PCR检测细菌16s rRNA基因在临床感染性疾病诊断中的应用

目的 建立检测临床常见细菌16 s rRNA基因的PCR方法.方法 分析细菌16 s rRNA基因保守区,设计通用引物对7种常见细菌16 s rRNA基因进行PCR扩增;并用该方法检测临床血液标本中的16 s rRNA基因表达,与传统培养方法结果进行比较.结果 7种标准菌株均出现特异阳性条带;感染性疾病血液标本16 s rRNA基因阳性表达.结论 16 s rRNA基因PCR法可用于快速检测临床细菌感染.     

分枝杆菌菌种鉴定DNA微阵列的初步研究与应用

目的制备快速鉴定分枝杆菌菌种的DNA微阵列。方法根据19种分枝杆菌标准株的16SRNA序列设计寡核苷酸探针,制备DNA微阵列,通过反向杂交技术鉴定19种分枝杆菌标准株、9种非分枝杆菌标准株和31株分枝杆菌临床分离株带荧光标记的PCR产物。结果该DNA微阵列与9种非分枝杆菌标准株不杂交,具有分枝杆菌特异性;可将19种分枝杆菌标准株鉴定到群或种,具有较高的分枝杆菌种特异性。应用PCR-SSCP分枝杆菌初步菌种鉴定方法对31株分枝杆菌临床分离株进行初步的鉴定,9株为结核分枝杆菌复合群和22株为非结核分枝杆菌。应用DNA微阵列进一步进行菌种鉴定,9株与探针a杂交阳性,为结核分枝杆菌复合群;2株与探针c杂交阳性,为胞内分枝杆菌;8株与探针d杂交阳性,为堪萨斯分枝杆菌或瘰疬分枝杆菌或猿猴分枝杆菌或胃分枝杆菌;1株与探针k杂交阳性,为戈登分枝杆菌;2株与探针p杂交阳性,为龟分枝杆菌脓肿亚种;2株与探针r杂交阳性,为偶然分枝杆菌;1株与探针s杂交阳性,为草分枝杆菌;2株与探针a和p杂交阳性,为结核分枝杆菌和龟分枝杆菌脓肿亚种复合感染株;1株与探针a和r杂交阳性,为结核分枝杆菌和偶然分枝杆菌复合感染株;3株与该芯片杂交阴性。2株临床分离株经基因测序也证实DNA微阵列鉴定的特异性。结论该DNA微阵列有可能简便、快速、准确地     

淋球菌L型的诱导与基因鉴定

用非高渗透压培养基培养具有多重耐药性的淋球菌菌株，观察其在培养基内自发或在抗生素作用下Ｌ型的形成情况以及淋球菌稳定Ｌ型的基因鉴定方法，探讨淋球菌Ｌ型的形成条件，生物学特性以及与慢性淋病的关系及其病原学诊断的问题。结果表明，淋球菌的多重耐药性菌株在不含血清的非高渗透压液体培养基内能够良好生长，并且能够自发形成Ｌ型或在高浓度羧苄青霉素的作用下形成Ｌ型。淋球菌Ｌ型的形态高度不规则，体积巨大但能够通过０．     

PCR技术在亲子鉴定中的应用

目的 将ＰＣＲ技术运用于亲子鉴定,改进亲子鉴定的方法,以提高亲子鉴定的水平。方法 采用ＣＳＦＩＰＯ、ＴＨＯＩ、ＴＰＯＸ,ｖＸＦ４０ＩＶＳ位点进行ＤＮＡ扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳分离及银染显带分型。结果２９例亲子鉴定案,有２０例不能排除父子关系,其中１４例的ＲＣＰ值≥９９．７３％,得到肯定父子关系的结论,认定率为８７．５％。结论 与血型系统遗传标记鉴别能力相比较,ＤＮＡ技术检测的遗传标记其鉴别,认定能     

逆转录PCR扩增杂交瘤细胞内特异性免疫球蛋白重链可变区基因

目的 利用细胞内逆转录PCR技术扩增杂交瘤细胞内的特异免疫球蛋白重链可变区基因片段，方法 用10%甲醛溶液固定杂交瘤细胞，以NP-40渗透化处理细胞后做逆转录PCR。结果 获得了大约350bp的特异性免疫球蛋白重链可变区基因片段，与用同一对引物得到的常规逆转录PCR扩增产物一致。结论 此方法操作简便，效率高，可用于获得特定结构基因片段，连接并扩增嵌合蛋白基因及构建多克隆免疫球蛋白文库等。     

人SRY基因核心序列的扩增和分析

根据人ＳＲＹ基因序列，设计合成一对引物，在男性ＤＮＡ中特异扩增一条４２２ｂｐ的ＤＮＡ片段，而女性中无任何扩增带出现，进一步将该片段克隆，限制性内切酶分析和测试表明，扩增片段就是ＳＲＹ基因的保守区，随后利用其作探针进行分子杂交，在男性ＤＮＡ中获得一个约１２ｋｂ的带，与文献相一致，因此，利用该引物或克隆片段，在临床上可用于性宫锁遗传病的产前诊断和性分化异常个体的研究。     

一株产广谱细菌素乳酸菌S3菌株的菌种鉴定

乳酸菌广泛分布于自然界,细菌素是由某些细菌通过核糖体合成机制产生的一类具有抑菌生物活性的蛋白质,抑菌范围不仅仅局限于同源的细菌,产生菌对其细菌素有自身免疫性。当革兰阳性菌产生的羊毛硫抗生素乳链菌肽(nisin)被科研人员发现并被认为可作为天然防腐剂以替代化学防腐剂应用在     

PCR检验法和细菌培养法在阴道细菌检验中的效果对比

目的 分析在阴道细菌检验中选用聚合酶链反应(PCR)检验法和细菌培养法两种手段所呈现出的不同效果。方法 50例阴道细菌感染性疾病患者,分别进行PCR检验法、细菌培养法检验,对比两种检验方式的阳性检出率、各病原菌阳性检出率、患者认可度。结果 PCR检验法阳性检出率88.00%高于细菌培养法的62.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。PCR检验法对加特纳菌的阳性检出率为59.09%,高于细菌培养法的35.48%,差异有统计学意义(P<0.05)。两种检验方式对棒状杆菌、肠球菌阳性检出率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。患者对PCR检验法的总认可度为98.00%,高于细菌培养法的76.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 在阴道细菌检验中选用PCR检验法相较于细菌培养法的检验效果更佳,尤其是在加特纳菌检验中效果突出,可为临床诊治提供重要参考依据,值得推广使用。     

PCR技术在医学检验中的应用现状

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)又称体外基因扩增技术或DNA扩增技术。自1985年美国PE-Cetus公司的Mullis等首创PCR技术以来，它以惊人的速度被广泛应用于医学及分子生物学等各个领域。现今，PCR技术已成为一种对标本中特定的DNA片段进行分析研究和检测鉴定的重要方法。近20年来PCR技术在生物医学等各个研究领域和临床应用中发挥了重大的作用，在病原体鉴定、遗传病诊断、免疫学研究、癌基因探索及治疗等方面都作出了相应的贡献。     

PCR在结核性脑膜炎病原诊断中的应用

ＰＣＲ在结核性脑膜炎病原诊断中的应用山西省儿童医院（０３００１３）张镁硒原慧云刘克战山西医学院张惠丽李亚蕊对１９９０年至１９９３年入院的４２例结核性脑膜炎（ＴＢＭ）脑脊液检查使用多聚酶链反应（ＰＣＲ）方法，认为快速、敏感、特异性强，与其它病原检测及生...     

16S rRNA基因及多重聚合酶链式反应在新生儿败血症早期诊断中的应用研究

目的分析16S rRNA基因聚合酶链式反应(PCR)检测方法及血培养方法检测疑似新生儿败血症患儿血标本中潜在病原菌的病原学特点,并以此为基础建立一套适用于临床的可检测新生儿败血症常见菌株的特异性引物多重PCR体系。方法建立16S rRNA通用引物PCR检测方法并检测534例疑似新生儿败血症患儿血标本,分析其病原学感染及特点,与常规血培养检测结果进行比较。建立适用于临床的可检测新生儿败血症常见菌株的特异性引物多重PCR体系。结果 534例血标本的血培养阳性率为26%,经鉴定为凝固酶阴性葡萄球菌(44.6%)、大肠埃希菌(14.4%)、无乳链球菌(8.6%)、金黄色葡萄球菌(7.9%)、肺炎克雷伯菌(5.8%)、屎肠球菌(4.3%)、其他菌株(14.4%)。16S rRNA通用引物PCR检测阳性率为37.6%,显著高于血培养检测(P<0.05)。经优化的多重PCR体系可快速准确检测败血症常见菌种。结论 16S rRNA基因PCR方法用于新生儿败血症的检测具有较高的检出率,可用于临床新生儿败血症的快速诊断。本研究初步建立的败血症常见致病菌特异性引物多重PCR体系具有一定的临床应用价值。     

应用PCR直接检测21羟化酶基因缺失

目的：探讨用ＰＣＲ技术检测２１羟化酶缺陷的临床意义。方法：对３２例先天性肾上腺皮持财产一症（ＣＡＨ）患儿,应用ＰＣＲ技术直接检测２１羟化酶Ｂ基因（功能基因）。结果：发现３例第３、第６外显子３００ｂｐ,６００ｂｐ小片段均缺失,３例仅３００ｂｐ缺失,另外３名仅６００ｂｐ缺失结论：用ＰＣＲ技术直接检测２１－ＯＨＤ方法简便,结果可靠,可直接区分Ａ、Ｂ的基因,不需使用限制性内切酶。     

PCR／RFLP用于黑龙江立克次体的鉴定

为探讨应用聚合酶链反应／限制性片段长度多态性图谱分析(PCR／RFLP)用于立克次体鉴定的高效性和特异性，将PCR／RFLP用于2株黑龙江立克次体的鉴定，并与以往其它鉴定黑龙江立克次体的分析结果作比较。结果表明，结论一致，均可鉴定出黑龙江立克次体为斑点热群立克次体的一新种。结论：PCR／RFLP以其简便、可信，采用菌体少等优点．适合在实验室进行立克次体研究时广泛应用。     

PCR定量分析ERCC2的基因在人肿瘤细胞中的表达

核苷酸切除修复交叉互补（ＥＲＣＣ２）基因是核苷酸切除修复（ＮＥＲ）系统中的重要成员，被认为可能与某些肿瘤的发生和肿瘤耐药有关，由于ＥＲＣＣ２基因的在肿瘤标本中的表达甚低，定量分析困难，故改良逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）建立双管ＥＲＣＣ２表达的定量方法，对１６株人肿瘤细胞进行定量分析，三批实验间的误差甚小，本定量方法可靠，准确，能对０．２５ｐｇＤＮＡ基因表达定量，适用于对ＥＲＣＣ２基因表达     

重组酶介导扩增技术与传统聚合酶链反应技术在甲状腺癌DNA甲基化检测中的应用比较

目的 建立重组酶介导的核酸扩增(RAA)技术特异性检测DNA甲基化的新方法并与传统的DNA甲基化特异性PCR(MSP)方法进行比较.方法 选取OXTR基因作为目的基因,提取样品外周血基因组DNA,经亚硫酸氢盐修饰后分别以MSP和RAA技术进行特异性检测DNA甲基化实验.结果 2种技术皆能扩增出OXTR非甲基化条带,而RAA技术成功扩增OXTR甲基化条带.结论 RAA是一种新型的等温体外核酸扩增技术,实现了在37℃恒温下的核酸快速扩增,可成为替代MSP乃至其他PCR实验的新方法.     

金黄色葡萄球菌肠毒素A基因全序列的克隆、鉴定与扩增

目的 克隆SEA基因作为后续基因治疗的目的基因。方法 以金黄色葡萄球茵基因组DNA(ATCC-13565)为模板,以金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因特异性引物为介导，采用普通PCR和降落PCR方法分别克隆SEA基因全序列，克隆入T载体后进行DNA测序。结果 2％琼脂糖凝脂电泳和DNA测序证实该基因克隆成功。结论 通过PCR方法，可以获得后续实验所需的SEA基因。     

16S rRNA/ITS基因序列分析与微生物分类鉴定及其在药品微生物质量控制中的应用

经典的微生物鉴定有赖于微生物的纯培养,其在一些难培养、生长缓慢或需要特殊营养的微生物鉴定方面有明显的局限性。全自动细菌鉴定及药敏分析系统和基质辅助激光解离飞行时间质谱对微生物鉴定属表型鉴定,严重依赖仪器生产厂商提供的数据库,对类型多样的环境微生物的鉴定分型有明显缺陷。基于遗传物质的分子生物学鉴定技术为微生物的准确鉴定及分型提供了新的思路。16S rRNA/ITS遗传信息具有相对稳定性和易变异的双重特点,不依赖于微生物的营养及生长状态,在微生物的鉴定、分型中得到广泛应用。微生物是影响药品质量的重要因素,而药品微生物控制是药品质量控制的重要方面。本文对16S rRNA/ITS序列与微生物鉴定、分型及其在药品微生物质量控制领域中的应用进行综述,为相关工作提供参考。     

降钙素原在新生儿血流感染细菌鉴定中的应用价值

目的　探讨降钙素原（PCT）在新生儿血流感染细菌鉴定中的应用价值。方法　选取2019年1月至2021年12月在济宁医学院附属滕州市中心人民医院接受治疗的198例新生儿血流感染为研究对象,进行回顾性分析,根据血培养结果,分为革兰阴性菌组（86例）和革兰阳性菌组（112例）,同时选取90例血培养阴性患儿为对照组。革兰阴性菌组男45例、女41例,日龄（15.15±2.63）d;革兰阳性菌组男58例、女54例,日龄（15.35±2.41）d;对照组男47例、女43例,日龄（15.65±2.78）d。对3组PCT、C反应蛋白（CRP）、白细胞计数（WBC）水平进行检测与比较,观察检出菌构成比及相应血清PCT水平,同时比较革兰阴性菌组与革兰阳性菌组血清PCT水平分布情况。采用F检验、χ²检验。结果　革兰阴性菌组和革兰阳性菌组PCT［（7.53±1.93）μg/L、（2.91±0.83）μg/L］、CRP［（37.32±16.61）mg/L、（30.73±15.94）mg/L］、WBC［（17.23±3.43）×10⁹/L、（15.53±3.12）×10⁹/L］水平均高于对照组［（0.07±0.02）μg/L、（9.32±3.35）mg/L、（8.54±2.37）×10⁹/L］,差异均有统计学意义（均P<0.05）;革兰阴性菌组PCT水平高于革兰阳性菌组［（7.53±1.93）μg/L比（2.91±0.83）μg/L］,差异有统计学意义（P<0.05）。PCT检测诊断新生儿血流感染的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及约登指数分别为94.44%、92.22%、96.39%、88.30%、86.67%,均高于CRP和WBC,差异均有统计学意义（均P<0.05）。血培养检出菌以大肠埃希菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌为主,分别占41.86%（36/86）、38.39%（43/112）、27.91%（24/86）;PCT水平最高为肺炎克雷伯菌感染新生儿［（11.21±3.32）μg/L］,其次为大肠埃希菌感染新生儿［（9.32±3.43）μg/L］。革兰阴性菌组与革兰阳性菌组PCT分布差异有统计学意义（P<0.05）。结论　PCT在新生儿血流感染细菌鉴定中的应用价值较高,可用于鉴别细菌感染类型,为早期诊断和治疗提供依据。     

浅谈聚合酶链反应在输血医学中的应用

聚合酶链反应简称--PCR技术.是近年来发展的一种体外高效扩增特异DNA或RNA序列的新技术，1985年由美国cetus公司创建以来,很快就成为分子生物学发展史上的又一里程碑，目前,我国仅有部分大、中型医院在开展此项工作，但由于技术操作工程较复杂,成本也较高.无法用于输血工作中对献血员的筛选，现就PCR技术在现代输血中的主要作用进行以下几方面的简述。