间质细胞双尾C基因条件性敲除小鼠模型建立及其表型分析

目的构建间质细胞双尾C(Bicc1)基因条件性敲除小鼠模型, 并对其表型进行分析。方法将CRISPR Cas9方法构建的Bicc1f/+小鼠子代与Pdgfra启动子驱动的Cre小鼠进行杂交, 获得子代小鼠, 饲养1～2周后提取其脚趾及鼠尾组织基因组DNA, 经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳后, 在DNA水平检测小鼠基因型;选取经鉴定后生长至3周龄的Bicc1基因条件性敲除小鼠(实验组)、野生型小鼠(对照组)各3只进行后续实验:通过腹腔注射他莫昔芬进行诱导敲除Bicc1基因, 于1周后取小鼠肾脏、骨骼肌、皮肤及脂肪组织, 一部分组织通过实时定量PCR(RT-qPCR)鉴定其中的Bicc1 mRNA表达水平;另一部分组织以10%多聚甲醛固定, 随后进行HE染色和Masson染色, 在光镜下观察分析。应用SPSS 28.0软件对数据进行分析, 组间比较采用t检验, P<0.05表示差异有统计学意义。结果通过繁育获得间质细胞Bicc1基因条件性敲除小鼠, 基因型为Bicc1f/fCre+/-, 野生型小鼠基因型为Bicc1f/fCre-/-;RT-qPCR检测结果显示, 实验组小鼠肾脏、骨骼...     

外源性IL-6促进IL-6基因敲除小鼠移植肝再生的研究

目的 观察外源性重组白细胞介素6(rIL-6)对白细胞介素6(IL-6)基因敲除小鼠原位肝移植后存活时间和移植肝再生过程的影响.方法 动物为C57BL/6野生型小鼠和IL-6基因敲除小鼠,分为4组进行实验:基因敲除对照组,肝移植供、受者均为IL-6基因敲除小鼠；野生型对照组,以IL-6基因敲除小鼠为供者,野生型C57BL/6小鼠为受者；基因敲除rIL-6组,供、受者均为IL-6基因敲除小鼠,肝移植前1h于受者皮下注射rIL-6,1 mg/kg;野生型rIL-6组,以IL-6基因敲除小鼠为供者,野生型C57BL/6小鼠为受者,受者应用rIL-6,用法和用量同前组.观察受鼠的存活情况.获取移植肝,进行组织学和免疫组织化学检查.结果 供肝冷缺血时间约为50 min.基因敲除对照组受鼠平均存活2.2d,野生型对照组受鼠平均存活1.9 d,基因敲除rIL-6组受鼠平均存活＞17.6 d,野生型rIL-6组受鼠平均存活＞20.4 d.各组间存活时间的差异均有统计学意义(P＜0.01).基因敲除对照组和野生型对照组受鼠移植肝有片状坏死和肝细胞气球样变,有极少数溴脱氧尿核苷染色阳性的细胞存在.基因敲除rIL-6组和野生型rIL-6组受鼠的移植肝无细胞坏死等改变,有散在的肝细胞溴脱氧尿核苷染色阳性.结论 外源性的IL-6能够延长IL-6基因敲除小鼠肝移植后的存活时间,促进其移植肝细胞再生.     

CXCR6介导的NKT细胞激活在急性肾损伤小鼠肾纤维化中的作用

目的 CXC趋化因子受体6(CXCR6)介导的自然杀伤T(NKT)细胞激活在急性肾损伤小鼠肾纤维化中的作用。方法雄性野生型C57BL/6小鼠和CXCR6基因敲除型C57BL/6小鼠各18只, 8～10周龄, 体重20～30 g, 采用随机数字表法分为6组(n=6):野生型小鼠对照组(WT-CON组)、CXCR6基因敲除型小鼠对照组(CXCR6-/--CON组)、野生型小鼠急性肾损伤组(WT-AKI组)、CXCR6基因敲除型小鼠急性肾损伤组(CXCR6-/--AKI组)、野生型小鼠急性肾损伤+NKT细胞过继转移组(WT-AKI-NKT组)和CXCR6基因敲除型小鼠急性肾损伤+NKT细胞过继转移组(CXCR6-/--AKI-NKT组)。腹腔注射叶酸250 mg/kg制备急性肾损伤小鼠肾纤维化模型。WT-AKI-NKT组和CXCR6-/--AKI-NKT组分别于注射叶酸后第4和9天时尾静脉注射NKT细胞悬液250 μl(1×106个)。注射叶酸后第14天时, 采取眼眶血标本, 检测血清BUN和Cr浓度。处死小鼠取肾组织, 采用天狼星红染色观察肾纤维化面积, 采用HE染色观察肾损伤情况, 并行...     

运动神经元生存蛋白基因敲除在顺铂致小鼠急性肾损伤中的作用

目的探讨运动神经元生存蛋白(survival motor neuron, SMN)基因敲除在顺铂诱导的急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)小鼠中的作用。方法构建顺铂诱导的AKI小鼠(C57BL/6)模型, 将雄性8～10周龄体重22～24 gSMN+/+野生型小鼠及SMN基因敲除杂合子(SMN+/-)小鼠随机分为4组:SMN+/+生理盐水组(野生型空白对照组, n=5)、SMN+/-生理盐水组(SMN基因敲除杂合子空白对照组, n=5)、SMN+/+顺铂组(野生型顺铂组, n=5)和SMN+/-顺铂组(SMN基因敲除杂合子顺铂组, n=5)。腹腔注射20 mg/kg顺铂溶液或0.9%生理盐水, 72 h后处死小鼠, 收集血清及肾组织。采用实时荧光定量PCR和Western印迹法检测SMN mRNA和蛋白表达水平, 采用肌氨酸氧化酶法和脲酶法分别测定血清肌酐和尿素氮水平, PAS染色观察肾组织病理改变, TUNEL免疫荧光检测细胞凋亡水平, Western印迹和免疫组化法检测细胞凋亡标志蛋白多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和内质网应激标志蛋白CHOP的表达。结...     

ACE2对5/6肾切除小鼠肾损伤的保护作用

目的:研究血管紧张素转换酶抑制剂(ACE2)在肾素血管紧张素系统(RAS)过度激活和进行性肾损害的作用并探讨其可能的作用机制。方法:选取雄性ACE2基因敲除(KO)小鼠及野生型(WT)小鼠,随机分成5/6肾脏切除模型组和假手术组,每2周测量血压,12周后检测肾脏损伤指标血肌酐,并对残余肾组织进行PAS染色观察病理变化;用RT-PCR检测肾组织纤维化指标α-SMA和炎症指标TNF-α的表达。结果:与野生型小鼠比较,ACE2基因敲除型小鼠出现血压明显升高,血肌酐增加。PAS染色分析结果提示ACE2基因敲除型小鼠较野生型出现更严重的系膜区增宽,系膜基质增生。用RT-PCR检测肾组织α-SMA和TNF-α的表达变化,提示ACE2基因敲除模型组小鼠肾脏纤维化和炎症因子的表达较野生型模型组小鼠显著增加。结论:ACE2基因敲除组小鼠较野生型小鼠在5/6肾脏切除术后出现更严重的肾脏损伤,血压增高,肾脏炎症和纤维化改变。     

免疫球蛋白样结构域受体2缺失加重缺血再灌注诱导的肾纤维化

目的探究免疫球蛋白样结构域受体2(immunoglobulin-like domain-containing receptor 2, Ildr2)在缺血再灌注诱导肾纤维化中的作用。方法利用CRISPR/Cas9技术构建Ildr2敲除小鼠(KO组), 其对照组为野生型小鼠(WT组)。通过夹闭左侧肾蒂构建单侧肾脏缺血再灌注(unilateral renal ischemia reperfusion, UIR)模型(UIR组), 造模后分为KO-UIR组和WT-UIR组;假手术小鼠(Sham组)不进行缺血处理。采用肌氨酸氧化酶法检测血清肌酐水平;二乙酰肟比色法检测血尿素氮水平;酶联免疫吸附测定法检测尿白蛋白水平, 计算尿白蛋白/肌酐比值;HE、PAS及MASSON染色检测肾组织炎性细胞浸润情况和纤维化程度;实时荧光定量PCR检测Ildr2, 肾损伤相关分子中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)和肾损伤分子1(kidney injury molecule-1, KIM-1), 纤维化标志分子Ⅰ型胶原α1(...     

血管紧张素1a型受体基因敲除小鼠肾脏局部肾素-血管紧张素系统的变化及其对糖尿病肾小球硬化的影响

目的 探讨血管紧张素1a型受体（AT1aR）基因敲除小鼠肾脏局部肾素-血管紧张素系统（RAS）的组分改变对糖尿病肾病（DN）肾小球硬化的影响及其可能机制。 方法 AT1aR基因敲除小鼠和野生型小鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ，300 mg/kg）诱导糖尿病模型12周后，取肾脏组织作冰冻组织切片，用激光捕获微切割技术分离肾小球，提取RNA。用实时定量PCR的方法检测肾小球内AT1aR、血管紧张素1b型受体（AT1bR）、血管紧张素2型受体（AT2R）、血管紧张素原、血管紧张素转化酶（ACE）、肾素、醛固酮合成酶（CYP11B2）的mRNA表达。PAS染色观察肾脏病理变化。免疫组化检测转化生长因子β1（TGF-β1）、1型纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)和肾素的表达。比较不同基因型小鼠肾小球细胞外基质和各细胞因子的表达变化。 结果 与野生型小鼠相比，AT1aR基因敲除小鼠肾小球内AT1bR、血管紧张素原、肾素、CYP11B2的表达明显上调（P < 0.05），AT2R表达下调，ACE无明显改变；AT1aR基因敲除小鼠肾小球细胞外基质明显增加（P < 0.05），TGF-β1、PAI-1、MCP-1和肾素的表达均明显增加（P < 0.05）。 结论 AT1aR基因敲除并不能使糖尿病小鼠肾脏病变改善。RAS组分的表达改变（AT1bR的上调和AT2 的下调，肾素的上调和CYP11B2的上调）参与糖尿病肾小球病变过程。     

血液淤积红细胞裂解诱导椎板切除术后硬膜外瘢痕增生的机制研究

目的探讨小鼠椎板切除术后切口血液淤积红细胞破裂释放白细胞介素33(interleukin-33, IL-33)诱导硬膜外瘢痕组织增生的机制。方法取6～8周龄野生型小鼠12只, 制作T12～L2椎板切除模型, 随机分为假手术组、生理盐水干预手术组、单纯红细胞干预手术组、全血干预手术组。术后第30天取切口区域标本行HE染色和Masson染色, 观察是否出现血液淤积;并通过免疫印迹技术检测四组术后第30天的瘢痕组织中纤连蛋白水平, 采用免疫组化染色方法观察术后硬膜外瘢痕增生程度。取野生型小鼠以及IL-33敲除小鼠红细胞, 按生理盐水孵育或红细胞裂解液裂解处理方法分为野生型小鼠红细胞生理盐水对照组、IL-33敲除小鼠红细胞生理盐水对照组、野生型小鼠红细胞裂解组、IL-33敲除小鼠红细胞裂解组, 通过免疫印迹技术检测四组红细胞中的IL-33水平。抽取小鼠血液后进行梯度离心提取较为纯净的红细胞, 按红细胞小鼠来源类型及干预措施分为野生型小鼠红细胞空白对照组、野生型小鼠相对对照组(仅加二抗, 检验是否有非特异性结合)、野生型小鼠红细胞组、IL-33敲除小鼠红细胞组(检验一抗是否有抗原特异性), 行免...     

壳聚糖支架负载SHH和CM-Dil标记的脂肪干细胞移植后存活分化研究

目的:观察壳聚糖支架负载音猬因子(Sonic hedgehog,SHH)和脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)移植后,ADSCs存活分化的效果。方法:将健康C57BL/6小鼠随机分为A组(PBS+ADSCs)、B组(SHH+ADSCs)、C组(壳聚糖+ADSCs)、D组(壳聚糖+SHH+ADSCs)。将各组混合物分别注射到小鼠背部皮下。术后1、2、4、8周处死小鼠,通过对移植组织一般观察、荧光显微镜观察、HE染色、免疫组化染色来评价移植细胞存活分化的情况。结果:术后8周,壳聚糖支架完全降解,大体观察、HE染色、免疫组化染色均说明壳聚糖支架同时搭载SHH和ADSCs脂肪干细胞存活率较高,新生血管增加,效果均优于A、B、C三组。结论:壳聚糖支架同时负载SHH和ADSCs可有效促进干细胞存活,显著增加血管组织数量。     

HIF-PHI减轻炎症反应预防小鼠肾缺血再灌注损伤

目的探讨低氧诱导因子—脯氨酰羟化酶抑制剂(hypoxia-inducible factor prolyl hydroxylase inhibitor, HIF-PHI)预处理小鼠能否减轻炎症反应, 减少细胞凋亡, 缓解肾脏缺血再灌注损伤。方法将雄性C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为假手术(Sham)组、缺血再灌注损伤(IRI)组、IRI+HIF-PHI组, 每组6只, 其中IRI+HIF-PHI组提前1周隔天灌胃罗沙司他20 mg/kg。建立肾脏缺血再灌注模型后, 检测各组小鼠血清肌酐(sCr)水平;HE染色观察小鼠肾组织病理变化并进行损伤评分;原位末端标记法(TUNEL)评估肾组织细胞凋亡;实时定量逆转录聚合酶链(RT-PCR)反应检测肾脏组织内低氧诱导因子1α(HIF-1α)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及白介素1β(IL-1β)的mRNA表达水平;免疫荧光及免疫组化分别检测HIF-1α, 炎症因子TNF-α和IL-1β表达情况。结果与IRI组相比, IRI+HIF-PHI组小鼠sCr水平明显降低(P<0.01), 肾组织损伤情况明显改善, 肾小管损伤半定量评分更低(P...     

MyD88及Trif对心脏移植小鼠体内供者特异性抗体及记忆性T淋巴细胞的影响

目的 探讨髓样分化因子88( MyD88)及Trif对皮肤移植预致敏的心脏移植小鼠体内供者特异性抗体(DSA)及记忆性T淋巴细胞的影响.方法 实验分为空白组(C57BL/6野生型小鼠,不行移植手术)、对照组(C3H小鼠为供者,C57BL/6小鼠为受者)和实验组(C3H小鼠为供者,MyD88及Trif基因敲除的C57BL/6小鼠为受者).将C3H小鼠皮片移植给受鼠,进行预致敏,2周后检测受鼠血清中 DSA的水平,并且将C3H小鼠心脏移植给相应受鼠,观察移植心脏存活时间.在观察终点时,再次检测受鼠血清中DSA水平,同时检测受鼠脾脏中记忆性T淋巴细胞的比例.结果 皮肤移植2周后,实验组受鼠DSA IgG2水平低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),DSA IgG1和IgG3的水平亦低于对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05).心脏移植3d后,与对照组相比较,实验组受鼠DSA IgG2水平明显降低(P＜0.01),受鼠脾脏中CD4+和CD8+记忆性T淋巴细胞的比例低于对照组(P＜0.01,P＜0.05).两组受鼠心脏移植后平均存活时间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 敲除小鼠MyD88及Trif基因虽然不能延长预致敏小鼠移植心脏的存活时间,但是能显著降低受鼠血清中DSA的水平及脾脏中记忆性T淋巴细胞的比例.     

卵母细胞敲除Rictor对纺锤体和早期胚胎发育的影响

目的 探讨Rictor对卵母细胞及早期胚胎发育的影响。方法 获得卵母细胞条件性敲除(Rictor-cKO)小鼠(KO组),取同窝未敲除雌性小鼠作为对照组(WT组),腹腔注射促性腺激素后收集卵母细胞,观察条件性敲除小鼠排出的卵母细胞的形态及排卵的数量;免疫荧光化学结合激光共聚焦技术观察卵母细胞条件性敲除Rictor对染色体数量、纺锤体形态的影响;采用卵胞浆内单精子注射(ICSI)技术向敲除鼠卵母细胞内注射野生型雄鼠的精子头,观察胚胎发育情况。结果 卵母细胞条件性敲除Rictor不显著影响小鼠的排卵数量(P>0.05)及卵母细胞的基本形态(P>0.05);然而早期胚胎发育出现明显迟缓,同时段内观察到敲除鼠的2PN率、发育到2-细胞期胚胎数量均显著低于对照组(P<0.05),发育到4-细胞期胚胎数量亦减少(44.4%)。免疫荧光化学结果显示,条件性敲除Rictor后,卵母细胞的染色体数量正常,但部分卵母细胞的纺锤体微管异常比例升高,对照组小鼠仅有少部分卵母细胞出现异常(11.57%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Rictor可能通过影响卵母细胞纺锤体的排列...     

利用Cre/loxP系统构建胰岛α细胞特异性敲除血管紧张素转换酶2基因的小鼠模型

目的构建α细胞特异性血管紧张素转换酶2(ACE2)敲除小鼠模型, 为研究胰岛α细胞ACE2功能提供基础。方法利用Cre/loxP系统, 将雌性ACE2loxP/WT与雄性Gcg-cre+/-小鼠进行交配, 取鼠尾组织, 通过PCR法鉴定子代基因型。选取基因型为ACE2loxP/y Gcg-cre+/-的雄性小鼠为实验所需要构建的模型小鼠(αACE2KO小鼠)。采用免疫荧光和免疫组织化学法检测ACE2表达。采用独立样本t检验。结果免疫荧光分析提示, 在Gcg-Cre小鼠胰岛中, (55.14±25.33)%的α细胞表达ACE2, 然而αACE2KO小鼠胰岛α细胞中未检测到ACE2表达(t=14.202, P<0.01), 同时αACE2KO小鼠的肝、肾、肺、心和骨骼肌中仍然表达ACE2。结论成功利用Cre/loxP原理特异性敲除α细胞ACE2, 为研究胰岛局部α细胞ACE2功能提供动物模型和基础。     

IL-17C影响小鼠移植肾存活的机制

目的探讨白细胞介素(IL)-17C在小鼠肾移植中的作用及其机制。方法以Balb/c(H-2Kd小鼠为供体,IL-17C基因敲除(IL-17CKO)小鼠(敲除组)、C57BL/6J(H-2Kb)小鼠(野生组)为受体,建立小鼠生命支持型肾移植模型。术后比较两组小鼠的体质量及存活时间。采用苏木素-伊红(HE)染色及过碘酸-雪夫(PAS)染色对移植肾进行病理学检查。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测移植肾组织中颗粒酶B、干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6及IL-1β的信使核糖核酸(mRNA)表达水平,采用流式细胞术检测移植肾组织中炎症细胞浸润情况。结果移植术后敲除组小鼠存活时间显著短于野生组小鼠(P=0.031),且体质量下降程度更明显,但差异无统计学意义。病理分析发现敲除组小鼠移植肾损伤较野生组小鼠明显加重。敲除组小鼠移植肾组织中颗粒酶B、IFN-γ、TNF-α、IL-6的mRNA表达水平均显著高于野生组(均为P0.01),IL-1βmRNA表达呈降低趋势,但差异无统计学意义(P=0.16)。流式细胞分析发现敲除组小鼠移植肾组织中CD45+CD11b+Ly6G+中性粒细胞和CD45+CD11b+Ly6Chi单核细胞浸润较野生组小鼠明显增加(分别为P0.05,P0.01),而CD45+Ly6Chi F4/80+巨噬细胞浸润无明显变化(P0.05)。结论 IL-17C参与肾移植后炎症反应的调控,可能通过降低促炎细胞因子的表达及炎症细胞的浸润来减轻急性排斥反应,改善移植肾存活情况。     

血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞外泌体促进腹主动脉瘤形成

目的探讨Ang Ⅱ诱导内皮细胞来源外泌体(VECs-AngⅡ exos)在小鼠腹主动脉瘤(AAA)发生发展的作用。方法使用8周龄雄性敲除Apoe小鼠皮下埋泵构建血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的腹主动脉瘤模型。提取并鉴定健康内皮细胞来源外泌体(VECs-exos)及Ang Ⅱ诱导内皮细胞来源外泌体(VECs-AngⅡ exos), 使用收集的外泌体(20 μg/ml)处理小鼠原代血管平滑肌细胞(VSMCs)。VECs-exos及VECs-AngⅡ exos每周尾静脉注射至腹主动脉瘤模型小鼠体内, 4周后获取小鼠动脉瘤组织行苏木精-伊红(HE)、EVG和马松(Masson)染色观察腹主动脉形态改变、弹性纤维断裂和胶原沉积。蛋白质印迹法(Western blot)检测小鼠动脉组织收缩型标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、SM22α和CNN表达。采用t检验分析数据统计学差异。结果小鼠实验组动脉瘤发生率[(80.670±4.842)%, t=16.66, P<0.01]、最大主动脉直径[(0.554 3±0.096 2) mm, t=5.759, P<0.01)及主动脉质量比[(...     

水通道蛋白在多囊肾病小鼠肾囊泡上皮细胞的表达与调控

目的 探讨水通道蛋白(AQP)在多囊肾病囊泡上皮细胞的表达和调控。 方法 采用免疫荧光染色和Western印迹法分别检测不同亚型的水通道蛋白AQP1、AQP2、AQP3和AQP4在小鼠常染色体隐性遗传病jck多囊肾小鼠肾脏的表达定位和表达调控。 结果 8周龄jck纯合子小鼠的肾脏占体质量的百分率约是同窝野生型小鼠肾脏的4倍,肾脏组织出现多发、大小不一囊泡,囊泡上皮细胞呈扁平状,肾脏间质可见纤维化。jck小鼠血尿素水平为（42.6±6.7） mmol/L,约是野生型小鼠血尿素水平[（8.4±1.9） mmol/L]的5倍（P < 0.01）。免疫荧光定位分析结果表明AQP1 在近曲小管上皮细胞顶膜和基底膜表达,也表达于髓袢降支细段和直小血管降支,肾囊泡上皮细胞未见AQP1表达。AQP2在集合管和肾囊泡上皮细胞顶膜表达,AQP3和AQP4在集合管和囊泡上皮细胞基底膜表达。Western印迹分析结果表明,jck肾脏AQP2、AQP3和AQP4蛋白表达水平与野生型肾脏相似,但AQP1在jck肾脏的表达水平显著低于其在野生型肾脏的表达水平（P < 0.01）。 结论 jck多囊肾小鼠肾囊泡上皮表达AQP2、AQP3和AQP4,提示肾囊泡来源于肾集合管,水通道蛋白可能在肾囊泡生长过程中起重要作用。     

大网膜包裹明胶-间充质干细胞复合物对马兜铃酸肾病保护作用的研究

目的研究大网膜包裹明胶-间充质干细胞(MSCs)复合物对马兜铃酸肾病(AAN)小鼠肾脏的修复和保护作用。 方法使用明胶与间充质干细胞共培养构建间充质干细胞-明胶复合物。用CCK-8法评价MSCs与明胶的生物相容性以及MSCs的增殖能力。将体重为20~25 g的健康雄性C57BL/6小鼠24只随机分为4组：正常对照组(Control组)、马兜铃酸肾病模型组(AAN组，腹腔注射马兜铃酸溶液)、大网膜包裹MSCs治疗组(MSCs组)、大网膜包裹MSCs-明胶复合物治疗组(MSCs-Gel组)。利用小动物活体成像系统观察MSCs在小鼠体内的分布和存活情况；检测各组小鼠的血肌酐、尿素氮水平变化，观察肾脏组织学变化及相关纤维化指标如α-SMA、TGF-β和胶原变化情况。 结果明胶对MSCs的增殖能力无明显影响。与单纯MSCs组相比，MSC-Gel组的MSCs在小鼠肾脏内存活时间更长，且血肌酐、尿素氮明显降低，肾组织病理改变纤维化程度明显减轻，α-SMA、TGF-β、Col-Ⅰ表达亦显著降低(均P<0.05)。 结论大网膜包裹明胶-MSCs复合物对AAN小鼠肾脏具有良好的修复和保护作用。     

粪菌移植改善慢性肾功能衰竭小鼠肠道组织病变的初步探究

目的探讨粪菌移植对慢性肾功能衰竭小鼠肠道菌群的调节及其机制。方法选取SPF级雄性昆明小鼠30只, 随机分为空白对照组(A组)、粪菌移植组(B组)和慢性肾功能衰竭组(C组), 每组10只。B、C组通过腺嘌呤灌胃建立慢性肾功能衰竭小鼠模型。建模后, B组进行粪菌移植干预, A、C两组进行等量生理盐水灌胃, 实验期间每天观察小鼠生长情况、毛发、精神活动状态, 并测量小鼠体重。干预结束后3 d处死小鼠, 检测其血清肌酐、尿素氮水平;光镜观察肾脏、结肠病理改变。采用免疫荧光单标法检测小鼠结肠上皮细胞间紧密连接蛋白(claudin-1)的分布情况。结果与A组比较, B、C组小鼠的尿素氮、血清肌酐均升高, 差异均有统计学意义(均P<0.05)。C组小鼠的尿素氮高于B组, 差异有统计学意义(P<0.05)。B组小鼠的肾小球毛细血管扩张, 肾小管上皮细胞轻度水肿, 部分肾小管萎缩, 肾小管管腔稍有扩张。C组小鼠的肾小球毛细血管扩张, 肾小管上皮细胞水肿严重, 肾小管上皮细胞排列疏松, 部分肾小管上皮细胞发生坏死, 肾小管管腔明显扩张。B组小鼠的结肠组织肠黏膜下层疏松水肿, 间隙稍增大, 有较...     

Nrf2/TGF－β通路在肾小管间质纤维化中的作用及机制

目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)/转化生长因子-β(TGF-β)通路在失神经支配肾脏缺血再灌注损伤(IRI)导致的肾小管间质纤维化(TIF)中的作用及机制。方法成年雄性C57BL/6小鼠随机分为4组(均n=12):假手术组(Sham组)、肾脏缺血再灌注组(IR组)、失神经假手术组(RDN组)和失神经肾脏缺血再灌注组(DIR组)。分别于造模后1 d或7 d取材, 利用苏木精伊红(HE)染色法观察肾脏病理学改变、马松染色法观察TIF程度及免疫组化观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达, 检测血尿素氮、肌酐和中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)、肾组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、白细胞介素-4、10、13(IL-4、IL-10、IL-13)水平, 蛋白印迹法检测Nrf2、TGF-β和磷酸化母亲DPP同源物3(果蝇)(Smad3)蛋白表达。结果与Sham组比较, 再灌注1 d组(IR-1)和DIR-1组肾脏病理损伤、血清尿素氮、肌酐和NGAL水平、肾组织MDA、IL-4、IL-10和IL-13水平升高而SOD活性降低, Nrf2、转化生长因子(TGF)-β...     

缺氧诱导因子-1调控血红素氧化酶-1在急性肾损伤的作用机制

目的探究缺氧诱导因子-1(HIF-1)在肾缺血再灌注损伤中引起急性肾损伤(AKI)的作用及机制的研究。方法 C57小鼠20只(6～8周龄, 体重20～25 g), 其中10只为野生型(WT)鼠, 10只为纯合子肾小管上皮细胞特异敲低HIF-1(cKO)小鼠。按照简单随机法进行分组, 将WT小鼠随机分为假手术(Sham)组和缺血再灌注(IR)组, 每组各5只;cKO小鼠分随机为Sham组与IR组, 每组各5只。用1%戊巴比妥钠注射小鼠尾静脉, 手术组分离两侧肾动静脉结扎60 min后解除夹闭, 24 h后切除肾脏, 构建肾缺血再灌注模型。通过苏木精-伊红(HE)染色判断肾小管损伤情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肾脏组织中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和铁含量;蛋白质印迹法(Western blot)检测血红素氧化酶1(HO-1)及铁死亡相关指标的蛋白表达水平;免疫组织化学染色(IHC)检测HIF-1、HO-1、铁死亡相关组织的表达。两组间差异比较采用单样本t检验。结果 HE染色结果显示, WT小鼠中IR组肾小管上皮细胞受损程度高于Sham组(9.78±1.07比2.43±0...