线粒体DNA ND1基因T3394C点突变与2型糖尿病的关系

目的探讨本地区汉族人群线粒体DNA ND1基因中T3394C突变与2型糖尿病（T2DM）的关系。方法应用聚合酶链反应（PCR）对无血缘关系的225例T2DM患者和190名正常对照者的外周血DNA进行PCR扩增并直接测序确证。结果糖尿病患者组中检出T3394C突变8例（3.56%）,正常对照组检出1名（0.53%）,2组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论线粒体DNA T3394C突变可能与本地区汉族人群T2DM的发生有关。     

宁夏地区回族人群2型糖尿病与线粒体基因突变的相关性分析

目的:以随机选取宁夏回族无血缘关系的63例糖尿病患者(糖尿病组)及77例健康个体(正常对照组)为研究对象,调查该人群中线粒体基因突变与2型糖尿病的关系.方法:采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态检测技术(PCR-RFLP)对线粒体基因位点(mtDNA3243、3316、3394、3426、3593)突变类型进行检测,并采用X2检验,比较mtDNA突变类型在两组间分布的差异,从而得出宁夏地区回族人群2型糖尿病与mtDNA突变的相关性.结果:在糖尿病组与正常对照组中均未发现mtDNA3243、3593、3426位点的突变.在糖尿病组中3316位点(G→A)突变频率为1.587%(1/63),正常对照组中该位点突变频率为3.896%(3/77);糖尿病组中未发现3394(T→C)突变,正常对照组中该住点突变频率为3.896%(3/77).以上位点的突变频率在两组间经X2检验,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:宁夏地区回族人群2型糖尿病与mtDNA3243、3316、3394、3426、3593位点的突变均无相关性.     

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征并发2型糖尿病患者线粒体DNA 16189 T→C变异情况调查

目的 调查阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)并发2型糖尿病(T2DM)患者中线粒体DNA(mtDNA)16189T→C变异情况.方法 采用聚合酶链反应结合限制性内切酶酶切(RELP-PCR) 对134例OSAHS患者线粒体DNA(mtDNA)16189T→C 变异进行分析,其中OSAHS并发T2DM患者52例,单纯OSAHS患者82例,同时以122例T2DM非OSAHS患者作为对照组,并以113例健康体检人群为空白组进行基因分布频率筛查.结果 OSAHS并发T2DM组中mtDNA 16189T→C 突变的发生率(55.8%)显著高于单纯OSAHS组,差异具有统计学意义(29.2%,P<0.001),与T2DM非OSAHS患者比较差异也有统计学意义(36.1%,P=0.016);OSAHS并发T2DM组中,mtDNA 16189 T→C突变型胰岛素抵抗指数(IR)与野生型比较差异具有统计学意义(P=0.0001).结论 OSAHS并发T2DM患者存在较高的16189 T→C突变,且此突变可能与IR相关.     

2型糖尿病线粒体ND1基因3个新突变位点的分析

目的 探讨线粒体DNA tRNA Leu（UUR）基因和ND1基因点突变（np 3243、3316、3394和3593）与湖北人群2型糖尿病的相关性。方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP），克隆和测序的分析方法，对184例2型糖尿病患者和210名健康对照进行筛选，并用DNAMAN、Primer、mfold和Antherprot软件对检出的突变位点进行分析和二级结构预测。结果 实验组检出3316（G→A）突变6例（3．3％），3394（T→C）突变5例（2．7％），3593（T→C）突变1例（0．5％），并发现3个尚未见报道的新突变位点：3606（A→G）、3618（T→C）和3688（G→C），未检出3243（A→G）突变；对照组只检出3316（G→A）突变1例（0．5％）。两组间仅3394（T→C）突变率差异有统计学意义（P〈0．05）。3606（A→G）和3618（T→C）突变分别为亮氨酸、苯丙氨酸的无意义突变，其二级结构均与野生型ND1同；3316（G→A）突变（丙氨酸→苏氨酸），3394（T→C）突变（酪氨酸→组氨酸），3593（T→C）突变（缬氨酸→丙氨酸），3688（G→C）突变（丙氨酸→脯氨酸），均引起ND1因DNA和蛋白质二级结构的改变，其中3394（T→C）突变型变化最显著。结论 线粒体DNA ND1基因3394（T→C）突变以及3688（G→C）突变伴随3316（G→A）突变，可能与2型糖尿病的发生发展有关。     

湖北汉族人群2型糖尿病患者线粒体基因突变检测及临床意义

目的研究线粒体DNA(mtDNA)16S rRNA基因(T3200C、C3206T)和ND1基因(A4136G、A4164G和T4216C)突变在湖北汉族2型糖尿病人群中的发生率及临床意义。方法采用等位基因特异性PCR(AS-PCR)、PCR-限制性酶切片段长度多态性(PCR-RFLP)分析及PCR产物直接测序,对175例2型糖尿病患者和200例正常对照的线粒体基因突变进行检测,并用Primer、Antherprot和Mfold软件对检出的突变位点进行分析,对RNA突变后最小自由能下的二级结构变化和ND1基因突变后蛋白质的二级结构改变进行预测。结果2型糖尿病组检出3200(T→C)突变2例(1．14％),3206(C→T)突变11例(6．28％),4216(T→C)突变3例(1．71％),4136位点未发现突变。发现2个未曾报道的新突变位点4164(A→G)7例(4．00％),4200(A→T)1例(0．57％)。对照组中检出3206(C→T)突变8例(3．92％),4164(A→G)突变5例(2．45％),两位点突变率在两组中比较差异无显著性(P>0．05)。RNA二级结构预测显示3200(T→C)突变引起16S rRNA基因最小自由能和二级结构的改变,可能引起疾病。4164(A→G)和4200(A→T)突变分别为Met和Leu的无义突变,4216(T→C)突变可使线粒体呼吸链中一个中性酪氨酸被亲水性组氨酸取代,蛋白质二级结构预测显示该突变可引起NDl蛋白质二级结构改变。研究还显示线粒体基因突变率在≥40岁个体呈上升趋势。结论mtDNA 3200(T→C)和4216(T→C)突变可能增加糖尿病的易感性;3206(C→T)和4164(A→G)为基因多态性改变;4136位点未发现突变。以上结果提示糖尿病的发生在线粒体基因突变上存在一定的异质性。     

线粒体DNA 5178C/A多态性与2型糖尿病关系的研究

目的研究线粒体DNA5178C/A多态性与2型糖尿病(T2DM)及其并发症的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)与PCR产物直接测序的方法,对2型糖尿组(220例)及正常对照组(126例)进行基因分析。结果 5178C基因型与5178A基因型的T2DM患者在性别、发病年龄、体重指数、血糖、血脂等水平差异无统计学意义,但T2DM患者中5178C基因型并发视网膜病变的频率要高于5178A基因型(P0.05)。结论线粒体DNA5178C/A多态性可能与T2DM患者并发视网膜病变负相关。     

线粒体基因变异与2型糖尿病易感性的关联研究

武汉大学人民医院的汤冬玲博士等对湖北地区2型糖尿病患者和糖耐量正常的健康人群mtDNA的12S rRNA、tRNA Leu、tRNA Glu、ND1和D-loop区的基因突变情况进行筛查,发现了3394(T→C)、14693(A→G)突变与T2DM的易感性有一定关联,16189(T→C)变异与湖北地区汉族人T2DM胰岛素抵抗相关.2型糖尿病是一组多因素导致的代谢紊乱综合征,患病率逐年上升.     

2型糖尿病患者线粒体ATP6基因变异分析

目的 研究2型糖尿病(T2DM)患者线粒体DNA(mitocho-ndrial DNA,mtDNA)ATP6基因变异与T2DM及其慢性并发症的相关性.方法 选取浙江籍汉族人群中临床诊断为T2DM的无血缘关系患者254例,同时收集165名年龄匹配的健康体检者作为健康对照组.提取所有受试者全血基因组DNA,采用PCR扩增线粒体ATP6基因,直接测序后与线粒体基因组剑桥参考序列(rCRS)进行比对.借助生物信息学和统计学方法分析ATP6基冈变异.结果 所有变异位点的发生率在T2DM组和健康对照组间差异无统计学意义(P>0.05).其中有部分位点仅在T2DM组中以低频率出现,多数为错义变异,其改变了线粒体ATP合酶6亚基(ATPase6)跨膜螺旋上高度保守的氨基酸.这些变异位点未见相关报道,同时在合并高血压且为非肥胖患者中检测到,包括G8557A、A8563G、T8594C、C8609T、A8689G、G8998A和G9139A.结论 线粒体ATP6基因存在大量变异,多数为多态性位点,但不能排除变异位点A8689G、T8825C、G8920A、G8998A、G9139A提高了T2DM易感性和微效致病性的可能.变异位点G8557A、A8563G、T8594C、C8609T、A8689G、G8998A和G9139A可能与糖尿病、高血压等生物能学疾病的发生有关.     

云南大理白族人群2型糖尿病患者线粒体基因A3243G和G3316A点突变的筛查

目的研究云南大理白族人群2型糖尿病患者线粒体tRNALeu(UUR)基因A3243G突变和NADH脱氢酶亚单位1(ND1)基因G3316A突变的频率与2型糖尿病发生的相关性。方法以随机挑取的云南大理白族无血缘关系的185例糖尿病患者(病例组)和150例健康个体(对照组)为研究对象,采用聚合酶链式反应及限制性片段长度多态性分析技术(PCR-RFLP)进行线粒体基因A3243G和G3316A点突变筛查,并采用χ2检验,比较线粒体基因突变在两组间分布的差异,从而得出大理地区白族人群2型糖尿病与线粒体基因A3243G、G3316A点突变的相关性。结果在糖尿病组中A3243G点突变频率为0.54%(1/185),在正常对照组未检出该位点突变;在糖尿病组中G3316A点突变频率为1.62%(3/185),正常对照组中该位点突变频率为0.67%(1/150)。突变频率在两组间经χ2检验,差异无统计学意义(P0.05)。结论云南大理地区白族人群2型糖尿病与线粒体基因A3243G和G3316A点突变均无相关性,可能不是该地区白族人群2型糖尿病的常见遗传易感因素。     

线粒体基因异常糖尿病临床预报的探讨

目的　拟建立基因序列检测的糖尿病 (DM )临床预报方法。方法　对 10 4例糖尿病患者和 5 0例正常无DM家族史对照者 ,用聚合酶链反应扩增 3 161～ 3 610基因片段直接测序。结果　 10 4例DM患者有 2 .88%同时出现mtDNA3 497C→T、3 5 71C→T点突变 ,和 3 2 90T→C点突变 ;1.92 %出现 3 42 1G→A基因突变。DM组与正常对照组比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　 3 497C→T、3 5 71C→T位点同时突变 ,或同时合并其他基因突变 ;3 3 16G→A位点突变合并 3 2 90T→C或其他错义基因突变时与DM有关。     

Novel mutations of mitochondrial DNA associated with type 2 diabetes in Chinese Han population

Mitochondrial single nucleotide polymorphisms (mtSNPs) have been reported to associate with type-2 diabetes mellitus (T2DM), but mtSNPs appear to be considerably different among different populations and regions. To determine mtSNPs in Chinese Han patients with T2DM, the entire sequences of the mitochondrial genomes from 72 T2DM Chinese (59 +/- 4 years) and 50 age-matched healthy subjects (controls) in Chongqing region of Western China were directly sequenced and mtSNPs were analyzed. We found that M8, M9, D, G, R and A haplogroups exist in Chinese Han population and the frequency of haplogroup M9 was significantly higher in patients with T2DM than in the controls (p = 0.0006, OR 0.06 [95% CI 0.008-0.476]). MtSNPs T3394C in NADH dehydrogenase subunit 1 (ND1), G4491A in ND2, T16189C and T16519C were found with significantly higher frequency in patients with T2DM than in the controls (T16189C, p = 0.0045; T16519C, p < 0.0001; T3394C, p = 0.0015; G4491A, p = 0.0015). In contrast, the frequency of C5178A in ND2 and A10398G in ND3 was higher in the controls than in patients with T2DM (C5178A, p = 0.014; A10398G, p = 0.0011). Our results indicate that mtSNPs T3394C, G4491A, T16189C and T16519C show susceptible tendency to T2DM and mtSNPs C5178A and A10398G seem to be genetic factors for against T2DM. These mtSNPs determined in our study is useful and could be used for early diagnosis and prevention of T2DM in Chinese Han population.     

Mitochondrial gene mutations in the tRNA(Leu(UUR)) region and diabetes: prevalence and clinical phenotypes in Japan

BACKGROUND: Mitochondrial gene mutations play a role in the development of diabetes mellitus. We have assessed the frequency of the A3243G and other mitochondrial mutations in Japan and in the relationship to clinical features of diabetes. METHODS: DNA was obtained from peripheral leukocytes of 240 patients with diabetes mellitus (39 with type 1; 188 with type 2; 13 with gestational diabetes) and 125 control subjects. We used PCR-restriction fragment length polymorphism analysis (ApaI) for A3243G and PCR-single-strand conformation polymorphism analysis to determine the mutations in the mitochondrial gene including nucleotide position 3243. RESULTS: The A3243G mutation was found in seven patients, and an inverse relationship was observed between the degree of heteroplasmy and the age at onset of diabetes. A3156G, G3357A, C3375A, and T3394C were detected in addition. Those who shared the same mutation showed similar clinical characteristics, thus representing a putative clinical subtype. The patients with A3156G had a sudden onset of hyperglycemia and showed a rapid progression to an insulin-dependent state with positive anti-glutamic acid decarboxylase antibody. Those with T3394C showed a mild defect in glucose-stimulated insulin secretion, and hyperglycemia appeared after adding such factors as aging or obesity. CONCLUSIONS: The identification of mitochondrial gene mutations allows preclinical diagnosis of diabetes and prediction of the age at onset by evaluating the degree of heteroplasmy in cases with A3243G. Mutation detection may also be important for patient management and identification of affected family members.     

2型糖尿病患者血清同型半胱氨酸浓度变化分析

目的研究血清同型半胱氨酸（Hcy）水平与2型糖尿病（T2DM）的关系,探讨影响T2DM患者血清Hcy水平的因素。方法选择T2DM患者122例、慢性肾脏病（CKD）患者67例及健康对照（CON）50例,观察各组血清Hcy水平变化,并分析Hcy与预测肾小球滤过率（eGFR）、空腹血糖（FBG）、糖化血红蛋白（HbA1C）、尿素（Urea）、肌酐（CRE）之间的相关性。采用循环酶法测定血清Hcy,离子交换高效液相法测定HbA1C,应用Levey改良的MDRD方程计算eGFR。结果T2DM组血清Hcy与CON组相比差异无统计学意义（P〉0．05）,CKD组血清Hcy显著高于T2DM组和CON组（P〈0．01）。T2DM组中Hcy水平超过CON组95％上限者仅为8．20％,而CKD组中超过者为64．18％。T2DM组中肾功能正常者[eGFR≥90mL&#183;（min&#183;1．73m^2）^-1]的Hcy水平与CON组比较差异无统计学意义（P〉0．05）,肾功能异常者[eGFR〈90mL&#183;（min&#183;1．73m^2）^-1]的Hcy水平较CON组增高（P〈0．05）。Hcy与eGFR在T2DM组和CKD组中均呈负相关（P〈0．01）,与Urea、CRE呈正相关（P〈0．01）,但Hcy与FBG、HbA1C、TC、TG均无相关性（P〉0．05）。结论糖尿病本身不会导致血中Hcy浓度增高,肾功能是影响T2DM患者Hcy水平的独立因素。     

线粒体新变异与中国北方人群中2型糖尿病的关联性的关联性

目的:探讨线粒体DNA 3537A/G、5351A/G位点突变与中国北方人群2型糖尿病发生之间的关系.方法:全部对象均来自大连市,2型糖尿病患者包括大连地区2型糖尿病家系调查收集的患者61例,大连市中心医院内分泌科收治的患者497例及国家"95"攻关"中老年糖尿病普查"大连地区散发患者56例.另选国家"95"攻关"中老年糖尿病普查"中糖耐量正常的344人作为正常对照.在614例2型糖尿病患者和334名非糖尿病对照群体中检测线粒体DNA 3537A/G、5351A/G位点的突变情况.在测序基础上,从线粒体DNA中排序选择2个有较高可能性与2型糖尿病相关的候选SNP,然后使用限制性片断长度多态性聚合酶链反应技术进行基因分型.结果:线粒体DNA 3537A/G、5351A/G在2型糖尿病患者中的突变频率分别为2.0%和2.6%,在对照人群中则分别为2.1%和4.2%,两者之间的差异无显著性意义(P＞0.05).按照体质量指数和血压进行分层之后,发现5351A/G在肥胖的2型糖尿病患者中突变频率为1.61%,在肥胖的对照中频率为15.38%,两者之间的差异具有显著性意义(P_(Fisher)=0.02,OR=2.76);但是A 3537G在各组中的差异无显著性意义(P＞0.05).结论:线粒体DNA ND2基因5351A/G可能与中国北方人群中2型糖尿病发病风险相关.     

人类纤溶酶原激活物抑制物-1基因多态性与2型糖尿病血管内皮功能的关系

目的 探讨人类纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)基因4G/5G多态性与2型糖尿病(T2DM)患者内皮依赖性血管舒张功能(EDF)的关系.方法 采用特异性多聚酶链反应技术检测66例T2DM患者和33例健康对照组PAI-1基因4G/5G多态性;利用B型超声检测T2DM患者EDF;同时检测PAI-1和纤维蛋白原.结果 T2DM患者与健康对照组基因型分布频率均符合Hardy-Weinberg平衡,差异无统计学意义(P0.05).T2DM患者比健康对照组具有更高的PAI-1、纤维蛋白原水平.T2DM患者PAI-1基因4G/4G型PAI-1水平明显高于其他两型,EDF明显低于其他两型(P<0.05).结论 PAI-1基因多态性可能影响T2DM患者的EDF.     

胱硫醚β合成酶基因多态性与脑卒中相关性的研究

目的　研究胱硫醚β合成酶 (CBS)基因 T2 7796 C多态性与脑卒中的遗传相关性。方法　采用限制性内切酶片段长度多态性方法 (PCR RFL P) ,对 5 9例脑卒中患者和 6 5例健康人 CBS基因 T2 7796 C多态性位点进行检测。结果　病例组 C等位基因占 5 6 .8% ,T等位基因占 4 3.2 % ;正常对照组 C等位基因占 5 1.5 % ,T等位基因占 4 8.5 % ;CBS基因 T2 7796 C多态性位点与脑卒中无明显相关 (P>0 .0 5 )。脑卒中组与正常对照组之间 3种等位基因型分布频率亦均无明显差异 ,其中 CC为 35 .6 %比 2 4 .6 % ;CT为 4 2 .4 %比 5 3.8% ;TT为2 2 .0 %比 2 1.5 % ;P>0 .0 5。缺血性卒中和出血性卒中组间 C、T等位基因及 3种等位基因型分布频率也均无显著性差异 (P均 >0 .0 5 )。结论　 CBS基因 T2 7796 C多态性位点与脑卒中无明显相关 ;T2 7796 C多态性位点与脑卒中的类型 (缺血性或出血性 )也无明显相关。