改善肝功能,通过下调Caspase-3蛋白表达,上调Bcl-2 mRNA,下调Bax mRNA的表达来抑制肝脏细胞凋亡,效果优于单纯干预,两者对肝细胞凋亡的抑制具有协同作用。     

从线粒体途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α致肝细胞凋亡的保护作用

目的:从线粒体途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α(TNF-α)和D-氨基半乳糖(D-GaIN)所致肝细胞凋亡的保护作用.方法:体外培养人正常肝L02细胞,用TNF-α(100 μg·L-1)和D-GaIN(44 mg·L-1)诱导肝细胞损伤模型,荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;采用细胞增殖实验(MTT)法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染色法结合高内涵细胞成像系统检测肝细胞凋亡;罗丹明123(Rh123)染色结合高内涵分析系统检测线粒体跨膜电位;Western-blot检测线粒体途径凋亡标志蛋白凋亡蛋白酶激活因子(Apaf-1)、细胞凋亡诱导因子(AIF)、胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9)表达水平的变化.结果:与正常对照组相比,TNF-α和D-GalN可明显抑制L02肝细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞线粒体跨膜电位明显下降,并使促凋亡蛋白Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达显著增加.不同浓度的凉血化瘀方作用后,与TNF-α/GalN损伤组相比,可显著减轻L02肝细胞的增殖抑制、减少细胞凋亡,抑制细胞线粒体跨膜电位的下降,并促使凋亡蛋白Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达量呈逐渐下降的趋势.结论:凉血化瘀方对TNF-α和D-GaIN所诱导的肝细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与稳定线粒体的膜电位和下调促凋亡基因Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达有关.     

凉血化瘀方对蓝光诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响

目的探讨唐由之研究员经验方凉血化瘀方对蓝光诱导体外培养的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium，RPE）细胞凋亡的影响。方法将RPE细胞分为四组，用波长为470．500nm，光照强度在（2000±500）LUX的蓝光照射12小时，处理组分别于光照前30分钟加入不同浓度的凉血化瘀方中药粗提物及100umot／L的维生素C，终止光照后用，用荧光素标记的连接素V／碘化丙锭（Annexin V—fluorescein isothiocyanate／Propidium iodium，Annexin V—FITC／PI）双染色法，上流式细胞仪检测，观察细胞凋亡的情况及不同浓度的凉血化瘀方中药粗提物对蓝光诱导RPE细胞凋亡的影响。结果蓝光照射体外培养人RPE细胞后，引起的细胞变化以细胞凋亡为主，光照前加入不同浓度的凉血化瘀方中药粗提物及维生素C后，凋亡细胞数量明显减少，且凉血化瘀方组凋亡细胞数量少于维生素C组。结论凉血化瘀方对蓝光诱导体外培养的人视网膜色素上皮凋亡具有保护作用。     

清化凉血化瘀方对急性肝衰竭大鼠生存率及生化指标的影响

目的观察清化凉血化瘀方对急性肝衰竭大鼠肝功能和累积生存率的影响。方法将160只大鼠随机分为空白组20只、模型组35只、西药组35只、中药组35只、中西医结合组35只,西药组和中西医结合组予复方甘草酸苷溶液灌胃,中药组予清化凉血化瘀方灌胃,空白组与模型组予灭菌蒸馏水灌胃。灌胃3 d后,除空白组外,其余组均腹腔注射纯D-氨基半乳糖(D-Gal)800 mg/kg、内毒素脂多糖(LPS)8μg/kg制造急性肝衰竭模型,造模后西药组和中药组再分别给予相应药物灌胃1次,中西医结合组予清化凉血化瘀方灌胃1次。造模24 h后,将每组大鼠再随机分为A、B 2个亚组,空白组2个亚组均为10只,其余每组中A组20只,B组15只,处死每组中A组大鼠,采集血清,检测肝功能、凝血功能;每组中B组大鼠观察至96 h,统计大鼠累积生存率及生存时间。结果模型组大鼠血清ALT、AST、TBil、CHE水平及血浆PT均明显高于空白组(P均<0.05),ALB明显低于空白组(P<0.05);各给药组大鼠血清ALT、AST、TBil、CHE水平及血浆PT均明显低于模型组(P均<0.05),ALB均明显高于模型组(P均<0.05);中西医结合组和西药组ALT、AST水平均明显低于中药组(P均<0.05),ALB水平均明显高于中药组(P均<0.05),且中西医结合组ALB水平明显高于西药组(P均<0.05);中西医结合组TBil、CHE水平及血浆PT明显低于中药组及西药组(P均<0.05),西药组CHE水平明显低于中药组(P均<0.05)。各给药组大鼠存活率均明显高于模型组(P均<0.05),但各给药组间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。各组生存时间比较差异均有统计学意义(P均<0.05);中西医结合组生存时间明显长于模型组(P<0.05)。结论清化凉血化瘀方联合复方甘草酸苷可改善肝衰竭大鼠的肝功能及凝血功能,提高大鼠累积生存率,延长大鼠生存时间。     

化瘀解毒方对胃癌细胞凋亡的作用及机制

目的:观察化瘀解毒方(Huayu Jiedu recipe,HYJDR)对胃癌细胞凋亡的影响,探讨HYJDR对胃癌细胞凋亡的作用机制,为HYJDR的临床运用提供实验依据。方法:运用噻唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)比色法检测HYJDR(5,10,15,20,25,30 g·L~(-1))对胃癌SGC-7901细胞活力影响,测定HYJDR对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(median inhibition concentration,IC50)。利用碘化丙啶(propidium iodide,PI)和hoechst双荧光染色检测HYJDR对胃癌SGC-7901细胞的凋亡影响情况。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HYJDR对胃癌凋亡相关蛋白表达情况的影响。实时荧光聚合酶链反应(Realtime-polymerase chain reaction,Real-time PCR)检测HYJDR对胃癌细胞凋亡相关蛋白信使RNA(mRNA)表达水平的影响。结果:与空白组比较,HYJDR质量浓度10 g·L~(-1)时可以明显抑制胃癌细胞的增殖活力,随着HYJDR浓度的增加,细胞活力下降明显(P0.05),呈明显的浓度依赖性。HYJDR可以促进胃癌细胞的凋亡,随着HYJDR浓度的增加,细胞的凋亡逐渐增多。与空白组比较,HYJDR可以明显抑制胃癌细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达(P0.05),同时提高Bcl-2细胞凋亡抵抗蛋白(Bcl-2 antagonist of cell death,Bad)和Bcl-2相关蛋白X(Bcl-2-associated X,Bax)等促凋亡蛋白表达(P0.05)。PCR结果显示,与空白组比较,HYJDR(5,10 g·L~(-1))组可以有效抑制胃癌细胞中Bcl-2 mRNA表达(P0.05),HYJDR各组促进Bad mRNA表达(P0.05)。结论:HYJDR可以明显促进胃癌细胞SGC-7901的凋亡,其作用很可能是通过提高Bad mRNA表达,抑制Bcl-2蛋白表达来实现的。     

凉血化瘀方抗肝细胞凋亡效应及对半胱天冬酶-3 mRNA表达的影响

目的研究半胱天冬酶-3(caspase-3)mRNA在内毒素肝损伤中的表达与肝细胞凋亡的关系,以及凉血化瘀方对其的影响.方法腹腔注射内毒素脂多糖(LipoplySaccharide,LPS)于D-氨基半乳糖(D-galactosamine,GalN)致敏的小鼠,造成暴发性肝衰竭(Fulminant Hepatic Failure,FHF)模型,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量分析caspase-3 mRNA表达,脱氧核苷酸转移酶介导的缺口原位末端标记技术(TUNEL法)、HE染色及透射电镜观察肝细胞凋亡情况,同时观察药物的影响作用.结果造模3h肝组织caspase-3 mRNA明显表达,治疗组83%,模型组141%,6h二组表达水平接近.凋亡阳性细胞在6h表达最强,二组比较治疗组则明显减少(P＜0.01).结论内毒素肝损伤中caspase-3 mRNA表达与肝细胞凋亡程度有相关关系,凉血化瘀方能延缓内毒素肝损伤肝细胞caspase-3 mRNA表达和抑制其凋亡效应.     

凉血化瘀方对MRL/lpr狼疮鼠蛋白尿及抗ds-DNA抗体的影响

[目的]研究凉血化瘀方对MRL/lpr狼疮鼠蛋白尿及抗ds-DNA抗体的影响。[方法]MRL/lpr小鼠35只,饲养至3月龄。将35只雌性MRI/lpr小鼠随机分为五组,每组7只。分别为:阴性组、模型组、西药强的松加环磷酰胺组、中药加强的松加环磷酰胺组、中药组。实验小鼠均于灌胃前、灌胃21d、灌胃49d时代谢笼采集24h尿蛋白定量;眼眶后静脉丛采血,取血并分离血清后,置-70℃冰箱保存,行ELISA检测抗ds-DNA抗体的表达。[结果]MRL/lpr小鼠模型组ds-DNA水平较阴性组明显升高,蛋白尿高于阴性组。经过西药(CTX、强的松)、中药(凉血化瘀方)及中西医结合治疗(CTX、强的松、凉血化瘀方),各治疗组蛋白尿显著少于模型组。但降蛋白尿上,西药组疗效优于中药组,中西医结合组疗效优于单用中药或单用西药组,差异有统计学意义(P<0.05)。抗ds-DNA抗体血清含量模型组3.026±0.129,阴性组1.404±0.064,两组相比,P<0.01。[结论]中药凉血化瘀方具有降低血抗ds-DNA水平及蛋白尿的作用。     

活血化瘀法治疗系统性红斑狼疮研究进展

观察近年来以活血化瘀法为主治疗系统性红斑狼疮（SLE）的相关文献,分析SLE的病因病机,并结合SLE血瘀证临床表现,认为SLE病程反复迁延,时轻时重,各种致病因素都可不同程度地导致血瘀,瘀血不仅是病理产物,又是致病因素,因此血瘀贯穿于SLE的始终。所以,活血化瘀法治疗SLE疗效显著。     

从活血化瘀论治冠心病

冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)的主要病机是血瘀形成,痹阻心脉,不通则痛。血瘀的病机形成大致可以分为气虚血瘀、气滞血瘀、寒凝血瘀、痰湿血瘀、热结血瘀等证型。其治法可以分为益气活血、行气活血、养血活血、滋阴活血、温阳活血、化痰活血、利水活血、解毒活血等。     

活血化瘀法为主治疗痛经31例疗效观察

目的:探讨活血化瘀法为主治疗痛经的临床疗效及其与改善甲襞微循环的关系.方法:31例痛经患者以活血化瘀为基本治法,在治疗前后进行甲襞微循环观察,采用甲襞微循环加权积分法进行分析比较.结果:治疗前总积分值最高,Σ(A×B)属重度异常,说明微循环障碍严重,与健康对照组比较差异有显著性(P＜0.01);治疗后总积分明显下降,Σ(A×B)属轻度异常,说明微循环有较明显改善,与治疗前比较有显著性差异(P＜0.01).随着临床症状的缓解和微循环障碍改善,总积分值随之下降.结论:"不通则痛"的发病机理与微循环障碍有密切关系;对痛经的施治,除了强调辨证外,改善微循环障碍亦是一个重要方面.     

活血化瘀法对血管生成效应与机制探析

活血化瘀法是中医学的重要治法,此法与补气、行气、清热解毒、温经、祛风除湿、养阴、化痰解郁、通腑攻下等法相配合,对血管生成具有不同的效应。活血化瘀法对血管生成调节因子正反两方面质或量的影响对于血管生成的效应起着决定性作用。本文探讨了活血化瘀法双向调节血管生成的效应与机理。     

活血化瘀法在糖尿病周围神经病变治疗中的应用

糖尿病周围神经病变(DPN)是临床上常见的糖尿病慢性并发症之一,历来成为医学界研究的热点。本文通过分析DPN的病因病机,观察中医从"瘀"治疗DPN的临床疗效,说明"瘀"为DPN致病因素,活血化瘀法为DPN治疗关键所在。     

复方冰红软胶囊活血化瘀及治疗急性软组织损伤研究

目的:研究复方冰红软胶囊活血化瘀及治疗急性软组织损伤的作用。方法:用动物血瘀模型观察复方冰红软胶囊对大鼠血液流变性、体外血栓形成及血小板黏附率的影响;打击造成大鼠急性软组织损伤,观察复方冰红软胶囊对大鼠软组织损伤程度及病理组织学的影响。结果:复方冰红软胶囊能明显改善模型大鼠血瘀症状及急性软组织损伤的损伤程度。结论:复方冰红软胶囊具有较好的活血化瘀及治疗急性软组织损伤的作用。     

滋补肝肾、活血祛痰方药对原发性高血压大鼠左心室肥厚的影响

目的：探讨滋补肝肾、活血祛痰方药早期干预对原发性高血压左室肥厚(EH—LVH)大鼠左室功能的影响。方法：在原发性高血压大鼠(SHR)孕期及子代出生后10周前给予滋补肝肾、活血祛痰方药治疗，观察该方药对其子鼠血压、左室肥厚的影响。结果：10周龄SHR即已形成一定程度的左室肥厚，经滋补肝肾、活血祛瘀方药早期干预，其子代大鼠血压显著下降(P＜0．05)，左室肥厚明显消退(P＜0．01），心室肌胶原蛋白浓度显著降低(P＜0．01)。结论：子代胚胎形成期及出生后10周前可能是SHR高血压发生、发展的重要时期，在此期经滋补肝肾、活血祛痰方药干预，能够减弱其发病，起积极预防作用。     

黄杞总黄酮活血化瘀作用研究

目的：研究黄杞总黄酮（ＴｏｔａｌＦｌａｖｏｎｅｏｆＥｎｇｅｌｈａｒｄｔｉａＲｏｘｂｕｒｇｈｉａｎａＴＦＥＲ）的活血化瘀作用。方法：采用兔血浆复钙试验、大鼠体外血小板聚集和体内血栓形成方法、大鼠急性“血瘀”证血液流变学指标、高脂血症小鼠血脂含量和常压耐缺氧时间等,观察ＴＦＥＲ的活血化瘀作用;用小鼠急性毒性试验,观察ＴＦＥＲ的毒性情况。结果：ＴＦＥＲ具有体外抗凝、抗血小板聚集和抗血栓形成作用;能降低血液粘度和血脂水平;延长耐缺氧时间。其急性毒性的最大耐受量为１９８ｇ／ｋｇ结论：ＴＦＥＲ具有较明显的活血化瘀作用,可为临床应用提供科学依据。