抗CD71人-鼠嵌合抗体对活化淋巴细胞的效应

目的　通过体外实验探讨抗CD71人 鼠嵌合抗体对活化淋巴细胞效应的影响 ,并与其鼠源性单克隆抗体进行比较。方法　以丝裂原诱导的人外周血单个核细胞 (PBMC)为靶细胞 ,测定嵌合抗体和鼠源性单抗对其增殖抑制率 ;在新鲜补体存在下 ,测定补体依赖性嵌合抗体介导的细胞毒效应(CDC)。以EBV转化的B细胞为刺激细胞 ,测定两种抗体对其诱导的同种异体PBMC的增殖抑制率 ;以同种异体的PBMC为刺激细胞 ,测定两种抗体在单向、双向混合淋巴细胞培养 (MLC)中的增殖抑制率。结果　嵌合抗体和鼠源性单抗均可明显抑制丝裂原诱导的PBMC的增殖反应 ,且二者抑制率差异无显著性(P >0 .0 5 ) ,其抑制作用随抗体浓度增加而增强 ,PBMC和丝裂原共同孵育 12h后加入抗体的增殖抑制效应最明显 ;在新鲜补体存在下 ,嵌合抗体对丝裂原诱导增殖的PBMC具有CDC作用 ,而鼠源性单抗CDC作用较弱 ;两种抗体对混合淋巴细胞培养反应有明显的抑制作用 ,且嵌合抗体组抑制率明显高于鼠源性单抗组 (P <0 .0 5 )。结论　抗CD71人 鼠嵌合抗体在体外实验中可抑制淋巴细胞的活化及其效应 ,其作用明显强于抗CD71鼠源性单克隆抗体。     

体外免疫法抗MG7人源性单抗的研制及其意义

本文建立了人淋巴细胞体外致敏技术,用本文作者既往制备的鼠抗人胃癌单抗MG7作为免疫原,在体外致敏人淋巴细胞获得成功。经与本文作者在建立的人鼠种间骨髓瘤细胞系FMC-1进行人鼠人双杂交,获得一株能与鼠源性抗体反应,但不与人、羊、马、兔等其他种属动物产生的抗体相反应的人源性单抗HMG7。本文讨论了HMG7可能的应用价值,以及在人淋巴细胞体外致敏过程中应注意的几个环节。     

真核表达系统的抗体库技术研究进展

单克隆抗体(mAb)药物研制经历了鼠源性、人鼠嵌合、人源化改造以及全人源这4个阶段,其中全人源抗体因其免疫原性最低而得到相对广泛的应用。全人源抗体的制备主要包括转基因鼠技术和抗体库技术,在抗体库技术中主要包括基于原核表达系统的噬菌体技术和基于真核表达系统的核糖体技术、酵母技术以及哺乳动物细胞技术。本文主要综述了近些年来基于真核表达系统的抗体库技术的研究发展。     

治疗性单抗的免疫原性研究进展

治疗性单克隆抗体(Tberapeutic mAb)已经成为药物工业发展最快的领域之一,2003年到2004年之间其种类增长了48.1%.到目前为止,有26个治疗性单抗被美国食品药品管理局(FDA)批准应用于临床,超过150个抗体正在进行临床实验,其中包括8个鼠源性单克隆抗体、6个嵌合型单克隆抗体、11个人源化单克隆抗体和1个全人型单克隆抗体.这些抗体在临床上均取得了很好的效果,但是都不同程度地遇到了过敏反应和抗.     

人源化单抗在初期临床试验中能解决某些免疫原性问题

当使用鼠源性单抗及其偶合物作成像检查或治疗时,许多病人产生了免疫应答,降低了单抗的治疗效应,使之难于给病人进行反复治疗。为消除此问题,许多研究者转向研制嵌合单抗(即连接小鼠单抗可变区和人抗体恒定区链)或使用重组DNA技术制备整个人单抗,并在细胞培养物中表达。研究者们在使用人单抗和人源性进行临床时获得某些成功,它们在体内确实比鼠源性单抗的半衰期要长。Albert Lo     

全人单克隆抗核抗体的制备和鉴定

目的 本研究旨在从系统性红斑狼疮(systemmic lupus erythematosus,SLE)患者外周血淋巴细胞中获得自身抗体,并从中鉴定筛选出抗核抗体.方法 利用人B细胞杂交瘤技术制备SLE患者来源的全人单克隆自身抗体,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immuno sorbenk assay,ELISA)方法测定阳性杂交瘤细胞上清抗体浓度,并以HEp-2细胞为底物,采用间接免疫荧光法鉴定筛选出抗核抗体.结果 共获得48株稳定分泌IgG型全人单克隆自身抗体的杂交瘤细胞株,其中12种细胞上清抗体浓度大于1 500 ng/mL,占25％,通过免疫荧光鉴定从中筛选出3种抗核抗体,荧光核型分别为周边型、斑点型和核仁型.结论 全人单克隆自身抗体的制备及抗核抗体的筛选鉴定,为开发新型单克隆抗体药物以及研究SLE的致病机制奠定了良好的实验基础.     

用CDR3导向抗体库法对鼠抗人膀胱癌单抗进行人源化

目的　构建含鼠单抗CDR3的人源噬菌体抗体库 ,对膀胱癌鼠单抗进行人源化。方法通过重叠PCR及DNA重组技术 ,将抗膀胱癌鼠单抗BDI的CDR3区与人淋巴细胞来源的多样化的VH和Vκ组合 ,构建含BDICDR3的人源噬菌体抗体库 ;利用loxp cre定位重组系统 ,增加轻、重链的组合配对 ,获大容量抗体库 ;用膀胱癌细胞 (EJ)从中筛选人源化抗膀胱癌单抗Fab段 ,ELISA方法对所筛克隆进行特异性鉴定 ,同时运用竞争抑制实验对所筛特异性克隆进行抗原表位的核实。结果　首先构建了库容为 2× 10 7的含鼠CDR3区的人源噬菌体抗体库 ;经过在cre 细菌胞内的定位重组后 ,获得库容为 10 1 0 的大容量噬菌体抗体库 ;用EJ细胞筛选到可与其特异结合的人源性Fab段 ;竞争抑制实验表明所获人源抗体片段与亲本鼠源单抗结合同一抗原表位。结论　在没有亲本鼠单抗基因 ,仅了解其CDR3序列的条件下 ,可通过CDR3导向 ,构建大容量抗体库 ,筛选到相应的人源化抗体基因。     

HIV感染者中B细胞免疫应答的研究进展

HIV感染引起了免疫系统慢性持续的活化而造成免疫细胞亚群的异常及其功能的耗竭(包括B淋巴细胞),使得宿主二次感染和机会性感染的易感性增加。B细胞的异常不仅出现在其表型及亚群上,更体现在功能的改变。伴随着B细胞的多克隆活化和高免疫球蛋白血症的出现,B细胞还表现出了对外源抗原无反应性及产生抗体的异常等功能缺陷方面的特征。对此,深入了解HIV感染过程中B细胞异常的致病机制,以期为今后通过改善HIV患者的体液反应来预防其机会感染的发生并为以抗体为基础的HIV疫苗研究策略提供有益的参考。     

基于抗体的中国生物制药产业化前景

 抗体药物是近年来复合增长率最快的一类生物技术药物，占现有生物技术药物研发总数的30%~35%。截至2006年，美国FDA已批准35个抗体药物，其中治疗肿瘤抗体药物占32%，免疫性疾病37%，器官移植11%，感染性疾病8%，心血管疾病4%，其他8%；按照抗体类型分析，鼠源20%（其中约70%用于肿瘤的治疗），人源化60%，全人抗体20%。在肿瘤治疗方面，应用利妥昔单抗（Rituxanab，美罗华）治疗B细胞性非霍奇金淋巴瘤已达30多万例病人，单药治疗总有效率为50%，其疗效与化学药物相同，但更安全，几乎无副作用，抗体联合化疗有效率高达80%以上。另外，针对血管内皮生长因子（VEGF）的抗体药物Bevacizumab（Avastin）与化疗药物联合使用，使晚期结肠癌患者的生存期平均延长了5个月，FDA认为它几乎对所有的晚期结肠癌患者都有帮助，因此批准它作为晚期结肠癌的一线用药。该类药物一经开发就倍受关注，并创造了巨大的效益。全球抗体药物年销售额从1997年的3.10亿美元已上升到2005年的150亿美元；在生物制药中所占份额也从2000年的1/5上升到2005年的1/3。......     

类风湿性关节炎患者血清TNF-α和外周血B细胞及T细胞亚群的探讨

目的：探讨了类风湿性关节炎患者血清TNF—α和外周血B淋巴细胞及T淋巴细胞亚群水平的变化。方法：分别应用放射免疫分析和单克隆技术测定了37例类风湿性关节炎患者血清TNF—α,和外周血B淋巴细胞及T淋巴细胞亚群的水平，并以30名正常健康人作比较。结果：类风湿性关节炎患者血清TNF—α和外周血B淋巴细胞数显著地高于正常人水平（P〈0．01），而CD3、CD4、CD4／CD8则显著地低于正常人水平（P〈0．01）。结论：类风湿性关节炎是一种自身调节免疫异常的疾病。     

原发性肝癌患者产生人抗鼠抗体（HAMA）的初步临床观察

为了解鼠源性单抗进入人体后产生抗抗体的能力及提出可能的预防措施，本文在动物实验基础上对３２例原发性肝癌患者的人抗鼠抗体（ＨＡＭＡ）进行了初步临床探讨，结果：（１）人体无先期抗鼠抗体的存在，（２）初次注射后的ＨＡＭＡ表现为缓慢升高后缓慢下降的趋势，（３）单抗从静脉投与者较从动脉投与者易出现ＨＡＭＡ，（４）标记上核素后或与化疗药合用可延迟及降低ＨＡＭＡ的产生，本研究结果提示，在以鼠源性单抗作临床导向治疗时，加以核素为弹头，从肝动脉投与，同时辅以抗癌药，不失为一种既实用又有效的减少ＨＡＭＡ产生的方法。     

抗CD4人—鼠嵌合抗体的鉴定及对PBMC增殖反应的影响

目的对已构建表达的抗 CD4人 -鼠嵌合抗体的生物学特性进行鉴定 ,比较嵌合抗体与鼠源性单抗对抗 CD3Mc Ab和 EBV转化细胞诱导的外周血单个核细胞 (PBMC)增殖反应的影响 ,以探讨抗 CD4抗体的增殖抑制作用机制。方法采用间接免疫荧光竞争抑制实验比较两种抗体对 CD4抗原的相对亲和力 ,MTT法检测抗 CD4抗体的增殖抑制作用。结果转染瘤细胞具有稳定表达及分泌特异性抗 CD4人 -鼠嵌合抗体的能力 ;两种抗体对 CD4抗原的相对亲和力相同 ;对经 TCR途径刺激诱导的 PBMC增殖反应均有抑制作用 ,嵌合抗体的增殖抑制作用较鼠源性单抗强。结论抗 CD4抗体的抑制作用很大程度上直接作用于 TCR诱导的活化信号。     

淋巴细胞合成生长激素对自身细胞增殖及γ－干扰素产生的影响

淋巴细胞能够合成和分泌生长激素已被证实。本文的目的在于观察免疫反应性生长激素（ｉｒＧＨ）在体外诱导淋巴细胞应答反应中发挥的作用。以特异性抗体和ｉｒＧＨ结合进行阻断试验，结果显示ＰＨＡ诱导的淋巴细胞增殖程度显著下降。４５μｇ／ｍｌ的免抗人ＧＨ抗体使淋巴细胞增殖的抑制率达４１．２％；使γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）的产生从５６．３±２７．４ｎｇ／ｍｌ下降到４９．１±２３．０ｎｇ／ｍｌ（Ｐ＜０．０５）由此说明ｉｒＧＨ参与体外淋巴细胞应答活动的调节。     

用抗原表位定向选择方法人源化抗TNF-α抗体Fab段

目的用抗原表位定向选择（ｅｐｉｔｏｐｅｇｕｉｄｅｄｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）方法，将鼠源性抗ＴＮＦ－α单抗Ｆａｂ段改造成完全人源性Ｆａｂ。方法首先用鼠单抗Ｆｄ段基因与人的κ链基因库相互配对，构建成人－鼠杂合噬菌体抗体库，筛选可与ＴＮＦ－α结合的克隆，所获得的人κ链基因再与人Ｆｄ基因库组合，建立人源噬菌体抗体库，再进行筛选；类似地以鼠κ链基因和人Ｆｄ库组合构建杂合抗体库，筛选人Ｆｄ基因，再和筛到的人κ链配对，选择与ＴＮＦ－α特异结合的克隆。结果以鼠抗体Ｆｄ段定向选择人κ链获得能与ＴＮＦ－α特异结合的杂合抗体Ｆａｂ片段，再以这些人κ链定向选择人Ｆｄ段获得能与ＴＮＦ－α结合的完全人源性的Ｆａｂ，但这些Ｆａｂ除与ＴＮＦ－α反应外，与一些无关蛋白有交叉反应。以鼠单抗κ链定向选择人Ｆｄ段获得能与ＴＮＦ－α特异结合的杂合Ｆａｂ，其中一个克隆显示很强的结合活性，以该克隆的Ｆｄ与筛到的人κ链配对，得到了能与ＴＮＦ－α特异结合的人源性Ｆａｂ片段。结论抗原表位定向选择方法提供了一种有效的鼠单抗人源化路线     

抗原表位定向选择的人源抗TNF-αFab的鉴定

目的对通过抗原表位定向选择技术（ＥＧＳ）所筛选到的２株人源化ＴＮＦ－α抗体Ｆａｂ段进行分析鉴定。方法测定可变区基因的序列,用亲本鼠单抗Ｚ８进行竞争ＥＬＩＳＡ,用Ｌ９２９细胞检测其体外中和ＴＮＦ－α的活性,并用硫氰酸铵洗脱法比较与亲本鼠单抗的亲和力。结果基因测序表明２株抗体ＶＨ相同,属人ＶＨⅠ亚群;Ｖκ分别属人ＶκⅠ、ＶκⅢ亚群;竞争抑制实验表明所获人源抗体片段与亲本鼠源抗体是针对ＴＮＦ－α的同一抗原表位;体外中和实验证明此抗体片段能中和ＴＮＦ－α对Ｌ９２９细胞的毒性;该抗体片段的亲和力略低于原鼠单抗Ｚ８。结论用ＥＧＳ方法获得的人源抗体片段基本保持了原鼠单克隆抗体Ｚ８的特性     

抗人胃癌全套单链抗体基因文库的构建

抗人胃癌全套单链抗体基因文库的构建杨丽娟苏成芝聂晓燕（第四军医大学生物化学及分子生物学教研室，西安７１００３２）胃癌是最常见的恶性肿瘤，占我国癌症死亡的首位［１］。单克隆抗体对胃癌的诊断和治疗有一定意义。但由于鼠源性单抗有制备周期长，易产生排斥反应等...     

抗钙调素抗体与人淋巴细胞凋亡

钙调素（ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ,ＣａＭ）是真核细胞中的Ｃａ２＋结合蛋白。Ｃａ２＋／ＣａＭ复合物在多个位点上参与细胞周期调控,促进细胞增殖与分化。抗ＣａＭ抗体可穿入淋巴细胞并干扰其功能,在自身免疫病发病机制中可能起作用［１］。本实验用抗ＣａＭ抗体与人淋巴细胞作用,并以抗Ｓｍ抗体为对照,研究其与细胞凋亡的关系。１　材料和方法１－１　抗体　兔抗ＣａＭ抗体和鼠抗ＣａＭ单抗（自制）。抗ＣａＭ阳性血清、抗Ｓｍ阳性血清分别筛选自甲亢和ＳＬＥ患者。抗ＣａＭ水平设定参照文献［２］进行。１－２　淋巴细胞分离与培养　常…     

人治疗性抗体的研究进展

抗体研究已有百余年的历史, 自从 20世纪 70年代德国学者K nler和英国学者Milstein利用细胞融合技术成功地制备了杂交瘤单克隆抗体 (mAb)以来, 抗体的生产技术才实现革命性的突破, 其在诊断、治疗、预防和蛋白提纯方面显示了重要的作用和非常广阔的应用前景。10多年来, 抗体被认为是理想的癌症和传染病的治疗分子。然而, 鼠源mAb作为异源性蛋白在人体内应用受到了限制: 如 ( 1 )可诱发鼠抗人抗体的生成(HAMA)[1]; (2)鼠源性Fc段不能有效地发挥人源性Fc段的功能; ( 3 )鼠源性抗体的生物半衰期很短 [2]。这严重影响了鼠mAb的治疗效…     

抗登革3型病毒单链抗体的可溶性表达和鉴定

目的为解决鼠源性单克隆抗体用於临床会引起变态反应等负作用问题，试图从基因水平上对登革３型病毒鼠源性单抗进行人源化改造以减少其鼠源性。方法选用对登革病毒４个血清型及部分黄病毒具有中和活性的抗登革３型病毒单克隆抗体３Ｄ３的轻重链可变区基因，通过反转录和聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩，扩增后的轻重链可变区ＰＣＲ产物通过连接引物连接成单链抗体基因，然后与噬菌体载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ连接，转化大肠杆菌ＨＢ２１５１，使单链抗体以可溶性的形式表达在上清液中。结果通过免疫荧光和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明，可溶性表达的单链抗体能与登革３型病毒抗原发生特异性结合，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中在２８ｋＤ处有一条带和单链抗体的分子量大小一致。结论表达产物与原单抗３Ｄ３一样，具有与登革３型病毒抗原结合的特性。     

抗淋巴细胞激活基因3(LAG-3)全人源抗体的制备

目的淋巴细胞激活基因3(LAG-3)是一个极具潜力的肿瘤治疗靶点。本研究旨在从大容量全人源噬菌体抗体库中筛选抗LAG-3的单链抗体(scFv),将其转化为完整的全人源抗体。方法从全人源噬菌体抗体库,筛选抗LAG-3全人源噬菌体scFv,ELISA鉴定噬菌体scFv的特异性,采用表面等离子共振技术(SPR)测定其亲和力,再通过真核表达系统获得抗LAG-3全人源完整抗体。结果通过3轮筛选富集,获得了4个具有特异结合活性的scFv。亲和力测定最高的达到3.48×10~(-10)。再通过构建完整的抗LAG-3全人源抗体表达载体,经真核细胞表达、纯化后,获得了3株特异性抗LAG-3全人源抗体。结论利用大容量全人源噬菌体抗体库,成功筛选并表达出3种高亲和力和特异性的抗LAG-3全人源抗体。