一氧化碳气体干燥保存法对小鼠心脏保存效果的实验研究

目的观察一氧化碳（carbon monoxide,CO）气体干燥保存法对同种小鼠心脏异位移植的影响。方法采用C57BL／6雄性小鼠,建立同系小鼠心脏腹部异位移植模型。4—6周龄小鼠60只,分为3组（n=20）,即空白对照组,HTK供体心组及CO供体心组;8～10周龄小鼠40只,分为HTK受体组及CO受体组（n=20）。取HTK供体心组小鼠心脏浸泡于HTK液中;取CO组小鼠心脏悬挂并置于高压气体罐中（PO2：3．2×101．3kPa＋PCO：0．8×101．3kPa=4×101．3kPa）。两组供体心均置于4℃冰箱中保存8h后,分别移植于两受体组小鼠腹部。空白对照组仅取供体心,不做移植术。移植完成后,比较HTK组及CO组复跳时间。移植2h后,对比观察两组移植心脏的颜色及复跳情况。取3组供体心心肌组织,分别采用苏木素伊红染色和TUNEL染色法对比供体心病理学改变及心肌细胞的凋亡情况。结果HTK供体心组6只复跳,CO供体心组13只复跳,复跳率差异有统计学意义[86．7％（13／20）vs.53.3％（7／20）,P=0．027];与HTK供体心组相比,CO供体心组供体心复跳时间显著缩短,差异有统计学意义[（203．92±73．52）s vs．（352．67±61．19）s,P=0．001];病理方面,与空白对照组比较,CO供体心组供体心病理损伤明显,但与HTK组比较明显减轻;Tunel检测显示,CO组凋亡率较空白对照组升高,差异有统计学意义（P〈0．05）;但比HTK组明显减少,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论CO气体保存法可以缩短供体小鼠心脏复跳时间及减少心肌细胞的凋亡,对离体心脏具有显著的保护作用。     

连续灌注不停跳心脏移植对供心的保护作用

目的 通过建立大鼠同种异位供心停跳心脏移植模型与连续血液灌注供心不停跳心脏移植模型,探讨连续灌注不停跳心脏移植对供心的影响.方法 建立大鼠同种异位连续灌注心脏不停跳心脏移植模型（不停跳移植组）和改良Heron法建立大鼠异位心脏移植模型（停跳移植组）.移植成功后2h检测受体外周血肌酸激酶同工酶（CK-MB）和心肌肌钙蛋白I（cTnI）含量,测定供心心肌脂质过氧化终产物丙二醛（MDA）、过氧化物歧化酶（SOD）含量,电镜观察心肌结构变化,并观察心肌凋亡情况.结果 连续灌注心脏不停跳移植组受体外周血CK-MB及cTnI含量低于停跳移植组,差异有统计学意义（P＜0.05）.与停跳移植组比较,不停跳移植组心肌MDA含量相对较少,SOD含量相对较多,心肌细胞凋亡指数较小,差异均有统计学意义（P＜0.05）.不停跳移植组心肌线粒体等结构损伤相对较轻.结论 心脏不停跳技术能有效减轻心脏移植供心的脂质过氧化反应,保护心肌线粒体,抑制心肌细胞凋亡,可减轻心脏移植供心的再灌注损伤.     

9例犬供心超长时间保存后行原位心脏移植体外循环的管理

目的总结9例犬供心超长时间保存后行原位心脏移植的体外循环管理经验。方法供体心脏以冷UW液（3例）或自制保存液（6例）灌注停跳、摘取心脏后保存24 h;在全麻下以标准法或双腔静脉法术式行犬原位心脏植入,体外循环均采用浅低温中流量、中度血液稀释法,以移植心脱离体外循环后,血流动力学稳定（窦性心律、心率≥90次/m in、平均动脉压≥90 mmHg,1 mmHg=0.133 kPa）4 h为手术成功。结果全组体外循环过程顺利,体外循环总时间（180±30）min,升主动脉阻断时间为（130±20）min,后并行时间（60±10）min,供心热缺血时间030 s、冷缺血时间（24±0.5）h。主动脉开放后,3例移植心自动复跳,4例移植心电击复跳,移植心复跳受者手术均成功。死亡2例为实验早期手术操作技巧不当所致。结论除良好的供心保护外,良好的体外循环管理亦是犬心脏移植成功的关键。     

猪供心热缺血移植后对细胞凋亡和Bcl-2、Bax、Fas表达的影响

目的:研究供心常温热缺血后细胞凋亡和Bcl2、Bax、Fas蛋白表达的变化。方法:利用猪原位心脏移植实验方法,猪18只随机分为3组,对照组（C,n=6）灌注低温保护液后切取供心,4℃保存4h;热缺血1组（E1,n=6）常温阻断主动脉缺血5min后,灌注低温保护液后切取供心;热缺血2组（E2,n=6）常温阻断主动脉缺血10min后,灌注低温保护液后切取供心。3组低温保存供心4h后分别行原位心脏移植。供心移植2h后取左心室心肌检测心肌细胞凋亡和Bcl2、Bax、Fas蛋白的表达。结果:供心移植2h后,E1、E2组心肌细胞凋亡显著高于C组（P<0.01）,E2组心肌细胞凋亡显著高于E1组（P<0.01）,Bcl2蛋白表达C组高于E1、E2组（P<0.01）,Bax和Fas蛋白表达C组低于E1、E2组（P<0.01）。结论:供心热缺血移植后的心肌细胞凋亡增加,Bcl2、Bax、Fas参与了凋亡发生。     

冷血停跳加温血诱导、复苏再灌注的心肌保护价值

目的；评价体外循环间断冷血停跳液加温血诱导复苏再灌注在心脏瓣膜置换术中心肌保护的价值。方法：在90例心脏瓣膜置换术中分别采用冷血停跳液加温血诱导复苏再灌注（Ⅰ组）和冷晶体灌注（Ⅱ组），每组各45例，比较其心肌保护疗效。Ⅰ组先用高钾温血停跳液（35℃）诱导心脏停跳。再用冷血低钾停跳液（4－8℃）每15－20分钟灌注1次，保持心肌低温（10℃－15℃），复跳前再用含低钾温血灌注。Ⅱ组应用4℃冷晶体停跳液灌注，每间隔20分钟灌注1次。结果：Ⅰ组心脏自动自动复跳率明显高于Ⅱ组（P＜0．001）；术后应用正性肌力药物剂量及时间明显于Ⅱ组（P＜0．05）；术后低心排症发生率明显低于Ⅱ组（P＜0．05）；在主动脉开放30分钟后Ⅰ组的cTnT,CK-MB及MDA水平升高明显低于Ⅱ组（P＜0．05）。结论：采用冷血停跳液加温血诱导、复苏再灌注技术，可明显减轻心肌再灌注损伤，使术后心功能恢复加快，具有良好的心肌保护作用。     

谷氨酰胺对离体大鼠心脏缺血再灌注损伤的影响

目的研究谷氨酰胺对心肌缺血再灌注损伤时心功能和心肌酶的影响。方法30只sD大鼠取心脏建立Langendorff灌注模型,随机分为三组：（1）对照组（A组,正常灌注90min）;（2）缺血再灌注组（B组,全心缺血30min,复灌60min）;（3）谷氨酰胺组（c组,取心脏前3小时静脉注射谷氨酰胺0．75g/kg,全心缺血30min,复灌60min）。记录三组心脏的血流动力学水平,测定冠脉流出液肌钙蛋白I水平,测定复灌后心肌的热休克蛋白70水平。结果实与缺血再灌注组相比,谷氨酰胺组的左室发展压（LVDP）、左室内压上升/下降速率（±dp/dt）和心率明显增加,左室舒张末期压力（LVEDP）和肌钙蛋白I水平显著降低（P均〈0．05）,谷氨酰胺组热休克蛋白70表达水平显著增加（P〈0．05）。结论谷氨酰胺能改善缺血再灌注损伤大鼠心脏的血流动力学,减轻心肌损伤,这些作用可能与其诱导热休克蛋白70表达相关。     

ICAM-1在兔无心跳供体肺移植术后的表达及意义

将30只拟行肺移植术的大白兔随机分三组,每组5对分别为供受体。一组为有心跳供体肺（HBD组）,另两组供体肺分别为无心跳供体热缺血30 min（NHBD-30组）及60 min（NHBD-60组）;另选15只作为对照组。建立兔无心跳供体左单肺肺移植模型,切除的受体左肺作为对照,采用免疫组化法检测供体肺缺血期间和移植再灌注肺组织内皮细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达水平。结果与HBD组、NHBD-30组比较,NHBD-60组左肺移植再灌注后肺泡区、小动脉区ICAM-1表达明显上调（P〈0.05）;与对照组比较,三组右肺冷保存10 h后无显著差异,与NHBD-60组左肺移植再灌注后比较均有显著差异（P〈0.05）。认为无心跳供体肺短时间热缺血未造成严重肺组织损伤,未能触发ICAM-1表达明显上调;ICAM-1表达上调发生于再灌注期间。     

HTK液与含血停搏液心肌保护效果比较

目的 比较HTK液和含血停搏液在复杂心脏手术中的心肌保护效果。方法40例重症复杂心脏手术患者分为两组。HTK液组（16例）手术中采用HTK液保护心肌；对照组（24例）术中采用常规1：4含血停搏液保护心肌。测定术前、主动脉开放后8h、24h、48h血中肌钙蛋白I（cTnI）和磷酸激酶同工酶（CK-MB）浓度，并比较两组患者术后心脏自动复跳率、正性肌力药物使用率、机械通气支持时间、ICU监护时间等临床指标。结果HTK组和对照组平均体外循环转流时间和主动脉阻断时间无明显差异，术后心脏自动复跳率分别为87．5％、64．6％（P〈0．05）。主动脉开放后8h、24h对照组cTnI和CK-MB均明显高于HTK组（P〈0．05）。两组其余观察指标无明显差异。结论HTK心脏停搏液对复杂重症心脏手术患者的心肌保护作用略优于1：4含血停搏液。     

Celsior液、HTK液和UW液对心脏保存效果的实验研究

目的应用Langendorff灌注模型低温灌注离体鼠心6h,检验器官保存液Celsior液、HTK液和UW液对心脏保存的效果.方法实验分为3组,每组8只Wistar大白鼠.麻醉并抗凝后,快速取下鼠心并悬挂在Langendorff灌注模型上灌注,测定血流动力学基础值.分别用三种器官保存液灌注离体鼠心,在4℃下低温浸泡保存6h.重新复温、复灌,再次测定血流动力学值和冠状动脉流量,留取标本分别测定心肌水含量、心肌酶漏出量、心肌细胞ATP和CP含量和观察心肌细胞超微结构变化.结果①血流动力学恢复率,Celsior液和HTK液组均优于UW液组.②心肌酶漏出量,Celsior液和HTK液组明显低于UW液组.③ATP和CP含量,Celsior液和HTK液组高于UW液组.④超微结构变化,Celsior液组和HTK液组心肌损害最轻,UW液组心肌损害较重.结论Celsior液、HTK液和UW液对心脏保护的效果均较好,均为较合适的心肌保存液.Celsior液和HTK液对心脏保存的效果无显著差异,但均优于UW液.     

牛磺酸对低温保存大鼠心脏的心肌形态和漏出酶的影响

目的研究牛磺酸在心肌低温冷缺血损伤中的保护作用。方法SD大鼠随机分成2组,包括对照组（HTK液保存）,牛磺酸组（HTK液中加15 mmol/L牛磺酸）。利用离体鼠心非循环式Langendorff灌注模式装置,经4℃保存4h后,观察复温再灌时的冠脉漏出液中心肌酶的漏出量,并切取心肌组织做光镜和电镜观察。结果与对照组比较,牛磺酸组能减少心肌酶（乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶及谷草转氨酶）的漏出,减轻线粒体的损伤。结论牛磺酸对心肌的冷缺血损伤具有保护作用。     

左西孟旦对离体大鼠心肌缺血——再灌注损伤的保护作用

目的:观察左西孟旦(Levosimendan,Levo)对离体大鼠心肌缺血—再灌注损伤的保护作用,并探讨其可能保护机制。方法:32只wistar大鼠随机分为四组,每组8只,利用Langendorff离体灌注装置,平衡灌注10min后,I/R组:继续K-H液灌注20min;L1组:30nmol/L Levo续灌20min;L2组:300nmol/LLevo续灌20min;L+G组:300nmol/L Levo和10μmol/L格列苯脲(Glibenclamide)续灌20min。四组均经历全心缺血缺氧30min,然后再用相应的灌注液复灌30min。观察各组LVDP、±dp/dtmax、HR、CF,测定冠脉流出液中心肌酶活性及心肌组织中ATP、Ca2+含量。结果:L2组LVDP、±dp/dtmax、HR、CF、ATP明显优于其他三组,心肌酶及Ca2+含量明显低于其他三组。结论:300nmol/L Levo对离体大鼠心肌缺血—再灌注损伤有保护作用,其可能的机制是开放KATP通道。     

Structural protection of the myocardial capillary endothelium by different forms of cardiac arrest and subsequent global ischemia at 5 degrees C.

BACKGROUND: In transplantation surgery sufficient myocardial protection achieved by cardioplegic cardiac arrest and deep hypothermia is a prerequisite for successful resumption of donor heart function. Intraischemic damage of the endothelium combined with capillary compression may lead to the "no-reflow phenomenon" during reperfusion, resulting in insufficient cardiac resuscibility. METHODS: We evaluated the endothelial ultrastructure after various common forms of cardiac arrest and subsequent ischemia in deep hypothermia. Canine hearts were arrested by aortic cross clamping and surface cooling with Tutofusin' (ACC) or by coronary perfusion with Custodiol (histidine tryptophane ketoglutarate, HTK solution), with University of Wisconsin solution (UW), or with St. Thomas' Hospital solution. After extirpation the hearts were incubated at 5 degrees C in the solution used for cardiac arrest. Myocardial samples were taken immediately after cardiac arrest and after 2h, 4h, 6h, and 10 h of global ischemia. The degree of structural damage was evaluated by a scoring system. Endothelial swelling was determined as the mean barrier thickness of the capillary endothelium. RESULTS: At all selected time points our results show that 1) after cardioplegia with St. Thomas' solution, the degree of endothelial cell swelling was higher than after aortic cross clamping; 2) using HTK or UW solution, the endothelial ultrastructure was better preserved than after aortic cross clamping or using St. Thomas' solution, whereby HTK was slightly better than UW; 3) using UW solution, endothelial cell swelling was a little (up to 10%) but significantly less than after HTK perfusion. CONCLUSIONS: With respect to the intraischemic structural preservation of endothelial cells, UW or HTK solution combined with deep hypothermia promises adequate protection, compared with other clinically used methods tested.     

Captopril improves recovery of adenosine triphosphate during reperfusion of the ischemic isolated rat heart; a 31-phosphorusnuclear magnetic resonance study

Summary The effect of captopril on energy-rich phosphates and pH during normothermic ischemic arrest, hypothermic cardioplegic arrest and subsequent reperfusion was investigated in the isolated rat heart using 31P-nuclear magnetic resonance. The hearts remained in the probe during all perfusion procedures and captopril (80 ml·l^–1) treatment was started directly after cannulation.After normothermic ischemic arrest (15 min), the ATP content of captopril-treated hearts was not significantly different from that of untreated hearts (53±9% and 52±8%, respectively). Accumulation of inorganic phosphate at the end of ischemia was significantly less in treated hearts, suggesting a higher end-ischemic nucleotide content in treated hearts.Hypothermic cardioplegic arrest (St. Thomas' Hospital solution, 4°C) lasted for 3 h at 10°C. Adenosine triphosphate in treated hearts was significantly lower at the end of ischemia; 36±6% compared to 53±9% for untreated hearts.Adenosine triphosphate in untreated hearts recovered to 76±9% after normothermic ischemia and to 72±7% after hypothermic ischemia at the end of 30 min reperfusion. Captopril significantly improved adenosine triphosphate recovery in both treated groups; 89±4% after normothermic and 83±4% hypothermic ischemia.We conclude that captopril has a beneficial effect on recovery of adenosine triphosphate both after normothermic and after hypothermic ischemia.     

转染人热休克蛋白70对同种异体移植心脏移植物血管病的影响

目的探讨经冠状动脉内灌注重组腺病毒载体介导HSP70（Ad．HSP70）转基因治疗对同种异体心脏移植物血管病的影响。方法以套管技术建立颈部异位异种心脏移植模型。基因转移组在体外经冠状动脉缓慢灌注含3．8×10^10VP／mlAd—HSP70的4℃HTK液,持续45min;空白载体组灌注含3．8×10^10VP／ml不携带基因腺病毒空白载体（Ad）的HTK液（B组）;对照组仅灌注无病毒的HTK液（A组）持续同样时间。术后1个月收集移植物组织做检测。组织内目的基因表达产物通过免疫分析、RT—PCR进行半定量分析,免疫组化染色进行定性和定位分析。结果RT—PCR证实,移植物内外源性HSP70基因转录,免疫组化检测证实Ad—HSPT0转染的移植物（C组）HsP70成功转到血管周围的心肌细胞和冠状动脉微血管,HSP70表达水平明显高于其他两组（P〈0．01）。HSP70过量表达减少NF—KB的活化及VCAM-1的表达,HSP70过量表达的移植物内炎症细胞浸润数明显减少,巨噬细胞和NK细胞浸润减少,移植物血管内皮损伤轻。结论经冠状动脉灌注重组腺病毒载体介导保护性自稳蛋白一人热休克蛋白70基因转移到心脏移植物是相当有效可行的,并可减轻移植物冠脉内皮损伤,预防移植物血管病。经冠状动脉灌注重组腺病毒载体介导基因转移在移植物内局部表达有潜力的治疗制剂,此方法具有广阔的临床应用前景。     

腺苷对大鼠离体心脏功能及心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨腺苷预处理对离体灌流大鼠心脏功能及心肌细胞凋亡的影响.方法 将30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、缺血—再灌注（IR）组、腺苷组,各10只.采用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉,同时腹腔注射肝素,麻醉后开胸暴露心脏,快速取出心脏.用Langehdorff离体灌注大鼠心脏K-H液,腺苷组、IR组建立心肌缺血—再灌注损伤模型.对照组灌注时间为120 min;IR组灌注K-H液30min,缺血30 min,K-H液60 min;腺苷组灌注K-H液10 min,给予腺苷20 min,缺血30 min,K-H液60 min.记录实验初始和结束时左室发展压（LVDP）和平均冠脉流量（CSF）,测定心肌组织丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性,TUNEL方法检测细胞凋亡.结果 IR组和腺苷组实验结束时LVDP、CSF低于实验初始（P均＜0.01）;实验结束时腺苷组、对照组的CSF均高于IR组,LVDP水平IR组＜腺苷组＜对照组,P均＜0.05.大鼠心肌组织中MDA水平IR组＞腺苷组＞对照组,P均＜0.01,腺苷组及对照组心肌组织SOD活性高于IR组,P均＜0.01.心肌细胞凋亡率IR组＞腺苷组＞对照组P＜0.01.结论 腺苷预处理能改善离体灌流大鼠心功能,其机制可能与减轻缺血-再灌注损伤和抑制心肌细胞凋亡有关.     

Protective Effect of JTV519, A New 1,4-Benzothiazepine Derivative, on Prolonged Myocardial Preservation

A bstract Background: JTV519 is know to protect cardiomyocytes from calcium overloading-induced damage. The aim of this study was to investigate the potential protective effect of JTV519 on myocardium subjected to prolonged ischemia and the underlying mechanism of such protection. The effect of JTV519 was also compared with that of diltiazem, a 1,5-ben-zothiazepine derivative. Methods: Isolated rat hearts were randomly divided into three groups. Control hearts were arrested with histidine-tryptophan-ketoglutarat (HTK) cardio-plegic solution alone. In the JTV519 group of hearts, cardiac arrest was achieved with JTV519 (10^--³ mmol/L) in the HTK solution. Hearts in the diltiazem group were arrested with diltiazem (0.5 mmol/L) in the HTK solution. All the hearts were then subjected to 6-hour storage in HTK solution at 4°C. Results: After a 30-minute reperfusion, the left ventricular developed pressure in the JTV519 and diltiazem groups were improved significantly compared with the control group. There was a significantly lower left ventricular end-diastolic pressure level and higher recovery of coronary flow in the JTV519 group than in the control group. The postischemic intracellular calcium concentration was attenuated by adding JTV519 or diltiazem to HTK cardioplegia. Conclusion: As an adjunct to cardioplegia, JTV519 showed a significant protective effect on myocardium undergoing 6 hours of ischemia. The beneficial protective effects of JTV519 are correlated with its ability to inhibit the postischemic rise in intracellular calcium.     

HTK液对老年患者心内直视手术中心肌保护的研究

目的 研究HTK液对老年患者心内直视手术中的心肌保护效果.方法 纳入在体外循环下进行心脏手术的60岁以上患者40例,随机分为HTK液组（A组,n=20）和4：1冷晶体含血停跳液组（B组,n=20）.主动脉阻断后,A组使用4℃HTK液,B组使用4℃ 4：1含血停跳液保护心肌,两组分别测定主动脉开放后12 h和24 h血中肌钙蛋白I（cTnI）和磷酸肌酸酶同工酶（CK-MB）浓度,并比较两组患者转机时间、主动脉阻断时间、辅助时间及心脏自动复跳率、心律失常发生率、正性肌力药物使用量、ICU监护时间等临床指标.结果 A组和B组平均体外循环转机时间、主动脉阻断时间、辅助时间及心律失常发生率均无统计学差异（P＞0.05）,但心脏自动复跳率、多巴胺使用量、ICU监护时间以及两个时间的cTnI和CK-MB,A组明显优于B组,差异有统计学意义（P均＜0.05）.结论 HTK心脏停跳液对60岁以上老年人心内直视手术中的心肌保护作用优于4：1冷晶体含血停跳液,特别适用于年龄偏大,病情重,心肌缺血时间较长的患者.     

低温停循环选择性脑灌注在婴幼儿主动脉弓缩窄Ⅰ期根治手术中的应用

目的:总结低温停循环(HCA)结合选择性脑灌注(ASCP)技术在婴幼儿主动脉弓缩窄合并心内畸形手术中体外循环方法。方法:回顾性分析北京安贞医院2009年1月至2010年8月22例婴幼儿主动脉弓缩窄合并心内畸形,行一期主动脉弓重建患者的临床资料。患者年龄平均13个月(16 d～8岁),体质量3～22 kg,平均(7.2±3.1)kg。全部病例温度均降至鼻咽温22.5℃～26.4℃,直肠温度降至24℃～28℃,在手术中所有患者采用HCA,通过无名动脉进行ASCP(20～30 mL/kg)的体外循环方法。心肌保护均采用一次性低温康斯特器官保护液(HTK液)。所有患者均采用术中常规超滤(CUF)及术后改良超滤(MUF)。结果:所有患者均无与体外循环相关的神经系统并发症,无死亡。体外循环时间65～170 min,平均(135±20)min,主动脉阻断时间16～95 min,平均(62±14)min,ASCP时间10～50 min,平均(28±8)min,自动复跳率100%。患儿术后常规镇静,清醒时间6～90 h,平均(44±22)h,机械通气时间8～96h,平均(47.5±20)h,ICU滞留时间1～11 d,平均(4.9±2.5)d,住院时间10～58d,平均(30±11.4)d。结论:在婴幼儿主动脉弓缩窄合并心内畸形主动脉弓重建手术中,应用低温停循环选择性脑灌注的体外循环方法,对于患儿重要器官的保护是安全可行的。