己烯雌酚对HOSE细胞中HOXA10基因表达及DNA甲基化的影响

目的研究己烯雌酚对人正常卵巢上皮细胞株HOSE中HOXA10基因表达及基因启动子区CpG岛甲基化的影响。方法用不同浓度的己烯雌酚(5×10-6、5×10-7、5×10-8 mol/L)作用于体外培养的人正常卵巢上皮细胞株HOSE。培养5d后收集细胞,应用实时荧光定量PCR和Western blot检测HOXA10基因mRNA和蛋白的表达;运用甲基化特异性PCR检测HOXA10基因启动子区CpG岛的甲基化状态。结果己烯雌酚作用后,HOSE细胞中HOXA10基因mRNA和蛋白表达上调(P<0.05),并且HOXA10基因启动子区发生去甲基化改变。结论己烯雌酚可以上调人正常卵巢上皮细胞株HOSE中HOXA10基因的表达,与其对HOXA10基因启动子区CpG岛甲基化的影响有关。     

17β-雌二醇对人牙髓细胞增殖影响的体外研究

目的：观察不同浓度17β-雌二醇对体外培养人牙髓细胞增殖的影响。方法选取年轻恒牙,采用组织块酶消化法获取人牙髓细胞并进行原代培养。取第4代对数生长期人牙髓细胞SABC法进行波形蛋白和角蛋白免疫组化染色鉴定细胞来源。将处于对数生长期的第4代人牙髓细胞随机分为5个实验组、1个对照组和1个空白对照组,96孔培养板每组选6个孔。实验组：在有细胞孔内分别加入含2％活性碳吸附胎牛血清的无酚红高糖DMEM培养液配置的终末浓度为10－5、10－6、10－7、10－8、10－9 mol／L的17β-雌二醇。对照组：在有细胞孔内仅加入培养液。空白对照组：在无细胞孔内仅加入培养液。分别于培养48 h和72 h时用MTT比色法检测17β-雌二醇对人牙髓细胞增殖的影响。采用流式细胞术检测各浓度组17β-雌二醇对人牙髓细胞的细胞周期的影响。结果与对照组比较,在一定浓度范围内17β-雌二醇能促进人牙髓细胞的增殖和细胞周期进程,以10－8 mol／L的17β-雌二醇作用最为明显（ P＜0．05）。结论17β-雌二醇对人牙髓细胞细胞增殖有一定的诱导作用。     

17β-雌二醇对乳腺癌细胞迁移的影响及CANP-FN通路的介导作用

目的探讨17β-雌二醇(E2)对人乳腺癌细胞迁移活动的影响及其信号机制。方法以雌激素受体(ER)阳性MCF-7和ER阴性MDA-MB-468乳腺癌细胞为研究模型,E2处理诱导细胞迁移。采用划痕实验检测细胞迁移能力,小分子RNA(siRNA)转染模型细胞沉默纤连蛋白(FN)基因表达,Western blot法检测蛋白水平,钙蛋白酶(CANP)特异性抑制剂Calpeptin(Cal)预处理细胞干预胞内CANP活性。结果(1)E2(50 nmol·L~(-1))处理24 h可明显促进MCF-7和MDA-MB-468乳腺癌细胞迁移,迁移率分别增加(51.55±5.50)%(P<0.05)和(40.78±4.78)%(P<0.01);(2)E2明显上调MCF-7和MDA-MB-468乳腺癌细胞FN蛋白表达水平,分别为对照组的2.11倍(P<0.05)和1.86倍(P<0.01);(3)Cal(10μmol·L~(-1))可明显抑制E2诱导的MCF-7和MDA-MB-468乳腺癌细胞迁移,抑制率分别为(49.55±6.44)%(P<0.05)和(36.85±4.40)%(P<0.01);(4)Cal能明显抑制MCF-7和MDA-MB-468乳腺癌细胞FN蛋白表达上调,抑制率分别为(80.12±4.55)%和(78.84±5.70)%(P<0.01);(5)siRNA沉默FN能抑制E2诱导MCF-7和MDA-MB-468乳腺癌细胞迁移,抑制率分别为(40.65±5.80)%(P<0.01)和(40.88±6.02)%(P<0.05)。结论E2可促进ER阳性或阴性乳腺癌细胞的迁移,而CANP-FN信号通路可能参与介导E2的促细胞迁移效应。     

17β-雌二醇对离体猪基底动脉的影响

目的与方法研究17β_雌二醇(E2)对KCl和5_羟色胺(5_HT)引起离体猪基底动脉收缩的拮抗及保护作用。结果E2 浓度依赖性地对抗KCl引起的最大收缩作用 ,IC50 为10-4.8mol/L。E2 预处理后 ,浓度依赖性地抑制KCl引起的最大收缩 ,IC50 为10-4.8 mol/L ,并降低5_HT引起收缩的浓度效应曲线的最大反应 ,其 pD2’为4 57。结论E2 对离体猪基底动脉有舒张作用     

17β-雌二醇对骨骼肌代谢、发育以及功能的影响

17β-雌二醇(17β-estradiol)是卵巢分泌的类固醇激素,其不仅对生殖和性功能有重要作用,也影响肌肉、骨骼等其他器官的发育和功能。骨骼肌存在着明显的性别差异,17β-雌二醇是导致骨骼肌性别差异的主要因素之一。本文综述了17β-雌二醇与骨骼肌内糖与脂肪代谢,骨骼肌发育和17β-雌二醇与骨骼肌疾病之间的关系,并探讨17β-雌二醇与骨骼肌目前研究未解决的问题及近期及远期研究方向。     

17-α雌二醇3-醚化合物的合成及初步生理活性研究

设计合成了4个17—α雌二醇3—醚化合物。4个化合物均末见文献报道，其结构经核磁共振谱、元素分析确证。其中17-α雌二醇3—β二乙胺基乙基醚经骨组织培养试验，初步表明具有促进骨形成作用。     

17β-雌二醇对大鼠局灶性脑缺血bcl-2、bax表达及细胞凋亡的影响

目的 观察雌激素对大鼠局灶性脑缺血皮层bcl—2、bax表达及凋亡的影响。方法 36只SD雌性大鼠分成3组：2h组、24h组、48h组，每组再分成假手术组，卵巢切除组(OVX组)，17β—雌二醇治疗的卵巢切除组(OVX E2组)。利用免疫组化、原位末端标记方法观察三组大鼠永久局灶性脑缺血皮层bcl—2、bax的表达和细胞凋亡情况。结果 缺血2h，很少出现明显的凋亡细胞，但随缺血时间延长逐渐增多，缺血24h、48h，OVX E2组凋亡细胞较OVX组明显减少；bcl—2在各时间点皆有表达，随缺血时间延长表达逐渐降低，OVX E2组bcl—2表达较同时间点OVX组、假手术组高；随缺血时间延长，bax蛋白表达逐渐增多，OVX E2组bax表达较同时间点OVX组、假手术组降低。结论 脑缺血后雌激素促进bcl—2表达，抑制bax表达，减少细胞凋亡。可能是其脑保护作用的机制之一。     

17β-雌二醇调控大鼠成肌细胞L6GNR4细胞迁移能力的机制研究

目的研究17β-雌二醇对大鼠成肌细胞L6GNR4细胞迁移能力的调控作用及机制。方法L6GNR4细胞培养在含有10%胎牛血清的DM EM高糖增殖培养基中,培养基中添加10 nM雌激素17β雌二醇和/或50 nM雌激素竞争性拮抗剂Tamoxifen。应用细胞划痕试验在药物处理后0、12、24 h观察17β雌二醇对成肌细胞迁移能力的影响。在药物处理24 h后,应用荧光定量PCR技术检测各组细胞中雌激素受体α和β的表达。同时还检测了成肌细胞迁移相关关键基因(Pax3、Fhl1以及Fhl1相互作用蛋白Actg1、Myh10)在各组细胞中的表达情况。结果与对照组比较,17β-雌二醇在划痕24 h时可以明显抑制L6GNR4的细胞迁移。17β-雌二醇能够明显抑制ERβ的表达,而雌激素竞争性拮抗剂Tamoxifen能够部分逆转17β-雌二醇对ERβ的抑制作用。17β-雌二醇能够明显抑制成肌细胞迁移相关的关键因子Pax3、Fhl1以及Fhl1相互作用蛋白Myh10的表达,而雌激素竞争性拮抗剂Tamoxifen能够逆转或部分逆转17β-雌二醇对Pax3、Fhl1和Myh10的转录抑制作用。相同浓度的雌激素对L6GNR4细胞中Actg1的表达改变不明显。结论雌激素17β-雌二醇通过ERβ转录抑制Pax3、Fhl1以及Fhl1的相互作用蛋白Myh10的表达,发挥其抑制大鼠成肌细胞迁移的作用。     

比较鳗鱼降钙素与17β-雌二醇对体外培养成骨细胞增殖与分化的影响

目的比较鳗鱼降钙素(CT)与17β-雌二醇对大鼠体外培养成骨细胞增殖和分化的影响。方法用酶消化法分离培养新生SD大鼠成骨细胞(OB),取第2继代,在培养液中分别加入不同浓度的CT和17β-雌二醇(E2);用MTT法观察OB的增殖能力(A值)及分化功能(ALP)。结果CT组较对照组从1×10-12mol·L-1起A值增加,且呈剂量依赖关系,当浓度≥1×10-9mol·L-1时,差异才有显著意义(P<0.05);E2组较对照组在1×10-9～1×10-7mol·L-1,A值均增加(P<0.001),以1×10-8mol·L-1作用最明显。CT组较对照组从1×10-12mol·L-1起ALP活性均增加,也呈剂量依赖关系,当浓度≥1×10-10mol·L-1差异有显著性意义(P<0.05);E2组较对照组在1×10-9～1×10-7mol·L-1,ALP活性均增加(P<0.05),以1×10-8mol·L-1作用最强。结论鳗鱼降钙素与17-β雌二醇均可促进大鼠体外培养OB增殖和分化。     

高浓度17β-雌二醇诱导巨噬细胞凋亡

目的　考察高浓度 17β 雌二醇 (E2 )对巨噬细胞的影响。方法　用Hoechst332 5 8进行染色质荧光染色 ;扫描电子显微镜观察细胞形态 ;激光共聚焦显微镜检测胞质内钙离子浓度 [Ca2 + ]i 及线粒体膜电位。结果　荧光染色及扫描电镜显示E2 (≥ 1μmol·L-1)作用后巨噬细胞出现多种凋亡表现。E2 1μmol·L-1作用后 ,细胞 [Ca2 + ]i 明显升高 ,且有剧烈的波动。E2 1μmol·L-1使线粒体膜电位下降。结论　高浓度的E2 (≥ 1μmol·L-1)能诱导巨噬细胞的凋亡 ,并且与[Ca2 + ]i 的变化及线粒体膜电位的下降有关     

雌二醇甲基化-β-环糊精包合物鼻黏膜吸收动力学研究

目的研究雌二醇甲基化 β环糊精包合物鼻黏膜吸收动力学,考察循环液的体积和流速对雌二醇甲基化 β环糊精包合物鼻黏膜吸收的影响。方法采用大鼠在体灌流模型,并固定循环液体积和流速。结果吸收速度常数(k)随着循环液体积的增加呈下降趋势;当流速较小时,随着流速的增加,k增大,但超过2 5mL·min-1后,k反而随着流速的增加而减小;循环液为5mL、流速2 5mL·min-1时,不同浓度的雌二醇甲基化 β环糊精包合物鼻黏膜吸收速度常数不同,且随药液浓度的增加而增大,经t检验(P <0 0 5 ) ,不同浓度间存在显著差异。结论雌二醇环糊精包合物鼻黏膜吸收具有浓度依赖性,在固定浓度条件下其动力学过程符合零级动力学模型,吸收速度常数与包合物的药物动力学解离 缔合平衡有关     

三羟基异黄酮和17-β雌二醇对自由基缩血管效应的影响

目的 :研究自由基引发血管收缩的机制 ,并通过血管静息张力的变化探讨三羟基异黄酮和 17 β雌二醇对自由基缩血管效应的影响。方法 :制备猪冠状动脉血管环 ,固定于恒温肌槽内 ,待平衡后 ,加入各种药物观察血管张力的变化。结果 :内皮完整的血管环在O2· -作用下产生明显的收缩 ,去除内皮后无明显反应。 1μmol·L-1三羟基异黄酮对O2· -引发血管收缩有明显的抑制作用 (P <0 .0 1,n =16 ) ,1μmol·L-117 β雌二醇无明显作用。H2 O2 使去内皮血管环产生明显的收缩作用 ,对内皮完整的血管环缩血管效应不明显 ,30 μmol·L-1三羟基异黄酮可明显抑制H2 O2 的缩血管作用。结论 :三羟基异黄酮可明显抑制O2· -和H2 O2 的缩血管效应 ,其作用明显强于 17 β雌二醇。     

7α和7β-甲基-10β,17β-二乙酰氧基-4-雌甾烯-3-酮的合成

由于7α-甲基或10β-乙酰氧基4(5)烯-3-酮雌(雄)甾化合物具有显著的抗着床或抗蜕膜活性,我们合成了既具有7α-甲基或7β-甲基又具有10β-乙酰氧基的两个新甾族化合物(1_a)和(1_b)。经药理试验表明(1_a)和(1_b)对孕鼠均有抗早孕作用。     

17β雌二醇对氯胺酮所致神经元凋亡的影响

目的：研究17β雌二醇对氯胺酮所致原代培养皮质神经元凋亡的影响及其机制。方法原代培养皮质神经元,体外培养7 d,随机分为空白对照组（给予相同体积的DMSO）,雌二醇组（17β雌二醇终浓度为0.1μmol·L-1）,氯胺酮组（氯胺酮终浓度为100μmol·L-1）,氯胺酮＋雌二醇组（氯胺酮,17β雌二醇终浓度分别为100μmol·L-1,0.1μmol·L-1）。噻唑蓝（ MTT）法检测神经元存活率,Hoechest33258染色法检测皮质神经元凋亡,Western-blot 法测定cleaved-Caspase-3及Bcl-2蛋白表达。结果氯胺酮组神经元存活率（54.02±7.78）%,明显低于空白对照组;氯胺酮＋雌二醇组神经元存活率（88.09±6.54）%,明显高于氯胺酮组。神经元经Hoechest33258染色在荧光显微镜下观察,氯胺酮组神经元凋亡[凋亡率（49.50±4.34）%]较空白对照组明显增加,氯胺酮＋雌二醇组[凋亡率（15.74±3.40）%]较氯胺酮组神经元凋亡下降。氯胺酮组 cleaved-Caspase-3表达明显增加,Bcl-2明显下降,而氯胺酮＋雌二醇组较氯胺酮组cleaved-Caspase-3表达明显下降,Bcl-2表达明显升高。结论17β雌二醇通过抑制神经元凋亡对抗氯胺酮诱导的皮质神经元损伤,产生保护作用。     

7α-和7β-甲基-10β,17β-二乙酰氧基-△~4-雌甾烯-3酮的抗早孕作用

7α-和7β-甲基-10β,17β-二乙酰氧基-△~4-雌甾烯-3酮(简称7α-和7β-甲-乙氧雌酮)对小鼠抗早孕ED_(50)分别为1.6和5.5 mg/kg。7α-甲-乙氧雌酮在大鼠也有抗早孕作用并使血浆孕酮浓度降低,应用10 μg/ml浓度能抑制离体妊娠大鼠卵巢孕酮合成。7α-和7β-甲-乙氧雌酮与兔子宫胞浆雌二醇受体的相对结合亲和力(RBA)分别为10.8和1.5,与孕酮受体的RBA均<1.7α-和7β-甲-乙氧雌酮都有较弱的雌激素和抗雌激素活性。     

17β-雌二醇后处理对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的研究

目的：探讨17β-雌二醇（17β-estradiol,E2）后处理对缺血再灌注损伤离体大鼠心肌的影响。方法：采用Langendorff装置建立大鼠离体心脏缺血再灌注模型,随机分3组,其中后处理组（Pos组）在复灌时给予3次30s短暂开放／30s阻断,雌激素组（E2组）灌注液中含有17B-雌二醇。定时收集冠脉流出液测定冠脉流量（CF）;检测缺血前及复灌后冠脉流出液中LDH、SOD、CK的含量;测定缺血区心肌梗死面积,电镜下观察心肌超微结构变化。结果：复灌后各时点CF值在Pos,E2组较Isc组恢复好（P〈0．05）,复灌30min后Pos,E2组中CK、LDH漏出量较少,SOD含量较高伙0．05）,Pos,E2组心肌梗死面积减小（P〈0．05）。结论：机械后处理、17β-雌二醇后处理,对离体大鼠心肌有保护作用．雌激素抗氧化功能是后处理的重要机制之一。     

DNA甲基化抑制物对雌激素受体β在乳腺癌细胞中表达的影响及意义

目的:研究甲基化抑制物作用于乳腺癌细胞后对其ER-β表达的影响及意义。方法:抽取细胞总RNA,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MCF-7与MDA-MB-231中ER-β的表达状况。在两种细胞中按作用浓度加入甲基化抑制药物5-AZA-CdR,反应一定时间后用RT-PCR的方法测定药物处理后ER-β的表达情况,分析影响及意义。结果:MCF-7的ER-β平均表达水平(0.54±0.44),药物处理后平均表达水平(0.76±0.53),较未经药物处理的细胞明显升高(P<0.05);MDA-MB-231是雌激素受体阴性的细胞株,不表达ER-β,药物处理后ER-β出现表达平均水平为(0.32±0.11),P<0.05。结论:DNA去甲基化可以诱导ER-β表达增强或再表达,对于提高乳腺癌的内分泌治疗疗效和指导新辅助化学治疗有重大意义。     

甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎对Th17细胞甲基化的影响及其机制

目的： 探讨甲氨蝶呤片（MTX）治疗类风湿关节炎（RA）对Th17细胞DNA甲基化的影响及其机制。方法： 将2018年3月至2019年3月在某院住院治疗的67例使用MTX口服治疗的RA患者作为观察对象。采集患者治疗前后静脉血检测红细胞沉降率（ESR）、C反应蛋白（CRP）、血小板计数（PLT）及白细胞介素-17（IL-17），分离外周血单个核细胞（PBMC）测定Th17细胞比例，分析PBMC中维甲酸相关孤核受体-γt（ROR-γt）、DNA甲基转移酶1（DNMT1）、DNMT3a、DNMT3b基因mRNA表达水平，并检测ROR-γt基因甲基化程度，分别对患者Th17细胞比例与ESR、CRP、PLT及IL-17水平和ROR-γt基因甲基化程度与IL-17水平进行相关性分析。结果： 患者治疗前Th17细胞DNA甲基化程度低，ESR快，CRP及PLT水平高，Th17细胞比例及IL-17水平高，DNMT1基因mRNA表达水平低，ROR-γt基因mRNA表达水平高，ROR-γt基因甲基化比例低；治疗后ESR、CRP及PLT水平显著降低（P<0.05），Th17细胞比例及IL-17水平显著降低（P<0.001），DNMT1基因mRNA表达水平显著升高（P<0.001），ROR-γt基因mRNA表达水平显著降低（P<0.001），ROR-γt基因甲基化比例显著增加（P<0.05）；Th17细胞比例与IL-17水平呈正相关，ROR-γt基因甲基化程度与IL-17水平呈负相关（P<0.05）。结论： 甲氨蝶呤可通过提高类风湿关节炎患者Th17细胞ROR-γt基因甲基化程度抑制体内IL-17分泌改善和延缓疾病进程，同时此过程有DNMT1酶参与。     

靶向性发夹状RNA对卵巢癌SKOV3细胞H-ras基因表达的影响

目的运用构建的小发夹状RNA重组质粒pshRNA/H-ras,研究其对卵巢癌SK-OV3细胞株内源H-ras基因的抑制作用。方法应用基因克隆技术,设计含21bp H-ras基因编码序列片段及中间以4~5个bp间隔的反向重复序列,克隆至转录载体pTZU6 1上并行序列分析。转染重组质粒pshRNA/H-ras至SKOV3细胞中,分别采用RT-PCR、Western blot检测细胞内H-rasmRNA和蛋白表达的变化。结果成功构建发夹状RNA载体,经DNA序列鉴定为正确的目的序列。RT-PCR和Western blot结果表明,重组质粒pshRNA/H-ras1和pshRNA/H-ras2均能在基因转录水平和蛋白表达水平上明显抑制SKOV3细胞内源H-ras蛋白的表达,抑制率达67%以上。结论重组质粒pshRNA/H-ras可显著抑制SKOV3细胞内源H-ras基因mRNA的转录和相应蛋白质的表达,为进一步研究H-ras基因在卵巢癌细胞异常增殖中的作用打下基础。