重组新城疫病毒IL29抑制人胃癌细胞系BGC的增殖与迁移

目的探讨表达IL-29的重组新城疫病毒Lo Sota株(rL-IL29)对人胃癌BGC细胞增殖及迁移的影响及其机制。方法将体外培养的人胃癌BGC细胞分为对照组、rL-IL29组和Lo Sota株新城疫病毒(NDV)组,分别经PBS、rL-IL29及NDV感染处理后进行下一步实验。蛋白质印迹检测BGC细胞中IL-29、NDV、P-ERK、MMP2、p-AKT蛋白的表达;CCK8法、划痕试验及Transwell小室法侵袭实验检测胃癌BGC细胞的增殖、迁移能力。结果IL-29蛋白仅在rL-IL29组表达,NDV蛋白在IL-29组及NDV组均稳定表达,且明显高于PBS组(P<0.05);rL-IL29感染BGC细胞后BGC细胞的增殖及迁移能力明显减弱,且rL-IL29的抑制较NDV组作用更强;BGC细胞经rL-IL29感染后P-ERK、MMP2(66 ku/72 ku)、p-AKT蛋白表达较对照组及NDV组明显减弱(P<0.05)。结论rL-IL29抑制胃癌BGC细胞的增殖、侵袭及迁移可能与ERK,AKT等信号通路相关。     

重组新城疫病毒rl-RVG抑制人肺腺癌A549系细胞迁移及相关机制

目的观察表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒(rl-RVG)对人肺癌细胞系A549的迁移影响,初步探讨其可能的机制。方法重组新城疫病毒rl-RVG直接感染A549细胞为rl-RVG实验组,新城疫病毒La Sota株处理的A549细胞组及未感染病毒的A549细胞组作为对照组。Western blot法检测NDV-HN蛋白及狂犬病毒糖蛋白(RVG),细胞增殖实验测定新城疫病毒使用的最佳作用浓度;划痕实验及Transwell法测A549迁移;Western blot法及免疫荧光法检测E-cadherin,MMP2蛋白表达。结果空白对照组无NDV、rl-RVG表达,rl-RVG仅在感染rl-RVG细胞组有表达,NDV在感染rl-RVG细胞组及感染NDV细胞组皆有表达;与空白对照组相比,rl-RVG及NDV稀释浓度大于5×10-5对细胞的增殖有抑制作用(P0.05);rl-RVG组迁移的距离及细胞数明显减少(P0.05)。与空白对照组及NDV感染组相比,rl-RVG组E-cadherin蛋白表达水平上调(P0.05),MMP2蛋白表达水平减弱(P0.05)。结论重组新城疫病毒rl-RVG能抑制人肺癌细胞系A549的迁移,并可能通过影响肺腺癌A549上皮细胞-间质转化(EMT)过程中的调控因子E-cadherin,MMP2蛋白而对细胞迁移而作用。     

重组新城疫病毒rL-RVG抑制人肺腺癌细胞系增殖

目的 探讨表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒rL-RVG抑制人肺腺癌细胞系A549和PC9增殖。方法 体外培养人肺腺癌细胞系A549、PC9,将处于对数增殖期的细胞分为对照组、新城疫病毒感染组(NDV)、重组新城疫病毒感染组(rL-RVG)、铁死亡诱导剂组(Erastin)和重组新城疫病毒联合铁死亡诱导剂组(rL-RVG+Erastin)。病毒及药物感染细胞24 h后，光学显微镜下观察细胞形态，CCK-8法检测细胞增殖能力，划痕试验检测细胞迁移能力，细胞毒性检测试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量，流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)含量，Western blot检测铁死亡相关蛋白p53、SLC7A11、GPX4的表达。结果 与对照组相比，NDV组、rL-RVG组、Erastin组细胞数、细胞增殖能力及迁移的距离明显降低(P均<0.001),LDH释放量和总ROS水平显著提高(P<0.01),p53蛋白表达明显增加(P<0.001),而SLC7A11、GPX4蛋白表达明显降低(P<0.001)。rL-RVG组与NDV组相比上述结果更明显(P<0.05),r...     

rL-RVG通过α7烟碱型乙酰胆碱受体诱导胃癌细胞系SGC凋亡的机制

目的探讨表达狂犬病毒疫苗糖蛋白的重组新城疫病毒(rL-RVG)通过乙酰胆碱受体诱导胃癌细胞凋亡的可能机制。方法将对数增殖期的胃癌细胞系SGC随机分成rL-RVG、新城疫病毒(NDV)组、PBS组,并同时分别设α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7-nAChR)抑制剂(MLA)及激动剂(ACB)预处理组。病毒感染24 h后,CCK8法测定病毒对SGC增殖影响;蛋白印迹检测α7-nAChR、RVG、NDV;凋亡蛋白cleved-caspase-3、BAX/BCL-2;P-ERK、ERK的表达。免疫荧光法测定P-ERK表达。结果随着rL-RVG、NDV病毒液浓度增加,胃癌细胞活力下降,rL-RVG在10~(-2)稀释倍数时抗增殖作用显著(P0.05);病毒组凋亡相关蛋白cleved-caspase-3、BAX/BCL-2相对表达量较PBS组明显升高,且rL-RVG组较NDV组及PBS组升高明显,乙酰胆碱受体抑制剂预处理后rL-RVG组、NDV组及PBS组凋亡蛋白水平明显增高,胆碱受体激动剂预处理组凋亡蛋白表达水平明显下降(P0.05);P-ERK在病毒组表达下降,且rL-RVG组较NDV组更低,乙酰胆碱受体抑制剂、激动剂预处理后分别下降、上升(P0.05)。结论rL-RVG通过α7-nAChR诱导胃癌细胞系SGC凋亡的机制之一是抑制ERK通路。     

rL-RVG体外抑制肺癌细胞增殖并促进其凋亡北大核心CSCD

目的将表达狂犬病毒糖蛋白的重组LaSota株新城疫病毒疫苗(rL-RVG)感染至A549肺腺癌细胞,观察其对肺癌细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法采用直接感染的方法将rL-RVG感染至A549细胞,采用Western blot法检测rL-RVG中RVG和NDV蛋白在A549细胞内的表达;MTT法检测rL-RVG对细胞增殖的影响,TUNEL法检测rL-RVG对A549细胞凋亡的影响;AnnexinⅤ-FITC/PI染色结合流式细胞检测术检测A549细胞凋亡情况;Western blot法检测caspase-3的表达,并与对照组LaSota株进行比较,PBS组为空白对照组。结果 A549细胞感染rL-RVG后RVG蛋白和NDV蛋白都稳定表达,MTT法结果显示细胞增殖明显被抑制,rL-RVG组抑制率高于LaSota组。A549细胞凋亡增多,其中流式细胞检测术中显示rL-RVG组早期凋亡细胞较其他2组增多,差异有统计学意义(P<0.05),TUNEL检测凋亡指数增加,rL-RVG组较其他2组增多,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot法显示促凋亡蛋白caspase-3表达增加,加入caspase抑制剂Z-VAD-FMK后,caspase-3蛋白表达明显降低。结论 rL-RVG感染A549细胞后能在细胞内稳定表达,rL-RVG可抑制肺癌细胞生长、促进肺癌细胞凋亡,效果优于野生LaSota株。     

rL-RVG体外抑制肺癌细胞增殖并促进其凋亡

目的将表达狂犬病毒糖蛋白的重组LaSota株新城疫病毒疫苗(rL-RVG)感染至A549肺腺癌细胞,观察其对肺癌细胞增殖和细胞凋亡的影响。方法采用直接感染的方法将rL-RVG感染至A549细胞,采用Western blot法检测rL-RVG中RVG和NDV蛋白在A549细胞内的表达;MTT法检测rL-RVG对细胞增殖的影响,TUNEL法检测rL-RVG对A549细胞凋亡的影响;AnnexinⅤ-FITC/PI染色结合流式细胞检测术检测A549细胞凋亡情况;Western blot法检测caspase-3的表达,并与对照组LaSota株进行比较,PBS组为空白对照组。结果 A549细胞感染rL-RVG后RVG蛋白和NDV蛋白都稳定表达,MTT法结果显示细胞增殖明显被抑制,rL-RVG组抑制率高于LaSota组。A549细胞凋亡增多,其中流式细胞检测术中显示rL-RVG组早期凋亡细胞较其他2组增多,差异有统计学意义(P0.05),TUNEL检测凋亡指数增加,rL-RVG组较其他2组增多,差异有统计学意义(P0.05)。Western blot法显示促凋亡蛋白caspase-3表达增加,加入caspase抑制剂Z-VAD-FMK后,caspase-3蛋白表达明显降低。结论 rL-RVG感染A549细胞后能在细胞内稳定表达,rL-RVG可抑制肺癌细胞生长、促进肺癌细胞凋亡,效果优于野生LaSota株。     

miR-99a通过下调RRM2抑制人子宫颈癌HeLa细胞系增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-99a与核糖核苷酸还原酶小亚基M2(RRM2)的靶向关系,并分析二者对人子宫颈癌(CC)HeLa细胞系增殖、侵袭及迁移的影响。方法 将HeLa细胞,分为对照组(control)、阴性对照组(inhibitor-NC)、抑制miR-99a表达组(miR-99a-inhibitor)、共转染组(RRM2-siRNA+miR-99a-inhibitor)。MTT法、平板集落实验检测细胞增殖;划痕实验、Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭;Western blot检测RRM2、细胞增殖核抗原(PCNA)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、N-钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)蛋白表达;免疫荧光法检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin定位及表达;生物信息学及双荧光素酶报告基因实验验证miR-99a与RRM2靶向关系;RT-qPCR检测细胞中miR-99a、RRM2 mRNA水平。结果 下调miR-99a表达,可增高HeLa细胞增殖率(100.00比128.86±4.25,P<0.05);上调集落形成率、划...     

干扰IDH-2基因对小细胞肺癌生长抑制作用的研究

 目的：研究siRNA特异干扰沉默异柠檬酸脱氢酶2（IDH-2）基因后对人小细胞肺癌细胞NCI-H446生长作用的影响。方法：用siRNA沉默NCI-H446细胞的IDH-2基因表达,用real-time PCR及Western blotting技术检测mRNA-IDH-2和蛋白的表达;CCK-8法测定细胞生长抑制,Western blotting检测MAPK p42的表达和流式细胞术检测细胞周期;用Transwell细胞迁移系统检测siRNA-IDH-2对NCI-H446细胞迁移能力的影响;将转染siRNA-IDH-2、阴性对照siRNA的细胞或未转染细胞皮下接种于BALB/c裸鼠背部,观察移植瘤的生长状况。结果：siRNA-IDH-2有效沉默NCI-H446细胞中IDH-2的表达;与对照组相比,下调IDH-2基因表达抑制NCI-H446细胞的增殖;MAPK p42蛋白表达下降且S期细胞明显增加;下调IDH-2基因显著抑制了NCI-H446细胞的迁移能力;体内实验显示siRNA-IDH-2组的肿瘤体积明显小于对照组。结论：siRNA-IDH-2能显著抑制IDH-2基因在人小细胞肺癌细胞NCI-H446中的表达,并降低细胞迁移效率,在体外和体内明显抑制NCI-H446细胞的生长。     

重组新城疫病毒rL-IL29促进人小细胞肺癌细胞系H446内质网应激、自噬及凋亡相关蛋白的表达

目的探讨重组新城疫病毒rL-IL29对小细胞肺癌细胞系H446细胞内质网应激、自噬及凋亡相关蛋白表达的影响。方法将H446细胞随机分为对照组、新城疫病毒(NDV)组及rL-IL29组,后2组分别转染NDV和rL-IL29。CCK-8法检测细胞活性;ELISA检测细胞上清中IL-29含量;Western blot和免疫荧光检测内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP的表达。并分别加入内质网应激抑制剂4-PBA预处理4 h,Western blot检测处理组及对照组GRP78、CHOP、自噬相关蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ和凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3的表达。结果感染H446细胞后,随着病毒浓度的升高,细胞活力明显降低,其中rL-IL29在10-5升高明显(P0.05)。rL-IL29处理组细胞上清中IL-29含量明显升高(P0.05),rL-IL29组IL-29蛋白水平较对照组明显升高(P0.05)。NDV组、rL-IL29组中GRP78及CHOP表达明显升高(P0.05),LC3Ⅰ/Ⅱ、cleaved-caspase-3表达明显高于对照组(P0.01),且rL-IL29组明显高于NDV组(P0.05)。4-PBA预处理后,4-PBA组GRP78、CHOP、cleaved-caspase-3以及LC3Ⅰ/Ⅱ蛋白表达明显降低(P0.05)。结论 rL-IL29能促进人小细胞肺癌细胞内质网应激、自噬及凋亡相关蛋白的表达。     

过表达BMP9对人肺鳞状细胞癌细胞NCI-H520迁移和侵袭的影响

目的:探讨骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)对人肺鳞状细胞癌细胞NCIH520迁移和侵袭的影响及其机制。方法:采用RT-PCR和Western blot法分别检测NCI-H520细胞和正常人支气管上皮(HBE)细胞中BMP9的mRNA和蛋白表达水平;用Ad BMP9感染NCI-H520细胞,RT-PCR和Western blot法验证BMP9的变化;应用划痕愈合实验检测各组细胞的迁移能力,Transwell小室检测迁移和侵袭能力,并用RTPCR和Western blot法检测迁移相关因子基质金属蛋白酶2(MMP2)的mRNA和蛋白水平。Western blot法检测BMP-Smad经典通路中Smad1/5的磷酸化水平(p-Smad1/5)。用BMP特异性拮抗剂Ad Noggin与Ad BMP9共处理NCI-H520细胞,检测p-Smad1/5及细胞迁移能力的变化。结果:BMP9在NCI-H520细胞中的mRNA和蛋白水平均比在HBE细胞中低;Ad BMP9感染的NCI-H520细胞中BMP9的mRNA和蛋白水平均明显升高,细胞迁移和侵袭能力均明显下降,MMP2的mRNA和蛋白水平下降,且p-Smad1/5的表达水平明显上调。在NCI-H520细胞中,Noggin能有效逆转BMP9导致的p-Smad1/5升高和细胞迁移抑制能力。结论:外源性BMP9转入肺鳞癌细胞NCI-H520可明显抑制其迁移侵袭的能力,该抑制作用可能与BMP-Smad信号通路的激活有关。     

EPAS1 siRNA抑制人肾透明细胞癌细胞系HiMet-ccRCC的增殖、迁移及侵袭

目的 探讨沉默内皮PAS区域蛋白1(EPAS1)对抑制人肾透明细胞癌细胞系HiMet-ccRCC增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法 将HiMet-ccRCC细胞分为对照(Con)组、阴性对照(NC)组、沉默EPAS1表达组(EPAS1 siRNA组)。用RT-qPCR检测HiMet-ccRCC细胞EPAS1 mRNA水平;MTT法检测HiMet-ccRCC细胞增殖;Transwell小室法检测HiMet-ccRCC细胞迁移、侵袭能力;蛋白质印迹法检测E-cadherin、N-cadherin、MMP-9、PCNA表达。结果 与对照组、阴性对照组比较,EPAS1 siRNA组HiMet-ccRCC细胞中EPAS1表达水平显著降低(P<0.05),HiMet-ccRCC细胞增殖抑制率明显升高、侵袭及迁移细胞数明显减少(P<0.05);与对照组、阴性对照组比较,EPAS1 siRNA组HiMet-ccRCC细胞E-cadherin蛋白表达上调(P<0.05),N-cadherin、MMP-9、PCNA蛋白表达下调(P<0.05)。结论 沉默EPAS1可抑制HiMe...     

上调RAI2表达抑制人子宫内膜癌细胞系HEC-1-A和KLE迁移与侵袭

目的 检测上调维甲酸诱导基因2(retinoic acid-induced 2,RAI2)表达对子宫内膜癌细胞系迁移、侵袭能力的影响。方法 选取子宫内膜癌细胞系HEC-1-A和KLE为研究对象,划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力。免疫荧光实验、Western blot检测RAI2、E-cadherin、vimentin的蛋白表达。结果 子宫内膜癌细胞系HEC-1-A和KLE中RAI2表达水平上调后,LV-RAI2组子宫内膜癌细胞迁移与侵袭能力减弱(P<0.05),RAI2、E-cadherin表达水平升高,vimentin表达水平降低(P<0.05)。结论 上调RAI2表达可能通过上皮间质转化调控抑制子宫内膜癌细胞迁移与侵袭能力。     

SphK1和FAK对人结肠癌HCT116细胞上皮间质转化的影响

 目的: 研究鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase l,SphK1)和黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)对人结肠癌HCT116细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法: 将人结肠癌HCT116细胞分成3组:采用SphK1抑制剂N,N-二甲基鞘胺醇(N,N-dimethylsphingosine,DMS)、FAK抑制剂PF573228和相同体积的培养基分别处理细胞。MTT法检测细胞活力,Western blot方法检测SphK1、FAK、E-cadherin、N-cadherin、vimentin和基质金属蛋白酶2(MMP2)蛋白的表达,real-time PCR检测SphK1、鞘氨醇1-磷酸(S1P)、FAK、E-cadherin和vimentin mRNA的表达,并应用细胞划痕实验检测肿瘤细胞的迁移能力。结果: PF573228和DMS均明显抑制人结肠癌HCT116细胞的活力,并呈时间剂量依赖性。DMS抑制SphK1的表达,同时下调FAK、N-cadherin、vimentin和MMP2蛋白的表达,而上调E-cadherin蛋白表达上调。PF573228明显抑制FAK的表达,同时抑制SphK1、N-cadherin、vimentin和MMP2的表达,上调E-cadherin蛋白的表达(P<0.01)。划痕实验显示PF573228和DMS显著抑制HCT116细胞的迁移能力(P<0.01)。与对照组比较,PF573228组和DMS组FAK、SphK1、S1P以及vimentin mRNA的表达明显下调,而E-cadherin mRNA的表达则明显上调(P<0.05)。结论: SphK1和FAK信号通路可能在结肠癌HTC116细胞上皮间质转化过程中发挥重要作用。     

膜联蛋白A5低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨膜联蛋白A5(ANXA5)低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响。方法将细胞分为干扰组、阴性对照组、转染试剂对照组和空白对照组,采用脂质体转染法将siRNA转染干扰组HeLa细胞,在转染72h后采用RT-PCR和Western blotting检测各组ANXA5的表达以鉴定抑制效率;细胞划痕实验检测各组HeLa细胞的迁移能力;Transwell实验检测各组HeLa细胞的侵袭能力;RT-PCR和Western blotting分别检测ANXA5低表达对E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(MMP)-9 mRNA及蛋白表达的影响。结果干扰组ANXA5蛋白及mRNA的表达均明显低于阴性对照组(P0.05);其表达均被显著抑制,干扰组细胞的迁移及侵袭能力比阴性对照组明显增强(P0.05),E-cadherin mRNA及蛋白的表达显著低于阴性对照组(P0.05);干扰组MMP-9mRNA及蛋白的表达均显著高于阴性对照组(P0.05)。结论靶向ANXA5的siRNA可有效抑制ANXA5的表达,且ANXA5低表达可能通过影响E-cadherin和MMP-9的表达来促进HeLa细胞的迁移和侵袭能力。     

miR-95对结肠癌细胞系SW620侵袭和迁移的影响及机制

目的探讨小分子非编码RNA-95(miR-95)表达对结肠癌细胞系SW620侵袭、迁移能力的影响及其机制。方法将miR-95干扰慢病毒转入结肠癌细胞系SW620,用qRT-PCR检测细胞中miR-95表达,用Transwell小室和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;MTT法检测细胞同种、异种细胞黏附能力;用Western印迹检测3组细胞的EMP1,VEGFC和MMP2蛋白表达。结果 SW620转染miR-95干扰慢病毒72 h后,转染率较高;与空病毒组和对照组比较,转染组miR-95的表达降低(P0.05);侵袭和迁移能力减弱(P0.05);同种黏附能力增强(P0.05);异种黏附能力减弱(P0.05);同时转染组EMP1蛋白表达明显增高,VEGFC、MMP2蛋白表达明显降低(P0.05)。结论 miR-95能够促进SW620细胞侵袭和迁移能力,可能是通过EMP1、VEGFC和MMP2实现的。     

下调MARCH8基因的表达对宫颈癌Siha细胞侵袭、迁移与增殖的影响

目的：研究下调MARCH8基因表达对人宫颈癌Siha细胞侵袭、迁移、增殖以及克隆的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：构建特异性针对MARCH8基因的siRNA片段,并将其通过脂质体介导转染至宫颈癌Siha细胞,同时设立转染无义序列的阴性对照组。分别采用Real-time PCR法与蛋白质印迹法检测转染后,细胞中MARCH8在mRNA和蛋白水平上的表达改变。通过Transwell小室实验、划痕实验检测MARCH8表达下调对细胞侵袭、迁移能力的影响,通过CCK-8法、细胞平板克隆实验检测MARCH8表达下调对细胞增殖、克隆形成能力的影响,并采用蛋白质印迹法检测MARCH8基因表达下调对基质金属蛋白酶9（MMP9）,波形蛋白（Vimentin）以及增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达的影响。最后采用蛋白质印迹法检测MARCH8基因表达下调,对Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin以及E钙黏蛋白（E-cadherin）表达的影响。结果：与转入siRNA-NC组相比,转入siRNA-MARCH8组细胞MARCH8在 mRNA和蛋白表达水平上均明显降低,细胞的侵袭、迁移以及增殖和克隆形成能力明显被抑制（P<0.05）,且侵袭标记蛋白MMP9,Vimentin以及增殖标记蛋白PCNA的表达也明显下降。MARCH8基因表达成功下调后,转入siRNA-MARCH8组细胞中β-catenin蛋白的表达水平较阴性对照组明显下降（P<0.05）,而E-cadherin蛋白的表达水平明显升高（P<0.05）。结论：下调MARCH8基因的表达可以抑制宫颈癌Siha细胞的侵袭、迁移、增殖和克隆能力,其机制可能与Wnt/β-catenin通路的抑制有关。     

羟基红花黄色素A抑制人肝癌细胞系Huh7发生上皮-间质转化

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对人肝癌细胞系Huh7迁移及侵袭的影响,并通过体内外实验探究其是否影响肝癌细胞上皮-间质转化(EMT)。方法体外培养Huh7细胞,分为对照组、HSYA 80和160μmol/L实验组,分别处理24 h,用transwell小室法和细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测细胞vimentin和E-cadherin蛋白表达;建立Huh7细胞裸鼠皮下移植瘤模型,HE染色观察移植瘤和肝脏组织形态;免疫组化检测移植瘤组织TGF-β1、vimentin和E-cadherin表达情况。结果与对照组相比,HSYA实验组Huh7细胞迁移与侵袭能力明显下降,E-cadherin蛋白表达升高,vimentin蛋白表达下降(P0.05);与移植组相比,HSYA实验组(2.25 mg/kg)肝内无肿瘤细胞转移,移植瘤组织出现肿瘤细胞坏死,E-cadherin表达升高,vimentin和TGF-β1表达下降(P0.05)。结论 HSYA通过抑制肝癌细胞发生EMT,抑制肝癌细胞的迁移及侵袭能力。     

沉默PAK4基因对胶质瘤细胞U251侵袭与迁移能力的影响

目的观察沉默P21活化酶4(p-21 activated kinase 4, PAK4)基因对神经胶质瘤细胞U251侵袭与迁移能力的影响。方法构建稳定沉默PAK4基因的U251细胞系,shRNA-U251(转染空载组作为对照即shNC组);应用免疫荧光实验检测PAK4在胶质瘤细胞系U251中的表达;应用细胞划痕愈合实验与Transwell侵袭实验比较两组细胞的迁移与侵袭能力的变化;通过Western blotting实验检测沉默PAK4基因后U251细胞系中基质金属蛋白酶MMP2与MMP9的表达改变。结果 PAK4蛋白主要表达于胶质瘤细胞系U251细胞核与细胞质; shRNA-U251组细胞划痕愈合率明显降低; shRNA-U251组细胞进入小室下壁的数量明显减少,shRNA-U251组细胞MMP2与MMP9蛋白的表达水平显著下调。结论沉默PAK4基因下调神经胶质瘤细胞U251的迁移与侵袭能力与降低基质金属蛋白酶MMP2、MMP9的表达相关。     

芒柄花黄素对体外卵巢癌细胞活力、迁移与侵袭的影响

目的:观察芒柄花黄素对卵巢癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响,并初步探讨其机制。方法:体外培养人卵巢浆液性囊腺癌SKOV-3细胞,采用不同浓度(0、25、50和100μmol/L)芒柄花黄素处理细胞48 h,用MTS法检测细胞活力,并筛选出半数抑制浓度。通过划痕迁移实验和Transwell侵袭实验检测芒柄花黄素对SKOV-3细胞迁移与侵袭能力的影响。RT-qPCR法和Western blot法检测细胞中的上皮钙黏素(E-cadherin)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA及蛋白表达的变化。结果:与对照组比较,SKOV-3细胞的活力随着芒柄花黄素浓度增加而下降(P<0.01)。50μmol/L芒柄花黄素组细胞迁移距离少于对照组(P<0.01)。50μmol/L芒柄花黄素组侵袭穿过Transwell小室底膜的细胞数量显著减少(P<0.01)。此外,50μmol/L芒柄花黄素组E-cadherin的mRNA及蛋白水平显著高于对照组(P<0.01),而MMP-9的mRNA及蛋白水平显著低于对照组(P<0.01)。结论:芒柄花黄素可能通过增加E-cadherin和降...     

钩吻碱通过下调circ_001680抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和侵袭

目的探讨钩吻碱对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs)增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法体外分离培养RASFs。经50、100、200μg/mL的钩吻碱干预24 h或转染circ_001680的小干扰RNA或过表达载体至RASFs后,CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室法检测细胞侵袭;蛋白印迹法检测E-cadherin和N-cadherin蛋白表达;RT-qPCR检测circ_001680表达。结果钩吻碱或干扰circ_001680表达可降低RASFs的增殖、克隆形成数、划痕愈合率和侵袭细胞数及细胞中N-cadherin蛋白表达(P<0.05),而促进E-cadherin蛋白表达(P<0.05)。钩吻碱可降低RASFs中circ_001680的表达(P<0.05),过表达circ_001680减轻钩吻碱对RASFs增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论钩吻碱可抑制RASFs增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与下调circ_001680表达有关。