waaF空肠弯曲菌变异株神经节苷脂表位的改变

目的:探索waaF空肠弯曲菌(CJ)变异株是否失去神经节苷脂模拟结构,不再能诱导抗神经节苷脂抗体产生,为CJ诱发Guillain-Barr啨综合征的分子腄饫砺厶峁┲ぞ荨7椒?将26只日本大耳兔随机分为CJ亲代株组(10只)、waaF变异株组(10只)、对照组(6只),分别用弗氏佐剂加入亲代株CJ、waaF变异株及生理盐水,对三组动物皮下注射免疫。ELISA动态检测三组动物免疫前及免疫后2周和4周血清中CJ脂寡糖(LOS)及多种神经节苷脂(GM1、GD1a、GD1b、GD3、GT1b)抗IgG抗体水平的变化。结果:免疫后2周,亲代株及waaF变异株组动物血清抗LOS-IgG抗体滴度(0.758±0.136及0.744±0.125)较免疫前(0.250±0.101及0.226±0.083)明显增高(P0.05),4周进一步增高为(0.971±0.214及0.975±0.172),亲代株及waaF变异株两组间无明显差异(P0.05),对照组免疫前后LOS-IgG抗体水平无明显改变;免疫后2周,亲代株组动物血清抗GM1-IgG、GD1a-IgG及GT1b-IgG抗体水平(0.661±0.290、0.487±0.041及0.457±0.071)较免疫前(0.173±0.081、0.151±0.038及0.182±0.101)明显增高(P0.05),4周进一步增高为(0.984±0.025、0.541±0.178及0.574±0.156),waaF变异株组及对照组免疫后未见神经节苷脂抗体增高。结论:CJ的LOS外核上神经节苷脂样结构是诱导抗神经节苷脂抗体产生的关键结构,为CJ感染后GBS的分子模拟机制提供证据,waaF变异株丧失了多种神经节苷脂模拟的抗原表位,但保留LOS免疫原性,可能成为安全减毒活菌苗的候选株。     

格林-巴利综合征相关空肠弯曲菌flaA基因的克隆及序列特征

近年来研究发现，空肠弯曲菌感染与部分格林一巴利综合征（Guillain-Barre syndrome，GBS）发病密切相关。空肠弯曲菌引起GBS的发病机制非常复杂，由于GBS常发生于少数几种特殊血清型的空肠弯曲菌感染，提示这些空肠弯曲菌可能具有某种独特的毒力特征，而这种毒力特征与引起GBS有关。空肠弯曲菌的鞭毛是其一个重要的毒力因子，在空肠弯曲菌感染的致病机制中起重要作用。鞭毛微丝由两个高度同源的基因flaA和flaB编码，     

空肠弯曲菌的神经节苷脂模拟结构诱导日本大耳兔发生周围神经传导阻滞

目的：探索空肠弯曲菌（CJ） 外膜上神经节苷脂样结构是否为诱导周围神经传导阻滞的关键抗原结构,为CJ诱发吉兰-巴雷综合征（Guillain-Barré,syndrome,GBS）的分子模拟理论提供证据.方法：利用CJ亲代株（含神经节苷脂样结构）及waaF变异株（缺失神经节苷脂样结构）作为抗原,进行对照研究.将26只日本大耳兔随机分为CJ亲代株组（10只）、waaF变异株组（10只）及对照组（6只）,分别用亲代株CJ、waaF变异株及免疫佐剂,对三组动物进行全身免疫.于免疫前及免疫后第4、8周进行神经电生理检查,观察坐骨神经复合肌肉动作电位（CMAP）、坐骨神经运动传导速度（MCV）、F波出现率的变化.结果：神经电生理检查显示：免疫后第4周,亲代株组动物坐骨神经CMAP波幅较免疫前明显降低,差异显著 （P〈 0.05）;第8周时CMAP波幅较第4周进一步下降;变异株组动物坐骨神经CMAP波幅在第4周及第8周时与免疫前比较无明显差异;三组动物坐骨神经MCV在免疫前、免疫后第4及第8周比较差异均无显著意义（P〉 0.05）;免疫后亲代株组动物坐骨神经F波出现率减少,而变异株组无明显改变.结论： CJ外膜上神经节苷脂结构可诱导动物轴索型周围神经传导阻滞,支持CJ感染相关轴索型GBS的分子模拟发病理论.     

neuB1基因失活空肠弯曲菌突变株的构建及其临床意义

目的构建唾液酸合成酶基因1（neuBl）失活、脂多糖（LPS）中唾液酸（SA）缺失的空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni，Cj）O：19突变株，以确认Cj LPS中，含SA基团的终端GM1样结构在Cj相关格林．巴利综合征（GBS）发病机理中的关键作用。方法从已有neuB1基因失活的Cj肠炎相关菌株O：2 DNA中，将含卡那霉素抗性基因（Km^R cassette）的neuB1突变片段——neuB1：：Km^R克隆到pGEM-T载体，形成突变载体pGEM-neuB1：：Km^R，进一步转化到与GBS相关的Cj O：19野生株，获得Cj O：19突变株，行PCR和RT-PCR鉴定。SDS-PAGE分析Cj LPS，过碘酸-间苯二酚和酸性茚三酮反应法分别检测Cj LPS中SA。霍乱毒素B亚单位（CTB）结合反应检测Cj菌体裂解物及LPS中神经节苷脂GM1模拟结构。最后以突变株及其同源野生株LPS为抗原分别免疫豚鼠，第5周取坐骨神经原纤维分离。结果neuB1基因突变片段——neuB1：：Km^R成功克隆到pGEM-T载体中，进而构建得neuB1基因失活的Cj突变株。后者LPS已丧失SA基团且不能与CTB结合，表明其菌体裂解物和LPS中已不存在GM1模拟结构。野生株LPS免疫组中，17．3％的坐骨神经原纤维发生免疫性损伤，明显高于PBS对照组（1．6％）和突变株LPS免疫组（2．4％）；而突变株LPS免疫组与PBS对照组间差异无统计学意义。结论成功构建neuB1基因失活的Cj O：19突变株，其LPS已缺失野生株所具有的SA基团及与GM1的分子模拟特性，且不能再诱导活体动物的周围神经免疫性损伤，有力证实了关于Cj LPS诱发GBS的分子模拟推论，SA是该交叉免疫反应中抗原的重要成分。