慢性肾功能衰竭大鼠下丘脑组织和血浆食欲素A及神经肽Y水平的变化及其意义

目的　探讨大鼠慢性肾功能衰竭 (CRF)动物模型的下丘脑组织和血浆食欲素A及神经肽Y(NPY)水平的变化及其意义。方法　将 41只 2 0 0～ 2 50 g雄性Wister大鼠分为 :正常组、假手术组和CRF组。术后 4、 8、 1 2周分批断头处死大鼠 ,取血浆和下丘脑组织标本。用放射免疫法测定血浆和下丘脑组织食欲素A和NPY。用生化自动分析仪测定血清肌酐。结果　CRF大鼠术后4、 8和 1 2周血肌酐水平均高于假手术组。其术后 1 2周的血浆食欲素A水平高于假手术组 (2 64pg/ml± 62pg/mlvs 1 83pg/ml± 56pg/ml,P =0 0 39)。CRF大鼠术后 1 2周的下丘脑食欲素A水平明显低于假手术组 (1 0 5fmol/mg± 2 7fmol/mg湿重vs 1 7 4fmol/mg± 3 9fmol/mg湿重 ,P =0 0 2 3)。CRF大鼠术后 8周 (7 1 pmol/ml± 1 7pmol/mlvs 5 0 pmol/ml± 0 5pmol/ml,P =0 0 1 )和1 2周 (7 9pmol/ml± 1 1pmol/mlvs 4 8pmol/ml± 1 1 pmol/ml,P =0 0 0 0 8)的血浆神经肽Y水平高于假手术组 ,其术后 1 2周的下丘脑神经肽Y水平明显低于假手术组 (70fmol/mg± 2 3fmol/mgvs1 1 3fmol/mg± 31fmol/mg湿重 ,P =0 0 33)。 结论　 (1 )CRF大鼠血浆食欲素A和NPY水平有逐渐增高趋势 ,肾功能减退可能导致食欲素A和NPY排泄障碍。 (2 )CRF时下丘脑组织食欲素     

增食欲素受体1在营养性肥胖大鼠肾上腺皮质中的表达及意义

 目的探讨营养性肥胖大鼠肾上腺皮质组织中增食欲素受体1（OX1R）的表达规律,以及下丘脑增食欲素（orexin）系统对其调节作用。方法高脂饮食诱导构建并评估营养性肥胖大鼠动物模型;免疫组化法检测肾上腺皮质组织中OX1R 的表达;侧脑室注射orexin 反义的硫代磷酸化鄄脱氧寡核苷酸（OX鄄PS鄄ODNs）干预下丘脑增食欲素系统,分析肾上腺皮质中OX1R 的变化规律。结果大鼠高脂膳食饲养8 周后,营养性肥胖组大鼠体质量、体脂含量、Lee忆s指数、血糖、胰岛素、甘油三酯、总胆固醇高于对照组（ < 0.05）。OX1R的蛋白表达定位于大鼠肾上腺皮质束状带细胞的细胞质中;与正常对照组相比,营养性肥胖大鼠
肾上腺皮质中的OX1R的表达升高（ < 0.05）,且OX1R的表达量与Lee忆s 指数、血糖、胰岛素、甘油三酯、总胆固醇呈显著负相关（ 分别为-0.829,-0.710,-0.801,-0.733和-0.756）。OX鄄PS鄄ODNs干预下丘脑orexin 系统2 d后,营养性肥胖大鼠肾上腺皮质中OX1R的表达明显下降（ < 0.05）。结论大鼠肾上腺皮质束状带细胞的细胞质中有OX1R 的表达,营养性肥胖大鼠体内orexin 系统可能通过下丘脑鄄垂体鄄肾上腺（HPA）轴参与调控能量代谢。     

增食欲素受体1在营养性肥胖型大鼠胰腺组织中的表达

目的 探讨高脂膳食诱导的肥胖大鼠胰腺组织中增食欲素受体1(OX1R)蛋白的表达规律,阐明OX1R对营养性肥胖型大鼠的体重及代谢指标的影响和调节机制.方法 建立高脂膳食诱导的营养性肥胖型大鼠模型;应用微型血糖仪测定全血葡萄糖、生化酶法测定甘油三酯、化学发光免疫分析法测定血清胰岛素的变化;免疫组化鉴定胰腺组织OX1R蛋白的表达;肥胖大鼠侧脑室灌注增食欲素受体1反义寡核苷酸(OX1R-PS-ODNs),检测其对肥胖大鼠胰腺组织中OX1R蛋白产生的影响.结果 大鼠饲养8周后,高脂组大鼠体重、血糖、胰岛素、甘油三酯、总胆固醇高于正常组(P＜0.05),大鼠出现营养性肥胖.OX1R蛋白的表达定位于胰腺胰岛β细胞细胞质中,肥胖组OX1R蛋白的表达水平较正常组减低约16%(P＜0.05).肥胖大鼠侧脑室灌注反义OX1R-PS-ODNs 72 h后,胰腺组织表达的OX1R蛋白由82±6降至65±4,下降约21%(P＜0.01).结论 胰岛β细胞中有OX1R蛋白的表达.下丘脑增食欲素系统可以干预肥胖型大鼠胰腺组织中OX1R蛋白的表达,并参与肥胖的发生和血糖、血清胰岛素的代谢调节.

Abstract：

Objective To identify the presence of orexin receptor 1 (OXR1) in obese rat pancreas and clarify its effect and mechanism on body weight and metabolic index in obese rats.Methods The obese rat model was established a high-fat diet.And the serum levels of glucose,triglyeride and insulin were measured by Mini-Blood Glucose meter,biochemical enzymatic method and chemiluminescent immunoassay.The pancreatic expression of OX1R protein was bidentified by immunohistochemistry.After an intracerebroventricular infusion of orexin receptor 1 antisense oligodeoxynucleotide ( OX1R-PS-ODNs),the effect on OX1R protein was detected in rat pancreatic tissue with obesity.Results After feeding for 8 weeks,high-fat diet rats appear alimentary obesity body weight,serum glucose,insulin,triglyeride and cholesterol of high-diet rats were higher than those in the control group( P＜0.05 ).The expression of OX1R protein was located in the cytoplasm of pancreas Islet 3-cells.The expression of OX1R protein in obese rat pancreas decreased around 16% versus the normal group( P＜0.05 ).After the obese rats were treated by OX1R-PS-ODNs for 72 hours,the expression of OX1R protein in pancreas declined from 82 ±6 to 65 ±4,reduced about 21% compare with control group( P＜0.01 ).Conclusion The expression of OX1R protein is found in pancreas Islet β-cells.Hypothalamic orexin system can intervene the expression of OX1 R protein in rat pancreatic tissue with alimentary obesity.And it may participate in the occurrence of obesity and the metabolic regulation of serum glucose and insulin.     

低糖状态对大鼠增食欲素及受体的影响

目的　研究急性葡萄糖水平的下降对大鼠下丘脑及培养胰岛细胞中增食欲素 (orexin)及其受体(OX1 R、OX2 R)的影响。方法　应用单次皮下注射胰岛素并伴 (或不伴 )禁食的方法 ,构建急性低血糖大鼠模型 ;体外原代培养胰岛细胞并调整培养液的葡萄糖浓度 (8 3mmol L及 2 8mmol L) ;应用反转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)检测下丘脑组织和胰岛细胞中orexin系统的变化。结果　在胰岛素 (伴禁食 )诱导的急性低血糖大鼠模型中 ,下丘脑orexin的mRNA表达较对照组增加约 1 5 0 % (P <0 0 1 ) ,OX1 R的mRNA表达减少 30 % (P <0 0 1 ) ,但是OX2 R的mRNA表达没有明显变化 (P >0 0 5 ) ;在培养胰岛细胞体外实验中 ,培养基中葡萄糖浓度由 8 3降至 2 8mmol L ,6h后胰岛细胞的orexinmRNA表达增加 1 0 0 % (P <0 0 1 ) ,而OX1 RmRNA表达对培养基中葡萄糖浓度的急性波动不敏感。结论　急性葡萄糖水平降低将刺激大鼠下丘脑中orexin的表达 ,其受体的变化相反 ;进食将会抑制orexin系统的这一反应。体外实验中发现培养胰岛细胞在葡萄糖浓度改变时发生类似变化     

增食欲素受体1在大鼠胰岛细胞中的表达研究

目的确立中枢神经系统外(胰岛细胞中)增食欲素受体1(OX1R)的存在;探讨葡萄糖对胰岛细胞产生的影响及可能的作用机制。方法原位杂交定位检测大鼠胰腺组织中OX1R mRNA的表达情况;观察不同浓度葡萄糖(2.8,8.3,16.7mmol/L)对体外细胞培养的大鼠胰岛细胞中orexin系统的影响;实时定量PCR检测胰岛细胞中orexin和OX1RmRNA的表达;应用流式细胞仪检测胰岛细胞增殖情况。结果大鼠胰岛细胞胞浆中有OX1R mRNA的表达,而没有OX2R mRNA的表达。培养液中2.8mmol/L葡萄糖导致胰岛细胞中orexin的基因表达增高约100%,16.7mmol/L葡萄糖使orexin表达减少近50%;OX1R mRNA的表达对血糖快速变化的反应不敏感。培养液中葡萄糖升高或降低均抑制胰岛细胞增殖。结论OX1R基因在中枢神经系统外的胰腺组织中有表达,在周围系统可能直接参与能量平衡及内分泌代谢的调控;培养液中葡萄糖浓度的变化对胰岛细胞中OX1R的表达没有显著影响,但会影响胰岛细胞的增殖功能。     

慢性轻度不可预见应激模型大鼠下丘脑食欲调节因子的变化及逍遥散的作用研究

目的 探讨慢性轻度不可预见应激抑郁模型大鼠下丘脑食欲调节因子及其受体的变化,及逍遥散抗抑郁的作用机制.方法 采用慢性轻度不可预见应激造模因素建立抑郁大鼠模型,随机分为模型组、逍遥散组与氟西汀组,每组各10只,另选10只正常大鼠作为正常对照.逍遥散以最佳给药剂量(中剂量)干预4周后,通过糖水消耗实验和新环境进食压抑实验对模型大鼠进行行为学验证;免疫组化法检测各组大鼠下丘脑食欲素及其受体、瘦素及其受体(LEPR)的变化.结果 与正常组比较,模型组大鼠1％蔗糖水消耗量、糖水消耗率、体质量与进食量均下降,差异具有统计学意义(P<0.01),进食潜伏期延长(P<0.05).在下丘脑弓状核,模型大鼠食欲素A表达上升(P<0.01),食欲素B和瘦素表达均降低(P<0.05,P<0.01).在下丘脑室旁核,模型大鼠食欲素A的表达也上升(P<0.01),食欲素受体1和食欲素受体2表达下降(P<0.05),瘦素及其受体LEPR的表达均降低(P<0.05,P<0.01).逍遥散对抑郁模型大鼠的糖水消耗量、体质量、进食量有上调作用(P<0.05),降低了进食潜伏期(P<0.05),对下丘脑区食欲素A、食欲素受体1与瘦素的表达有调节作用(P<0.05,P<0.01).氟西汀能够调节食欲素B与食欲素受体2表达(P<0.05,P<0.01).结论 逍遥散能够通过调节中枢食欲素、瘦素水平发挥抗抑郁的功效,食欲调节因子可能是其抗抑郁的靶点之一.     

食欲素A调控INS-1胰岛素瘤细胞的细胞增殖的分子机制

目的探讨增食欲素A(Orexin A)通过增食欲素受体1(OX1R)和AKT/PKB信号传导途径对胰岛细胞增殖的干预效应。方法体外培养的大鼠INS-1胰岛素瘤细胞暴露于不同浓度的Orexin A,OX1R拮抗剂(SB334867)、PI3K拮抗剂(渥曼青霉素)和AKT拮抗剂(PF-04691502)干预Orexin A的作用,测定INS-1的细胞增殖、凋亡、胰岛素分泌、OX1R蛋白活性及AKT蛋白磷酸化水平。结果 Orexin A(10-10~10-6mol/L)可刺激INS-1细胞的增殖和活化,防止细胞凋亡,并增加胰岛素的分泌;Orexin A(10-10~10-6mol/L)增强了INS-1细胞内AKT的磷酸化,SB334867(10-6mol/L)、渥曼青霉素(10-8mol/L)和PF-04691502(10-6mol/L)可以减弱Orexin A的作用。结论 INS-1细胞内Orexin A通过Orexin A-OX1R的介导而活化AKT信号通路,促进细胞增殖。     

癫痫持续状态大鼠海马中食欲素受体1随时间演变的规律

目的探讨癫痫持续状态后癫痫模型大鼠海马中食欲素受体1(orexin receptor-1,OX1R)随时间演变的规律。方法实验3月龄雄性Wistar大鼠100只,体质量250~400 g,随机分为实验组(KA组)和对照组(NS组),实验组采用海人酸(kainic acid,KA)腹腔注射诱导大鼠癫痫持续状态的模型,在癫痫持续状态30 min后终止发作,分别于终止发作后4 h、1 d、1周、1个月、2个月处死大鼠,对照组腹腔注射0.9%氯化钠注射液,处理同实验组,随后行免疫组化染色和Western-blot方法检测OX1R的变化。结果两种检测方法均提示实验组(KA组)和对照组(NS组)随着鼠龄(3~5个月)的增加,海马内OX1R表达均随呈上升趋势,在各个时间点KA组海马各区OX1R的表达均高于NS组,但两组差异无统计学的意义(P>0.05)。结论在癫痫持续状态大鼠及对照组大鼠中,海马CA1区、CA3区及齿状回(dentate gyrus,DG)OX1R的表达与癫痫发作无相关性,但随着鼠龄的增长海马各区OX1R的表达均随时间呈增多趋势,提示随鼠龄增加海马OX1R表达逐渐增多。     

儿童营养状态与血增食欲素A、瘦素的相关性

目的探讨不同营养状态儿童血中增食欲素A、瘦素水平的变化及其相关性。方法检测29例营养不良儿童和29例肥胖儿童的外周血增食欲素A、瘦素水平,并与29例性别、年龄匹配的健康儿童比较,同时分析血增食欲素A、瘦素、 BMI之间的相关性。结果①营养不良儿童中外周血增食欲素A水平显著高于对照组（F=4．551,P=0．012）,瘦素水平显著低于对照组（F=4．074,P=0．005）,未发现性别对增食欲素A、瘦素水平的影响存在交互作用（P〉0．05）;②肥胖组儿童外周血增食欲素A水平显著低于对照组（F=5．063,P=0．008）,肥胖组血清瘦素水平显著高于对照组（F=5．105,P=0．007）,未发现性别对增食欲素A、瘦素水平的影响存在交互作用（P〉0．05）;（9相关性分析表明营养不良组、肥胖组与对照组3组中血增食欲素A与BMI成负相关（P〈0．05）,血瘦素水平与BMI存在着正相关性性（P〈0．05）,而血增食欲素A与血瘦素水平无显著相关性存在（P〉0．05）。结论外周血增食欲素A水平、瘦素水平与儿童的营养状态有关,增食欲素A与瘦素参与了机体营养状态的调节。     

食欲素与血糖和能量代谢的调节

食欲素是一种下丘脑兴奋性神经肽,参与调节睡眠、进食、自主神经功能等,并且在血糖稳态调控和能量代谢平衡中也扮演重要角色。食欲素表达神经元整合外周代谢信号,通过食欲素受体(OXR)1和OXR2发挥生理功能。另外,食欲素通过调节胰岛素和瘦素敏感性影响整体糖代谢,尤其是OXR2介导的信号通路可提高瘦素敏感性,从而预防食源性肥胖和胰岛素抵抗。     

胰岛素抵抗大鼠 Orexin/leptin系统变化及其影响因素的研究

目的研究IR大鼠下丘脑及脂肪组织中orexin和leptin系统的变化,分析其可能的调控因素.方法IR大鼠模型采用高脂肪膳食诱导并经钳夹技术证实;RT-PCR技术检测orexin/leptin及其受体(OX1R、OX2R、LR)mRNA的表达;生化比色法测定血清FFA、放免法测定血清TNF-α.结果该模型大鼠下丘脑中Prepro-orexin表达减少约80%,OX1R、OX2R分别增加3.4及3.2倍,leptin mRNA增加约8倍;LR减少78%;血清FFA和TNF-α均升高;钳夹技术中葡萄糖输注率(GIR60-120)明显低于对照组.结论高脂肪膳食可诱导大鼠体内IR;并导致orexin/leptin系统平衡状态的破坏;orexin与leptin相互作用共同维持机体能量代谢的稳定:FFA和TNF-α可能参与该系统的调控.     

THE OREXIN SYSTEM IN INSULIN RESISTANCE RAT MODEL INDUCED BY HIGH-FRUCTOSE DIET

INTRODUCTIONOrexin,aneuropeptidefoundin1998,hasbeenshownofbeinginvolvedinmanyphysiologicalprogressessuchasregulationoffoodintake,sleep,andinresponsetoacutestressthroughitsreceptorsorexin1receptorandorexin2receptor.Theachieve-mentofintroductionoforexintogetherwiththeintro-ductionofobesegene(obgene)anditsencodingproteinleptinin1994s,hasbeenwellrecognisedasstepstonesinthefieldofobeseresearch.Inthisstudy,weaimedatthoseregulatingfactorswithinin-sulinresistancebyevaluatingorexin/leptinandtheirre…     

EFFECTS OF ACUTE HYPOGLYCEMIA ON THE OREXIN SYSTEM IN RAT

OREXIN isa kind of new neuropeptideisolated from rathypothalamus, which involvedin many physiologicalregulationprogressesvia orexin1receptor(OX R )and orexin2 receptor(OX R ).The physio- 1 2logicalfunctionoforexinisstillnotcompletelyknown ,butitisidentifiedthatorexinis involvedinmany physiologicalprogressesuchasfeeding,sleep,and stress.1However ,itisstillunknown abouttheregulationoforexinsystemby hypo-thalamus,theregulationtopancreasby orexinsystem,and the regulationbetween orexin,bloodglu…     

食欲肽及其对睡眠-觉醒的调节

食欲肽是一种神经肽,在下丘脑分布有大量的食欲肽A和食欲肽B神经元.食欲肽受体有2种亚型OX1R和OX2R,OX2R是2种食欲肽的非选择性受体,OX1R仅对食欲肽A有选择性.食欲肽神经元在人脑的分布与鼠类似.食欲肽除调控摄食行为外,对睡眠与觉醒有重要的调控作用.在调节睡眠-觉醒的相关区域,存在大量的食欲肽受体OX1R和OX2R与高表达的OX1R和OX2R的前体mRNA.食欲肽还与调控觉醒和快波睡眠的神经位点LC、乳结节神经核(TMN)、DR与基底前脑(BF)有复杂的联系,这些区域的食欲肽神经元在觉醒与快波睡眠状态时都异常活跃.食欲肽增多可促进睡眠,食欲肽缺失能诱发发作性睡病.损毁下丘脑某些区域以致食欲肽神经元胞体减少,则可引起睡眠-觉醒功能障碍(如原发发作性睡病等).     

长期使用氯米帕明对大鼠睡眠/觉醒及食欲素的影响

目的探讨长期注射氯米帕明对大鼠睡眠/觉醒周期和脑内食欲素系统的影响。方法成年雄性SD大鼠分为生理盐水组和氯米帕明组,每组8只。每12小时腹腔注射1次生理盐水或氯米帕明。于第六周行96h睡眠描记。结束后取额叶皮层、海马和下丘脑行RT-PCR。结果大鼠的运动觉醒和快速眼球运动睡眠的时间显著减少,安静觉醒和慢波睡眠时间显著增加（P〈0.01）。氯米帕明显著地抑制了额叶皮层、海马和下丘脑食欲素前体和食欲素2受体mRNA的表达（P〈0.05,P〈0.01）。结论氯米帕明在剥夺快速眼球运动睡眠的同时减少了运动觉醒,其抑制食欲素前体和食欲素2受体mRNA表达,但是不影响食欲素1受体mRNA的表达。