miR-188调控TGF-α抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移

目的 探索miR-188和转化生长因子α(TGF-α)对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响.方法 检测人骨肉瘤组织和癌旁组织中miR-188和TGF-α的表达.TargetScan和双荧光素酶报告基因实验检测TGFA是否为miR-188的靶基因.细胞划痕实验检测骨肉瘤细胞系MG63的迁移能力.构建骨肉瘤裸鼠移植瘤模型并观察对m...     

miR-96通过靶向调控KRAS蛋白抑制骨肉瘤的增殖和转移

目的 探讨miR-96在骨肉瘤组织和细胞中的表达情况及其对骨肉瘤细胞的调控作用。方法 采用RT-qPCR方法检测骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞系MG63和U2OS中miR-96的表达;miR-96 mimics转染骨肉瘤细胞后,CCK-8法检测细胞增殖;Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和转移;荧光素酶报告基因实验检测miR-96与鼠类肉瘤病毒癌基因（KRAS）的3’UTR区的靶向结合作用。Western blot检测KRAS蛋白表达变化。结果 与对照组相比,骨肉瘤组织和细胞中miR-96表达较低。体外实验中发现,miR-96的过表达能够抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭、转移。荧光素酶报告基因实验发现KRAS的3’UTR是miR-96的靶点。miR-96过表达能下调骨肉瘤细胞中KRAS蛋白的表达。结论 miR-96在骨肉瘤患者中表达下调,miR-96过表达能显著抑制骨肉瘤细胞的增殖和侵袭转移,该作用与靶向调控KRAS蛋白相关。     

莪术醇抑制人骨肉瘤细胞系的增殖和促凋亡

目的 探究莪术醇对人骨肉瘤细胞系MG-63和U2OS体外增殖、凋亡的影响和作用机制。方法 将MG-63细胞和U2OS细胞分为对照组、莪术醇20、40、80和160μmol/L干预组;MTT法检测MG-63、U2OS细胞增殖;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;流式细胞测量细胞凋亡;RT-qPCR和Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl2、caspase和β-catenin的mRNA和蛋白表达。结果 莪术醇呈浓度依赖性地抑制MG-63和U2OS细胞增殖,IC₅₀值分别为128.03μmol/L、117.95μmol/L。与对照组相比,莪术醇显著抑制MG-63、U2OS细胞的体外迁移和侵袭(P<0.05),并诱导细胞凋亡(P<0.05)。与对照组相比,莪术醇组促进Bax、caspase 3表达,抑制Bcl2表达(P<0.05),MG-63、U2OS细胞内β-catenin的mRNA表达水平和蛋白表达均被显著抑制(P<0.05)。结论 莪术醇显著抑制人骨肉瘤细胞系MG-63、U2OS增殖,诱导细胞凋亡。     

miR-135a靶向调节SP1对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨miR-135a通过靶向调节SP1对人骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞增殖和凋亡的影响。方法收集人正常成骨组织和OS组织,培养正常成骨细胞(h FOB1.19)和OS细胞(MG-63),Real-time PCR法检测miR-135a和SP1的表达,Western blot法检测SP1表达。转染miR-135a mimics和inhibitor,MTT法和Brd U-ELISA法检测OS细胞增殖变化,Western blot法检测凋亡蛋白Bax、BCL-2和Caspase 3的表达。双荧光素酶报告基因检测miR-135a与SP1的靶定关系。Western blot法检测miR-135a对OS细胞中SP1表达的影响。Western blot法检测miR-135a对OS细胞中JAK2/STAT3表达的影响。结果 OS组织和细胞中miR-135a表达均显著降低,SP1表达均显著升高。转染miR-135a mimics可降低OS细胞活性,减少Brd U阳性标记率。同时,miR-135a mimics增加OS细胞Bax和Caspase 3的表达,减少BCL-2的表达。miR-135a mimics降低荧光素酶报告基因的荧光强度,结合位点突变后荧光素酶活性升高。上调miR-135a显著降低SP1的表达并降低JAK2和STAT3的磷酸化水平。miR-135a inhibitor作用均与mimics相反。结论 miR-135a可通过靶向调节SP1抑制人OS细胞增殖,诱导OS细胞凋亡,并下调JAK2/STAT3活化。     

miR-30a抑制人骨肉瘤细胞143B的迁移、侵袭和活力

目的探讨miR-30a对人骨肉瘤细胞143B侵袭、迁移和细胞活力的影响。方法过表达或抑制miR-30a分别处理人骨肉瘤细胞143B。划痕实验观察细胞划痕愈合能力;Transwell实验检测143B细胞迁移和侵袭能力;MTT实验检测细胞活力;定量PCR实验确认过表达miR-30a腺病毒有效性并且检测RUNX2 mRNA表达;Western blot检测细胞中RUNX2总蛋白表达。结果过表达miR-30a抑制了骨肉瘤细胞143B迁移和侵袭(P0.05),在72 h时,miR-30a明显抑制细胞活力(P0.01);抑制miR-30a的内源性表达后,143B细胞的迁移和侵袭能力增加(P0.05),细胞活力也表现出上升水平(P0.01);同时过表达miR-30a可以抑制RUNX2的蛋白表达,抑制内源性miR-30a后RUNX2蛋白水平表达增加(P0.05)。荧光素酶活性检测,miR-30a可以靶向于RUNX2(P0.01)。结论 miR-30a抑制骨肉瘤细胞143B的迁移、侵袭和活力,其作用可以能是通过抑制RUNX2的表达来实现。     

miR-211通过靶向调控TFAM抑制人乳腺癌细胞系增殖

目的探讨miR-211靶向线粒体转录因子A(TFAM)对人乳腺癌细胞增殖的影响。方法用miR-211及TFAM作为研究对象。首先,在乳腺癌细胞中转染miR-211 mimics或miR-211抑制剂以实现miR-211过表达或miR-211沉默,并检测miR-211过表达或沉默时TFAM蛋白质的表达水平;其次,构建了在TFAM的5'端有或无6对碱基突变的荧光酶报告基因质粒(mut-TFAM/wt-TFAM),与miR-211 mimics或miR-211抑制剂共转染后检测荧光酶活性变化;然后,构建pc DNA3.1/TFAM质粒,与miR-211 mimics或miR-211抑制剂共转染后检测TFAM蛋白质表达水平变化;最后,检测pc DNA3.1/TFAM和mimics NC/miR-211 mimics共转染后乳腺癌细胞增殖的增殖。结果miR-211过表达抑制TFAM蛋白质表达(P0.01),miR-211沉默促进TFAM蛋白质表达(P0.01);miR-211可靶向结合TFAM调控其表达;pc DNA3.1/TFAM可实现TFAM过表达(mRNA P0.01,蛋白质P0.01),并可恢复miR-211对TFAM的抑制作用;miR-211可抑制乳腺癌细胞的增殖和增殖(P0.05),TFAM可促进乳腺癌细胞增殖增殖(P0.01),TFAM可回复miR-211对乳腺癌细胞增殖增殖的抑制作用(P0.05)。结论 miR-211靶向TFAM基因抑制人乳腺癌细胞的增殖。     

miR-99a通过下调RRM2抑制人子宫颈癌HeLa细胞系增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-99a与核糖核苷酸还原酶小亚基M2(RRM2)的靶向关系,并分析二者对人子宫颈癌(CC)HeLa细胞系增殖、侵袭及迁移的影响。方法 将HeLa细胞,分为对照组(control)、阴性对照组(inhibitor-NC)、抑制miR-99a表达组(miR-99a-inhibitor)、共转染组(RRM2-siRNA+miR-99a-inhibitor)。MTT法、平板集落实验检测细胞增殖;划痕实验、Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭;Western blot检测RRM2、细胞增殖核抗原(PCNA)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、N-钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)蛋白表达;免疫荧光法检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin定位及表达;生物信息学及双荧光素酶报告基因实验验证miR-99a与RRM2靶向关系;RT-qPCR检测细胞中miR-99a、RRM2 mRNA水平。结果 下调miR-99a表达,可增高HeLa细胞增殖率(100.00比128.86±4.25,P<0.05);上调集落形成率、划...     

miR-499a-5p通过靶向Pten减轻嗜铬细胞瘤细胞PC12低氧损伤

目的 研究miR-499a-5p对化学性低氧诱导的嗜铬细胞瘤细胞(PC12)损伤的影响。方法 将PC12细胞分为对照组、低氧组(CoCl₂处理24 h)、低氧+miR-NC组和miR-mimic转染组(分别转染miR-NC和miR-499a-5p mimic后,用CoCl₂处理24 h)。用RT-qPCR检测miR-499a-5p表达;用MTT法检测细胞活性;用试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)活性;用流式细胞测量术检测各组细胞凋亡;用Western blot检测磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)蛋白的表达。用荧光素酶报告基因检测Pten是否为miR-499a-5p的直接作用靶标。结果 与对照组比较,低氧组中miR-499a-5p表达和细胞活性降低(P<0.01或P<0.001),LDH活性和细胞凋亡增加(P<0.01或P<0.001);过表达miR-499a-5p可提高低氧条件下PC12细胞的存活率并抑制其凋亡(P<0.05或P<0.01)。Pten是miR-499a-5p的直接作用靶标。结论 miR-499...     

circKEAP1通过影响miR-661/LIF轴促进骨肉瘤细胞增殖和迁移

目的：探讨环状RNA circKEAP1通过影响微小RNA-661(miR-661),进而调控白血病抑制因子(LIF)基因促进骨肉瘤细胞凋亡和迁移的作用及其机制。方法：采用RT-qPCR探究不同骨肉瘤细胞系和成骨细胞hFOB1.19对照中circKEAP1的表达量,并通过一代测序验证其成环剪切位点。通过PCR验证circKEAP1在互补DNA与基因组DNA中的表达,并探究其在放线菌素D作用下的降解速率。构建circKEAP1的小干扰RNA,敲减circKEAP1后通过CCK-8、流式细胞术和细胞迁移实验评估骨肉瘤细胞143B活力、凋亡和迁移的改变。萤光素酶报告基因实验评估circKEAP1与miR-661的结合情况。通过CCK-8、流式细胞术和细胞迁移实验评估miR-661抑制剂对circKEAP1敲减的影响。转录组测序结合生物信息学分析预测circKEAP1的下游靶基因,并通过萤光素酶报告基因实验评估miR-661与LIF的结合情况。通过CCK-8、流式细胞术和细胞迁移实验评估LIF过表达对circKEAP1敲减的影响。结果：RT-qPCR结果显示,与成骨细胞hFOB1.19相比,多...     

miR-451a通过靶向调节MEF2D抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的研究miR-451a在膀胱癌中的表达及对膀胱癌发生发展的影响。方法通过实时定量PCR(real-time PCR)检测miR-451a在膀胱癌细胞系及组织标本中的表达。采用real-time PCR和Western blot检测MEF2D在膀胱癌组织及转染miR-451a mimics和inhibitor的T24细胞中的表达。双荧光素酶基因报告实验分析MEF2D是否为miR-451a直接的靶基因。通过MTT,Transwell迁移和侵袭实验检测T24细胞在转入miR-451a mimics和inhibitor后细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果 miR-451a在膀胱癌细胞及组织中的表达水平下调。miR-451a抑制了T24细胞的增殖、迁移和侵袭。双荧光素酶基因报告证实MEF2D为miR-451a的直接靶基因。miR-451a能够降低T24细胞MEF2DmRNA和蛋白表达水平。结论 miR-451a在膀胱癌中表达下调,通过靶向调节MDF2D起到了抑癌的作用,可能成为膀胱癌诊疗的潜在靶点。     

miR-129-5p靶向调控VCP抑制骨肉瘤细胞体外迁徙侵袭

目的 探讨miR-129-5p是否靶向调控VCP基因抑制骨肉瘤细胞迁徙侵袭.方法 构建miR-129-5p过表达及低表达的慢病毒载体,转染骨肉瘤细胞U2-OS;采用实时荧光定量PCR检测上调及下调miR-129-5p的U2-OS细胞中miR-129-5p的表达量;采用RT-PCR和Western blot技术检测VCP mRNA和蛋白表达;采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁徙、侵袭情况.结果 实时荧光定量PCR结果显示U2-OS细胞中miR-129-5p表达被明显上调或下调;RT-PCR和Western blot检测结果显示:miR-129-5p上调U2-OS细胞组中VCP mRNA和蛋白表达水平显著低于阴性对照细胞组(阴性慢病毒转染);miR-129-5p下调U2-OS细胞组中VCP mRNA和蛋白表达水平显著高于阴性对照细胞组;miR-129-5p上调U2-OS细胞迁徙和侵袭力显著低于阴性对照细胞,miR-129-5p下调的U2-OS细胞迁徙和侵袭力显著高于阴性对照细胞.结论 miR-129-5p靶向调控VCP的表达而抑制骨肉瘤细胞迁徙和侵袭能力.     

miR-141-3p通过靶向PDCD1抑制人胃癌细胞系AGS的迁移与侵袭

目的 探讨miR-141-3p对胃癌(GC)细胞迁移与侵袭的影响,并揭示其潜在的分子机制.方法 用RT-qPCR分别检测临床组织样本、正常胃黏膜上皮细胞系GES-1和胃癌细胞系AGS中miR-141-3p的表达.在AGS细胞中转染miR-141-3p mimic后,用Transwell小室法检测细胞的迁移和侵袭;荧光素...     

TLK2促进人乳腺癌细胞系增殖、迁移和侵袭

目的探究Tousled样激酶2 (TLK2)对乳腺癌细胞的影响及其可能的机制。方法用免疫组织化学和Western blot检测TLK2在乳腺癌组织和细胞系中的表达。用RT-qPCR检测乳腺癌组织和细胞系中TLK2 mRNA以及miR-622的表达。用CCK-8、BrdU和Transwell小室法检测TLK2过表达质粒和miR-622抑制剂对HCC70细胞增殖、迁移和侵袭的影响。通过Targetscan在线分析数据库和双荧光素酶报告基因分别预测和验证miR-622和TLK2之间的靶向调控关系。结果乳腺癌组织或细胞系中的TLK2表达水平显著上调(P0.05)。TLK2显著促进HCC70细胞增殖、迁移和侵袭(P0.01)。可能的作用机制表明miR-622可结合TLK2的3′UTR。结论 TLK2参与促进HCC70细胞增殖、迁移和侵袭,且被miR-622负向调控。     

miR-203a-3p抑制人肝癌细胞系增殖

目的 探索miR-203a-3p对人肝癌细胞系增殖和凋亡的分子调节机制。方法 RT-qPCR检测临床肝癌(HCC)组织及肝癌细胞系中miR-203a-3p的表达;建立miR-203a-3p过表达的HepG2细胞模型;MTT法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;平板集落形成实验检测集落形成;细胞划痕实验检测细胞迁移;表达谱芯片检测mRNA水平;ELISA检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的分泌;Western blot检测TGF-β1表达。结果 miR-203a-3p在HCC组织中低表达(P<0.05),与肿瘤分期呈负相关(P<0.05);HepG2细胞中过表达miR-203a-3p可显著降低细胞增殖速率(P<0.05)、迁移能力(P<0.05)、克隆形成能力(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05);TGF-β1表达降低(P<0.05),而TGFβR1表达升高(P<0.05);细胞培养上清中TGF-β1含量降低(P<0.05);细胞内TGF-β1的蛋白降低(P<0.05);加入TGF-β1重组蛋白可减轻miR-2...     

miR-410通过靶向Snail1抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭

目的分析miR-410通过Snail1蛋白抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭的机制。方法通过双荧光素酶报告验证miR-410靶向Snail1。将宫颈癌HeLa细胞系分为4组:对照组、mimic组、mimic+Snail1组和Snail1组。通过质粒转染技术过表达miR-410和/或Snail1。qPCR和Western blot分别用于检测RNA和蛋白的表达水平。分别通过CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell实验和细胞共培养检测各组的细胞生长、迁移、侵袭能力和免疫抑制情况。结果 miR-410直接靶向抑制Snail1。Mimic组的Snail1mRNA和蛋白水平显著低于对照组(P<0.05),Mimic+Snail1组的Snail1 mRNA和蛋白水平显著高于mimic(P<0.05)。mimic组的细胞活力、迁移、侵袭和免疫抑制水平显著低于对照组(P<0.05),Snail1组的细胞活力、迁移、侵袭和免疫抑制水平显著高于对照组(P<0.05),并且mimic+Snail1组的细胞活力、迁移、侵袭和免疫抑制水平显著高于mimic组(P<0.05)。结论 m...     

miR-654-3p靶向GMFB抑制骨肉瘤细胞增殖的作用及机制研究

目的 探究miR-654-3p对骨肉瘤细胞增殖的影响，预测其靶基因并评估靶基因对骨肉瘤患者生存预后的干预情况。方法 选择GEO数据库中GSE70367数据集进行差异分析，筛选骨肉瘤细胞中异常表达的miRNA，通过RT-qPCR检测miR-654-3p在骨肉瘤细胞系143B、MG-63、SAOS2和HOS中的表达情况。通过TargetScan和miRmap数据库预测miR-654-3p的靶基因，采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-654-3p与GMFB基因的结合。用CCK8实验和CFU实验分析miR-654-3p和GMFB对骨肉瘤细胞MG-63和HOS增殖的影响。下载TCGA数据库中肉瘤患者的GMFB表达数据和临床信息，通过R软件包绘制GMFB对生存预后影响的KM曲线以及预测肉瘤患者1年、3年和5年生存率的列线图。结果 与人正常成骨细胞hFOB1.19相比，骨肉瘤细胞系143B、MG-63、SAOS2和HOS中miR-654-3p的表达均明显降低（P＜0.05）。miR-654-3p与GMFB基因结合，并负调控GMFB的表达。miR-654-3p模拟物在体外明显抑制骨肉瘤细胞的增殖，而GMFB转染能够逆转抑制作用（P＜0.05）。GMFB高表达的骨肉瘤患者的总体生存率明显低于低表达患者（P＜0.05），且通过列线图能够预测患者的1年、3年和5年生存率。结论 miR-654-3p通过靶向负调控GMFB基因表达，抑制骨肉瘤细胞的增殖，且GMFB高表达与骨肉瘤患者的预后呈负相关。