枸杞多糖对实验性高血压妊娠小鼠血压和胎鼠发育的影响

目的:检测枸杞多糖对实验性高血压妊娠小鼠血压和胎鼠发育的影响。方法:提取宁夏枸杞多糖;冷刺激诱导建立孕小鼠高血压模型。将小鼠分为5组:正常妊娠对照组(A组)、冷刺激妊娠组(模型组,B组)、冷刺激+不同浓度多糖组(实验组,C-E组)。C、D、E组分别灌胃给予枸杞多糖5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg,qd×18d;A组、B组相应地给予等量生理盐水,连续饲养18d。妊娠小鼠颈动脉插管记录血压,剖宫检测胎盘、胎鼠重,全长、体长。结果:B组血压显著高于A组(P<0.01),实验组血压与A组比无统计学差异(P>0.05)。B组胎盘、胎鼠重,全长、体长显著低于A组(P<0.01);实验组与A组比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:枸杞多糖对实验性高血压妊娠小鼠有降低血压、保护胎儿发育的作用。     

孕激素对人卵巢癌细胞株H08910细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨孕激素（Ｐ）对人卵巢癌细胞株ＨＯ８９１０细胞体外增殖及凋亡的调控作用。方法 选用人卵巢癌细胞株ＨＯ８９１０进行体外培养,实验组中加入含有同浓度Ｐ的培养液,对照组加入等量空白培养液,采用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率,光学显微镜和透射电子显微镜进行形态学观察,终末脱氧核苷酸转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记法（ＴＵＮＥＬ）计数凋亡细胞,流式细胞仪间     

氯化镧对子宫颈癌HeLa细胞增殖和迁移能力的影响

目的 探讨氯化镧对宫颈癌HeLa细胞增殖和迁移能力的影响,为寻找新的有效治疗宫颈癌的药物提供实验依据.方法 宫颈癌细胞株HeLa细胞经培养、传代后分为两组,即实验组(加入5、50、100 μmol/L的氯化镧)和对照组(未加入氯化镧).倒置显微镜下观察两组细胞的生长情况,激光共聚焦显微镜观察两组细胞核的形态变化.采用四甲基偶氮唑蓝(MTF)比色法检测两组细胞的增殖情况,双染色流式细胞仪检测两组细胞的凋亡率,体外迁移实验检测两组细胞迁移能力的变化,逆转录(RT)-PCR技术检测两组细胞中增殖、抗凋亡和迁移相关基因细胞周期蛋白(cyclinD1)、锌指蛋白(A20)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA的表达.结果 倒置显微镜下观察:实验组细胞随着氯化镧浓度的升高,细胞密度逐渐降低,细胞质内颗粒逐渐增多,颜色加深,细胞间隙增大,少量细胞变圆漂浮,脱落细胞也逐渐增多;而对照组细胞贴壁生长密集,形态清晰,胞质饱满,相邻细胞生长融合成片.激光共聚焦显微镜观察:实验组细胞核染色质浓聚边集,核体积变小,随着氯化镧浓度的升高,核染色质崩解,核膜破裂、核碎裂,直至细胞核完全碎裂;而对照组细胞核饱满,核膜完整.实验组细胞经不同浓度(5、50、100 μmol/L)的氯化镧作用后,细胞生长抑制率分别为24%、51%、78%,高于对照组(0),差异有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡率分别为(4.91±0.39)%、(7.30±0.71)%、(13.48±0.92)%,高于对照组的(0.89±0.11)%,差异有统计学意义(P<0.01);穿膜细胞数分别为(22.2±4.3)、(12.0±3.2)、(7.8±2.6)个,低于对照组的(41.2±5.4)个,差异有统计学意义(P<0.01).实验组细胞中cyclinD1、A20及MMP-9 mRNA的表达强度随氯化镧浓度(5、50、100 μmol/L)的升高逐渐减弱.结论 氯化镧通过下调宫颈癌细胞中增殖、抗凋亡和迁移相关基因cyclinD1、A20及MMP-9 mRNA的表达,抑制宫颈癌细胞的增殖和迁移并诱导其凋亡.     

人巨细胞病毒活动性感染对绒毛细胞增殖活性的影响

人巨细胞病毒是引起胎儿宫内感染的最主要病原体 ,能导致死胎、畸形、胎儿生长受限 (ＦＧＲ)、智力发育落后等严重后果[1] 。我们曾研究发现孕早期人巨细胞病毒宫内感染可引起孕妇生殖内分泌激素的变化[2 ] 。由此推想 ,人巨细胞病毒感染也可能引起孕早期绒毛组织细胞某些功能的改变。增殖细胞核抗原 (ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｃｅｌｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ ,ＰＣＮＡ)ｍＲＮＡ表达水平是细胞增殖状态的标志。本研究通过对孕早期绒毛组织中ＰＣＮＡｍＲＮＡ表达的定量分析 ,旨在探讨人巨细胞病毒活动性感染对绒毛组织细胞增殖活…     

小檗碱对人宫颈癌细胞生物学行为及裸鼠成瘤的影响

目的:研究小檗碱对人宫颈癌细胞生物学行为及裸鼠成瘤的影响。方法:将不同浓度小檗碱(5、20、40mg/L)作用于HeLa及CaSki细胞,MTT法检测HeLa及CaSki细胞的增殖能力;光学显微镜观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;侵袭及迁移实验研究细胞侵袭和迁移能力;Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax及MMP-9表达。显微镜下观察HeLa及CaSki细胞中NF-κB p65蛋白阳性表达情况并计算阳性表达率。建立宫颈癌裸鼠模型,腹腔给予不同浓度小檗碱(10、30、50mg/L),观察裸鼠肿瘤体积变化及肿瘤组织中Bcl-2、Bax、MMP-9、NF-κB p65阳性表达情况。结果:小檗碱对HeLa及CaSki细胞增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性,细胞抑制率随着作用时间及作用剂量的增加而升高。小檗碱促进HeLa及CaSki细胞凋亡、降低细胞侵袭迁移能力。随着小檗碱浓度增加,HeLa及CaSki细胞内Bax蛋白表达量增加,而Bcl-2、MMP-9、NF-κB p65蛋白表达量显著降低。小檗碱能明显降低肿瘤体积,且呈剂量依赖性降低Bcl-2、MMP-9、NF-κB p65蛋白表达,提高Bax蛋白表达。结论:小檗碱能有效抑制宫颈癌增殖及侵袭转移并诱导其发生凋亡,其作用机制可能与降低Bcl-2、MMP-9、NF-κB p65表达及提高Bax表达有关。     

IL-24对宫颈癌细胞株Siha细胞生长和凋亡的影响

目的:利用穿梭质粒pAd track CMV,探讨抑癌基因IL-24对宫颈癌细胞株Siha细胞生长和凋亡的影响。方法:将携带目的基因IL-24的穿梭质粒pAd track CMV转染入体外培养的宫颈癌细胞株Siha细胞,用MTT法检测细胞的生长增殖,用流式细胞术测定细胞周期及凋亡率。结果:经MTT法测定,3组Siha细胞OD值的总体差异有统计学意义(P<0.001),两两比较,IL-24组Siha细胞OD值明显低于空质粒组和阴性对照组(P<0.001),空质粒组和阴性对照组Siha细胞OD值则无明显差异(P=0.100);经流式细胞术测定,3组Siha细胞早期凋亡率的总体差异有统计学意义(P<0.05),两两比较,IL-24组Siha细胞早期凋亡率明显高于空质粒组和阴性对照组(P<0.05),空质粒组和阴性对照组Siha细胞的早期凋亡率无明显差异(P>0.05);与空质粒组和阴性对照组Siha细胞相比,IL-24组Siha细胞G0/G1期细胞增多(P<0.05),S期细胞减少(P<0.05),G2/M期细胞减少(P<0.05),空质粒组和阴性对照组则无明显差异(P>0.05)。结论:IL-24对宫颈癌细胞有抑制生长、诱导凋亡的作用。     

植酸酮对人宫颈癌细胞增殖的影响

目的：研究不同浓度植物提取物植酸酮在不同作用时间对两种宫颈癌细胞系增殖的影响。方法：以培养基稀释植酸酮妇科清洗装置Ⅱ型1号及2号至相应浓度,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测不同药物浓度对宫颈癌HeLa细胞[腺癌,含人乳头状瘤病毒18（HPV18）基因]及Caski细胞（鳞癌,含HPV16基因）不同时间点的增殖抑制率。结果：植酸酮妇科清洗装置Ⅱ型1号及2号试剂对HeLa及Caski细胞增殖的抑制作用具有浓度依赖性和时间依赖性。不同浓度植酸酮妇科清洗装置Ⅱ型1号及2号试剂对HeLa及Caski细胞增殖抑制作用差异有统计学意义（P＜0.05）,细胞增殖抑制率随给药浓度增加作用增强,浓度为5 860 mg/L、5 500 mg/L细胞增殖抑制率最高。同一给药浓度不同作用时间对细胞增殖抑制率差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：植酸酮对宫颈癌细胞系增殖具有抑制作用,可为临床上植酸酮抗HPV治疗宫颈病变及宫颈癌提供理论依据。     

枸杞多糖对生精障碍模型小鼠生精能力作用的研究

目的研究枸杞多糖(LBP)对生精功能和生精干细胞的影响。方法 122只雄性昆明小鼠中随机选取92只,通过35 mg/kg白消安造模,获得生精障碍动物模型,另外30只小鼠为正常对照组。40 d后对造模成功的小鼠随机分为自然恢复组(n=23)和LBP低剂量组(n=16,75 mg/kg)、中剂量组(n=19,150 mg/kg)、高剂量组(n=16,300 mg/kg),连续灌胃给药70 d(小鼠2个生精周期)后进行观察,并与正常对照组进行比较,观察其生理状态和生殖功能变化。结果 LBP在造模动物的外观体征、机能和行为的表现、动物正常发育状态(体质量)、生殖器官组织重量(睾丸、附睾和储精囊、前列腺-会阴复合体)、附睾精子质量、睾丸组织精子生成量、睾丸组织形态学和c-kit表达量、精曲小管直径和空泡化程度、生精上皮厚度和细胞层数、c-kit阳性细胞数、H-score评分、平均吸光度(IA)等系列指标均显示明显高于自然恢复组(P0.05,P0.01),并具有剂量效应关系,但仍未达到正常对照动物的水平。结论 LBP具有明显促进白消安生精障碍模型小鼠的生精能力的作用,可以显著增加生精干细胞、附睾精子质量和睾丸精子生成量。     

细胞凋亡与细胞增殖对重度妊娠高血压综合征的影响

细胞凋亡是自主性的细胞死亡过程，影响着正常妊娠孕卵的着床及胚胎的发育，病理状态下异常的细胞凋亡与多种疾病及妊娠并发症有关^[1]。本研究从细胞存活与凋亡的角度阐述导致重度妊娠高血压综合征(重度妊高征)发生发展的病理生理机制。     

沉默DNA甲基转移酶1基因对子宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 利用RNA干扰技术沉默宫颈癌HeLa细胞中DNA甲基转移酶(DNMT)1基因的表达,探讨沉默DNMT1基因后对HeLa细胞增殖及凋亡的影响.方法 针对DNMT1基因构建短发夹状RNA(shRNA)重组载体pshRNA-DNMT1-A、B和C质粒,并行酶切鉴定和测序分析.采用RT-PCR技术筛选出其中RNA干扰效果最佳的重组载体,通过脂质体介导转染宫颈癌HeLa细胞(转染组),以空载体组(转染空载体pSilencer3.1-H1质粒)和未转染组(未作任何处理)为对照.采用RT-PCR技术和蛋白印迹法分别检测转染前后HeLa细胞中DNMT1 mRNA和蛋白表达的变化,活细胞计数(CCK-8)法和双染法流式细胞术分别检测转染前后HeLa细胞增殖和凋亡的变化.结果 (1)酶切鉴定和测序分析证实,靶向DNMTI的3个shRNA重组载体pshRNA-DNMT1-A、B和C质粒构建成功.RT-PCR技术筛选显示,重组载体pshRNA-DNMT1-B质粒的干扰效果最佳.(2)RT-PCR技术检测显示,转染组转染24、48及72 h时HeLa细胞中DNMT1 mRNA的相对表达水平分别为0.406±0.057、0.191±0.036、0.104±0.015,明显低于空载体组和未转染组(分别为0.520±0.020、0.537±0.041,P＜0.05).蛋白印迹法检测显示,转染组转染24、48及72 h时细胞中DNMT1蛋白的相对表达水平分别为0.197±0.024、0.075±0.015、0.040±0.013,明显低于卒载体组和未转染组(分别为0.273±0.010、0.283±0.016,P＜0.05).(3)CCK-8法检测显示,转染组转染24、48、72、96、120 h时HeLa细胞存活率分别为70.8%、64.8%、51.6%、45.3%、38.0%,分别与空载体组和未转染组各时间点比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).双染法流式细胞术检测显示,转染组转染24、48及72 h时的细胞凋亡率分别为(17.7±1.3)%、(35.3±1.3)%、(47.6±1.6)%,明显高于空载体组及未转染组[分别为(4.9±0.5)%、(5.1±0.7)%,P＜0.05].结论 RNA干扰技术能成功沉默宫颈癌HeLa细胞中DNMT1基因的表达,通过下调DNMT1基因的表达可抑制宫颈癌细胞增殖、促进细胞凋亡.     

槲皮素对宫颈癌细胞SiHa增殖的影响

目的:探讨槲皮素对于人宫颈癌细胞Si Ha的作用及机制。方法:用不同浓度的槲皮素(0、20、40和80μmol/L)处理Si Ha细胞不同时间后(24 h,48 h和72 h),通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力的变化;通过流式细胞仪检测槲皮素对细胞周期的影响;通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测槲皮素对细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达的影响。结果:MTT法检测结果显示,槲皮素处理Si Ha细胞24 h和48 h后,40μmol/L和80μmol/L组的细胞活力低于对照组(P0.05);槲皮素处理Si Ha细胞72 h后,20μmol/L、40μmol/L和80μmol/L组的细胞活力低于对照组(P0.05);在40μmol/L和80μmol/L组,随着培养时间延长,细胞活力较24 h时降低(P0.05)。流式细胞仪检测结果显示,Si Ha细胞经过20、40和80μmol/L浓度的槲皮素分别处理48 h后,处于G0/G1期的细胞百分比明显高于对照组。RT-PCR和Western blotting结果显示,槲皮素可以下调Si Ha细胞中Cyclin D1蛋白的表达。结论:槲皮素通过下调Si Ha细胞中Cyclin D1蛋白的表达,可以抑制Si Ha细胞的活力和增殖。     

红景天苷对宫颈癌HeLa 细胞增殖抑制作用的研究

目的：探讨不同浓度红景天苷对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法：浓度分别为5,50,500 μg/mL的红景天苷体外培养HeLa细胞24 h后,应用噻唑蓝（MTT）法观察红景天苷对HeLa 细胞的生长抑制作用,流式细胞技术及Hoechst核染色法观察各组HeLa细胞凋亡情况,比色法检测凋亡相关因子Caspses-3及Caspase-9的表达。结果：红景天苷能明显抑制HeLa细胞增殖,不同剂量（5,50,500 μg/mL）红景天苷组的细胞存活率[（82.00±3.65）%,（59.33±2.39）%,（54.00±2.61）%]与阴性对照组[（97.33±3.45）%]比较降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;流式细胞技术结果显示,红景天苷低、中、高浓度组凋亡细胞比例分别为（20.53±5.76）%、（32.43±3.53）%和（42.40±3.39）%,与阴性对照组[（1.33±0.95）%]相比升高,差异均有统计学意义（P＜0.01）;Hoechst33258核染色法结果显示,红景天苷能够增加凋亡细胞数量;Caspase活性检测结果显示,红景天苷能增强Caspase-3及Caspase-9表达。结论：红景天苷通过增强Caspase-3及Caspase-9表达抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,诱导其凋亡,提示红景天苷可能在宫颈癌的治疗中具有一定作用。     

宫颈癌中HPA的表达与细胞增殖、血管生成和转移的关系

目的通过对宫颈癌组织中乙酰肝素酶(heparanase,HPA)、细胞核增殖相关抗原Ki-67和微血管密度的检测,探讨HPA在宫颈癌发生发展中的作用。方法采用免疫组化染色(S-P法)检测67例宫颈癌中HPA、Ki-67和CD34的表达,并与13例正常宫颈组织进行对照研究,分析HPA与患者临床特征、Ki-67和CD34之间的关系。结果67例宫颈癌中49例(73%)阳性表达,而正常13例宫颈组织中无一例阳性表达(P=0.000)。HPA与临床分期、淋巴结转移、细胞增殖和血管生成显著正相关(P值分别为0.001、0.012、0.000、0.000)。结论HPA可能在宫颈癌的发展、浸润、转移和血管生成中起重要作用,并与肿瘤细胞的增殖活性有关,可作为临床预测宫颈癌浸润转移的一个重要参考指标和有价值的治疗靶点。     

精原干细胞在支持细胞饲养层上的长期增殖特征

目的:建立体外研究精原干细胞与支持细胞共培养的细胞模型,探讨体外精原干细胞在支持细胞层上的增殖特点。方法:应用两步酶消化法,分别从12-15d及6d龄昆明小鼠睾丸中分离支持细胞及精原干细胞,并用免疫细胞化学方法鉴定。将精原干细胞接种在支持细胞层上,观察不同时间点精原干细胞形成的细胞集落形态及数目。结果:精原干细胞与支持细胞层共培养24h,开始增殖分裂,呈双细胞形态。随着培养时间延长,双细胞集落数逐渐减少,而链状细胞集落逐渐增加。培养120h后,链状细胞局部融汇堆积,且细胞集落维持在相对稳定数量。在每4-5d更换培养液的条件下,细胞集落维持稳定状态的平均时间为51.2±5.8d。结论:精原干细胞在体外支持细胞层上呈集落样生长,并能长时间维持细胞集落形态及数目,这为体外研究药物或毒物干扰精原干细胞功能提供了细胞模型。     

沉默MMP-2对人宫颈鳞癌SiHa细胞生物学行为的影响

目的:研究基质金属蛋白酶2(MMP-2)对人宫颈鳞癌SiHa细胞增殖、迁移、侵袭及裸鼠成瘤能力的影响。方法:分别用MMP-2沉默慢病毒感染人宫颈鳞癌SiHa细胞(MMP-2-LV组)、空载慢病毒感染人宫颈鳞癌SiHa细胞为阴性对照组(NC-LV组)。转染后采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)观测MMP-2 mRNA的表达,蛋白质印迹(Western blotting)检测MMP-2蛋白的表达,流式细胞技术、Transwell侵袭、迁移和CCK-8细胞增殖实验观测MMP-2对细胞凋亡、侵袭、迁移和细胞增殖的影响,在裸鼠上构建移植瘤模型观测MMP-2对小鼠皮下成瘤能力。结果:转染后,与NC-LV组比较,MMP-2-LV组细胞MMP-2 mRNA和蛋白的表达量较低(P<0.05),增殖能力降低(P<0.01),侵袭、迁移能力降低(P<0.05),而细胞凋亡率升高(P<0.05)。裸鼠成瘤实验显示,接种MMP-2-LV组细胞的裸鼠皮下成瘤体积小于接种NC-LV组细胞的裸鼠皮下成瘤体积(P<0.01)。结论:沉默MMP-2可抑制SiHa细胞增殖、侵袭及迁移能力并促进其凋亡,MMP-2可能是宫颈鳞癌的潜在诊疗靶点。     

顺铂对小鼠宫颈癌局部CD8~+T细胞的影响及可能机制

目的:探讨顺铂对小鼠宫颈癌局部CD8~+T细胞的影响及可能机制。方法:建立TC-1肿瘤细胞C57BL/6小鼠模型,分为对照组(4只)和顺铂组(4只),对照组给予磷酸盐缓冲溶液(PBS)100μl,顺铂组给予顺铂5 mg/kg,两组均腹腔注射,3天1次,共2次。免疫组化方法检测两组肿瘤组织中CD8阳性T细胞(CD8~+T)、程序性凋亡配体1(PD-L1)的表达,并对小鼠宫颈癌组织中CD8~+T细胞与PD-L1表达的相关性进行分析,同时采用流式细胞仪检测并比较两组脾单核淋巴细胞中CD4~+CD25~+T调节细胞(Treg)数量比例。结果:①顺铂组模型小鼠宫颈癌组织中CD8~+T表达的MOD值为3.24±0.39明显低于对照组4.70±0.28,差异有统计学意义(P0.05);顺铂组PD-L1表达的MOD值为7.65±1.82高于对照组2.89±0.70,差异有统计学意义(P0.05)。②小鼠肿瘤组织中CD8~+T细胞与PD-L1表达呈负相关(r=-0.61,P0.05)。③顺铂组小鼠脾脏内单核淋巴细胞中Treg细胞数量(71.50±4.04)%低于对照组(87.00±6.06)%,差异有统计学意义(P0.05)。结论:顺铂可增加宫颈癌组织PD-L1表达,减少宫颈癌组织局部CD8~+T细胞数量,抑制机体免疫内环境,并且顺铂对机体免疫的抑制作用可能并不来源于对Treg细胞的影响。应用PD-L1抗体阻断顺铂诱发的PD-L1表达可能可促进顺铂的化疗效果。     

青藤碱与卡铂对宫颈癌Hela细胞增殖的协同抑制研究

目的:研究选择性环氧合酶-2(COX-2)押制剂青藤碱(sinomenine,SIN)对宫颈癌Hela细胞生长的影响及其与卡铂联合对宫颈癌Hela细胞的协同抑制作用,初步探讨SIN在宫颈癌中的作用机制.方法:MTT法检测SIN及其与卡铂联合对宫颈癌Hela细胞增殖的影响;流式细胞仪检测处理后宫颈癌Hela细胞周期及凋亡的变化.结果:SIN以时间和剂量依赖性特点抑制宫颈癌Hela细胞的增殖,其与卡铂联合对宫颈癌Hela细胞的增殖具有协同抑制作用.流式细胞仪细胞周期分析表明,SIN处理组G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少;卡铂处理组结果相反.细胞凋亡分析表明,SIN处理组细胞凋亡率较对照组升高,呈时间和剂量依赖性特点;两药联合处理组细胞凋亡率较单药处理组升高.结论:SIN以时间和剂量依赖性抑制宫颈癌Hela细胞的增殖,其作用机制与改变细胞周期分布、促进细胞凋亡有关.SIN与卡铂联合对宫颈癌Hela细胞的增殖具有协同抑制作用,其机制可能与共同影响细胞周期分布、促进细胞凋亡有关.