灵菌红素对小鼠肺纤维化及其对Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察灵菌红素对小鼠肺纤维化的改善作用,探讨Wnt/β-catenin信号通路的调控机制。方法C57BL/6小鼠随机分为对照组(Control group)、博来霉素组(Bleomycin group)和灵菌红素组(Peptide group),每组15只。除对照组外,其余各组小鼠气管内分别一次性注入100μL博莱霉素溶液(5mg/kg)以制备小鼠肺纤维化模型;造模完成后,治疗组分别腹腔注射300μg/kg灵菌红素或300 mg/kg吡非尼酮,连续28天。HE及Masson染色观察肺组织病理变化;测定肺组织羟脯氨酸含量;Western Blot检测肺组织中TGF-β1、α-SMA、Colla I、CollaⅢ及GSK-3β、p-GSK-3β、α-catenin蛋白的表达。结果灵菌红素明显改善小鼠肺组织病理损伤,降低肺组织中羟脯氨酸含量,下调TGF-β1、α-SMA、Colla I、CollaⅢ、p-GSK-3β及β-catenin蛋白表达水平,上调GSK-3蛋白表达水平。结论灵菌红素改善小鼠肺纤维化,与抑制Wnt/β-catenin信号通路活性相关。     

阿托伐他汀联合环孢素A对百草枯中毒大鼠肺纤维化的缓解作用

目的探索阿托伐他汀联合环孢素A对百草枯中毒大鼠肺纤维化的疗效。方法 Wistar大鼠50只随机分为5组,每组10只。对照(Control)组给予生理盐水1 mL灌胃,其余4组单次给予单剂量百草枯20 mg/kg灌胃以染毒。然后,模型(PQ)组以生理盐水1 mL灌胃;阿托伐他汀(PQ+STN)组、环孢素A(PQ+CsA)组以及联合用药(PQ+STN+CsA)组分别以阿托伐他汀20 mg/kg、环孢素A 10 mg/kg以及阿托伐他汀20 mg/kg+环孢素A 10 mg/kg灌胃,每天1次,共7 d。HE和Masson.s染色观察肺组织病理学变化;测定肺湿重/干重比、羟脯氨酸含量;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测肺组织TNF-a、IL-1 b、IL-6含量;Western blot检测TGF-b、CollagenⅠ、CollagenⅢ、MMP-2、MMP-9、E-cadherin、Vimentin和a-SMA的蛋白表达;试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)等指标。结果 HE染色结果显示,与Control组比较,PQ组肺泡壁变厚、免疫细胞聚集、肺泡破裂;Masson.s染色显示肺组织明显纤维化。与PQ组比较,PQ+STN组和PQ+CsA组均一定程度减轻肺损伤和纤维化,PQ+STN+CsA组对肺损伤和纤维化的改善最明显。与Control组比较,PQ组肺湿重/干重比升高(P0.05),肺羟脯氨酸含量增加(P0.01),TNF-α、IL-1β和IL-6升高(P0.01),MDA增加(P0.01),SOD和GSH降低(P0.01),纤维化标志蛋白TGF-β、CollagenⅠ和CollagenⅢ升高(P0.01),MMP-2、MMP-9、Vimentin和α-SMA升高(P0.01),E-cadherin降低(P0.01)。与PQ组比较,PQ+STN组、PQ+CsA组和PQ+STN+CsA组肺湿重/干重比、肺羟脯氨酸含量、TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA、TGF-β、CollagenⅠ、CollagenⅢ、MMP-2、MMP-9、Vimentin和α-SMA降低(P0.05),SOD、GSH和E-cadherin升高(P0.05)。结论阿托伐他汀联合环孢素A能更有效减轻百草枯中毒导致的肺纤维化,控制氧化应激和炎症,其机制可能与其对细胞移动能力相关蛋白的调控有关。     

紫檀茋减轻百草枯诱导的模型大鼠肺纤维化

目的 探究紫檀茋(Pte)减轻百草枯(PQ)诱导大鼠肺纤维化的作用及机制。方法 将大鼠随机分为对照(control)组,PQ组(1次性灌胃50 mg/kg百草枯),低、中、高剂量Pte干预组(灌胃PQ 30 min后分别灌胃25、50和100 mg/kg Pte。每天1次,共7 d。)。治疗7 d后,用苏木精-伊红(HE)染色评价肺组织形态,用Masson三色染色评价肺纤维化。ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-1β、IL-6和MIP-2水平。用试剂盒检测肺组织中MDA和SOD含量。Western blot检测肺组织中E-cadherin、α-SMA、vimentin、Nrf2、NF-κB p65、p-NF-κB p65、TGF-β1、Smad3和p-Smad3的蛋白表达。结果 与对照组比较,PQ组大鼠肺组织损伤程度,肺纤维化评分,BALF中的IL-1β、IL-6和MIP-2水平,肺组织中MDA含量,α-SMA、vimentin和TGF-β1的蛋白表达水平,NF-κB p65和Smad3蛋白的磷酸化水平均显著升高(P<0.05),而肺组织中SOD含量,E-cadhe...     

巨噬细胞向肌成纤维细胞转化促进LPS诱导的急性肺损伤模型小鼠肺纤维化

目的 探讨巨噬细胞向肌成纤维细胞转化(MMT)在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠肺纤维化过程中的作用。方法 将21只小鼠分为7组：对照组、不同时间点LPS诱导小鼠早期肺纤维化(LPS-PF)模型组和不同时间点氯磷酸二钠脂质体(CL-LIP)干预组(n=3)。用HE、Masson染色评估各组肺纤维化程度;用免疫荧光检测MMT过程中CD68和α-平滑肌动蛋白(α-SMA)共标记阳性细胞数量。骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)分为对照(Ctrl)组和转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激组(n=3);用RT-qPCR检测各组α-SMA、纤连蛋白(FN)、人I型胶原蛋白(Col1)表达水平。用Western blot检测各组间α-SMA以及Smad同源物3(Smad3)、磷酸化的Smad3(p-Smad3)蛋白表达量。结果 LPS-PF模型小鼠肺组织第7天Ashcroft评分较对照(Ctrl)组显著增高(P<0.01);但在CL-LIP组中肺纤维化程度较LPS-PF组明显减轻(P<0.05)。肺组织免疫荧光染色发现,CL-LIP组CD68α-SMA共标记阳性细胞数较LPS-PF组对...     

上调miR-200a的表达减弱TGF-β1刺激的大鼠胰腺星状细胞活化和胶原合成

目的探讨miR-200a对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的大鼠胰腺星状细胞(PSCs)活化和胶原蛋白合成的影响。方法用组织块法培养分离PSCs,免疫荧光染色检测结蛋白(desmin)、神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达鉴定PSCs;取新鲜培养的第2代PSCs,设空白对照组、TGF-β1组、TGF-β1+miR-NC组、TGF-β1+miR-200a mimic组,Western blot法和细胞免疫荧光染色法检测α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)的表达,荧光定量PCR检测α-SMA、collagenⅠmRNA及miR-200a的表达。结果 TGF-β1可刺激大鼠PSCs活化及促进胶原蛋白的合成(P0.05),且呈时间依赖性;转染miR-200a mimic后,在相同浓度的TGF-β1刺激下,α-SMA和collagenⅠ的蛋白和mRNA表达明显降低(P0.01)。结论上调miR-200a的表达,可减弱TGF-β1对大鼠PSCs活化和胶原蛋白合成的刺激作用,其可能的机制是抑制TGF-β1的生物学作用。     

Rho激酶-1在肺纤维化小鼠肺组织中的表达变化与上皮-间充质转化

目的 观察Rho激酶-1(Rock-1) 在博莱霉素（BLM）致小鼠肺纤维化中的表达变化, 探讨其在肺纤维化中与上皮间充质细胞转化(EMT) 的关系。 方法 将60只小鼠随机分成正常对照组（Cont组）, BLM致肺纤维化模型组, 地塞米松（DXM）治疗组。BLM组给予0.04ml BLM (5mg/kg)一次性气管内灌注,治疗组在BLM一次性气管内灌注后每天给予DXM 5mg/kg腹腔注射。各组分别于第3、7、14和28天各处死5只小鼠, 取肺组织, 做病理切片,HE染色观察小鼠肺炎症和纤维化的程度, 以样本碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量, 免疫组织化学检测不同实验组小鼠间充质细胞标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) 和上皮细胞标记物上皮钙黏素( E-Cad) 的表达,应用Western blotting法测定不同实验组小鼠Rock-1的表达水平。 结果 BLM组肺组织病理切片按时间顺序呈现由肺泡炎至纤维化的动态改变,肺组织胶原含量在第7天明显增加, 第28天达高峰, HYP含量测定动态增高。与Cont组比较、BLM组、DXM组E-Cad的蛋白表达降低,α-SMA蛋白表达增高。Western blotting结果显示,BLM组Rock-1的表达与正常对照组比较显著增高( P<0.05),第14天时达到高峰。DXM组Rock-1的表达逐步下降。 结论 Rock-1在小鼠肺纤维化中表达增高, 表明其可能是肺纤维化形成的促进因子, 且随着Rock-1的增高,α-SMA逐步增高 E-Cad逐步降低, 推测Rock-1在肺纤维化形成中的机制可能与促进EMT有关。     

糖尿病大鼠肾组织中miR-21和SnoN表达的变化

目的探讨糖尿病(DM)大鼠肾组织中微小核糖核酸-21(miR-21)和核转录共抑制因子(SnoN)在肾纤维化过程中的表达变化及其可能机制。方法用链脲佐菌素复制DM大鼠模型,并设对照组(NC),每组n=8。10周后处死大鼠,观察肾组织形态变化;免疫组织化学染色、Western blot及RT-q PCR检测miR-21、SnoN、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、p-Smad3(Ser423/425)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)和胶原蛋白Ⅲ(collagenⅢ)的表达。结果与对照组相比,DM组肾组织p-Smad3(Ser423/425)、TGF-β1和α-SMA蛋白表达增加(P0.05),SnoN、E-cadherin蛋白表达减少(P0.05),但SnoN mRNA和miR-21表达明显上调(P0.05),并伴有collagenⅠ、collagenⅢ和FN在间质沉积增多。结论 TGF-β1可能上调miR-21表达,抑制SnoN翻译水平的表达,促进DN的纤维化病变。     

结缔组织生长因子在博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化中的作用探讨

目的:检测结缔组织生长因子(CTGF)在小鼠肺内的表达,并探讨其在肺纤维化中的意义。方法:通过向气管内滴入博莱霉素建立小鼠肺纤维化模型。用免疫组化染色方法检测不同时期肺组织中CTGF蛋白的表达;用RT PCR检测CTGFmRNA的表达;用酸水解法测定肺羟脯氨酸的含量。结果:在正常小鼠肺组织中,CTGF蛋白和其mRNA几乎不表达;而在模型组的肺组织中表达明显升高(P<0.01)。CTGF蛋白表达于支气管/细支气管上皮细胞、肺泡Ⅱ型上皮细胞和肺成纤维细胞,表达量与肺组织中羟脯氨酸的含量呈显著的正相关(r=0.92,P<0.001)。结论:CTGF与肺纤维化的形成关系密切,CTGF检测可作为评价肺纤维化发生、发展的一种灵敏的指标。     

苦参碱对肺纤维化鼠肝细胞生长因子表达的影响

目的 探讨苦参碱对博莱霉素诱导肺纤维化大鼠肺组织肝细胞生长因子表达的影响.方法 选取SD大鼠72只,随机分为空白对照组、模型对照组、苦参碱处理组,每组各24只.各组动物于7、14、28d随机处死8只,取肺组织采用苏木精-伊红染色,Masson胶原染色及测定羟脯氨酸(HYP)浓度采评价治疗效果,用原位杂交的方法检测肝细胞生长因子(HGF)mRNA的表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测HGF蛋白在大鼠肺组织的含量.结果 苦参碱组肺泡炎和肺纤维化程度及羟脯氨酸浓度低于同时期模型对照组,有统计学意义;模型组肺组织HGFm RNA表达及蛋白含量在第7d达高峰,之后下降,第14d,第28d低于正常对照组(P<0.01),苦参碱组HGFm RNA表达及蛋白含量变化趋势与模型组同,但其表达均高于同时间段模型组(P<0.05).结论 在博来霉素诱导肺纤维化形成阶段应用苦参碱干预能减轻肺纤维化的程度,其可能机制为通过促进HGF的表达而实现.     

NRP1调控M2型巨噬细胞极化介导电离辐射肺纤维化的作用研究

目的：研究神经菌毛蛋白1(NRP1)对电离辐射肺损伤导致纤维化进程的影响，并探讨其与M2型巨噬细胞间的关系。方法：电离辐射肺纤维化（RIPF）组小鼠以6 Gy X射线全胸辐射建立电离辐射肺纤维模型；对照组即正常小鼠；EG00229给药组（EG00229为NRP1拮抗剂）小鼠辐射前7 d小鼠EG00229给药处理。HE、天狼星红、马松染色观察三组小鼠肺组织损伤和纤维化胶原沉积；ELISA检测三组小鼠肺泡灌洗液中TNF-α、IL-4、TGF-β1炎症因子水平；IHC和RT-PCR检测三组小鼠肺组织中Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和NRP1蛋白表达水平；免疫荧光检测三组小鼠肺组织中CD14和M2型巨噬细胞极化标志物精氨酸酶1(Arg1)、抵抗素样分子α(FIZZ1)、几丁质酶3样蛋白1(Ym1)蛋白表达水平。结果：HE染色显示RIPF组小鼠肺部呈现放射性肺纤维化病理形态表现，EG00229给药组小鼠肺组织纤维化损伤有明显改善；与对照组相比，RIPF组小鼠肺组织中Col-Ⅰ、α-SMA和NRP1及TNF-α、IL-4、TGF-β1和CD14表达水平显著升高，EG0022...     

二甲双胍对肺纤维化大鼠肺组织肺泡上皮-间充质转化的抑制作用及机制

目的:观察二甲双胍(metformin)对肺纤维化大鼠肺泡上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的抑制作用及其可能机制。方法:SD大鼠48只,其中12只设为正常对照组,36只采用博来霉素(5 mg/kg)气管滴注诱导肺纤维化大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组及二甲双胍低剂量(100 mg/kg)和高剂量(300 mg/kg)组。二甲双胍组每日灌服相应剂量的二甲双胍,连续4周。HE染色和Masson染色观察肺组织病理学及胶原沉积的变化,real-time PCR、Western blot及免疫组化检测肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、紧密连接蛋白1(ZO-1)、I型胶原(collagen I)、III型胶原(collagen III)和转化生长因子β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)的mRNA和蛋白表达及Smad2/3和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulatedkinase 1/2,ERK1/2)蛋白的磷酸化水平。结果:二甲双胍可上调肺纤维化大鼠肺组织E-cadherin及ZO-1的表达,下调α-SMA、vimentin、collagen I、collagen III和TGF-β_1的表达及Smad2/3和ERK1/2蛋白的磷酸化水平(P0.05)。结论:二甲双胍可抑制肺纤维化大鼠肺泡EMT,其机制可能与抑制TGF-β_1信号转导通路有关。     

硫化氢通过抑制TGF-β1/Smad信号通路抗大鼠肺纤维化

目的观察硫化氢(H2S)对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的影响,并探讨其是否通过转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路发挥作用。方法 SD大鼠50只随机分为正常对照组、假手术组、模型组、硫氢化钠(Na HS)组和地塞米松组,每组10只,假手术组大鼠以生理盐水气管内注入,而后3组大鼠以博莱霉素A5气管内注入制备肺纤维化模型。自第2天起,Na HS组、地塞米松组大鼠分别以Na HS、地塞米松腹腔注射,其余3组腹腔注射等量生理盐水。全部大鼠第28天处死,留取肺组织,行HE和Masson染色,通过试剂盒测定肺组织羟脯氨酸(HYP)含量,采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测肺组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)m RNA和蛋白表达。结果与模型组比较,Na HS组和地塞米松组肺泡炎症与肺纤维化程度明显减轻(P0.01)。与正常对照组或假手术组比较,模型组肺组织HYP含量以及TGF-β1、Smad 2、Smad 3、α-SMA、ColⅠ、ColⅢm RNA和蛋白表达水平升高,但Smad 7 m RNA和蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P0.01)。通过Na HS或地塞米松处理后,肺组织HYP含量以及TGF-β1、Smad 2、Smad 3、α-SMA、ColⅠ、ColⅢm RNA和蛋白表达水平减少,而Smad 7 m RNA和蛋白表达水平增加,与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.01)。然而,Na HS组与地塞米松组以及假手术组与正常对照组上述指标相比无显著性差异(P0.05)。结论 H2S可能通过抑制TGF-β1/Smad信号转导通路下调α-SMA表达,从而减少ColⅠ、ColⅢ合成发挥抗大鼠肺纤维化作用。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸对人肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞转化的调节作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)是否通过对转化生长因子-β1(TGF-β1)介导的ROCK/SRF/α-SMA信号转导通路活化的调节,阻抑肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质细胞转化,即上皮-间质转化(EMT),进而发挥其抗(矽)肺纤维化的作用.方法:培养人A549肺泡Ⅱ型上皮细胞株,免疫细胞化学显色检测角蛋白、波形蛋白及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;免疫印迹检测E-钙黏蛋白(E-cad)、波形蛋白及Rho相关卷曲蛋白激酶(ROCK)、血清反应因子(SRF)、α-SMA及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达;Real-Time PCR检测ROCK、SRF、α-SMA的表达情况.结果:在TGF-β1的诱导下,上皮细胞向肌成纤维细胞的形态改变,伴随着上皮标志物角蛋白、E-cad降低,而间质细胞标志物波形蛋白增高,α-SMA表达并增多.与对照组相比,TGF-β1诱导刺激组ROCK、SRF、α-SMA蛋白和基因表达水平上调,Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达上调.给予ROCK阻滞剂Y-27632、Ac-SDKP干预后,ROCK、SRF、α-SMA及Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达显著降低.结论:Ac-SDKP通过阻断TGF-β1介导的ROCK/SRF/α-SMA信号转导通路,阻抑肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞的转化及胶原的合成,进而发挥其抗(矽)肺纤维化的作用.     

IL-33调控NF-κB/Twist信号通路促进肺泡上皮细胞上皮-间质转分化的机制研究北大核心CSCD

目的:探究IL-33是否通过激活NF-κB/Twist信号通路,进而诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞发生上皮-间质转分化(EMT)而促进肺纤维化(PF)的进程。方法:C57BL/6小鼠48只,随机分成对照(CON)组、博莱霉素(BLM)组、BLM+IL-33(30μg/kg)组和BLM+抗IL-33抗体(Anti-IL-33 Ab)(100μg/kg)组,每组12只。气管注射BLM(5000 U/kg)诱导PF小鼠模型。造模后每隔1 d腹腔注射1次重组IL-33和抗IL-33抗体,连续注射3周。HE和Masson染色观察肺组织病理变化及胶原沉积情况。ELISA检测血浆IL-33的水平。免疫组化检测肺组织IL-33跨膜受体ST2L的表达。体外培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,实验设Control组、IL-33(100 ng/ml)组、IL-33^(+)二甲基亚砜(DMSO)组及IL-33^(+)吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC,100μmol/L)组,每组设复孔6个。细胞先用PDTC或DMSO预处理1 h,再用IL-33处理48 h。RT-PCR检测肺组织或肺泡上皮细胞中CollagenⅠ、CollagenⅢ、E钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达。Western blot检测肺组织和(或)肺泡上皮细胞IL-33、CollagenⅠ、CollagenⅢ、E-cadherin、Vimentin、α-SMA、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达及细胞核内NF-κB p65和Twist的蛋白水平。结果:体内实验,与CON组相比,BLM组IL-33、ST2L的表达明显升高,p-IκBα、p-NF-κB p65及核内NF-κB p65和Twist的蛋白水平显著升高,肺组织E-cadherin的表达明显下调而Vimentin、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达明显上调(P<0.05)。与BLM组相比,IL-33组IL-33、ST2L的表达进一步升高,p-IκBα、p-NF-κB p65及核内NF-κB p65和Twist的蛋白水平进一步增加,肺组织E-cadherin的表达进一步下调而Vimentin、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达进一步上调(P<0.05),肺纤维化程度进一步加重;而Anti-IL-33 Ab的作用正好和IL-33的作用相反。体外实验,IL-33能够明显增加细胞内IκBα、NF-κB p65磷酸化水平,显著增加细胞核内NF-κB p65和Twist蛋白水平,明显下调E-cadherin的表达而显著上调Vimentin、α-SMA、CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达(P<0.05)。而IL-33的这些作用能够被NF-κB抑制剂PDTC所逆转。结论:IL-33可能通过激活NF-κB信号通路而促使转录因子Twist的表达,进而诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞发生EMT而导致PF发生。     

过表达肝/骨/肾型碱性磷酸酶对小鼠急性心肌梗死后心室重塑的影响

目的 探讨肝/骨/肾型碱性磷酸酶(ALPL)过表达对小鼠急性心肌梗死（MI）后心室重塑的影响。方法 36只8周龄雄性C57BL/6 J小鼠随机分为对照组(sham组),心肌梗死组（MI+Adv-EGFP组）和ALPL过表达组（MI+Adv-ALPL组）,每组12只。术后2周,使用心脏彩色超声测定小鼠心脏功能,HE染色观察小鼠心脏组织病理变化,Real-time PCR检测小鼠心脏ALPL mRNA表达水平, Western blotting检测ALPL、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（ColⅠ）和Ⅲ型胶原蛋白（ColⅢ）表达情况,苦味酸天狼猩红染色偏振光法测定各组标本胶原容积分数(CVF)和Ⅰ型/Ⅲ型胶原比值。结果 与MI组相比,过表达ALPL组小鼠心脏左室射血分数(LVEF)及左室短轴缩短率(LVFS)明显下降（P<0.05),过表达ALPL组HE染色可见心肌纤维断裂,排列紊乱,梗死区域纤维化明显,心脏组织α-SMA、ColⅠ、ColⅢ蛋白表达及CVF均显著增大（P<0.05）,同时ColⅠ/ColⅢ比值显著增加（P<0.05）。结论 ALPL过表达加重小鼠急性心肌梗死后心室病理性重塑。     

气管内移植人脐血间充质干细胞对博来霉素致小鼠肺纤维化的作用

目的:探讨气管内移植人脐血间充质干细胞(HUCBMSCs)对于博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的作用,比较气管内及尾静脉移植HUCBMSCs对肺纤维化的治疗效果。方法:取第2代HUCBMSCs培养至4代;60只无特定病原体的雄性昆明小鼠随机分成4组:阴性对照组(Cont组)、博来霉素组(BLM组)、HUCBMSCs移植Ⅰ组(MⅠ组)和HUCBMSCs移植Ⅱ组(MⅡ组),每组15只;后3组小鼠采用气管内插管灌注博来霉素制造肺纤维化模型,24 h后,MⅠ组各小鼠气管内灌注5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记的HUCBMSCs,MⅡ组各小鼠尾静脉内注射Brdu标记的HUCBMSCs,分别于模型建造后的第7、14、28天每组各处死5只小鼠取材。采用HE染色和Masson染色观察肺组织形态学变化;免疫组织化学法检测间充质干细胞在肺组织的定位和分布;碱水解法测定羟脯氨酸的水平;免疫印迹法检测TGF-β1、α-SMA的蛋白表达量。结果:两组间充质干细胞移植组第7、14、28天均可见Brdu标记的细胞;3个时间点的MⅠ组、Ⅱ组的肺泡炎症和肺纤维化程度均分别较博来霉素组轻,差异有统计学意义(P0.05)。肺组织中TGF-β1、α-SMA的表达情况:BLM组MⅠ组、MⅡ组Cont组(P0.05);MⅠ组和Ⅱ组表达量差异无统计学意义(P0.05)。结论:气管内移植HUCBMSCs可以定植于受损的肺组织中,能够减轻博来霉素诱导的小鼠肺纤维化。     

过表达c-SKI抑制异丙肾上腺素诱导的小鼠心肌纤维化

目的探讨原癌基因c-SKI在异丙肾上腺素(ISO)诱导的小鼠心肌纤维化中的作用及机制。方法将小鼠分为对照组(control组)、模型组(model组)、c-SKI基因感染模型组(LV-SKI组)及对照病毒感染模型组(LV-NC组),每组10只。模型组采用皮下注射ISO 30 d,首次剂量为5 mg/kg,后续以2.5 mg/kg。2周后LV-SKI组和LV-NC组于18、21、24、27和30 d分别尾静脉注射c-SKI慢病毒和对照病毒,剂量均为100μL,滴度1×10~8 TU。HE染色和Masson染色观察心肌组织病理学;ELISA检测心肌组织中Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白含量;Western blot检测c-SKI、间质细胞标志物波形蛋白(vimentin)、α-SMA、内皮细胞标志物CD31以及转录因子Snail、Twist及Slug的表达。结果与对照组相比,模型组小鼠心肌纤维组织中c-SKI的表达呈时间依赖性下降(P0.01);模型组心肌细胞排列紊乱,间质显著增多,Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白含量增加(P0.01);心肌组织vimentin、α-SMA、Snail、Twist及Slug表达均上调,CD31蛋白表达下调(P0.05)。过表达c-SKI后,与LV-NC组比较,小鼠心肌结构趋于整齐,间质胶原纤维减少,心肌组织中Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白减少(P0.01);Vimentin、α-SMA蛋白的表达下调(P0.05);CD31蛋白的表达上调(P0.05);同时转录因子Snail、Twist和Slug蛋白的表达也随之下调(P0.01)。结论小鼠心肌纤维化进程中c-SKI表达下调,而过表达c-SKI能够通过抑制内皮-间充质转化(End-MT)改善ISO诱导的心肌纤维化。     

苦参碱对肺纤维化鼠肝细胞生长因子表达的影响

目的探讨苦参碱对博莱霉素诱导肺纤维化大鼠肺组织肝细胞生长因子表达的影响。方法选取SD大鼠72只,随机分为空白对照组、模型对照组、苦参碱处理组,每组各24只。各组动物于7、14、28d随机处死8只,取肺组织采用苏木精-伊红染色,Masson胶原染色及测定羟脯氨酸（HYP）浓度来评价治疗效果,用原位杂交的方法检测肝细胞生长因子（HGF）mRNA的表达,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测HGF蛋白在大鼠肺组织的含量。结果苦参碱组肺泡炎和肺纤维化程度及羟脯氨酸浓度低于同时期模型对照组,有统计学意义;模型组肺组织HGF mRNA表达及蛋白含量在第7d达高峰,之后下降,第14d,第28d低于正常对照组（P〈0.01）,苦参碱组HGF mRNA表达及蛋白含量变化趋势与模型组同,但其表达均高于同时间段模型组（P〈0.05）。结论在博来霉素诱导肺纤维化形成阶段应用苦参碱干预能减轻肺纤维化的程度,其可能机制为通过促进HGF的表达而实现。     

RNA干扰沉默Smad3基因对百草枯致小鼠肺间质纤维化的治疗作用

目的通过RNA干扰技术沉默小鼠肺组织中Smad3基因,观察其对百草枯(PQ)所致肺间质纤维化是否具有保护作用。方法利用小鼠L929成纤维细胞,体外验证抑制Smad3基因表达的有效shRNA,并进一步将其合成进重组腺病毒。实验小鼠分为三组,在小鼠染毒后2h,气管内分别注入PBS、非靶向重组腺病毒和靶向重组腺病毒。不同时间点(0d,7d,28d)对每组6只小鼠进行处理,留取肺组织标本。提取肺组织中总RNA,Real time PCR检测肺组织中Smad3、I型前胶原mRNA表达,Western Blot检测肺组织细胞核中Smad3蛋白表达,羟脯氨酸检测试剂盒分析肺组织中羟脯氨酸的含量以及肺组织HE染色后观察组织病理学变化。结果同PBS组、非靶向重组腺病毒组相比,靶向重组腺病毒有效抑制了肺组织内Smad3 mRNA和蛋白表达。重组腺病毒介导的shRNA转染进一步抑制了肺组织中I型前胶原mRNA表达和羟脯氨酸的产生,减轻了PQ所致的肺间质纤维化的形成。结论Smad3对百草枯引起的肺间质纤维化有重要作用,RNA干扰抑制肺组织Smad3基因表达可能是一种有效的治疗该病的方法。     

铁死亡诱导剂咪唑酮埃拉斯汀(IKE)通过抑制IL-6、 CCL5及CXCL9分泌缓解CIA小鼠的肺纤维化

目的 探索铁死亡诱导剂咪唑酮埃拉斯汀(IKE)对胶原蛋白诱发关节炎(CIA)小鼠肺纤维化的作用及潜在机制。方法 选取8周龄～10周龄DBA/1小鼠,按照完全Freund佐剂(CFA)与鸡Ⅱ型胶原蛋白混合乳化方法建立CIA小鼠模型,设置对照组、 CIA组、 CIA联合IKE组。每2 d进行关节评分与爪垫厚度测量,39 d后收集小鼠各脏器组织。HE染色、番红-固绿染色、甲苯胺蓝染色评价关节处组织病理改变;Masson染色评价肺部组织病理改变。免疫组织化学染色法检测肺组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞活化蛋白α(FAPα)、转化生长因子β(TGF-β)及Ⅰ型胶原蛋白(Col1)、白细胞介素1(IL-1)、 IL-6、 IL-17及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平;Olink mouse exploratory panel检测小鼠血清细胞因子IL-17α、 IL-17F、 TGF-β1、整合素亚基β6(ITG-β6)、 TNF受体超家族成员11B(TNFRSF11b)、 TNF受体超家族成员12A (TNFRSF12a)、 IL-6、 IL-1α、 IL-1β、 IL-10、...