抑制铁死亡可减轻脓毒症小鼠的心肌损伤：脂钙蛋白-2的作用

目的 观察铁死亡在盲肠结扎与穿孔（CLP）法诱导的脓毒症小鼠心肌损伤中的作用,并探讨脂钙蛋白-2（Lcn2）在铁死亡中的可能作用。方法 选取8周龄雄性C57BL/6小鼠,采用CLP法诱导脓毒症心肌损伤模型。小鼠随机分为3组（10只/组）：假手术组、脓毒症组（CLP,小鼠接受CLP手术）、脓毒症+铁死亡抑制剂Ferrostain-1组（CLP+Fer-1,小鼠腹腔注射浓度为5 mg/mL的Fer-1 5 mg/kg,1 h后接受CLP手术）。各组小鼠术后24 h通过超声心动图检测小鼠心功能。H&E染色观察心肌损伤,透射电镜观察心肌纤维细微结构和线粒体的变化;ELISA法测定血清中炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;组织铁试剂盒测定心肌组织铁含量的变化;Western blot法检测心肌组织中Lcn2蛋白和铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）和铁死亡抑制蛋白1（FSP1）的表达变化。结果 与假手术组相比,CLP术后24 h,脓毒症小鼠心脏收缩与舒张功能减弱,左心室射血分数（LVEF%）、左心室缩短分数（LVFS%）和左心室舒张末期内径（LVIDd）降低（P<0.05）;左心室收缩期末期内径（LVIDs）升高（P<0.05）。与CLP组相比,CLP+铁死亡抑制剂Fer-1组LVEF%、LVFS%和LVIDd升高（P<0.05）;LVIDs降低（P<0.05）。光镜下观察到CLP小鼠心肌纤维排列不整齐,部分变性,有炎症细胞浸润,间质水肿,横纹模糊,红细胞渗出。透射电镜观察到部分线粒体嵴减少,外膜破裂,部分线粒体变小,膜密度增高。CLP+Fer-1组小鼠心肌形态学有改善,线粒体损伤减轻。与假手术组相比,CLP组血清TNF-α水平、心肌组织铁含量、Lcn2蛋白表达升高（P<0.01）,GPX4、FSP1蛋白表达降低（P<0.01）。与CLP组相比,CLP+Fer-1组血清TNF-α水平、心肌组织铁含量、和Lcn2蛋白表达降低（P<0.05）;GPX4、FSP1蛋白表达升高（P<0.05）。结论 来源于GPX4、FSP1不同途径的铁死亡参与CLP引起的脓毒症性心肌损伤的发生,抑制铁死亡可减轻脓毒症心肌损伤,Lcn2可能参与其中。     

抑制Pannexin1可能通过减少NLRP3炎症小体的激活减轻脓毒症小鼠脑损伤

目的：探究缝隙连接蛋白Pannexin 1(Panx1)是否参与脓毒症小鼠脑损伤的发生发展及其可能的作用机制。方法：清洁级健康成年雄性C57BL/6小鼠45只,采用随机数字表法分为以下3组：假手术（Sham）组、盲肠结扎穿孔（CLP）组、甘珀酸（Panx1通道抑制剂,CBX）预处理+盲肠结扎穿孔（CLP+CBX）组。除Sham组外,其余两组采用CLP法制备脓毒症脑损伤模型。CLP+CBX组于造模前30 min经双侧侧脑室各注射1μL CBX,对照组双侧侧脑室注射等剂量生理盐水。造模后24 h对各组小鼠行神经行为评分,后麻醉、处死小鼠,心脏灌流后取脑组织,HE染色切片观察海马组织病理损伤,ELISA试剂盒法测定海马组织IL-1β与TNF-α含量,Western Blot及免疫组化检测海马组织Panx1蛋白表达水平,Western Blot检测NLRP3、Caspase-1蛋白表达水平,RT-PCR检测Panx1、NLRP3、Caspase-1及IL-1β与TNF-α mRNA表达水平。结果：与Sham组相比,CLP组神经行为评分明显降低,海马神经元病理损伤明显,IL-1β与TNF-α表达...     

辛伐他汀对脓毒症大鼠心肌保护作用的实验研究

目的探讨辛伐他汀对脓毒症大鼠心肌损害的保护作用及可能机制。方法将30只4周龄清洁级雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术对照组(Sham组)、脓毒症模型组(CLP组)和辛伐他汀干预组(Sim组)。Sham组仅开腹翻动盲肠;CLP组及Sim组行盲肠结扎穿刺术;Sim组于术后尾静脉注射辛伐他汀20 mg·kg-1+10%二甲基亚砜(DMSO)1 mL·kg-1和生理盐水2 mL·kg-1,其他各组均注射生理盐水3 mL·kg-1。Sham组于术后5 h、CLP组及Sim组分别于术后52、0 h处死6只大鼠,留血液和心肌组织标本。分别测定血清心肌酶CKMB、心肌组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及心肌组织一氧化氮(NO)含量,观察心肌组织病理变化并采用免疫组织化学测定TOLL样受体4(TLR-4)蛋白表达。结果 CLP组心肌组织损伤明显,TLR-4表达明显,CKMB、TNF-α、NO水平较Sham组均显著升高(均P<0.01),其中CKMB、TNF-α水平和TLR-4表达于5 h较高,而NO水平于20 h较高。Sim组心肌病理损伤减轻,且各指标表达较CLP组均显著下降(均P<0.01)。结论辛伐他汀能减轻脓毒症大...     

miR-145-5p对脓毒症小鼠心肌损伤的保护作用及其机制

目的 探讨miR-145-5p对脓毒症小鼠心肌损伤的保护作用及其机制。方法 80只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术+尾静脉注射agomir-NC组(sham+ago-NC)、假手术+尾静脉注射agomir-miR-145-5p组(sham+ago-miR)、脓毒症+尾静脉注射agomir-NC组(CLP+ago-NC)和脓毒症+尾静脉注射agomir-miR-145-5p组(CLP+ago-miR),每组20只。采用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症模型。绘制小鼠生存曲线，ELISA法检测血清心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)和肌钙蛋白I(cTnI)水平以及促炎细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达，HE染色观察心肌组织微观结构，超声仪检测心脏收缩功能(LVEF、LVFS),免疫荧光染色检测CD68、Ly6G、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)和凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达情况，碘化丙啶染色评估心肌细胞焦亡，qRT-PCR检测miR-145-5p表达，Western blot检测NLRP3、AS...     

线粒体靶向抗氧化剂Mito-Tempo对脓毒症小鼠急性肝损伤的保护作用

目的：探讨线粒体靶向抗氧化剂Mito-Tempo对脓毒症小鼠急性肝损伤的影响及可能机制。方法：将C57BL/6小鼠随机分为对照组（Control组）、盲肠结扎穿刺组（CLP组）、Mito-Tempo治疗组（CLP+Mito-Tempo组）。采用盲肠结扎穿刺术（cecal ligation and puncture,CLP）构建小鼠脓毒症急性肝损伤模型,CLP+Mito-Tempo组在CLP处理前1 h使用Mito-Tempo腹腔注射进行预处理。24 h后麻醉并处死小鼠,取小鼠肝脏组织进行HE染色观察肝组织病理损伤;ELISA法监测血清中炎症因子,免疫荧光染色检测肝组织中活性氧（reactive oxygen species,ROS）的水平;电镜观察线粒体形态,Western blot法检测细胞焦亡相关蛋白剪切型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase 1,cleaved-Caspases-1)、剪切型焦孔素D(cleaved-gasdermin D,GSDMD)、白细胞介素-1α(interleu...     

激活乙醛脱氢酶2的表达可减轻过氧化氢诱导的心肌细胞损伤

目的探讨线粒体乙醛脱氢酶2（ALDH2）在过氧化氢（H2O2）诱导的心肌细胞氧化应激损伤中的变化。方法正常体外培 养的H9C2心肌细胞,取对数生长期细胞建立H2O2氧化应激损伤模型,分为正常对照组、正常+ ALDH2激动剂Alda-1组、H2O2损 伤组、H2O2+ALDH2激动剂Alda-1组、H2O2+ALDH2抑制剂Daidzin组;MTT比色法测定各组心肌细胞活力,DHE荧光染色检测 各组心肌细胞氧化应激水平,分光光度法和Western blotting法分别检测ALDH2活性及蛋白水平变化。结果与正常对照组相比, 正常+ALDH2激动剂Alda-1组心肌细胞活力、氧化应激水平、ALDH2活性水平和蛋白表达均无明显变化（P>0.05）;H2O2损伤组心 肌细胞活力明显下降,DHE荧光染色显示氧化应激水平明显升高,ALDH2 活性和蛋白表达降低（P<0.05）;给予Alda-1 激动 ALDH2 后,与H2O2损伤组相比,心肌细胞活力升高,氧化应激水平下降,ALDH2 活性和蛋白表达均明显升高（P<0.05）;给予 Daidzin阻断ALDH2后,与H2O2损伤组相比,心肌细胞活力、氧化应激水平、ALDH2活性水平和蛋白表达均无明显变化（P<0.05）。 结论H2O2直接诱导H9C2心肌细胞ALDH2活性及蛋白表达下降;提高心肌ALDH2表达可减轻H2O2诱导的氧化应激损伤。     

线粒体细胞色素c释放抑制剂对大鼠全脑缺血再灌注损伤炎症反应的作用

目的探讨线粒体细胞色素c抑制剂对大鼠全脑缺血再灌注后脑损伤的作用,分析线粒体乙醛脱氢酶2（ALDH2）和炎症反应在其中的机制。方法通过四血管阻断法模拟大鼠全脑缺血再灌注损伤（I/R）模型,雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、I/R组、ALDH2激动剂Alda-1+I/R组、Bax介导的线粒体细胞色素c释放抑制剂（Bcb）+I/R组。HE染色观察海马CA1区细胞形态学的变化;免疫组织化学观察海马CA1区ALDH2及炎症小体关键蛋白NLRP3表达水平,Western blotting检测海马CA1区4-HNE、NLRP3、IL-1β、IL-18及ALDH2的蛋白水平变化。结果与Sham组比较,I/R组再灌注7 d后,I/R组海马CA1区细胞存活率明显下降;与I/R组比较,Alda-1+I/R组、Bcb+I/R组的海马CA1区神经元存活率增高（P < 0.01）。与I/R组相比,Bcb+I/R组、Alda-1+I/R组海马CA1区ALDH2蛋白表达增加,海马CA1区NLRP3、IL-1β、IL-18、4-HNE蛋白表达下降（P < 0.01）。结论大鼠全脑缺血再灌注损伤模型中,海马CA1区NLRP3表达增高;Bcb可以通过促进线粒体ALDH2的表达、降低炎症反应发挥保护作用。     

Vaspin通过抑制KLK7改善败血症诱导的小鼠心脏损伤和心脏炎症

目的 探讨Vaspin是否参与脓毒症诱导的小鼠心脏损伤,并探讨其通过何种机制参与作用。方法 首先采用盲肠结扎穿刺(CLP)和脂多糖(LPS)建立脓毒症小鼠模型,将造模成功的小鼠分为模型组(CLP)、vaspin(0.1μg/kg)+CLP组、KLK7-/-+CLP组,并设置假手术组。每组小鼠15只,同时假手术组和模型组注射与药物等量的生理盐水。给药24 h后,超声检测各组小鼠血流动力学指标;乳酸脱氢酶(LDH)和CK-MB检测试剂盒检测各组小鼠体内LDH和心肌结合肌酸激酶(CK-MB),用以评估心脏损伤;苏木素-伊红(HE)染色检测各组小鼠心肌组织病理学变化;蛋白免疫印迹检测vaspin、KLK7、Cleaved caspase3、TNA-α、IL-6等蛋白水平;酶联免疫吸附(ELISA)检测小鼠体内TNA-α、IL-6等炎症因子水平。结果 与假手术处理的小鼠相比,接受CLP和LPS处理的小鼠心肌损伤明显,心脏和血清中vaspin的表达均增加,KLK7的表达也显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。在CLP小鼠中,vaspin预处理降低了死亡率,并减轻了心脏损伤标志物和心功...     

抗CD200抗体对脓毒症小鼠肝脏保护作用及其机制的研究

目的观察CD200在脓毒症小鼠肝脏的表达情况,并进一步探讨抗CD200抗体对脓毒症小鼠肝脏的保护作用及其可能的作用机制。方法构建脓毒症小鼠模型(CLP),将C57BL/6雄性小鼠分为假手术组、脓毒症组(CLP组),每组8只,观察各组小鼠肝脏组织CD200的表达水平;将C57BL/6雄性小鼠分为假手术组,脓毒症组(CLP组)、CLP+同型对照抗体治疗组(Isotype组)、CLP+抗CD200抗体治疗组(anti-CD200组),每组8只。检测各组小鼠外周血氨基转移酶水平、肝脏病理、腹腔灌洗液细菌负荷、外周血TNF-α、IL-6的水平、肝脏组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-6的mRNA水平、肝脏组织核转录因子-κB(NF-κB)磷酸化水平。结果脓毒症组小鼠的肝脏CD200表达水平明显高于假手术组(P<0.05);anti-CD200组小鼠肝脏组织的坏死程度明显轻于脓毒症组(P<0.05),TNF-α、IL-6水平低于脓毒症组(P<0.05),腹腔灌洗液细菌菌落的水平低于脓毒症组(P<0.05),NF-κB的磷酸化低于脓毒症组(P<0.05)。结论抗CD200抗体可以对脓毒症小鼠肝脏产生保护作用,其可能的机制为抑制NF-κB的磷酸化、减少炎症因子的释放。     

高迁移率族蛋白B1在脓毒症大鼠心肌损害中的表达和作用

目的:探讨脓毒症大鼠心肌高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在脓毒症心肌损害中的表达和作用。方法:48只清洁级健康雄性Wistar大鼠随机分成正常对照组(Normal组)、假手术组(Sham组)、脓毒症模型组(CLP组),各16只。于手术后24 h、48 h分别检测HMGB1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、肌钙蛋白(Tn)I浓度,光镜观察心肌病理变化。结果:与Normal及Sham组比较,CLP组在24 h、48 h HMGB1、TNF-α、IL-6及Tn I水平均显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);CLP组术后48 h较24 h HMGB1增加值与TNF-α、IL-6及Tn I增加值间分别呈显著正相关(r=0.886,P<0.05;r=0.943,P<0.05;r=0.829,P<0.05)。光镜下CLP组可见心肌损伤。结论:HMGB1与脓毒症心肌损害密切相关,其介导的炎性反应在心肌损害的发生发展过程中起着重要的作用。     

硫化氢通过抑制ROS介导的内质网应激改善脓毒症心肌损伤的研究

  目的  探讨硫化氢（H₂S）对脓毒症心肌损伤中活性氧（ROS）介导的内质网应激的影响。  方法  采用盲肠结扎穿刺术（CLP）诱导SD大鼠脓毒症模型,将大鼠随机分成假手术（sham）组、脓毒症（CLP）组、脓毒症+硫氢化钠（NaHS）（CLP+NaHS）组。超声心动图观察各组大鼠左心室功能,检测大鼠血浆H₂S的水平;通过乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）水平检测以及ROS染色评估大鼠心肌氧化应激水平;HE染色观察大鼠心肌组织形态变化,透射电子显微镜观察心肌细胞线粒体超微结构;Western blot检测细胞内源性硫化氢合成酶半胱硫氨酸-γ-裂解酶（CSE）、3-巯基丙酮酸硫转移酶（3-MST）表达变化,内质网应激标志性蛋白:磷酸化（p）-激酶蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、p-细胞翻译启始因子2α（eIF2α）、p-肌醇需要酶1α（IRE1α）、活化转录因子（ATF）4和C/EBP同源蛋白（CHOP）的表达变化;TUNEL染色观察大鼠心肌细胞凋亡变化。   结果  脓毒症大鼠左室射血分数（LVEF）、左心室缩短分数（LVFS）降低（P<0.05）,血浆H₂S降低（P<0.05）,血浆H₂S与LVEF和LVFS呈线性相关（r2=0.62、r2=0.64,P均<0.05）。脓毒症组大鼠ROS水平明显增强,LDH水平增高（P<0.05）,MDA表达增强（P<0.05）,GSH表达下降（P<0.05）;在HE染色中可见炎性细胞浸润,心肌细胞水肿,透射电子显微镜可观察到线粒体明显损伤,可见线粒体水肿,嵴结构溶解等情况;Western blot结果显示,CSE、3-MST表达水平有所下降（P<0.05）,内质网应激标志性蛋白p-PERK、p-eIF2α、IRE1α、ATF4和CHOP蛋白表达水平升高（P<0.05）;TUNEL染色结果显示心肌细胞凋亡水平明显增加（P<0.05）。NaHS处理后,LVEF和LVFS升高（P<0.05）,血浆H₂S升高（P<0.05）。心肌氧化应激水平降低,HE与透射电镜显示心肌形态学有改善,线粒体损伤减轻,CSE、3-MST水平升高（P<0.05）,p-PERK、p-eIF2α、IRE1α、CHOP蛋白表达下降（P<0.05）,心肌细胞凋亡水平有所下降（P<0.05）。  结论  H₂S通过抑制ROS介导的内质网应激,减少脓毒症心肌细胞凋亡,从而改善脓毒症心肌功能障碍。     

脓毒症的免疫损伤

目的观察脓毒症小鼠脾淋巴细胞凋亡情况。方法采用盲肠结扎穿孔术复制小鼠脓毒症模型,30只小鼠随机分为假手术组(Sham组)和模型组(CLP组),术后24h取脾组织,行HE染色,观察病理变化,TUNEL法检测细胞凋亡。结果 CLP组脾脏白髓淋巴滤泡内则见大量灶性分布的凋亡淋巴细胞,凋亡的严重程度以凋亡指数(Apoptosis Index,AI)计算,CLP组与Sham组比较差异具有统计学意义(P<0.01)。结论脓毒症脾淋巴细胞凋亡明显增加,成为脓毒症免疫抑制的重要机制。     

右美托咪定对脓毒症小鼠脑损伤的保护作用

目的评价右美托咪定对脓毒症小鼠脑损伤的影响,并初步探讨其可能机制。方法雄性ICR(institute of cancer research)小鼠180只,6-8周龄,重20-25 g,采用随机数字表法分为4组:假手术组(S组)、假手术组+右美托咪定组(S+D组)脓毒症组(CLP组)、脓毒症+右美托咪定组(CLP+D组)。S+D组和CLP+D组于术后0,3,6 h腹腔注射右美托咪定20μg/kg。于CLP或假手术后6,12,24 h时,取脑组织采用伊文氏蓝染色和检测脑组织含水量来观察各组小鼠血脑屏障的破坏情况,并检测脑组织中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)的水平。于CLP或假手术后24 h时,取脑组织,采用Western blot法检测各组小鼠脑组织紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-5表达的改变,并行HE染色观察脑组织病理学改变。结果 S组和S+D组各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。与S组比较,CLP组于CLP后6,12和24 h时EB含量和脑组织含水量升高,脑组织中TNF-α和HMGB1的水平升高(P<0.05);于CLP后24 h时,脑组织紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-5表达下调(P<0.05),海马CA1区神经元排列紊乱、胞质深染,核固缩,结构不清晰。与CLP组相比,CLP+D组于CLP后6,12,24 h EB含量和脑组织含水量降低,脑组织中TNF-α和HMGB1的水平降低(P<0.05);于CLP后24 h时,脑组织紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-5表达上调(P<0.05),海马CA1区神经元排列尚规整,受损神经元减少。结论右美托咪定可通过减轻脓毒症小鼠血脑屏障的破坏来改善脑损伤,其机制与抑制炎症反应有关。     

线粒体ALDH2通过调控自噬对缺氧性肺动脉高压的保护机制研究

目的：探讨激活线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)可以降低因缺氧所引起的平滑肌细胞自噬,并降低肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的增殖,分析ALDH2对缺氧性肺动脉高压平滑肌增殖的调控关系。方法：将SPF级雄性SD大鼠分4组：正常对照组(N组)、常氧+ALDH2特异性激动剂Alda-1组(N+Alda-1组)、缺氧组(H组)、缺氧+Alda-1组(H+Alda-1组),将PASMCs分为6组：常氧组(N组)、常氧+Alda-1组(NA组)、缺氧组(H组)、缺氧+Alda-1组(HA组)、缺氧+ALDH2抑制剂Daidzin组(HD组)、缺氧+Alda-1+Daidzin组(HAD组)。HE染色观察各组动物肺组织中肺动脉病理变化;免疫荧光鉴定肺动脉平滑肌细胞;CCK-8测定各组细胞增殖能力;Annexin V-FITC/PI双染测定细胞凋亡水平;Western blotting检测各组ALDH2、p62、Beclin1、LC3B等蛋白的表达。结果：与N组相比,H组肺小动脉管壁增厚,管腔变窄;与HC组相比,H+Alda-1组的肺小动脉管壁厚度减轻,管腔狭窄程度有所改善;与N组相比,H组的ALDH...     

舒血宁对脓毒症大鼠心肌的保护作用

目的探讨舒血宁注射液对脓毒症损害的大鼠心肌是否具有保护作用。方法将30只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)与舒血宁注射液组(SXN组),CLP组与SXN组采用大鼠盲肠结扎穿孔术制造脓毒症模型。SXN组于盲肠结扎穿孔术前1h经腹腔注射0.3ml/kg舒血宁注射液,Sham组和CLP组于相同时间点给予0.3ml/kg生理盐水。术后6h时经腹主动脉取血行肌钙蛋白T(TnT)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β检测;取部分心肌匀浆,制成10%心肌组织悬液,测定超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)含量;部分心肌行H-E染色观察病理变化。结果与CLP组比较,舒血宁可显著降低CLP后血浆TnT、TNF-α与IL-1β水平以及心肌组织MDA含量,并使心肌SOD活性增强(P<0.05或0.01);组织学观察可见舒血宁可明显改善脓毒症组大鼠心肌充血、水肿及炎性细胞浸润等病理改变。结论舒血宁对脓毒症大鼠心肌损伤具有保护作用,其机制可能与其对心肌氧自由基的清除作用及对炎性介质的影响有关。     

西维来司他钠对脓毒症小鼠急性肝损伤的保护作用

目的 通过观察西维来司他钠对肝组织炎症因子及肝损伤指标的影响,探讨其对脓毒症急性肝损伤的保护作用。方法 60只SPF级雄性C57小鼠随机分为4组,每组15只。假手术（Sham）组：只进行开腹缝合手术,不进行盲肠结扎;假手术+西维来司他钠（Sham+S）组：假手术后腹腔注射100 mg/kg注射用西维来司他钠溶液;脓毒症（CLP）组：盲肠结扎法造模后腹腔注射100 mg/kg生理盐水;脓毒症+西维来司他钠（CLP+S）组：盲肠结扎法造模后腹腔注射100 mg/kg注射用西维来司他钠溶液。观察各组小鼠手术后的状态及活动情况,术后3、6、18小时检测血清中天门冬氨酸氨基转氨酶（AST）、谷氨酸氨基转移酶（ALT）的水平;ELISA法检测肝组织匀浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）的水平;肝脏组织HE染色观察病理变化。结果 与同时间点Sham组比较,CLP组血清AST、ALT的水平均显著升高（P<0.05）,肝组织匀浆中TNF-α、IL-6、NE的水平显著增高（P<0.05）;与同时间点CLP组比较,CLP+S组血清AST、ALT的水...     

胃促生长素对脓毒症大鼠脑功能障碍的影响及相关机制

目的探讨炎性因子在脓毒症大鼠脑功能障碍发病机制中的作用及胃促生长素(ghrelin)对脓毒症大鼠脑功能和脑部炎性反应的影响。方法将64只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为假手术组(Sham组)、假手术+ghrelin组(Sham+ghrelin组)、盲肠结扎穿孔(CLP)组及CLP+ghrelin组,每组16只。采用CLP法制作大鼠脓毒症脑病模型。Sham+ghrelin组和CLP+ghrelin组于造模后即刻及12h后腹腔注射ghrelin80μg/kg,Sham组及CLP组于相应时间点腹腔注射等量的0.9%氯化钠溶液。将每组再分为3个亚组:第1亚组6只,于术后6h采用动物神经功能评分表对大鼠进行评分,而后麻醉断头取左侧海马组织,采用酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子(TNF)-α及白细胞介素(IL)-6的表达情况;第2亚组6只,于术后24h进行上述处理;第3亚组4只,于术后24h灌注取脑组织行尼氏染色后进行病理学检查。结果造模后24h,CLP组及CLP+ghrelin组大鼠的神经功能评分均显著低于Sham组及Sham+ghrelin组(P值均<0.05),CLP+ghrelin组显著高于CLP组(P<0.05),Sham+ghrelin组与Sham组间的差异无统计学意义(P>0.05)。造模后6、24h,Sham组与Sham+ghrelin组间海马组织中TNF-α及IL-6表达的差异均无统计学意义(P值均>0.05),CLP组及CLP+ghrelin组海马组织中TNF-α及IL-6的表达水平均显著高于Sham组及Sham+ghrelin组(P值均<0.05),CLP+ghrelin组显著低于CLP组(P值均<0.05)。CLP组大鼠海马神经元明显变性、坏死、丢失,排列疏松,部分神经元核固缩,细胞质内尼氏小体减少;CLP+ghrelin组与CLP组相比,上述病理改变明显减轻,但未完全消失。结论 ghrelin对脓毒症大鼠的脑功能起到一定的保护作用,其机制可能与下调炎性因子TNF-α及IL-6的表达而减轻海马神经元的损伤有关。     

脓毒症肺损伤小鼠血清内皮微颗粒的变化

目的 探讨脓毒症相关肺损伤小鼠血清中内皮微颗粒(endothelial-derived microparticles, EMPs)的变化及意义。方法 C57BL/6J 小鼠随机分成结扎盲肠头尾端穿孔术(cecal ligation puncture procedure, CLP)组和假手术(Sham)组。术后24h CLP组存活的小鼠和假手术组小鼠心尖取血,离心后测定血清IL-1β、IL-6、TNF浓度,流式细胞仪检测血清中CD144⁺EMPs浓度水平。取各组肺组织测定肺湿重/干重比值(W/D),光镜下观察肺组织学的改变,电子显微镜下观察肺组织超微结构改变。结果 CLP组小鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF浓度均高于Sham组(P<0.01);CLP组小鼠肺组织W/D高于Sham组(P<0.01)。病理学检查显示CLP术后24h小鼠出现急性肺损伤,肺泡内皮细胞损伤明显。CLP组小鼠血清中CD144+EMPs浓度高于Sham组(P<0.01)。结论 CLP术后24h小鼠发生了急性肺损伤,是较好的肺损伤的模型。内皮微颗粒浓度的升高和脓毒症相关性肺损伤密切相关,内皮微颗粒可能参与了急性肺损伤的过程。     

Casp-8通过调控NLRP3炎性小体介导的细胞焦亡减轻脓毒症引起的急性肺损伤

目的:分析半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-8(Casp-8)对脓毒症引起的急性肺损伤(ALI)的作用及其相关分子机制。方法:对40只C57BL/6小鼠使用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症诱导的小鼠ALI模型,将造模成功的小鼠随机分为模型组(CLP组)和CLP+Casp-8抑制剂组(CLP+Z-IETD-FMK组),每组20只。另取20只正常饲养的小鼠设为假手术组(sham组)。采用称质量法测定小鼠肺组织湿干质量比值(W/D),HE染色观察小鼠肺组织病理变化,TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡情况,ELISA检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子水平,qRT-PCR检测肺组织中Casp-8 mRNA表达,Western blotting检测小鼠肺组织中Casp-8蛋白、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体及细胞焦亡相关蛋白表达。结果:与sham组比较,CLP组小鼠24 h存活率明显降低(P<0.05);小鼠肺组织充血水肿,肺泡结构严重破坏,肺间质内大量炎症细胞浸润;肺组织W/D,细胞凋亡率,BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、I...     

ALDH2通过线粒体融合与裂变减轻脂多糖诱导的脑微血管内皮细胞屏障的损伤

目的 观察乙醛脱氢酶2(ALDH2)对脂多糖（LPS）诱导的小鼠脑微血管内皮细胞屏障的影响,并探讨线粒体融合与裂变在内皮屏障中的作用。方法 小鼠脑微血管内皮细胞分为3组：对照组：不给予任何处理;LPS损伤组（LPS）:1μg/mL的LPS刺激24 h;LPS+ALDH2激动剂Alda-1组（LPS+Alda-1）：在LPS刺激前给予20μmol/mL的Alda-1预处理1 h。CCK-8实验检测细胞活性;跨内皮细胞电阻和FITC-Dextran葡聚糖实验检测细胞通透性变化;试剂盒丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）测定氧化应激水平;超氧化物阴离子荧光探针检测细胞活性氧（ROS）的表达;Western blot检测细胞ALDH2、紧密连接蛋白ZO-1、Occludin以及线粒体融合蛋白Mfn2、OPA1和分裂蛋白Drp1、Fis1表达。结果 与对照组相比,LPS组跨内皮细胞电阻值降低、FITC-Dextran渗漏性增高,MDA含量升高、SOD活性下降,ROS荧光表达增强,ALDH2、紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、线粒体融合蛋白Mfn2和OPA1表达降低,而线粒体分裂蛋白D...