CXCL8、HIF-1α在宫腔粘连子宫内膜组织表达及相关性分析

目的 探讨CXC趋化因子配体-8(CXCL8)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在宫腔粘连（IUA）患者子宫内膜组织中的表达及相关性。方法 收集2018年6月至2020年9月行宫腔粘连分离手术（TCRA）治疗的IUA患者60例,IUA患者在行TCRA前判断IUA严重程度,轻度19例（轻度IUA组）,中度22例（中度IUA组）,重度19例（重度IUA组）。收集同期在本院因子宫纵隔、输卵管性不育行常规宫腔镜检查的25例患者为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测所有组织中CXCL8 mRNA、HIF-1α mRNA表达水平;Western blot检测组织中CXCL8、HIF-1α蛋白表达。免疫组化法检测组织中CXCL8、HIF-1α表达。Pearson法分析IUA患者子宫内膜组织中CXCL8、HIF-1α的相关性。结果 与对照组相比,轻度IUA组、中度IUA组、重度IUA组CXCL8 mRNA、HIF-1α mRNA及蛋白表达水平依次升高（P<0.05）;Pearson相关性分析显示,IUA患者子宫内膜组织CXCL8 mRNA、HIF-1α mRNA相对表达水平呈正相关（P<...     

绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞在脑缺血大鼠体内迁移的实验研究

目的:探讨基质细胞衍生因子-1α（SDF-1α）对骨髓间充质干细胞(BMSCs)在SD大鼠脑缺血后迁移至脑损伤区的影响。方法:构建大脑中动脉阻塞的脑缺血模型;50只大鼠随机分为脑缺血PBS对照组、脑缺血MSCs治疗组。将腺病毒携带的增强型绿色荧光蛋白(EGFP）标记的MSCs,在脑缺血1d后经尾静脉注射入大鼠体内;用实时定量PCR检测缺血半暗带区基质细胞衍生因子-1α（SDF-1α）的分泌;用流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞上CXCR4的表达率;用荧光共聚焦显微镜扫描显示骨髓间充质干细胞的迁移。结果:GFP转染率大约87%转染骨髓间充质干细胞;实时定量PCR显示大鼠海马分泌的SDF-1α在1 d时达到峰值,1-14 d一直维持在较高的水平,14 d后开始缓慢下降,而皮质分泌的SDF-1α在第3 d开始缓慢上升,14 d才达到峰值;流式细胞仪检测BMSCs表面的CXCR4有14%;GFP标记的BMSCs移植后6 h发现聚集在大脑中动脉起始处（嗅球）,在第3 d后在丘脑等缺血半暗带区,在14 d后皮质处的GFP+BMSCs已有明显的增加。结论:损伤组织SDF-1α浓度的升高与骨髓间充质干细胞迁移的增加可能存在一定的关系。     

情志刺激加速小鼠动脉硬化进展与SDF-1/CXCR4失衡的相关性研究

目的:通过观察情志刺激对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠血浆、血小板、主动脉、海马及骨髓组织中基质细胞衍生因子1(SDF-1)和CXC趋化因子受体4(CXCR4)表达的影响,揭示情志刺激加重动脉粥样硬化斑块易损性的可能机制.方法:30只8周龄雄性ApoE-/-小鼠随机分为正常对照组、高脂组和情志刺激模型组,每组...     

miR-22靶向TGFβR1对宫腔粘连大鼠内膜组织的影响

目的 探究微小RNA-22(miR-22)对转化生长因子β受体1(TGFβR1)的调控作用,及对宫腔粘连（IUA大鼠内膜组织损伤的影响。方法 取2016年8月—2019年6月于我院进行宫腔镜手术的10例IUA患者及非IUA患者子宫内膜组织,用反转录PCR(RT-PCR)法测miR-22、TGFBR1 mRNA、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA表达。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、miR-22激动剂（agomir-miR-22）组、agomir-miR-22阴性对照（agomir-NC）组、TGFBR1基因过表达（ad-TGFBR1）组、ad-TGFBR1阴性对照（ad-pcDNA-NC）组、agomir-miR-22+ad-TGFBR1组,每组10只。用子宫内膜刮除法建立IUA模型,干预miR-22及TGFBR1表达后,取子宫内膜组织,观察子宫内膜粘连情况并进行评分;苏木素-伊红（H-E）染色观察组织病变;马森（Masson）染色观察纤维化程度;免疫组化法检测TGFBR1阳性表达;Western blot法检测T...     

SDF-1/CXCR4轴通过调控间充质干细胞定向分化修复缺氧缺血性脑损伤

目的:探讨基质细胞衍生因子-1(stromalcell-derivedfactor-1,SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCchemokinereceptor4,CXCR4)轴调控间充质干细胞定向分化、修复缺氧缺血性脑损伤的作用。方法:大鼠间充质干细胞(ratmesenchymalstemcells,rMSCs)经缺氧培养不同时点(0h、6h、12h、24h、48h、72h)或SDF-1α(10μg/L)孵育后,采用RT-PCR、Westernblotting和流式细胞术检测其表面CXCR4表达的变化;建立大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,运用RT-PCR和Westernblotting检测造模后不同时点(1d、3d、5d、7d、14d、21d)大鼠脑部海马组织中SDF-1αmRNA转录和蛋白表达的改变情况;用AMD3100(CXCR4拮抗剂)拮抗rMSCs表面CXCR4后,免疫细胞化学和Westernblotting检测rMSCs诱导向神经细胞分化中神经元特异性烯醇化酶(neuron-specificenolase,NSE)和胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)等神经细胞特异性标志物的阳性率及表达变化情况。结果:低氧培养6h及12h的rMSCsCXCR4mRNA及蛋白表达水平均较常氧培养组明显增加(P<0.01),10μg/LSDF-1α孵育后rMSCs的CXCR4表达水平明显增加(P<0.01);缺氧缺血性脑损伤模型的大鼠脑内SDF-1α蛋白表达显著增加(P<0.01);5mg/LAMD3100处理后的rMSCs在向神经细胞诱导分化中NSE和GFAP蛋白的表达明显减少。结论:微小剂量的SDF-1α可诱导低氧培养的rMSCs表面CXCR4的表达,而在缺氧缺血性脑损伤模型的大鼠脑内SDF-1α表达增加,从而使SDF-1/CXCR4轴的生物学效应得以增强;CXCR4拮抗的rMSCs在分化中神经细胞特异性标志物NSE和GFAP的表达降低,表明SDF-1/CXCR4轴在rMSCs定向神经分化修复缺血缺氧脑损伤中具有重要的调控作用。     

红细胞生成素对慢性肾衰竭大鼠外周血内皮祖细胞SDF-1及其受体表达的影响*

 目的：观察红细胞生成素（EPO）对慢性肾衰竭（CRF）大鼠外周血内皮祖细胞（EPCs）归巢因子表达的影响。方法：采用分阶段5/6肾切除制备大鼠CRF模型。实验动物随机分为3组：假手术组、CRF组和EPO治疗组。从第3周开始,治疗组大鼠每次皮下注射重组人EPO 50 U/kg,每周3次,共6周。8周时取其外周血分离与培养EPCs,并检测EPCs的功能。采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测外周血EPCs基质细胞衍生因子1 （SDF-1）及其受体（CXCR4）、EPO及其受体（EPOR）mRNA和蛋白的表达。结果：与CRF组比较,EPO治疗可上调外周血EPCs中SDF-1和CXCR4 mRNA及蛋白的表达（均P<0.05）;此外,EPO还可上调CRF大鼠外周血EPCs的 EPO及EPOR mRNA和蛋白的表达（均P<0.05）。结论：EPO对慢性肾衰竭大鼠外周血EPCs的动员可能与其增加外周血EPCs的 SDF-1及其受体表达有关。     

转化生长因子β1促进大鼠子宫内膜纤维化

目的 探讨大鼠子宫内膜纤维化中转化生长因子β1(TGF-β1)的表达及相关机制。方法 将SD雌性大鼠随机分成假手术组(n=12)和模型组(n=12)。术后7、14及28 d收集双侧子宫组织,HE染色观察子宫内膜形态,动态观察子宫内膜病理改变和子宫内膜腺体数目;Masson染色检测子宫内膜纤维化程度;免疫组织化学法检测TGF-β1及α-SMA蛋白表达。结果 相比假手术组,模型组大鼠子宫结构破坏;术后7、14和28 d,子宫内膜TGF-β1蛋白表达显著升高(P<0.05);术后14和28 d,子宫内膜腺体数目明显减少、子宫内膜纤维化面积比例明显增加,α-SMA蛋白表达上调(P<0.05)。结论 TGF-β1可能通过激活肌成纤维细胞及相关信号通路进一步促进子宫内膜纤维化。     

脂联素调控SDF-1α/CXCR4信号轴在炎症微环境下牙周膜干细胞成骨分化中的作用

目的 研究脂联素通过调控基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)/CXC趋化因子受体4(CXCR4信号轴对炎症微环境下牙周膜干细胞（PDLSCs）成骨分化中的影响。方法 原代培养PDLSCs后取第三代细胞进行分组处理,进行成骨分化诱导并用10 ng/mL肿瘤坏死因子-α(TNF-α)模拟微炎症环境、用10μg/mL脂联素处理、转染阴性对照（NC）或SDF-1α的siRNA。成骨诱导第3、5、7 d时,检测碱性磷酸酶（ALP）活性,骨钙素（OCN）、骨保护素（OPN）、SDF-1α、CXCR4的m RNA表达,SDF-1α的含量;成骨诱导第21 d时,进行茜素红染色、观察钙盐沉积情况。结果 炎症微环境下PDSCSs的成骨分化及SDF-1α/CXCR4信号轴的激活均受到抑制;脂联素在炎症微环境下促进PDSCSs的成骨分化及SDF-1α/CXCR4信号轴的激活;转染SDF-1α的siRNA后,SDF-1α/CXCR4信号轴的激活受到抑制,脂联素在炎症微环境下促进PDSCSs成骨分化的作用也被抑制。结论 脂联素通过激活SDF-1α/CXCR4信号轴促进炎症微环境下PDSCSs的成骨分化。     

软骨损伤后基质细胞衍生因子1的表达

背景：研究表明基质细胞衍生因子1对骨髓间充质干细胞的迁移、聚集有影响。 目的：观察软骨损伤后不同时间损伤修复区组织基质细胞衍生因子1的表达以及与骨髓间充质干细胞迁移的关系。 方法：建立兔软骨损伤模型,分别于建模后2,5,7,10,14,28 d取损伤灶及边缘区组织,检测基质细胞衍生因子1表达和体外细胞迁移实验,观察基质细胞衍生因子1对骨髓间充质干细胞、软骨细胞的迁移影响。 结果与结论：基质细胞衍生因子1的表达呈现出时间变化的趋势,软骨损伤后第7天达到高峰(P < 0.05)。体内移植的骨髓间充质干细胞主要聚集在软骨损伤灶周围,但在封闭CXC趋化因子受体4后,此聚集现象逐渐减弱(P < 0.05)。结果证实,局部组织中基质细胞衍生因子1的表达在软骨损伤早期明显升高,对骨髓间充质干细胞向软骨损伤修复区迁移有重要作用。     

圣愈汤对胶原诱导性关节炎小鼠踝关节组织SDF-1/CXCR4信号通路的影响

目的 探讨圣愈汤对胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠的治疗作用,及对基质细胞衍生因子1(SDF-1)/趋化因子受体4(CXCR4)信号轴的调控作用.方法 取DAB/1小鼠72只,用随机数字表法分为正常对照组、模型组、阳性对照组(甲氨蝶呤,0.1 mg/kg)组和低(9g/kg)、中(18 g/kg)、高(36 g/kg)剂...     

依托考昔抑制SDF-1/CXCR4信号通路影响骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及炎性因子表达

为探讨依托考昔对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡、炎性因子表达的影响及其对基质细胞衍生因子1 (stromal cell derived factor 1,SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)信号通路的调控作用,原代分离培养人骨关节炎软骨细胞,分别加入浓度为12....     

体外阻断基质细胞衍生因子1/CXC趋化因子受体4信号通路后人关节软骨组织Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的表达

背景：基质细胞衍生因子1/CXC趋化因子受体4信号通路在骨关节炎的发病中起关键作用。 目的：探讨AMD3100体外阻断基质细胞衍生因子1/CXC趋化因子受体4信号通路后对培养的关节软骨组织Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖mRNA表达及Ⅱ型胶原蛋白表达的影响。 方法：将骨关节炎软骨和创伤性截肢患者正常软骨分别分为3个小组即实验组,实验对照组,空白对照组。将其置于含基质细胞衍生因子1和AMD3100,含基质细胞衍生因子1和MAB310,只含基质细胞衍生因子1的培养液培养。 结果与结论：实验组软骨组织内的Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA表达量、Ⅱ型胶原蛋白含量高于实验对照组和空白对照组(P < 0.05)。可见基质细胞衍生因子1通过基质细胞衍生因子1/CXC趋化因子受体4信号通路诱导人关节软骨中Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的降解;AMD3100可阻断该信号通路及减少软骨中Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖的降解,延缓关节软骨组织的退变;AMD3100不能使已退变的骨关节炎软骨内的Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖含量恢复到正常水平。     

补阳还五汤促进内皮祖细胞修复损伤血管内皮

目的:探讨补阳还五汤(BYHWD)促进内皮祖细胞(EPCs)修复损伤血管内皮的作用及相关机制。方法:以补阳还五汤灌胃及EPCs尾静脉输注作用于内皮损伤的模型大鼠,从血管内皮的形态、功能和EPCs归巢等方面评价内皮损伤修复情况;从血管内环境改善和基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及其受体趋化因子受体-4相关蛋白表达了解该方促进EPCs修复受损血管的机制。结果:与单用EPCs组和单用BYHWD组比较,BYHWD联合EPCs组内膜厚度明显减少,甘油三酯、总胆固醇及血钙含量降低,高密度脂蛋白含量升高;此外,BYHWD联合EPCs组血管内皮型一氧化氮合酶(e NOS)及血管SDF-1蛋白表达均显著增加。结论:补阳还五汤能促进EPCs修复损伤的血管内皮,其作用机制可能与调控内环境以及促进EPCs的归巢有关。     

缺血预适应对大鼠保留肾单位手术中缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究

目的 探讨缺血预适应(IPC)动员肾祖细胞(RPC)归巢在保留肾单位手术(NSS)中对肾脏缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用及其发生机制。方法 选取2~3月龄、体质量250~300 g的雄性SD大鼠54只,建立切除右肾的单肾模型后采用数字表法随机分为3组,每组18只:假手术组(Sham组,无血管夹闭),NSS组(肾动脉夹闭45 min后行NSS),IPC组(先进行肾动脉夹闭15 min,再灌注10 min预处理,再行NSS)。分别在术后12、24、72 h每组各取出6只大鼠,收集血液及肾组织标本,之后采用颈椎脱臼法处死大鼠。观察项目:(1)检测血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN);(2)组织病理学检查及肾小管损伤评分;(3)在24 h观察IPC对肾组织中RPC数量的影响,以及IPC对基质细胞衍生因子(SDF-1)、受体CXCR7表达水平的影响。结果 (1)术后12、24、72 h 时3组大鼠SCr和BUN值比较, IPC组分别为(65.0±10.78)、(91.5±15.12)、(52.6±11.68)μmol/L和(14.78±2.77)、(18.31±4.99)、(9.41±2.73)mmol/L,NSS组分别为(80.5±12.63)、(116.9±14.32)、(83.7±11.43)μmol/L和(18.58±4.18)、(28.86±5.64)、(19.49±3.83)mmol/L, Sham组分别为(41.5±7.36)、(39.7±7.55)、(42.7±7.15)μmol/L和(7.72±1.75)、(7.40±1.98)、(6.83±2.09)mmol/L;除72 h时IPC组与Sham组SCr和BUN值比较差异无统计学意义(P＞0.05)外,在12 h和24 h,IPC组均高于Sham组、低于NSS组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。(2)术后12、24、72 h肾小管损伤评分IPC组和NSS组均高于Sham组,术后12、24 h IPC组较NSS组肾小管损伤评分低,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。(3)术后24 h,IPC组和NSS组大鼠肾组织中RPC数量明显增加、SDF-1和CXCR7表达显著升高,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。结论 IPC可促进RPC归巢,缓解NSS中IRI损伤程度,保护肾功能,SDF-1/CXCR7轴可能在这一动员过程中发挥了重要作用。     

NONHSAT248596.1内源性竞争miR-146a-5p调控骨关节炎软骨退变的机制

背景：目前已有针对lncRNAmiRNAmRNA的共表达网络对骨关节炎发生发展调控机制的研究,课题组前期研究已通过数据库筛选出符合条件的NONHSAT248596.1和miR-146a-5p,尚缺乏体内实验来验证上述调控机制。目的：探究NONHSAT248596.1在基质细胞衍生因子1/4型趋化因子受体轴介导体内骨关节炎软骨退变进程中对miR-146a-5p发挥的竞争性内源性RNA调控作用。方法：取36只新西兰兔,通过向右侧后肢膝关节注射基质细胞衍生因子1溶液建立骨关节炎模型,采用随机数字表法分4组,lncRNA组、mi RNA组、ce RNA组、对照组分别向造模膝关节内注射NONHSAT248596.1过表达的慢病毒载体、mi R-146a-5p过表达的慢病毒载体、mi R-146a-5p+NONHSAT248596.1过表达的慢病毒载体及空慢病毒载体。造模第4,8,12周,取膝关节软骨组织和软骨下骨组织进行相关检测。结果与结论：(1)苏木精-伊红与番红O固绿染色显示,4组软骨组织都有不同程度的退变表现,造模第4周时,lncRNA组软骨组织中的软骨细胞肿胀、细胞极性消失,细胞外基质破...     

基质细胞衍生因子1α预处理大鼠骨髓间充质干细胞的迁移

背景：骨髓间充质干细胞移植过程中只有少量细胞能定向迁移到损伤组织,因此如何提高细胞定向迁移的数量是干细胞移植的关键因素。 目的：观察基质细胞衍生因子1α预处理对大鼠骨髓间充质干细胞定向迁移的影响。 方法：体外分离培养骨髓间充质干细胞,予以传代。使用Transwell体外迁移体系,观察不同浓度的基质细胞衍生因子1α趋化骨髓间充质干细胞定向迁移,选取最佳浓度值趋化细胞。在基质细胞衍生因子1α预处理、CXCR 4型受体阻断剂AMD3100和Akt通路阻断剂LY294002的干预下观察骨髓间充质干细胞的趋化迁移情况,检测基质细胞衍生因子1α预处理对骨髓间充质干细胞中CXCR 4型受体 mRNA、蛋白水平及AKT磷酸化的影响。 结果与结论：0.2 mg/L的基质细胞衍生因子1α孵育细胞10 h具有最佳趋化细胞迁移效应。骨髓间充质干细胞的定向趋化迁移作用随着基质细胞衍生因子1α预处理细胞浓度的增加而增强,预处理时间为6 h;而AMD3100和LY294002可阻断基质细胞衍生因子1α预处理的促迁移作用;基质细胞衍生因子1α预处理可上调骨髓间充质干细胞CXCR 4型受体的表达并促进Akt蛋白磷酸化。提示基质细胞衍生因子1α预处理可通过增加骨髓间充质干细胞表面的CXCR 4型受体数量,从而增强基质细胞衍生因子1α/CXCR4型受体介导的骨髓间充质干细胞定向迁移,该预处理效应可能与Akt信号途径有关。     

IL-1受体拮抗剂对大鼠肝星状细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及TIMP-1 mRNA表达的影响

目的:研究白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)对大鼠肝星状细胞(HSC)Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(Col-Ⅲ)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)基因表达的影响,探讨IL-1ra抗肝纤维化作用的机制.方法:原位分离、培养大鼠HSC,荧光显微镜观察及免疫细胞化学染色法鉴定.用1 μg/L、10 μg/L、100 μg/L 3个浓度的IL-1ra分别作用于HSC 48 h,实时荧光定量RT-PCR法检测Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和TIMP-1 mRNA的表达.结果:对照组Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和TIMP-1mRNA的表达水平分别为1.97±0.29、2.70±0.57、3.83±0.30.加入1 μg/L、10 μg/L、100 μg/L IL-1ra后Col-Ⅰ基因表达水平依次为1.34±0.35、0.86±0.19、0.35±0.03;Col-Ⅲ基因表达水平依次为2.02±0.29、1.13±0.09、0.47±0.11;TIMP-1 mRNA的表达水平依次为3.12±0.25、2.53±0.38、1.98±0.18,与对照组比较,不同浓度处理组Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和TIMP-1 mRNA的表达均明显降低(P<0.05).结论:IL-1ra以剂量依赖方式抑制HSC中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ及TIMP-1 mRNA的表达,具有抗纤维化作用.     

细胞内趋化因子重组突变体SDF-1α/54/KDEL的构建及其对CXCR4受体在细胞膜表面表达的抑制作用

构建人基质细胞衍生因子(SDF-1)突变体SDF-1α/54/KDEL重组真核表达质粒,并考察其对T细胞性白血病细胞株Molt-4细胞表面受体CXCR4表达的影响,为尝试表型敲除肿瘤细胞CXCR4以抑制肿瘤的转移提供理论和实验依据.以SDF-WT-Gly×4-Dec/PET30a( )质粒为模板,用PCR法扩增出SDF-1α/54并将其亚克隆至真核表达质粒pEGFP-C3构建成真核表达载体pEGFP-C3/SDF-1α/54/KDEL.经酶切及测序验证后,脂质体介导转染入COS-7细胞,通过Western blot检测SDF-1α/54/KDEL的表达.电穿孔法将重组载体瞬时转染CXCR4高表达的Molt-4,并用流式细胞仪检测CXCR4含量的变化.DNA测序证明:读码框完全正确,重组真核表达载体含有SDF-1α/54基因和编码4肽KDEL的基因,Western blot证明融合蛋白能在COS-7细胞表达.电穿孔转染Molt-4细胞后发现,SDF-1α/54/KDEL可以显著降低胞膜表面CXCR4表达量.由此提示: KDEL介导的SDF-1α/54对Molt-4细胞CXCR4具有表型敲除作用,且此效应不受SDF-1α C端α螺旋缺失的影响.