过氧化物酶体增殖物激活受体在乙型肝炎病毒的转录与复制中的作用研究现状

<正>乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）属嗜肝DNA病毒,通过逆转录机制复制。HBV基因组转录生成3. 5kb HBV m RNA（前基因组RNA）是病毒复制过程中最关键的步骤[1]。多种细胞转录因子通过激活HBV核心启动子,促进病毒前基因组RNA的转录生成和病毒的逆转录复制[2-3]。在这些细胞转录因子中,肝富集转录因子最受关注,是调节前基因组RNA转录的<正>乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）属嗜肝DNA病毒,通过逆转录机制复制。HBV基因组转录生成3. 5kb HBV m RNA（前基因组RNA）是病毒复制过程中最关键的步骤[1]。多种细胞转录因子通过激活HBV核心启动子,促进病毒前基因组RNA的转录生成和病毒的逆转录复制[2-3]。在这些细胞转录因子中,肝富集转录因子最受关注,是调节前基因组RNA转录的     

乙型肝炎病毒基因型别及X基因变异的研究进展

乙型肝炎病毒是一个以RNA为中间体的反转录复制病毒,由于RNA聚合酶缺乏校正功能,这使其突变率明显高于一般的DNA病毒,随着分子生物学研究技术的进展,不断有新的HBV基因型和亚型被发现。对和疾病进程、治疗相关的HBV基因型和X基因变异进行研究,有助于对疾病的控制和治疗提供更好的理论依据,在控制HBV感染上具有重要的意义。     

乙肝病毒研究进展

乙肝病毒(HBV)属嗜肝DNA病毒,感染乙肝病毒不仅会引起急性肝炎,还可能导致慢性肝炎、肝硬化甚至肝癌。HBV可通过多种途径感染人体,引起肝病的传播。现就HBV的最新研究进展综述如下。1　HBV的结构　　HBV是目前人类感染的最小的双链DNA病毒,其编码区基本有广泛的重叠。不同病毒株的L(- )链均含有4个开放读码框,分别称为S ,C ,P ,X区。1 1　S基因　S区又分为S基因,preS1基因和preS2基因3段,它们读码框相位相同,连续串连排列,分别编码S蛋白、preS1蛋白和preS2蛋白。其中S蛋白称为主要蛋白或小蛋白,preS2 S蛋白称为中蛋白,pre…     

血清乙型肝炎病毒RNA定量分析系统的建立

目的 :建立针对血清乙型肝炎病毒 (hepatitisBvirus,HBV)转录体的定量分析系统 .方法 :从血清中提取病毒DNA和RNA ,采用竞争性PCR技术、Southern blotting及分子克隆等技术 ,建立循环病毒DNA和RNA(转录体 )的定量分析系统 ,并应用其对抗病毒药物Lamivudine干预治疗后HBV感染患者血清中HBVDNA和RNA结构和数量的变化进行分析 .结果 :建立了两个针对X区RNA的定量分析系统 ,可检测带有全长型和顿挫型 3′端结构的转录体 .我们还建立了HBVX ,Core和X PreCore区段的DNA/RNA定量分析系统 ,三者分别与HBV基因复制的早、中、晚期对应 .此研究初步阐明了Lamivudine治疗期间患者血清中HBVDNA和转录体结构和数量的变化 .治疗 8wk以后 ,在Core和X PreCore区DNA拷贝数从 10 9·mL-1下降为 10 5·mL-1,下降幅度明显高于X区(下降至 10 7·mL-1) ,其比率更准确地反映了Lamivudine的作用效率 ,可用于疗效的评估 .转录体的拷贝数仅有小幅下降 ,采用锚定的Oligo(dT)引物检测的两种全长和顿挫型Ploy(A)RNA (10 5·mL-1)明显低于X区 (10 7·mL-1)RNA的拷贝数 ,提示在基因复制过程中前基因组RNA的Ploy(A)尾被去除 .结论 :这一分析系统可显示血清中HBV转录体含量及定量不同 3′端结构 ,为研究循环中HBV转录体和DNA的动态变化提供     

HBV感染者Pre-S1蛋白检测和临床意义

乙型病毒性肝炎是由 HBV引起的病毒性肝炎 ,通常认为 ,HBs Ag、HBe Ag和 HBV- DNA阳性是 HBV感染和复制的重要指标。大量研究表明 ,前S1蛋白 ( Pre- S1蛋白 )作为 HBV血清学又一指标 ,逐渐表现出较高的临床意义 ,Pre- S1蛋白抗原和HBV的活动性复制及感染性有关 [1] 。笔者对 2 1 6例各型 HBV感染者血清 Pre- S1蛋白测定结果及其与HBV标志物、HBV- DNA的关系作一回顾性分析 ,以探讨血清 Pre- S1蛋白测定的临床意义。1　临床资料2 1 6例均为 2 0 0 0年 1 2月～ 2 0 0 2年 1 2月我院肝科住院和门诊患者 ,男 1 68例 ,女 48例 …     

乙型肝炎抗病毒药物治疗进展

乙型肝炎病毒 ( HBV)是一种嗜肝 DNA病毒 ,感染肝细胞后松驰型部分双链环状基因组DNA进入细胞核内 ,变成共价闭环 DNA( ccc D-NA) ,并以后者的负链为模板转录为 m RNA,再以此 m RNA为模板逆转录为 DNA。这种独特的细胞内复制方式 ,决定了其治疗的困难性[1] 。近来在实验室及临床上有些发现提示 ,HBV有直接致病的可能性。随着对乙型肝炎免疫发病原理的深入研究 ,对其药物治疗的研究也取得了相当大的进展 ,抗乙肝病毒的新药开发如雨后春笋 ,并已有多种进入临床试验[2 ] 。近年来 ,国内外在应用生物反应调节剂 (如干扰素α和胸腺肽…     

乙型丙型肝炎病毒合并感染细胞模型的建立

目的：本文拟利用慢病毒载体,在可感染丙型肝炎病毒（HCV）的Huh7.5.1细胞中过表达人肝细胞乙型肝炎病毒（HBV）受体钠离子牛磺胆酸共转运蛋白（sodium taurocholate cotransporting polypeptide, NTCP）编码基因,建立Huh7.5.1- hNTCP细胞模型,使其可以被HBV、HCV共同感染。方法：使用携带人NTCP编码基因、GFP（green fluorescent protein）基因、嘌呤霉素抗性基因的GV358重组慢病毒载体,以50的感染复数（MOI）感染Huh7.5.1细胞。经过嘌呤霉素筛选获得稳定表达人NTCP基因的Huh7.5.1-hNTCP细胞株,并通过Western-blotting验证NTCP蛋白的表达。使用HepAD38细胞来源的HBV感染Huh7.5.1-hNTCP细胞,通过ELISA及qPCR等方法检测HBV感染后不同时间点HBsAg、HBeAg的表达以及HBV DNA的复制。HBV感染后24小时予以HCV-JFH1感染,检测合并感染状态下HBV DNA以及HCV RNA的复制。结果：Western-blotting 结果表明Huh7.5.1-hNTCP细胞株可稳定表达HBV受体NTCP。HBV感染Huh7.5.1-hNTCP细胞后ELASA、qPCR结果显示：HBsAg、HBeAg、HBV DNA合成逐渐增加,并在第9天达峰。HBV/HCV合并感染Huh7.5.1-hNTCP细胞后,qPCR检测结果显示不同时间点HBV DNA、HCV RNA复制逐渐增加。结论:建立了Huh7.5.1-hNTCP细胞模型,该模型可被HBV/HCV合并感染。     

乙型肝炎病毒变异的研究进展

乙型肝炎病毒（HBV）是一种高变异病毒，由于它在复制过程中，必须经过RNA中间体的逆转录复制，在这一逆转录复制过程中。因RNA聚合酶和逆转录酶缺乏校正功能，使病毒基因在复制过程中，可以发生一个核苷酸（点突变）和多个核苷酸的变异。发生变异的病毒常引起其生物学特性的改变，尤其HBV编码蛋白如抗原蛋白等发生变异，可以导致HBV感染发病机制的变化，在诊断和防治中带来一系列新的问题[1]。本文就近期国内外有关HBV变异的研究进展作简要概述。1HBV基因结构及功能HBV结构非常精致，可以最少容量发挥高效功能，核酸链仅有3．2kb…     

前S1蛋白在检测乙型肝炎中的临床意义

乙肝病毒（HBV）是一种嗜肝细胞病毒，我国为病毒性肝炎高发区约10％以上患者转为慢性肝炎，部分演变为肝硬化同时乙肝病毒也是原发性肝癌的诱发因子。前S1抗原和前S2蛋白均和病毒的复制与感染有关。前S1抗原持续存在表明病毒复制，前S1抗原持续阳性提示感染慢性化和疾病处于活动期。因此血清前S1抗原检测可作为免疫清除HBV抗病毒治疗及疾病预后观察指标之一。     

前S1蛋白在检测乙型肝炎的研究进展

乙肝病毒 (HBV)是一种嗜肝细胞病毒 ,自 1970年英国的Dane在患者血清中发现完整的乙肝病毒颗粒以来 ,人们发现乙肝患者血清中有三种形式的病毒颗粒存在 ,并在病毒复制、传染性方面存在差异。 1986年 ,Theilmann等[1 ] ,发现前S1蛋白和HBVDNA有着极为密切的关系 ,指出 ,前S1蛋白可能直接反映病毒活动性复制状态 ,而且前S1蛋白与HBsAg、肝内HBcAg及HBeAg滴度呈正相关[2 4 ] 。前S1蛋白位于病毒颗粒表面。在病毒感染、装配、复制和刺激机体产生免疫反应等方面具有十分重要的作用[5] 。近年来随着国内外免疫分子生物学技术的发展 ,人…     

宫内感染乙型肝炎病毒的新生儿及其母亲HBV基因结构分析

目的：探讨HBV基因变惜民宫内感染的关系。方法：扩增2对发生宫内感染的新生儿及母亲血清中2．5kb HBV DNA，克隆、测序并分析其基因结构。同时用免疫染色法检测孕妇胎盘组织HBsAg。结果：母婴HBV DNA序列中，前S1、前S2和S区都发生突变并且导致相应编码蛋白的氨基酸组成发生改变，其中以前S2区突变率为最高（P＜0．01）；而前C、C区基因只有少数核苷酸发生沉默突变、孕妇胎盘组织各层细胞中均有HBsAg阳性信号。结论：新生儿HBV的细胞源性宫内感染可能主要与HBV突变 有前S／S区的基因变异有关，而前C／C区相对比较保守，未见明显相关。     

乙型肝炎患者血清中HBV—DNA、HVB—M以及ALT和AST的相关性探讨

乙性型肝炎病毒（HBV）属于嗜肝DNA科，主要是通过血液、性接触和母婴传播。HBV复制是靠一个RNA的中间体通过逆转录方式完成。HBV感染的标志物主要有HBV—DNA，HbsAg，抗-HBs，HbeAg，抗-Hbe和抗-HBc等。HBV—DNA的含量是判断病毒复制活跃和具有传染性最为直接可靠的依据，而ELISA法检测的是乙肝病毒基因表达产物和患者的免疫反应产物，只能渐渐提供标本感染HBV的依据。另外，目前认为肝脏的损伤不是HBV直接导致，而是免疫反应所致。因此，本文对1100例标本进行HBV—DNA含量和HBV—M以及AST，ALT测定，探讨它们之间的相关性。     

肝富集转录因子在HBV基因转录与复制中的作用研究

目的观察各种肝富集转录因子对乙型肝炎病毒（HBV）基因转录和病毒复制水平的影响,探讨其在HBV嗜肝性机理中的作用。方法用复制型HBV重组质粒pHBV4．1与肝富集转录因子HNF1、HNF3、HNF4、HNF6、C／EBP或RXRa／PPARa的表达质粒,分别共转染非肝源细胞株NIH3T3、HeLa、293T、SWl353、CV-1和COSl。用Northern吸印杂交检测HBV3．5kb、2．4／2．1kb、0．7kb mRNA的转录情况,Southern吸印杂交检测HBV DNA复制中间体水平。结果用pHBV4．1转染NIH3T3细胞后,在没有肝富集转录因子表达质粒共转染时未能检出3．5kb HBV RNA转录,也无HBV DNA复制;当用肝富集转录因子共转染时,HNF4和RXRα／PPARα的表达能够激活3．5kb HBV RNA转录和HBV DNA复制,而HNF1、HNF3、HNF6和C／EBP未能激活HBV复制。在HeLa、293T、SW1353、CV-1和COS1细胞中,HNF4、RXRα／PPARα对HBV的转录和复制也具激活作用。进一步用突变型HBV重组质粒研究发现,C启动子HNF4结合位点的突变明显减弱了HNF4和RXRα／PPARα对HBV复制的激活作用。结论肝富集转录因子HNF4和RXRα／PPARα可支持HBV在非肝源细胞中的转录与复制;肝特异性基因转录是HBV嗜肝性的决定因素之一。     

乙型肝炎病毒前S抗原的检测及临床意义

目的 :检测不同HBVM模式的Pre S1Ag ,Pre S2 Ag并与HBV DNA相比较 ,探讨二者不同的临床价值。方法 :用ELISA检测标本HBVM ,用ELISA方法检测Pre S1Ag ,用EIA方法检测Pre S2 Ag,用PCR方法检测HBV DNA。结果 :Pre S1Ag阳性率低于Pre S2 Ag,与HBV DNA及HBeAg更接近。在HBsAg、HBeAg、抗HBc阳性模式中阳性占 87.2 9% ,而Pre S2 Ag在恢复期的模式中阳性率较高。结论 :Pre S1Ag比Pre S2 Ag更适合作为HBV复制活跃的指标 ,Pre S2 Ag与HBV也可作为病毒复制指标 ,同时与病毒清除有关。     

乙型肝炎病毒复制对肝癌细胞Arid2基因表达的影响

目的:初步研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染及其复制对肝癌细胞中抑癌基因Arid2(AT-rich interactive domain 2)表达的影响。方法:采用携带HBV基因组1.1倍体的复制型重组腺病毒Ad-HBV1.1感染Huh7细胞,或者四环素诱导的HBV复制细胞模型Hep AD38细胞,观察HBV瞬时或稳定复制细胞模型中Arid2的表达变化;进一步采用HBV各元件乙型肝炎病毒S蛋白(hepatitis B virus S protein,HBs)、乙型肝炎病毒DNA聚合酶(HBV-pol)、乙型肝炎病毒核心蛋白(hepatitis B virus core protein,HBc)、乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)的过表达质粒转染Huh7细胞,明确病毒自身编码蛋白对Arid2表达的调控作用。在上述细胞模型中,运用Southern-blot、ELISA、real-time PCR的方法验证HBV的感染与复制情况,通过RT-PCR、Western blot检测肝癌细胞抑癌基因Arid2表达水平的变化。结果:HBV瞬时转染或稳定复制细胞模型中,Ad-HBV1.1感染的Huh7细胞m RNA和蛋白表达水平明显降低,Western blot结果显示Arid2蛋白表达水平降低了46.10%(P<0.05);在HBV稳定复制的Hep AD38细胞中,Arid2蛋白表达水平降低了37.63%(P<0.05)。转染HBV 4种病毒编码蛋白过表达质粒的Huh7细胞中,过表达HBs、HBx组较其他实验组Arid2表达水平明显降低,Western blot结果显示Arid2蛋白表达水平在HBs组降低了54.55%(P<0.05),在HBx组降低了46.38%(P<0.05)。结论:HBV的感染和复制导致肝癌细胞中Arid2的表达水平下调,Arid2基因的表达与HBV复制水平呈负相关,其中HBs、HBx对Arid2的下调作用较明显。     

乙型肝炎病毒前S抗原,PHSAR检测的临床分析

现已明确HBV基因为环状双股DNA ,长 3.2Kb ,正股不完整 ,呈半环状 ,含 6个开放读码框架 (ORF) ,其中 4个ORF是病毒蛋白的编码区 ,划分为S区 (前S1基因、S2 基因和S基因 ) ,C区 (分前C基因和C基因 ) ,P区和X区 ,分别编码病毒囊膜蛋白 (HBsAg) ,壳体蛋白、复制酶蛋白及X蛋白 ,其中囊膜蛋白 (HBsAg)有前S1蛋白、前S2 蛋白、S蛋白 ,中蛋白和大蛋白等 5种成分。这些蛋白以配体形式与肝细胞膜上的受体相结合而感染肝细胞 ,其中前S1蛋白的 2 14 7氨基酸片段可直接与受体结合 ,而S2 和S蛋白起某种空间辅助作用[1] ,其中前S2抗原 (Pre…     

乙型肝炎病毒前S1抗原/抗体检测的临床意义

<正> 乙型肝炎病毒(HBV)是一种嗜肝组织病毒,HBV感染肝细胞的第一步需侵入肝细胞,然后才能在肝细胞内复制繁殖。现在认为前S蛋白在HBV附着和入侵肝细胞的机理中起重要作用。前S蛋白已作为HBV感染、复制和乙型肝炎患者的诊断、治疗和预后的一个重要标志。现就乙型肝炎病毒患者血清中前S1抗原/抗体(Pre-S1Ag/Ab)与乙型肝炎患者病毒复制和疾病转归的关系进行初步探讨。     

用不同标记的乙型肝炎病毒DNA探针对肝组织内病毒基因进行原位核酸分子杂交

本文报道采用国产[α-(55)~S]dATP及进口[3~H]dNTP与生物素标记HBV DNA全基因探针进行原位核酸分子杂交,均可获得阳性结果。其中[3~H]dNTP标记探针的敏感性与特异性最佳。对6例慢性乙型肝炎患者肝组织切片进行原位核酸分子杂交,结果与肝组织提取物经Southern吸印转移HBV DNA杂交的阳性率完全一致。原位核酸杂交显影后的银颗粒呈灶性分布于肝细胞内,提示病毒在肝内扩散为细胞——细胞间传播方式进行。对1例有复制型HBV DNA的肝癌组织进行原位核酸分子杂交,发现HBV DNA主要分布在光镜下癌细胞旁肝细胞胞浆中,而癌细胞中未测得HBV DNA,其意义有待更多病例数检测后才能阐明。     

期刊文摘

乙型肝炎病毒RNA上La蛋白结合位点缺失对S基因mRNA稳定性的影响[林园园,林菊生,谢娜等.中华肝脏病杂志,2006,14(7):517~520]为探讨乙型肝炎病毒(HBV)RNA上La蛋白结合位点的缺失对S基因mRNA在细胞内稳定性的影响,评价HBV RNA上这个位点对HBV生命周期的重要性,从而寻找新的抗HBV靶点。构建HBV突变载体,使其转录出来的HBV RNA缺失La蛋白结合位点;计算机预测突变后这个位点所在的HBV RNA片段的二级结构,将未突变的HBV载体和HBV突变载体分别瞬时转染HepG2细胞;半定量逆转录聚合酶链反应法检测HBV S基因的mRNA,酶联免疫…     

HBV x基因与肝癌的研究进展

全球约有3.5亿人感染乙肝病毒,乙肝病毒感染是肝脏疾病的主要原因.乙型肝炎病毒( hepatitis B virus,HBV)简称乙肝病毒,是一种DNA病毒,属于嗜肝DNA病毒科,基因组长约3.2 kb,为部分双链环状DNA.HBV基因组有4个开放读码框,分别为S、C、P、X,这四个开放读码框都能与细胞基因组整合,其中HBV x基因(HBx)整合率最高[1].HBx被认为是HBV致肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的重要因素,HBx能调节细胞的多个基因和蛋白,从而影响细胞信号转导、细胞增殖与分化、细胞凋亡、细胞癌变以及癌症转移等,本文就从以上几个方面介绍HBx与肝癌的关系.