苦参诱导K562细胞分化的研究

K562细胞属于人红白血病细胞株，是骨髓多能干细胞。以苦参作诱导分化剂，可使K562细胞有分化现象并向多方向分化，这为临床探索中药非杀伤性治疗白血病打下了良好的基础。     

K562细胞的诱导分化与表型

Ｋ＿５６２细胞的诱导分化与表型临床生化教研室泰建平综述蒋纪恺，王霞文审校中图分类号Ｒ７３３．７目前对于白血病的治疗主要是用化疗、骨髓移植等，但疗效都不能令人满意。因此，探讨新的治疗途径显得十分必要而迫切。自从ＬｅｏＳａｃｈｓ于１９７８年报告恶性肿瘤细...     

苦参碱诱导K562细胞向红系分化伴随凋亡

目的 体外研究苦参碱诱导K562细胞向红系分化伴随的细胞凋亡改变.方法 体外培养K562细胞,采用不同浓度的苦参碱诱导K562细胞4 d.分别采用倒置显微镜、透射电子显微镜观察诱导前后细胞的形态学和超微结构改变,进一步采用免疫细胞化学方法检测细胞周期调控蛋白p27kipl表达变化.结果 与阴性对照组K562细胞相比,0.10/gL浓度的苦参碱诱导后K562细胞形态学和超微结构均显示有凋亡特征,同时细胞内p27kipl蛋向表达明显增加.结论 苦参碱在体外诱导K562细胞向红系分化伴随凋亡.可能与p27kipl蛋白表达增加相关.     

VP16对人类白血病细胞系K562细胞诱导分化作用的研究

目的 研究足叶乙甙（VP16）对K562细胞分化的诱导作用。方法 K562细胞在含0．4μg/mlVIP16的培养液中培养72h，观察K562细胞NBT还原能力和吞墨功能，以及细胞化学和超微结构的变化。结果 0．4μg/mlVP16可使K562细胞NBT还原能力和吞墨功能增强，细胞内过氧化物酶、糖原和α-萘酚酯酶含量增加，电镜下可见细胞体积变小，微绒毛和线粒体减少，核异染色质增加。结论 VP16诱导K562细胞向粒单细胞系分化。     

丙氧岛苷对K562细胞抑制增殖和诱导分化作用

目的 研究丙氧鸟苷（ＧＣＶ）抑制Ｋ５６２细胞增殖作用和机制。方法 细胞培养、集落培养、联苯胺染色。结果 ０．６２５￣４０μｍｏｌ浓度的ＧＣＶ对Ｋ５６２细胞有明显的抑制增殖作用，作用４ｄ时的半数抑制量（ＩＣ５０）为２．９９μｍｏｌ，作用７ｄ后克隆形成抑制率达４３％，联苯胺染色阳性细胞百分率随药物剂量的增加和培养时间的延长而逐渐增加。结论 ＧＣＶ体外抑制Ｋ５６２细胞增殖并能诱导其向红系分化。     

姜黄素对人类红白血病细胞（K562）的抑制及诱导分化作用

用人类红白血病细胞（Ｋ５６２）为通过细胞计数、ＭＴＴ法测定,形态学观察、ＮＢＴ还原试验及联七胺反应等方法检测了不同浓度姜黄素对体外人Ｋ５６２细胞的作用。结果表明,姜黄素对Ｋ５６２细胞有明显的抑制作用。随浓度增加,抑制作用逐渐增强,形态学观察可见轻微诱导分化作用。鉴于姜黄素对人类红白血病细胞兼有轻微诱经和增殖抑制人艇,提示姜黄素有可能应用于人类红白血病的治疗。     

苦参碱对K562细胞增殖抑制与诱导分化的实验研究

目的：观察苦参碱对K562细胞的增殖抑制和诱导分化作用。方法：以K562细胞为实验对象,采用体外培养技术,通过细胞生长曲线、细胞形态、乳酸脱氢酶（LDH）活性测定方法观察苦参碱的作用。结果：浓度为0．2－0．3mg/ml的苦参碱对K562细胞有明显的增殖抑制与诱导分化作用,实验组细胞的数量,形态和生化代谢都发生了变化。结论：这一结果将对白血病的诱导分化治疗提供有力的实验依据。     

芒果苷诱导白血病K562细胞凋亡机制的研究

目的研究芒果苷诱导慢粒白血病细胞系K562细胞凋亡的机制。方法采用RT-PCR检测芒果苷(25~200μmol/L)处理(24、48、72、96h)后K562细胞中bcl-2 mRNA、bax mRNA、survivin mRNA基因表达变化;采用Western blotting方法检测K562细胞BCR/ABL融合蛋白质P210水平。结果芒果苷作用K562细胞后,P210蛋白质水平下调,并呈时间及剂量依赖性,bax基因表达显著上调,bcl-2基因表达轻度下调,survivin mRNA基因表达下调。结论芒果苷诱导K562细胞凋亡的机制可能是通过下调BCR/ABL融合蛋白质P210、bcl-2和sur-vivin mRNA基因表达及上调bax基因表达来实现的。     

硫化砷诱导K562细胞凋亡

研究硫化砷（Ａｓ２Ｓ２）对Ｋ５６２细胞凋亡的诱导作用。采用Ｋ５６２细胞体外培养，应用流式细胞仪（ＦＣＭ）分析细胞周期，鉴定凋亡细胞，检测线粒体膜蛋白Ａｐｏ２．７的表达。结果显示：Ａｓ２Ｓ２能够诱导Ｋ５６２细胞凋亡，使细胞周期中的Ｓ期细胞减少，Ｇ２／Ｍ期细胞升高，提示：Ａｓ２Ｓ２具有促凋亡效应。     

核苷类似物对K562细胞的抗增殖和诱导分化作用

目的：探讨核苷类似物阿昔洛韦（ACV）,更昔洛韦（GCV）对人白血病细胞的抗增殖和诱导分化作用。方法：将ACV、GCV分别加入K562细胞培养4d,测定其活细胞数目,克隆形成率,联苯胺染色阳性率,观察光镜形态,组织化学染色,并进行流式细胞分析,端粒酶检测。结果：在ACV,GCV的作用下,K562细胞的增受抑,生长分数降低,并且向具有合成血红蛋白能力的细胞分化,结论：核苷类似物ACV,GCV对K562细胞具有抑制增殖和诱导分化作用,该结果为慢性粒细胞白血病的治疗提示了新的途径。     

肿瘤细胞诱导分化剂NADAH的固定化及其与K562细胞DNA作用的研究

目的：探讨肿瘤细胞诱导分化剂六亚甲基二乙酰胺（ＨＭＢＡ）和Ｎ－乙酰－１，６－二胺基己烷（ＮＡＤＡＨ）与人红白血病Ｋ５６２细胞ＤＮＡ的相互作用和诱导肿瘤细胞分化的机理．方法：通过两步合成，将ＮＡＤＡＨ偶联到对甲基苯磺酰氯活化的异丙基甘油硅胶上，制备高效液相色谱柱，研究人红白血病Ｋ５６２细胞ＤＮＡ在ＮＡＤＡＨ柱上的行为及ＮＡＤＡＨ及ＨＭＢＡ与人红白血病Ｋ５６２细胞ＤＮＡ的相互作用．结果：以２ｍｏｌ／Ｌ（ＮＨ４）２ＳＯ４ｐＨ７．４的磷酸缓冲液做降盐梯度洗脱时，Ｋ５６２细胞ＤＮＡ大部分很快被洗脱流出，另有一小部分ＤＮＡ在（ＮＨ４）２ＳＯ４浓度降至最低时才流出，ＮＡＤＡＨ柱对这部分ＤＮＡ的保留能力极强，即有很强的疏水作用；不同的ＤＮＡ与ＮＡＤＡＨ具有不同的疏水亲和力．ＮＡＤＡＨ柱对ＤＮＡ的离子效应很弱．结论：ＨＭＢＡ和ＮＡＤＡＨ在诱导肿瘤细胞的分化过程还对ＤＮＡ有疏水作用．     

manumycin对人髓系白血病细胞株K562细胞的增殖抑制作用

探讨manumycin对人髓系白血病细胞株K562细胞的增殖抑制作用,为其治疗白血病提供理论依据。方法：实验设阴性对照组（K562加含10%胎牛血清的IMDM培养液）和manumycin组（终浓度分别为2、4、8及16 μmol/L）,分别作用24、48和72 h,镜下观察manumycin作用后K562细胞的生长情况;MTT法检测K562细胞的生长抑制率;24 h 后,用Western blotting方法检测对照组及4、 16 μmol/Lmanumycin组K562细胞中survivin蛋白的表达。结果：镜下观察显示,对照组细胞生长状态良好,密度均一,大小一致,轮廓清晰,折光性强。与对照组比较,8 μmol/L manumycin组细胞明显变小,密度稀疏,大小不均一,细胞轮廓欠清晰,折光性差;16 μmol/L  manumycin组细胞密度明显减少,大小不等,轮廓不清,有细胞碎片。MTT结果显示,随着manumycin浓度增加和作用时间延长,生长抑制率逐渐增加,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,且存在时间-剂量-效应关系。Western blotting结果显示,与对照组比较,16 μmol/L manumycin作用K562细胞24 h以后细胞内survivin蛋白含量下降。结论：manumycin通过下调K562细胞survivin蛋白的表达,促进细胞凋亡,抑制肿瘤细胞的生长,从而达到治疗白血病的目的。     

吉九里香碱诱导K562细胞凋亡的研究

目的探讨吉九里香碱(girinimbine)通过诱导细胞凋亡而发挥其抑制肿瘤细胞增殖的作用。方法采用MTT法检测吉九里香碱对K562细胞增殖的抑制作用;采用荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;库尔特全自动颗粒粒度仪分析药物引起K562细胞体积大小分布的变化;琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯形条带及流式细胞术检测细胞凋亡时凋亡峰的变化。结果MTT结果显示不同浓度的吉九里香碱处理K562细胞不同时间均能抑制细胞的增殖,抑制率依赖于吉九里香碱的浓度和作用时间;50μmol/L吉九里香碱处理K562细胞24h时,细胞出现凋亡典型的形态学特征;50μmol/L吉九里香碱分别处理K562细胞6、12、24h及不同浓度吉九里香碱处理K562细胞24h时,能够使细胞产生明显的DNA梯形条带和体积大小变化,呈一定的量效和时效关系,并且细胞凋亡的亚G1峰随作用时间的延长而增加,分别为(15.93±3.79)%(6h)、(32.87±4.89)%(12h)、(41.30±1.91)%(24h)。结论吉九里香碱可能通过诱导K562细胞凋亡而发挥其抗K562细胞增殖的作用。     

SHP1基因诱导慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡及红系分化

目的探讨SHP1基因在诱导K562细胞凋亡及红系分化中的作用。方法应用RT-PCR法克隆SHP1基因全长cDNA序列并克隆于真核表达载体pcDNA3.0,脂质体转染使其基因在K562细胞中过表达。Hoechst33258染色和FACS(AnnexinⅤ-PI双标)分析检测转基因后K562细胞凋亡;联苯胺蓝染色和血型糖蛋白A(GPA)表达检测分析细胞分化情况。结果 pcDNA3-SHP1转染K562细胞,RT-PCR、蛋白免疫印迹分析证实SHP1在K562细胞中表达。转染48h后,K562细胞出现凋亡,AnnexinⅤ-PI双标FACS分析细胞凋亡率为16.84%,与转染空载体pcDNA3.0(6.23%)相比差异有统计学意义(P=0.000)。联苯胺蓝染色细胞阳性率14.67%,GPA表达率19.38%,与转染空载体组比较差异也有统计学意义(P=0.005)。结论 SHP1能有效地诱导K562细胞凋亡与红系分化。     

苦参碱逆转人白血病K562/ADM细胞对阿霉素耐药性的研究

[目的] 探讨苦参碱对人白血病K562／ADM细胞对阿霉素耐药性的逆转作用。[方法] MTT法测定苦参碱的细胞毒性及其对K562／ADM细胞药敏性的影响,荧光分光光度法检测细胞内药物浓度的改变,流式细胞术检测耐药细胞凋亡百分率的变化。[结果] 苦参碱的非细胞毒性剂量为50μg／mL,低细胞毒性剂量为125μg／mL。50μg／mL苦参碱可增加K562／ADM细胞内阿霉素(ADM)浓度和K562／ADM细胞凋亡百分率,使K562／ADM细胞的IC50由原来的35．2μg／mL降低至15．8μg／mL,其逆转倍数为2．2倍。[结论] 苦参碱可部分逆转人白血病K562／ADM细胞对阿霉素的耐药性,其逆转机制与增加细胞内药物积累有关。     

CSA逆转白血病细胞株K562/ADM耐药的实验研究

目的研究不同浓度环孢霉素A(2、0.3、0μg/mL)和粒细胞集落刺激因子以及小剂量化疗药物(米托蒽醌 替尼泊甙 阿糖胞苷)组合后,不同组合对耐药白血病细胞株K562/ADM的作用情况,为环孢霉素A逆转耐药的临床应用提供实验依据。方法采用四唑氮蓝(MTT)药敏法测定K562/ADM细胞株的增殖抑制率,观察细胞形态学改变,在不同培养时间进行细胞活力测定,并采用流式细胞仪检测K562/ADM细胞株的P-糖蛋白表达和细胞周期分析。结果在每个时间点,大剂量环孢霉素A(2μg/mL) 粒细胞集落刺激因子 化疗组对K562/ADM细胞株的抑制率最大;培养96 h后,P-糖蛋白平均荧光强度下降最明显(P<0.01)。粒细胞集落刺激因子 小剂量化疗药与不同浓度环孢霉素A结合的三组组合,在培养72 h后,大量细胞出现S期阻滞。结论大剂量环孢霉素A既降低了细胞耐药性,粒细胞集落刺激因子预激又促使细胞进入细胞周期,有利化疗对于白血病细胞进行最大限度的杀伤,二者有明显协同作用。     

p16基因在K562/A02细胞株表达情况的研究

目的:研究p16基因在K562/A02细胞株的表达情况及其与耐药的关系。方法:用PCR法对慢性髓系白血病细胞株K562及其耐药细胞株K562/A02进行p16基因缺失检测。结果:K562及K562/A02细胞株经PCR扩增后,均未扩出相应条带。结论:K562/A02细胞株与K562细胞株一样,均表现为p16基因缺失。     

青蒿琥酯诱导人白血病细胞K562胀亡和凋亡作用的研究

目的:探讨青蒿琥酯(Artesunate,ART)对人慢性粒细胞性白血病细胞株K562增殖抑制的影响.方法:采用MTT比色法检测青蒿琥酯对体外培养的K562细胞的生长抑制作用,光、电镜下观察青蒿琥酯作用后的K562细胞形态学变化特征,流式细胞仪检测在不同浓度、不同时间作用下青蒿琥酯诱导K562细胞的细胞胀亡率和凋亡率.结果:青蒿琥酯对K562细胞有明显的增殖抑制作用,24h、48h、72h的半数抑瘤浓度IC50(μg/ml)分别为65.17、31.63、10.51.青蒿琥酯主要引起K562细胞的胀亡和凋亡变化,但胀亡率与凋亡率尤明显差别.结论:青蒿琥酯主要通过胀亡和凋亡2种方式抑制K562细胞增殖,并呈明显量效时效关系.     

孤儿受体ROR2诱导慢性髓细胞白血病细胞株K562凋亡的研究

目的 研究ROR2抑制慢性髓细胞白血病细胞株K562增殖并诱导其凋亡的作用,初步探讨可能的机制.方法 采用重组ROR2腺病毒(AdROR2)感染K562细胞为实验组,重组RFP腺病毒(AdRFP)感染K562细胞为对照组.采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞凋亡.Western blot检测实验组和对照组促凋亡基因caspase3和抗凋亡基因survivin的表达.结果 与对照组比较,实验组ROR2感染K562细胞48 h后,细胞增殖明显受抑(P＜0.05),细胞周期主要阻滞在G2/M期(P＜0.05),细胞凋亡增多,48 h凋亡显著(P＜0.05),同时促凋亡蛋白caspase3表达升高(P＜0.05),抗凋亡蛋白survivin表达下降(P＜0.05).结论 过表达ROR2能够抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调了促凋亡蛋白caspase3和下调了抗凋亡蛋白survivin表达有关.     

环孢菌素A诱导K562细胞凋亡机制的研究

目的：观察环孢菌素A对K562细胞株凋亡的影响及其作用机制。方法：采用瑞氏染色、流式细胞术观察环孢菌素A对K562细胞株凋亡的影响;采用流式细胞仪检测环孢菌素A影响K562细胞凋亡时Bcl-2基因表达的改变情况。结果：20μmol/L环孢菌素A作用24 h可诱导K562细胞凋亡,瑞氏染色呈现典型的凋亡形态学改变,流式细胞术显示凋亡峰,细胞周期分析发现环孢菌素A可使K562细胞生长阻滞于G0~G1期。环孢菌素A处理组的凋亡率高于对照组（P〈0.01）;环孢菌素A处理组的Bcl-2蛋白阳性率低于对照组（P〈0.01）。结论：环孢菌素A可诱导K562细胞株凋亡,其机制可能是通过下调Bcl-2基因表达。