黑色素瘤缺乏因子2通过磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路调控胰腺癌细胞增殖、凋亡的作用机制

目的探讨黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)对胰腺癌恶性细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法通过慢病毒转染技术构建AIM2稳定过表达的胰腺癌细胞株BxPC-3和PANC-1, 并分别通过定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)验证AIM2的mRNA及蛋白水平。通过BrdU增殖实验、划痕实验、Transwell侵袭实验、细胞凋亡以及细胞周期实验检测过表达AIM2对胰腺癌细胞株功能的影响。通过转录组测序探究AIM2在胰腺癌中的作用机制并进行验证, 使用基因表达差异分析评估多组样本之间的差异, 组间差异采用t检验分析。结果慢病毒转染可成功构建AIM2稳定过表达的胰腺癌细胞株。BrdU增殖实验结果表明, BxPC-3和PANC-1细胞LV-AIM2-OE组的增殖能力显著低于LV-NC组(吸光度值:0.502±0.006比0.543±0.005、0.956±0.032比1.235±0.091, t=5.568、2.903, P<0.05);划痕及Transwell实验结果表明, 过表达AIM2后BxPC-3、PANC-1细胞的迁移[(51.960±4...     

微小RNA-135a调控骨肉瘤细胞的增殖、迁移和凋亡

目的探讨微小RNA-135a(miR-135a)对骨肉瘤(OS)细胞增殖、迁移和凋亡的影响及可能的机制。方法构建miR-135a过表达和空载病毒的Saos-2细胞分别为miR-135a UP组(实验组), Control组(对照组)。采用实时定量反转录聚合酶连锁反应(qRT-PCR)检测c-Myc信使核糖核酸(mRNA)的改变, 采用蛋白免疫印迹(Western blot)技术检测c-Myc蛋白及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)(PAM)通路蛋白的改变。细胞集落形成和细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖能力, 划痕和Transwell实验分别检测迁移和侵袭能力, 细胞流式技术检测抗凋亡能力, 两组比较采用t检验。结果 miR-135a表达量实验组高于对照组(59.006±5.034比1.008±0.151, t=23.031, P<0.01), c-Myc与PAM通路蛋白表达量实验组低于对照组, 细胞增殖能力实验组低于对照组(CCK-8法:1.311±0.048比2.029±0.046, t=24.301, P<0.01...     

miR-567在胰腺癌细胞中的表达及其作用机制

目的:探讨miR-567在胰腺癌细胞中的表达及其作用。方法:采用qRT-PCR检测正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7及胰腺癌细胞系Panc-1、AsPC-1、HPAC、BxPC-3中miR-567表达。Panc-1细胞转染miR-567过表达慢病毒载体后,分别用CCK-8法、流式细胞术、划痕愈合实验、qRT-PCR、Western blot法检测细胞增殖、凋亡及迁移能力,以及KPNA4 mRNA与蛋白的表达、凋亡相关蛋白表达的变化。结果:miR-567在胰腺癌细胞系Panc-1、AsPC-1、HPAC、BxPC-3中的表达水平均明显低于正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7(均P0.05);miR-567慢病毒转染Panc-1细胞后,增殖能力明显减弱,凋亡率明显增加,划痕愈合率明显降低、KPNA4 mRNA与蛋白表达明显下调、而caspase-3及Bax蛋白表达明显上调(均P0.05)。结论:miR-567在胰腺癌细胞中表达降低,升高其表达可抑制胰腺癌细胞的生长与迁移能力,其机制可能与下调KPNA4并上调凋亡相关蛋白表达有关。     

miR-519d在胰腺癌细胞中的表达及其作用

目的:探讨miR-519d在胰腺癌细胞中的表达及作用。方法:用qRT-PCR检测miR-519d在胰腺癌细胞系AsPC-1、BxPC-3、Capan-2、Panc-1及正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7中的表达。将Panc-1细胞分别转染miR-519d过表达质粒(miR-519d组)与阴性对照质粒(阴性对照组),以无处理的Panc-1细胞为空白对照组,用MTT法、Transwell实验、Western blot分别检测转染后细胞的增殖和侵袭能力、凋亡情况以及X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达。结果:各胰腺癌细胞系中miR-519d相对表达量均明显低于正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7(均P0.05);与空白对照组比较,miR-519d组细胞增殖能力降低(培养72 h后明显降低)、凋亡率明显升高、侵袭能力明显减弱、XIAP蛋白表达量明显降低(均P0.05);阴性对照组各项指标与空白对照组差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:miR-519d在胰腺癌细胞中表达下调,miR-519d表达下调有增强胰腺癌细胞增殖和侵袭能力、降低凋亡的作用,该作用可能与其调节XIAP蛋白的表达有关。     

微小RNA-21促进胰腺癌细胞侵袭的研究

目的探索微小RNA-21(miR-21)对胰腺癌MiaPaCa-2细胞侵袭能力的影响和机制。方法选取人类胰腺癌MiaPaCa-2细胞, 采用简单随机法分为四组:正常组、miR-21过度表达组、空白对照组和miR-21抑制组。通过慢病毒载体感染MiaPaCa-2细胞, 调节miR-21的表达, 反转录聚合酶链反应(RT-PCR)验证miR-21的表达;体外侵袭实验(Transwell)检测其侵袭能力;流式细胞蛋白检测和RT-PCR检测上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白和基因的表达, 包括E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、N-钙黏附蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)。两样本间的比较采用t检验。结果 miR-21组中miR-21的表达(1.99±0.17)和MiaPaCa-2细胞侵袭能力(128.00±5.66)高于正常组(0.87±0.12、36.50±0.71), 差异有统计学意义(t=9.406、39.315, P<0.01), 反之miR-21i组中miR-21的表达(0.50±0...     

多嘧啶序列结合蛋白2通过调控Slug促进乳腺癌细胞上皮-间充质转化的机制

目的探讨多嘧啶序列结合蛋白2(PTBP2)在乳腺癌组织及细胞中的表达, 探讨PTBP2通过调控上皮-间充质转化(EMT)影响乳腺癌细胞的侵袭和迁移的具体分子机制。方法利用蛋白质印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测PTBP2在乳腺癌细胞中的表达水平。并利用Transwell实验、侵袭实验检测PTBP2对乳腺癌细胞迁移侵袭能力的影响。两组之间的比较采用独立样本t检验。结果 Western blot及RT-PCR结果表明PTBP2在乳腺癌组织中的表达水平明显高于正常组织(7.22±0.27比3.02±0.16, t=13.33, P<0.01);敲低PTBP2表达后, MDA-MB-231细胞迁移能力、侵袭能力明显弱于对照组(30.20±1.56比113.80±4.23, t=18.52, P<0.01;9.60±1.60比29.20±4.28, t=4.29, P<0.01);并导致乳腺癌细胞发生MET转变。过表达PTBP2表达后, MCF7细胞迁移能力、侵袭能力明显强于对照组(136.00±5.33比63.40±4.32, t...     

肌球蛋白重链11对肿瘤Hela细胞凋亡、迁移和侵袭的影响

目的探讨肌球蛋白重链11(MYH11)对人宫颈癌Hela细胞凋亡、迁移和侵袭作用的影响。方法应用实时荧光定量聚合酶联反应法(qRT-PCR)检测宫颈癌Hela细胞与正常宫颈上皮细胞Ect1/E6E7中MYH11的信使RNA(mRNA)表达水平, 通过流式细胞术、噻唑蓝(MTT)实验及Transwell实验测定过表达MYH11对宫颈癌细胞凋亡、增殖、迁移和侵袭的影响, 两组间比较采用t检验。结果 qRT-PCR法检测mRNA表达, 结果显示, 宫颈癌Hela细胞中MYH11表达(0.52±0.04)明显低于正常宫颈上皮细胞(1.00±0.03), 差异有统计学意义(t=10.56, P<0.01)。细胞凋亡实验结果显示, 过表达MYH11组Hela细胞抗凋亡能力较ctrl组以及NC组表达显著降低。ctrl组、NC组、过表达MYH11组为(20.27±1.48)%、(19.83±1.85)%、(34.21±2.75)%, 差异有统计学意义(F=45.69, P<0.01)。MTT增殖实验结果显示, Hela细胞中ctrl组、NC组以及过表达MYH11组24、48、72 h细胞增...     

长链非编码RNA Linc00472靶向微小RNA-381对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的观察长链非编码RNA Linc00472(LncRNA Linc00472)靶向调控微小RNA-381(miR-381)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响。方法收集2017年3月至2018年5月郑州大学第一附属医院收治的骨肉瘤患者29例为研究对象,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测骨肉瘤组织和瘤旁组织中Linc00472的表达。将骨肉瘤U2OS细胞分为pcDNA3.1组、pcDNA3.1-Linc00472组、pcDNA3.1-Linc00472+miR-NC组、pcDNA3.1-Linc00472+miR-381组。甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移及侵袭。双荧光素酶报告实验鉴定Linc00472与miR-381的靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果Linc00472在骨肉瘤组织中的表达水平低于瘤旁组织(0.31±0.03比1.03±0.10,t=37.138,P<0.05),差异有统计学意义;与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-Linc00472组细胞存活率[(100.29±10.12)%比(53.29±5.44)%]低于pcDNA3.1组(t=12.272,P<0.05),差异有统计学意义,迁移细胞数[(266.00±23.61)个比(124.00±12.01)个]与侵袭细胞数[(131.00±13.06)个比(62.00±6.24)个]少于pcDNA3.1组(t=16.082,P<0.05;t=14.301,P<0.05),差异有统计学意义,而细胞凋亡率[(8.58±0.91)%比(26.61±2.64)%]高于pcDNA3.1组(t=19.370,P<0.05),差异有统计学意义;miR-381过表达可抑制野生型载体WT-Linc00472细胞的荧光素酶活性(t=19.827,P<0.05),差异有统计学意义;与pcDNA3.1-Linc00472+miR-NC组比较,pcDNA3.1-Linc00472+miR-381组可增强细胞增殖[(53.17±5.33)%比(85.26±8.62)%]、迁移[(122.00±12.31)个比(223.00±22.18)个]及侵袭[(64.00±6.36)个比(104.00±10.20)个]能力高于pcDNA3.1-Linc00472+miR-NC组(t=9.499,P<0.05;t=11.945,P<0.05;t=9.983,P<0.05),细胞凋亡率[(26.11±2.62)%比(13.11±1.34)%]低于pcDNA3.1-Linc00472+miR-NC组(t=13.253,P<0.05),差异有统计学意义。结论LncRNA Linc00472通过靶向调控miR-381可抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移及侵袭并诱导细胞凋亡。     

长链非编码RNA氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA 1对肾癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA 1(lncRNA OSER1-AS1)对肾癌ACHN细胞的增殖、迁移、侵袭的影响及其对微小RNA(microRNA,miR)-612的调控作用。方法2017年1月至2020年3月,采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测肾癌组织、癌旁组织中OSER1-AS1、miR-612的表达量;体外培养肾癌细胞ACHN,分别将OSER1-AS1小分子干扰RNA(si-OSER1-AS1)及其阴性对照(si-NC)、miR-612寡核苷酸模拟物(miR-612 mimics)及阴性对照mimic NC序列(miR-NC)、si-OSER1-AS1与miR-612特异性寡核苷酸抑制剂的阴性对照(anti-miR-NC)、si-OSER1-AS1与miR-612特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-612)转染至ACHN细胞;采用RT-qPCR法检测细胞中OSER1-AS1、miR-612的表达量;采用噻唑蓝(MTT)、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测OSER1-AS1、miR-612的靶向关系;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、p21蛋白表达量。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果肾癌组织OSER1-AS1的表达水平(1.00±0.08比3.37±0.28)高于癌旁组织(t=52.113,P<0.05),miR-612的表达水平(1.00±0.06比0.47±0.04)低于癌旁组织(t=47.062,P<0.05);si-OSER1-AS1组细胞活力(0.66±0.05比0.31±0.03)与Cyclin D1(0.63±0.05比0.25±0.02)、MMP-2(0.82±0.07比0.35±0.03)、MMP-9(0.76±0.06比0.28±0.03)蛋白水平低于si-NC组(t=18.007、21.169、18.514、21.466,P<0.05),si-OSER1-AS1组迁移细胞数[(115.56±9.52)个比(55.99±5.59)个]、侵袭细胞数[(93.41±6.09)个比(46.05±4.35)个]低于si-NC组(t=16.188、18.984,P<0.05),si-OSER1-AS1组p21蛋白水平(0.15±0.02比0.57±0.05)高于si-NC组(t=23.398,P<0.05);miR-612组细胞活力(0.68±0.05比0.39±0.03)与Cyclin D1(0.66±0.05比0.28±0.03)、MMP-2(0.85±0.06比0.46±0.03)、MMP-9(0.78±0.05比0.34±0.02)蛋白水平低于miR-NC组(t=14.920、19.551、17.441、24.512,P<0.05),miR-612组迁移细胞数[(118.76±9.87)个比(64.39±4.65)个]、侵袭细胞数[(99.65±9.12)个比(53.57±3.67)个]低于miR-NC组(t=14.950、14.062,P<0.05),miR-612组p21蛋白水平(0.14±0.02比0.51±0.04)高于miR-NC组(t=24.820,P<0.05);双荧光素酶报告实验证实OSER1-AS1可靶向结合miR-612;抑制miR-612表达可明显逆转干扰OSER1-AS1对细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论干扰OSER1-AS1可通过上调miR-612的表达从而抑制肾癌ACHN细胞增殖、迁移及侵袭。     

microRNA-10b表达变化对人胰腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨microRNA-10b(miR-10b)的表达变化对人胰腺癌细胞ASPC-1生物学行为的影响。方法:胰腺癌细胞ASPC-1细胞株分别以脂质体法转染正义、反义miR-10b真核表达载体和空载体,用荧光显微镜观察转染效率。以未转染的ASPC-1细胞为空白对照,检测各转染组miR-10b和RhoC蛋白表达,并检测各组细胞生长、凋亡及侵袭能力。结果:各组转染48 h后,转染效率达50%~70%;与空白对照组比较,正义miR-10b转染组细胞miR-10b表达和RhoC蛋白表达量明显增加,凋亡率明显降低,生长活性和侵袭能力明显增强(均P<0.05);而反义miR-10b转染组细胞以上检测结果与正义miR-10b转染组细胞呈相反改变(均P<0.05);空载体转染组所有指标与空白对照组间无明显差异(均P>0.05)。结论:上调miR-10b的表达,能促进胰腺癌细胞ASPC-1的生长、侵袭并抑制凋亡,该作用可能与其调控RhoC表达有关。     

癌相关成纤维细胞外泌体携带微小RNA-20a靶向CX43调控细胞缝隙连接促进PC-3细胞侵袭和迁移

目的探讨癌相关成纤维细胞(CAFs)来源外泌体微小RNA(miR)-20a对前列腺癌细胞间通讯连接(GJIC)、侵袭和转移能力的影响及其机制。方法构建CAFs来源近红外荧光蛋白(IRFPs)标记外泌体,以不同浓度(0、10、100、200 mg/L)与PC-3细胞共培养。蛋白质印迹法检测PC-3细胞中CX43蛋白的相对表达水平;荧光漂白恢复技术测定PC-3细胞间缝隙连接功能;Transwell小室侵袭和迁移实验检测PC-3侵袭能力。构建高表达和低表达miR-20a的CAFs,分别与PC-3细胞共培养,检测缝隙链接蛋白43(Connexin 43,CX43)表达、细胞缝隙连接功能、细胞迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证PC-3细胞中miR-20a与CX43基因是否直接结合。用Student’t检验分析组间差异。结果PC-3细胞的CX43表达水平及细胞缝隙连接功能均随外泌体浓度增加而降低(0.715±0.058、0.544±0.039、0.313±0.028和0.196±0.020,F=19.031,P<0.05),差异有统计学意义。Transwell小室检测结果表明,CAFs来源外泌体促进PC-3细胞迁移[各组每视野穿膜细胞数分别为(176.0±9.2)、(485.0±12.8)、(159.5±9.7)和(198.0±10.5)个,F=11.475,P<0.01]和侵袭[各组每视野穿膜细胞数分别为(150.0±8.4)、(443.0±21.7)、(182.0±11.2)和(153.5.0±10.1)个,F=16.306,P<0.01],差异有统计学意义;增强细胞缝隙连接能抑制此效应(F=14.052,P<0.01;F=14.804,P<0.01)。高表达miR-20a组的PC-3细胞的CX43表达水平(0.126±0.062比0.834±0.103,t=9.430,P<0.05)、荧光恢复率[(25.02±7.85)%比(46.65±6.98)%,t=5.782,P<0.05]均显著低于低表达miR-20a组,但细胞的迁移[(502.5±18.6)个比(128.5.0±9.4)个,t=9.120,P<0.05]和侵袭能力(458.0±16.8比194.5±9.2,t=6.286,P<0.05)均显著高于表达miR-20a组,差异均有统计学意义。双荧光素酶报告实验结果显示,野生型CX43的PC-3细胞中,转染miR-20a的细胞荧光活性显著低于miR-NC组(0.46±0.08比0.99±0.14,t=10.208,P<0.05),差异有统计学意义;而突变型CX43的PC-3细胞中,miR-20a组与miR-NC组细胞荧光活性差异无统计学意义(0.94±0.06比0.97±0.08,t=0.142,P>0.05)。结论CAFs来源外泌体miR-20a通过直接作用CX43基因,下调PC-3细胞CX43的表达,从而显著降低细胞间通讯连接功能,增强前列腺癌细胞的增殖、侵袭和转移能力。     

含V-Set免疫球蛋白域蛋白2对胰腺癌细胞恶性生物学行为影响及机制

目的探究含V-Set免疫球蛋白域蛋白2(VSIG2)对人胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及具体机制。方法质粒转染构建VSIG2敲低和过表达细胞系, 分为sh-VSIG2#1/sh-VSIG2#2组和oe-VSIG2组, 并分别以sh-NC和Vector组作为对照。蛋白质印迹法(Western blot)验证转染效率。细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆测定胰腺癌细胞增殖能力。Transwell和划痕实验检测侵袭及迁移能力。KEGG对VSIG2相关基因进行通路富集分析, Western blot检测通路关键指标的表达量。以VSIG2过表达细胞系进行功能回复, Western blot检测通路指标表达量变化。组间比较采用t检验和单因素方差分析。结果 CCK-8结果显示, sh-VSIG2#1比sh-VSIG2#2组72 h吸光度值低于sh-NC组(1.122±0.056比0.997±0.063比1.561±0.072, t=8.876、8.994, P<0.05);oe-VSIG2组72 h吸光度值高于Vector组(2.103±0.102比1.604±0.089, t=12.21...     

长链非编码RNA HOST2对胰腺癌细胞增殖迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HOST2对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法:qRT-PCR检测正常胰腺上皮细胞系HPDE6-C7及胰腺癌细胞系Panc-1、AsPC-1、BxPC-3、HPAC中lncRNAHOST2表达水平。将Panc-1细胞分别转染siRNA-HOST2(si-HOST2组)和阴性对照序列(阴性对照组)后,用MTT法测定细胞增殖,细胞划痕和Transwell实验测定细胞迁移和侵袭,Westernblot测定上皮-间质转化(EMT)相关蛋白vimentin、Snail、Twist的表达。以无转染的Panc-1细胞为空白对照组。结果:与正常胰腺上皮细胞HPDE6-C7相比,lncRNAHOST2在各胰腺癌细胞系中的表达均明显上调(均P0.05)。与空白对照组比较,si-HOST2组细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱,vimentin、Twist1、Snail蛋白相对表达量均明显下调(均P0.05),而阴性对照组上述指标均无明显变化(均P0.05)。结论:lncRNAHOST2在胰腺癌细胞中高表达,且与胰腺癌增殖、迁移和侵袭密切相关,其机制可能与调节EMT相关蛋白的表达有关。     

敲低长链非编码RNA PURPL-微小RNA-137-Ⅰ型跨膜受体蛋白信号通路抑制乳腺癌的机制

目的探究敲低长链非编码RNA PURPL调控微小RNA(miR)-137抑制物/Notch同源物1干扰物信号轴对抗乳腺癌的调控机制。方法生信系统分析PURPL与癌症相关性;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测PURPL, miR-137, Ⅰ型跨膜受体蛋白(Notch1)在乳腺癌组织表达;蛋白质印迹法(Western blot)、免疫荧光检测Notch1在乳腺癌组织中蛋白和阳性信号的表达;双荧光素酶报告基因检验miR-137抑制物与PURPL和Notch1的调控机制;细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、Transwell实验、细胞伤口愈合实验及原位缺口末端标记法(TUNEL)凋亡分别检测下调PURPL-miR-137-Notch1轴对增殖、侵袭、迁移及凋亡的调控能力;构建乳腺癌裸鼠皮下移植瘤模型检测肿瘤体积和重量, 生长情况。两组间比较采用独立样本t检验。结果 PURPL和Notch1在乳腺癌组织中高表达(1.01±0.09比2.81±0.22、1.02±0.11比3.19±0.28, t=62.903、59.918, P<0.01), miR-137低表达(0.99±...     

环状RNA CDR1as靶向抑制微小RNA-135a-5p调控人肺动脉平滑肌细胞增殖、迁移和侵袭的机制

目的探讨环状RNA小脑变性相关蛋白1反义转录物(circCDR1as)对人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法体外培养HPASMC, 缺氧诱导后干扰circCDR1as表达、抑制或过表达微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)以及过表达Janus激酶2(JAK2)。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中circCDR1as、miR-135a-5p表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中JAK2、信号转导和转录激活因子3(STAT3)蛋白表达。组间差异比较采用t检验。结果缺氧组circCDR1as表达水平和磷酸化JAK2(p-JAK2)/JAK2、磷酸化STAT3(p-STAT3)/STAT3比值高于常氧组(1.98±0.07比1.01±0.05、0.62±0.06比0.18±0.04、0.56±0.05比0.15±0.03), miR-135a-5p表达水平低于常氧组(0.52±0.05比1.00±0.04), 差异有统计学意义(t=27.620、14.946、17.223、18.362, P<0.05)。...     

DNA甲基转移酶1对前列腺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响

目的探究DNA甲基转移酶1(DNMT1)对前列腺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响。方法采用小干扰RNA(siRNA)沉默前列腺癌细胞株(PC3和DU145)中DNMT1表达, 通过定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测沉默效率。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的体外增殖能力;TransWell检测细胞体外迁移和侵袭能力;Western blot检测si-DNMT1细胞后上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白表达。组间比较采用t检验。结果 qPCR和Western blot实验结果显示DNMT1在前列腺癌细胞中高表达, 并成功构建siDNMT1 PC3和DU145细胞系。4 d后, CCK-8结果显示, siDNMT1细胞增殖能力低于相应对照组[PC3:1.27±0.71和1.44±0.48比1.66±0.58, t=7.268、5.108, P<0.01;DU145:1.43±0.12和1.27±0.10比1.80±0.06, t=4.841、7.493、P<0.01]。Transwell显示, 与对照组细胞比较, siDNMT1细胞迁移和侵袭...     

细胞外囊泡介导的微小RNA-491递送抑制骨肉瘤肺转移

目的探讨细胞外囊泡(EV)介导的微小RNA(miR)-491递送抑制骨肉瘤肺转移。方法细胞水平检测miR-491靶向降解胫骨来源的骨肉瘤细胞中αB-晶状体蛋白(CRYAB)的信使RNA(mRNA)和蛋白, 分为6组, miR-NC组、miR-491组、Vector+miR-NC组、Vector+miR-491组、CRYAB+miR-NC组、CRYAB+miR-491组。收集我院接受骨折治疗手术的男性患者皮下脂肪组织并分离脂肪组织来源的间充质间质细胞(AD-MSC), 在AD-MSC中过表达miR-491或阴性对照(NC)后收集细胞外囊泡miR-491-EV和NC-EV。随后建立小鼠骨肉瘤肺转移模型并分为两组:NC-EV组和miR-491-EV组, 检测肺转移结节数和肺重量。通过t检验和方差分析检测不同组间差异。结果 miR-491组的CRYAB的mRNA和蛋白水平低于miR-NC组(1.00±0.03比0.19±0.02, t=38.912, P<0.01)。Vector+miR-491组的侵袭能力和迁移能力低于Vector+miR-NC组(1.00±0.08比0.31±0.03...     

微小RNA-148a-3p对肝癌树突状细胞活化的影响及其机制

目的探讨微小RNA(miR)-148a-3p对肝癌树突状细胞活化的影响及其机制。方法分离肝癌患者外周血树突状细胞, 通过双荧光素酶报告验证miR-148a-3p和细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)的靶向关系。树突状细胞分为4组:对照组、miR-148a-3p组、SOCS1组和miR-148a-3p+SOCS1组。通过转染miR-148a-3p类似物和/或SOCS1质粒来实现过表达。检测各组细胞中miR-148a-3p和SOCS1蛋白、抗原呈递蛋白(CD11c和CD86)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-α(IFN-α)的表达水平和树突细胞迁移能力。多组间的差异采用单因素方差分析(ANOVA), 组间两两比较采用SNK-q检验。结果 miR-148a-3p组的miR-148a-3p水平高于对照组(4.21±0.38比1.00±0.07, t=66.461, P<0.05), SOCS1组的SOCS1蛋白表达水平显著高于对照组(2.91±0.25比1.00±0.08, t=58.212, P<0.05)。miR-148a-3p+SOCS1组的SOCS1蛋白水平显著高于...     

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/基质金属蛋白酶-9信号通路在芬太尼抑制人胃癌细胞侵袭和迁移中的作用

目的观察磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/基质金属蛋白酶(MMP)-9信号通路在芬太尼抑制人胃癌MGC-803细胞侵袭和迁移中的作用。方法将人胃癌MGC-803细胞随机分为空白对照组(C组)、芬太尼组(F组),LY294002组(LY组),SB-3CT组(SB组),LY294002+芬太尼组(FLY组)和SB-3CT+芬太尼组(FSB组)。Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭迁移能力,实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测MMP-9和Akt的mRNA和蛋白质的表达,使用方差分析和独立样本t检验分析组间差异。结果F组胃癌细胞侵袭数低于C组(35.91±3.36比48.46±4.86,t=3.679,P<0.05)、迁移数低于C组(74.75±3.76比96.00±5.20,t=5.739,P<0.05)细胞迁移率(%)低于C组(14.29±4.29比22.43±3.37,t=3.591,P<0.05),Akt mRNA表达低于C组(0.77±0.02比1.00,t=8.110,P<0.05)、MMP-9 mRNA表达低于C组(0.87±0.08比1.00,t=2.967,P<0.05)、Akt-1蛋白表达低于C组(0.76±0.04比0.90±0.05,t=3.940,P<0.05)和MMP-9蛋白表达低于C组(0.76±0.05比0.94±0.04,t=4.774,P<0.05),差异均有统计学意义。FLY组胃癌细胞侵袭数低于LY组(18.45±4.86比33.62±4.13,t=4.999,P<0.05)、细胞迁移数低于LY组(42.79±3.56比71.79±7.60,t=5.986,P<0.05)和细胞迁移率(%)低于LY组(7.52±1.30比11.02±1.73,t=2.811,P<0.05),FLY组Akt mRNA表达低于LY组(0.60±0.05比0.76±0.17,t=3.468,P<0.05)、MMP-9 mRNA表达低于LY组(0.75±0.06比0.88±0.03,t=3.288,P<0.05)、Akt-1蛋白表达低于LY组(0.60±0.02比0.75±0.05,t=4.783,P<0.05)和MMP-9蛋白表达低于LY组(0.48±0.03比0.74±0.06,t=7.266,P<0.05),差异均有统计学意义。FSB组胃癌细胞侵袭数低于SB组(18.67±2.15比32.33±6.20,t=3.607,P<0.05)、细胞迁移数低于SB组(45.67±4.63比75.04±4.47,t=7.898,P<0.05)和细胞迁移率(%)低于SB组(7.09±1.69比14.39±2.06,t=4.745,P<0.05),FSB组Akt mRNA表达低于SB组(0.53±0.11比0.76±0.07,t=2.950,P<0.05)、MMP-9 mRNA低于SB组表达(0.63±0.07比0.84±0.01,t=3.687,P<0.05)、Akt-1蛋白表达低于SB组(0.61±0.03比0.75±0.04,t=4.573,P<0.05)和MMP-9蛋白表达低于SB组(0.53±0.07比0.72±0.05,t=3.730,P<0.05),差异均有统计学意义。芬太尼可降低细胞侵袭和迁移能力,MMP-9和p-Akt表达减少,且芬太尼联合LY294002或SB-3CT较单独用药时进一步加强了抑制效果。结论芬太尼抑制人胃癌MGC-803细胞侵袭和迁移的机制与抑制PI3K/Akt/MMP-9信号通路有关。     

微小RNA217靶向人沉默调节蛋白1对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨微小RNA-217(miR-217)对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响途径。方法采用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测人正常结肠上皮细胞NCM460和人结直肠癌细胞SW620、RKO、HT-29、HCT116中miR-217表达水平。将miR-217模拟物(mimic)与阴性对照(mimic NC)分别转染于RKO细胞系, 检测miR-217表达水平。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)与平板克隆实验检测细胞增殖活力;采用划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;采用RT-qPCR与蛋白质印迹法(Western blot)检测沉默信息调节因子1(SIRT1) mRNA与蛋白表达水平。两组间比较采用t检验, 多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果 miR-217在人结直肠癌细胞系中表达水平降低, 其中RKO细胞系明显低于NCM460细胞系[(0.286±0.022)倍比(1.000±0.090)倍, t=13.360, P<0.01], 差异有统计学意义。RKO细胞系转染miR-217 mimic后, miR-217表达水平高于N...