染氟大鼠血清雌二醇水平与生精细胞端粒酶逆转录酶表达关系的研究

目的了解氟中毒大鼠雌激素水平与生精细胞端粒酶表达的关系。方法将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、低剂量染毒组、高剂量染毒组,分别按0、10和20mg/kg体重的染毒剂量隔日腹腔注射氟化钠(NaF)溶液39天后,用放射免疫法测定大鼠血清中雌二醇含量,用原位杂交法检测端粒酶逆转录酶(TERT)表达情况。同时镜检成熟精子质量和睾丸组织病理学改变。结果染毒各组大鼠血清雌二醇含量低于对照组(P<0·05);且随着染毒剂量的增加,雌二醇含量逐渐降低。染毒各组大鼠生精细胞TERT阳性表达率分别低于对照组(P<0·05);且随着染毒剂量的增加,TERT阳性表达率逐渐降低。各染毒组大鼠精子数量和精子存活率低于对照组(P<0·05);精子畸形率高于对照组(P<0·05);随着染毒剂量的增加,精子数量、精子存活率降低(P<0·05),精子畸形率升高(P<0·05)。各染毒组大鼠血清雌二醇含量与生精细胞TERT表达率均呈正相关,低剂量染毒组r=0·941,P<0·01;高剂量染毒组r=0·929,P<0·01。结论NaF很可能是通过雌激素/雌激素受体-端粒酶逆转录酶-精子途径对生殖系统造成损害的,各染毒组大鼠血清雌激素含量与生精细胞TERT表达率呈显著正相关。     

氟对雄性大鼠生精细胞Fas蛋白表达影响的研究

目的探讨氟对大鼠生精细胞Fas蛋白表达影响。方法将30只4～5周龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组、低剂量组、高剂量组。分别按0、10和20mg/kg染毒剂量隔日灌胃氟化钠(NaF)染毒39天,采用酸浸-氟离子选择电极法测定睾丸氟含量,用放射免疫法测定大鼠血清睾酮含量,用免疫组化(ICH)检测睾丸中Fas蛋白表达情况,同时镜检成熟精子质量。结果各染氟组大鼠睾丸氟含量均高于对照组(P0.05)且随染毒剂量的增加而逐渐升高;各染氟组大鼠血清睾酮含量低于对照组(P0.05),且随着染毒剂量的增加,睾酮含量逐渐降低;各染氟组大鼠生精细胞Fas蛋白阳性表达率高于对照组(P0.05),且随着染毒剂量的增加,Fas蛋白阳性表达率逐渐升高;各染毒组大鼠精子数量和精子活动率低于对照组(P0.05);精子畸形率高于对照组(P0.05)。结论染氟雄性大鼠血清睾酮水平降低,激活了生精细胞Fas/FasL系统,从而导致生精细胞损伤。     

亚慢性染毒2,3,7,8-四氯二苯并二噁英对雄性大鼠生殖系统的影响

目的了解2,3,7,8-四氯二苯并二噁英(TCDD)对雄性大鼠生殖系统的影响。方法清洁级Wistar雄性大鼠32只,体重(100±10)g,随机分成4组,每组8只,连续经口灌胃染毒90 d,剂量分别为2.5,25,250 ng/kg,对照组给予二甲基亚砜(DMSO),测定血清中睾酮(T)、促黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)的激素水平以及睾丸、前列腺、精囊腺的脏器质量系数,附睾尾精子畸形率。结果与对照组比较,各染毒组T水平下降,差异有显著性(P<0.05);各染毒组FSH和LH水平上升,但差异无显著性(P>0.05);中、高剂量组的睾丸、精囊腺及所有染毒组的前列腺脏器质量系数均低于对照组(P<0.05);各染毒组精子畸形率随剂量的增加而上升,中、高剂量组与对照组相比差异显著(P<0.01)。结论TCDD亚慢性染毒,可影响精子和生殖系统的正常发育,并在一定程度上对生殖激素的稳态造成了干扰。     

胚胎期毒死蜱和氯氰菊酯混合暴露对仔代雄性大鼠生殖功能的影响

目的 观察低剂量毒死蜱和氯氰菊酯联合染毒对仔代雄性大鼠生殖功能的影响及其机理。方法 健康Wistar大鼠雌雄按2∶1合笼,孕鼠分为对照组、毒死蜱组、氯氰菊酯组、毒死蜱和氯氰菊酯联合染毒组等4组,每组8只,孕l至孕8天染毒孕鼠。给予雄性仔鼠普通饮食喂养至成年。股动脉放血法处死仔鼠,迅速分离脏器,计算脏器系数,附睾尾精子计数,计算精子活动率、精子畸形率。测定血清生殖激素和乙酰胆碱酯酶活力,观察睾丸组织病理改变、生殖细胞凋亡和生精细胞端粒酶的表达。〖HTH〗结果 联合染毒组雄性仔鼠睾丸、附睾的体重比值显著性降低(P<0.05),附睾尾精子总数显著低于对照组,血清FSH高于对照组,T低于对照组(P<0.05)。联合染毒组雄性仔鼠睾丸少量曲细精管生精上皮退化变性,生精细胞脱落,生精细胞凋亡指数明显高于对照组(P<0.05)。结论 胚胎期毒死蜱和氯氰菊酯混合染毒对仔代大鼠的生殖系统有明显的增毒作用;对睾丸的损伤及性激素水平(FSH、T)的协同影响,可能是产生联合生殖毒性的机理之一;提示对毒死蜱和氯氰菊酯进行环境健康风险评价时应考虑这种协同作用。     

过氯酸铵对雄性大鼠甲状腺功能及睾丸的影响

目的 研究过氯酸铵(ammonium perchlorate,AP)对雄性大鼠甲状腺激素及睾丸的影响.方法 雄性SD大鼠20只,随机分为对照组、AP低、中、高剂量组,染毒剂量分别为0、130、260、520mg·kg-1·d-1,以大鼠限量饮水方式连续染毒80 d.检测大鼠血清中甲状腺激素、血清睾酮(T)水平、精子活力,并观察睾丸组织的病理变化.结果 AP染毒3周至80 d,中、高剂量组大鼠体重增长明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),各组大鼠甲状腺湿重及甲状腺脏器系数均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).高剂量组大鼠睾丸脏器系数明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).各剂量组游离甲状腺素(FT4)水平随染毒剂量的增加均明显降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)水平无明显变化.中、高剂量组促甲状腺激素(TSH)均明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).中、高剂量组A、B级精子百分比[A∶(12.3%±2.52%)、(14.8%±5.93%),B∶(17.7%±4.63%)、(15.8%±2.28%)]明显低于对照组(27.8%±8.70%),差异有统计学意义(P＜0.01),而D级精子百分比随染毒剂量的增加而逐渐增加,中、高剂量组D级精子百分比[(38.0%±3.61%),(40.0%±8.99%)]明显高于对照组(17.0%±5.00%),差异有统计学意义(P＜0.01).各组大鼠血清中血清T水平没有明显改变.结论 AP可对大鼠甲状腺激素水平产生影响,能引起FT4下降;对雄性生殖系统的毒作用主要是使精子活力发生减退性改变.     

亚慢性染毒2,3,7,8-四氯二苯并二(口恶)英对雄性大鼠生殖系统的影响

目的 了解2,3,7,8-四氯二苯并二(口恶)英(TCDD)对雄性大鼠生殖系统的影响.方法 清洁级Wistar雄性大鼠32只,体重(100±10)g,随机分成4组,每组8只,连续经口灌胃染毒90d,剂量分别为2.5,25,250 ng/kg,对照组给予二甲基亚砜(DMSO),测定血清中睾酮(T)、促黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)的激素水平以及睾丸、前列腺、精囊腺的脏器质量系数,附睾尾精子畸形率.结果 与对照组比较,各染毒组T水平下降,差异有显著性(P＜0.05);各染毒组FSH和LH水平上升,但差异无显著性(P＞0.05);中、高剂量组的睾丸、精囊腺及所有染毒组的前列腺脏器质量系数均低于对照组(P＜0.05);各染毒组精子畸形率随剂量的增加而上升,中、高剂量组与对照组相比差异显著(P＜0.01).结论 TCDD亚慢性染毒,可影响精子和生殖系统的正常发育,并在一定程度上对生殖激素的稳态造成了干扰.     

氯乙酸甲酯亚慢性染毒大鼠睾丸组织和血清睾酮水平变化

目的研究氯乙酸甲酯亚慢性染毒大鼠睾丸功能和组织学变化。方法将55只雄性大鼠随机分成5组,4个剂量组分别给予4.3、8.6、17.2和34.4mg/kg的氯乙酸甲酯,对照组给予生理盐水共13周,观察睾丸和附睾组织形态学的变化,检测精子活力、精子计数以及精子畸形率,血清睾酮水平和睾丸细胞的凋亡率。结果高剂量染毒组睾丸脏器系数、血清睾酮水平、睾丸细胞凋亡率[0.85±0.05、(5.93±2.75)μg/L、(18.22±7.03)%]与对照组[0.80±0.09、(14.70±8.04)μg/L、(6.40±4.51)%]之间差异有显著性(P<0.05)。结论最高剂量氯乙酸甲酯处理大鼠睾丸和血清睾酮水平有变化。     

三氯化铝暴露致雄性小鼠生殖细胞的遗传毒性

目的研究三氯化铝(AlCl3)对雄性小鼠生殖细胞的遗传毒性。方法将20只清洁级健康昆明种雄性小鼠按体重随机分为4组,分别为低、中、高剂量AlCl3染毒组(染毒剂量分别为50、75、100mg/kg)和阴性对照组(0.9%生理盐水),每组5只。采用腹腔注射方式进行染毒,连续染毒2d,间隔1天,持续2周。观察染毒前后体重变化,并计算睾丸系数。采用彗星试验测定Olive尾矩,采用精子核荧光染色试验测定未成熟精子率。结果染毒前后高、中、低剂量AlCl3染毒组体重与阴性对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。高、中、低剂量AlCl3染毒组睾丸系数均小于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);且体重增长值和睾丸系数随着AlCl3染毒剂量的升高而减少。彗星试验中,高、中、低剂量AlCl3染毒组Olive尾矩均长于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01);且Olive尾矩随着AlCl3染毒剂量的升高而增加。精子核荧光染色试验中,高、中、低剂量AlCl3染毒组未成熟精子率均高于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01);且未成熟精子率随着AlCl3染毒剂量的升高而增加。结论AlCl3暴露可对雄性小鼠生殖细胞...     

氟对雄性大鼠生殖系统的内分泌干扰作用研究

目的　探讨高氟对雄性大鼠生殖系统的内分泌干扰作用。方法　给予雄性Wister大鼠含氟化钠 15 0mg/l的水 10周后 ,检测其精子计数、活动率、畸形率 ,测定睾丸、附睾生化标志酶和性激素 ,观察睾丸组织病理改变。结果　染毒组精子计数、活动率下降 ,畸形率升高 ,血清睾酮、促黄体生成激素下降 ,较对照组差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ,睾丸组织有明显的病理学改变。结论　长期接触高浓度的氟对雄性生殖系统有明显的内分泌干扰作用     

氯乙烯对雄性大鼠生殖内分泌激素的影响

目的 探讨氯乙烯对雄性大鼠生殖内分泌激素的影响.方法 雄性SD大鼠60只,随机分为对照组和10、100和1000mg/kg氯乙烯染毒组,每组15只,腹腔注射染毒14和28d.测定大鼠血清中睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、抑制素B(InhB)和睾丸中E2、T、InhB的水平,并观察睾丸支持细胞和间质细胞超微结构的改变.结果 与对照组比较,染毒14 d各染毒组大鼠血清中T和E2水平降低,InhB和LH水平升高,仅100 mg/kg染毒组LH水平差异有统计学意义(P<0.05).染毒28 d,100、1000 mg/kg染毒组大鼠血清中T分别为(10.90±1.56)和(8.52±2.85)ng/ml,InhB水平分别为(31.40±6.21)和(28.39±5.67)pg/ml,均明显低于对照组[T为(15.89±4.03)ng/ml,lnhB为(46.87±8.74)pg/ml],差异有统计学意义(P<0.05);各染毒组大鼠血清中FSH水平均明显高于对照组.差异有统计学意义(P<0.05).与染毒14d比较,染毒28d各染毒组大鼠血清中InhB和LH水平均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).染毒28 d时100、1000mg/kg染毒组大鼠睾丸组织中T和InhB水平分别为(8.05±2.19)、(6.75±1.94)ng/mg pro和(39.32±5.55)、(35.53±8.71)pg/mg pro,与对照组[T为(11.90±2.33)ng/mg pro、InhB为(49.45±7.01)pg/mg pro]比较,差异有统计学意义(P<0.05).超微结构观察可见,染毒组的睾丸间质细胞和支持细胞出现了细胞核畸形、线粒体肿胀等改变.结论 氯乙烯对雄性大鼠生殖内分泌系统有损害作用,可引起生殖内分泌激素水平改变和睾丸间质细胞、支持细胞超微结构变化.     

氟化钠对肾小管上皮细胞骨桥蛋白与bax、bcl-2基因表达的影响

目的　研究氟化钠对肾小管上皮细胞骨桥蛋白与bax、bcl- 2基因表达的影响,以探讨氟对肾损害的发生机制。方法　采用原代肾小管上皮细胞的培养技术,利用逆转录 聚合酶链式反应测定bax、bcl -2基因和骨桥蛋白在氟处理的情况下细胞的mRNA表达水平的变化。结果　氟处理48h后 7 5、12 5mg/L组的肾小管上皮细胞bax的mRNA水平 (吸光度比值分别为 2. 37±0 .18和2. 64±0. 19)比对照组(吸光度比值为 1 .26±0. 16)有升高;在 5、7 5mg/L组的bcl 2的mRNA表达水平(吸光度比值分别为 0 .80±0. 22和 0. 71±0 .22)比对照组(1. 19±0. 03)下降。与对照组 (骨桥蛋白吸光度比值 1 49)比较,氟处理 48h后肾小管上皮细胞的骨桥蛋白mRNA水平随着染氟量 (≤7. 5mg/L)的增加而逐渐升高,在 7 5mg/L染氟量处理下,骨桥蛋白mRNA水平 (吸光度比值 2.01±0. 40)与对照组比较,差异有统计学意义。结论　氟化钠可促进bax和抑制bcl-2的表达使细胞凋亡,随着氟浓度的升高,凋亡率逐渐升高;在一定的氟剂量下骨桥蛋白表达增多,发挥保护肾脏作用。     

氟对大鼠脑细胞DNA的损伤及诱导凋亡的作用

目的　探讨氟对大鼠脑细胞DNA的损伤作用及诱导凋亡的作用。方法　体内试验中 ,对照组大鼠腹腔注射蒸馏水 ,氟组大鼠注射氟化钠 ,染毒剂量为 2 0mg·kg- 1 ·d- 1 ;体外试验中 ,采用 5mmol/L氟化钠对急性分离的大脑神经细胞染毒 2h后用单细胞凝胶电泳技术 (SCGE)研究氟对细胞DNA的损伤 (单链断裂 )。采用TUNEL法和流式细胞术 (FCM)检测细胞凋亡。结果　体内试验氟组大鼠大脑皮层神经细胞DNA损伤情况明显比对照组严重 ,Ridit值分别为 0 351和 0 639,体外试验对照组与氟组Ridit值分别为 0 650 1和 0 3844。TUNEL阳性细胞在氟组大鼠大脑皮层、海马及小脑颗粒细胞层均可见到 ,在对照组大鼠则很罕见。流式细胞术检测结果表明大脑皮层及海马神经细胞凋亡百分率氟组 (2 7 1 2± 3 0 8,34 97± 5 46)均高于对照组 (4 63± 0 98,5 35± 0 79) ,差异有极显著性意义。结论　氟化钠可引起大鼠脑细胞DNA损伤和细胞凋亡发生     

氟化钠对L02人正常肝细胞衰老及相关蛋白表达影响的实验研究

目的 研究氟化钠（NaF）是否会诱导人肝细胞 L02衰老及衰老相关标志蛋白水平的改变。方法 不同浓度 (0、1、2、3、4、5、6、7和8mmol/L) NaF 处理 L02人正常肝细胞,CCK-8 法检测细胞存活率的变化以筛选 NaF 的作用浓度;衰老标志物 β-半乳糖苷酶 (β-galactosidase, β-Gal) 染色检测衰老阳性细胞;实时荧光定量 PCR (Real-time PCR) 和蛋白免疫印迹 (Western Blot) 测定细胞衰老标志蛋白 p16,p21 mRNA 和蛋白的表达水平;流式细胞术分析细胞周期的变化情况。结果 CCK-8 结果显示,NaF 浓度为 1、4、7mmol/L时 L02细胞的存活率（87.38±0.93、66.72±2.81、52.17±2.04）均低于对照组［(100.00±0.00),均 P<0.01］,且每组之间的细胞存活率差异存在统计学意义（均 P<0.01）,因此 NaF 选用1、4、7 mmol/L 处理L02细胞作为低氟组、中氟组、高氟组开展研究;β-半乳糖苷酶染色结果显示,低、中、高氟组中细胞衰老率 (23.15±0.23、36.06±0.40、65.36±0.82)均高于正常组［(3.27±0. 27),P<0.01］;Real-time PCR 结果显示,p16、p21 mRNA在低、中、高氟组中表达(2.29±0.19、3.44±0.30、5.25±0.32;1.88±0.22、3.22±0.24、7.33±0.30)表达均高于正常对照组［(1.00±0.00;1.00±0.00),均P<0.01］。低、中、高氟组中p16蛋白水平(93.68±3.40、116.25±7.30、122.31±3.00)均高于对照组［(78.07±4.17),P<0.05,P<0.01,P<0.01),低、中、高氟组中p21蛋白水平(87.61±5.22、121.62±4.27、147.95±7.81)均高于对照组［(61.32±4.56),均P<0.01)］;流式结果显示,低、中、高氟组 L02 细胞周期均停滞在 G2 期,与对照组相比,差异具有统计学意义 (P<0.01)。结论 NaF 处理的人肝细胞 L02 中细胞衰老率及衰老标志蛋白 p16、p21 的 mRNA 和蛋白表达升高,这可能提示了 NaF 可导致 L02 细胞衰老,进一步说明细胞衰老在氟化物诱导的肝损伤中可能具有重要作用。     

过量摄入氟后激活的成骨细胞系中原癌基因的表达

目的 研究在体内外过量氟作用下激活的成骨细胞系中原癌基因c-fos和其伴随基因c-jun的表达。方法 在饮水中加入氟化钠(NaF)进行大鼠染毒实验,在体外成骨样细胞培养液中加入氟化钠进行染氟实验,采用原位杂交技术、Western印迹技术和免疫组织化学方法对氟中毒大鼠骨组织进行c-fos、c-jun的mRNA水平、蛋白质水平的定量分析和成骨样细胞染氟后不同时间c-fos、c-jun mRNA的定量分析。结果 NaF可刺激慢性氟中毒大鼠椎骨各包被成骨细胞增殖,并诱导c-fos、c-jun的表达。高钙加氟组c-fos、c-jun mRNA表达的吸光度值分别为107．74和117．48,明显低于高钙对照组的139．63和126．37。免疫组化分析结果显示,高钙加氟组c-fos、c-jun蛋白水平(吸光度值分别为140．73和134．03)明显低于高钙对照组,低钙加氟组c-fos、c-jun mRNA和蛋白表达(吸光度值分别为117．24、111．46、132．46和129．79)明显低于低钙对照组(吸光度值分别为139．16、131．15、149．98和149．19),差异有显著性。Western印迹技术检测NaF各组骨外膜成骨细胞系细胞c-fos、c-jun的蛋白水平明显低于各自的对照组,吸光度值分别为123．32、116．60、115．97和108．30。成骨样细胞染氟12h,c-fos、c-jun mRNA含量明显增高,48h仍不见减少,其吸光度值分别为114．80、161．14、118．20和150．41,与对照组比较差异非常显著。结论 过量氟可以刺激大鼠成骨细胞系和培养的成骨样细胞激活,增殖能力增强,c-fos、c-jun在mRNA和蛋白质水平的表达增强,c-fos过表达在氟骨症骨相损害的发生发展中可能起重要的作用。     

7-硝基吲唑对氟致SH-SY5Y细胞凋亡及一氧化氮合成酶含量的影响

目的探讨神经元型一氧化氮合成酶(nNOS)抑制剂7-硝基吲唑(7-nitroindazole,7-NI)对氟致体外培养细胞生长、凋亡保护作用的机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,在培养液中加入不同浓度Na F(0、0.02、0.2、2.0、4.0 mmol/L),分别培养24、48、72 h,同时在各组细胞培养液中联合应用7-NI(10~(-4)、10~(-3)、10~(-2) mmol/L);于倒置显微镜下观察细胞生长,以CCK-8试剂盒方法检测细胞存活率,以比色法和硝酸还原酶法测定细胞培养液中NO含量及NOS活力,以流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果与对照组比较,氟浓度为0.2 mmol/L(低氟组)和2.0 mmol/L(高氟组)时,24、48、72 h后细胞存活率分别下降至(83.76±1.04)%,(70.27±1.20)%,(54.40±0.98)%和(52.17±1.07)%,(40.60±1.11)%,(29.50±1.40)%。10~(-4)mmol/L 7-NI可刺激细胞增殖,24 h细胞存活率为(105.96±3.44)%;10~(-3) mmol/L 7-NI处理细胞24 h后的细胞存活率为(100±2.30)%;10~(-2) mmol/L 7-NI可使细胞存活率下降,24 h细胞存活率为(88.64±4.75)%。10~(-4)、10~(-3)、10~(-2) mmol/L 7-NI处理细胞24 h后细胞培养液中NO含量、NOS活力均降低,分别为(1.156±0.356)、(0.958±0.074)、(0.672±0.188)μmol/L和(0.403±0.089)、(0.398±0.010)、(0.103±0.076)U/ml。高剂量(10~(-2) mmol/L)7-NI组的SH-SY5Y细胞凋亡指数升高至(8.7±2.3)%,高于对照组(P0.05);低剂量(10~(-4)、10~(-3) mmol/L)7-NI组的凋亡指数分别为(0.6±0.4)%和(1.0±0.2)%,与对照组差异无统计学意义(P0.05);低剂量7-NI组凋亡指数低于高剂量组,差异有统计学意义(P0.05)。染氟24、48、72 h后细胞培养液中NO含量及NOS活力升高,低氟组的NO含量、NOS活力分别为(3.074±0.160)、(5.604±1.374)、(10.173±1.307)μmol/L和(0.743±0.122)、(0.959±0.054)、(1.446±0.12)U/ml,高氟组分别为(8.974±0.919)、(14.729±1.241)、(20.976±0.712)μmol/L和(1.086±0.024)、(1.728±0.130)、(2.583±0.192)U/ml,高于对照组[(1.320±0.280)、(2.420±0.658)、(2.867±0.662)μmol/L,(0.452±0.012)、(0.517±0.072)、(0.607±0.013)U/ml],差异有统计学意义(P0.05)。与氟单独处理组相比,NaF联合应用7-NI后,各组NO含量及NOS活力均下降,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,氟可使SH-SY5Y细胞凋亡指数升高,差异有统计学意义(P0.01),并随着氟染毒剂量及时间的增加,细胞凋亡指数随之增加;联合应用7-NI后,各组细胞凋亡指数下降,差异有统计学意义(P0.01)。氟可使SH-SY5Y细胞数量减少,形态变为圆形、不规则形,细胞存活率降低;低剂量(10~(-4)、10~(-3) mmol/L)7-NI组在相同视野下细胞数增加,高剂量(10~(-2) mmol/L)7-NI组细胞数明显减少,大部分细胞呈圆形或不规则形。结论氟中毒所致细胞凋亡可能与NOS活力和NO含量升高有关,7-NI可降低细胞凋亡指数。     

氟对大鼠骨组织Osterix mRNA及其蛋白表达影响

目的观察氟对大鼠股骨中成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)mRNA及其蛋白表达的影响。方法 36只SD大鼠按体重随机分为对照组、低氟组(饮水含氟50 mg/L)、高氟组(饮水含氟5 mg/L),饲养6个月后股动脉放血处死。用免疫组织化学法检测各组大鼠股骨组织中OSX蛋白表达;实时荧光定量PCR检测OSX mRNA表达。结果高氟组大鼠OSX阳性成骨细胞数[(51.47±3.37)个]增多,明显高于低氟组[(36.80±2.83)个]和对照组[(27.00±2.92)个],差异有统计学意义(P<0.05);低氟组OSX mRNA是对照组的2.10倍,高氟组OSX mRNA是对照组的2.82倍,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论氟可导致大鼠骨组织OSX mRNA及蛋白表达水平增高,OSX可能参与氟引起的骨骼损伤的发生机制。     

大鼠海马中氟浓度与胆碱酯酶活力的关系

目的　研究氟在大鼠海马中的蓄积及其对胆碱酯酶活力的影响。方法　用氟化钠对大鼠进行亚慢性染毒 ,测定大鼠海马中氟浓度及胆碱酯酶活力。结果　大鼠海马内氟浓度与接触剂量呈正相关 ,高剂量组、低剂量组 [(1 3 .0 3± 1 .79)、(9.83± 0 .92 ) μg/g]与对照组 [(8.2 7± 1 .1 1 ) μg/g]比较或两剂量组间比较 ,差异均有显著性 (P <0 .0 1 ) ;乙酰胆碱酯酶 (AChE)活力高剂量组、低剂量组分别为 (0 .1 1 1± 0 .0 31 )、(0 .1 4 3± 0 .0 2 5) μmol/mg ,与对照组 (0 .1 83± 0 .0 2 7) μmol/mg比较或两剂量组间比较 ,差异均有显著性 (P <0 .0 1 ) ,且与海马内氟浓度呈负相关 (r=- 0 .70 0 ,P <0 .0 1 ) ;丁酰胆碱酯酶(TChE)活力在高剂量组 [(0 .0 4 1± 0 .0 1 0 ) μmol/mg]与对照组 [(0 .0 67± 0 .0 2 5) μmol/mg]间比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5) ,与海马内氟浓度的负相关关系不明显 (r =- 0 .31 7,P =0 .0 94)。结论　氟可透过血 脑屏障在大鼠海马内蓄积 ,进而抑制胆碱酯酶活力     

氟化钠对小鼠睾丸间质瘤细胞StAR和P450scc mRNA表达的影响

目的观察氟化钠对小鼠睾丸间质瘤细胞(mLTC-1)中类固醇急性调节蛋白(StAR)和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)mRNA表达水平的影响。方法利用小鼠mLTC-1细胞为模型,用实时定量PCR法测定细胞中StAR和P450scc mRNA表达水平。采用放射免疫法测定细胞培养基上清中孕酮分泌量。结果与对照组比较,12、16和20μg/ml氟化钠浓度组的StAR和P450scc mRNA的表达量以及孕酮分泌量明显降低(P<0.05)。结论氟化钠可以抑制mLTC-1细胞StAR和P450scc mRNA的表达,进而影响mLTC-1细胞孕酮的合成。     

氟化钠对人成骨肉瘤Saos-2细胞PI3K/Akt信号表达及凋亡的影响

目的观察氟化钠(NaF)对人成骨肉瘤Saos-2细胞磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号表达及凋亡的影响。方法采用成组设计,按NaF剂量将Saos-2细胞分为0(对照)、5、10、20、40 mg/L染氟组(n=3)。体外培养24、48 h后收集细胞,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测PI3K、Akt和线粒体凋亡途径相关分子Forkhead转录因子(FoxO)1的蛋白表达,采用流式细胞仪检测Saos-2细胞的凋亡水平。结果体外培养24、48 h时,各组Saos-2细胞PI3K、Akt蛋白表达比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。24 h时,5、10、20、40 mg/L染氟组磷酸化PI3K(p-PI3K)蛋白表达(0.40±0.06、0.45±0.02、0.37±0.06、0.32±0.06)均高于对照组(0.28±0.04,P均<0.05);48 h时,5、10 mg/L染氟组p-PI3K蛋白表达(0.46±0.06、0.58±0.03)均高于对照组(0.29±0.04,P均<0.05),而40 mg/L染氟组(0.21±0.03)低于对照组(P<0.05)。24 h时,5、10、20 mg/L染氟组磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达(0.27±0.01、0.30±0.03、0.27±0.03)均高于对照组(0.20±0.02,P均<0.05);48 h时,5、10 mg/L染氟组p-Akt蛋白表达(0.42±0.04、0.60±0.02)均高于对照组(0.27±0.01,P均<0.05),而40 mg/L组(0.18±0.02)低于对照组(P<0.05)。24 h时,10、20、40 mg/L染氟组FoxO1蛋白表达(0.38±0.07、0.41±0.06、0.47±0.08)均高于对照组(0.34±0.04,P均<0.05);48 h时,5、10、20、40 mg/L染氟组FoxO1蛋白表达(0.36±0.08、0.37±0.10、0.54±0.04、0.73±0.04)均高于对照组(0.28±0.04,P均<0.05)。24、48 h时,对照组和5、10、20、40 mg/L染氟组细胞凋亡率分别为(2.867±0.583)%、(3.647±0.035)%、(3.773±0.095)%、(5.440±0.325)%、(7.203±0.476)%,(3.707±0.286)%、(4.023±0.241)%、(4.970±0.368)%、(12.473±0.949)%、(19.387±1.892)%。24 h时,40 mg/L染氟组凋亡水平高于对照组(P<0.05);48 h时,20、40 mg/L染氟组凋亡水平均高于对照组(P均<0.05)。结论氟可以直接激活成骨细胞内的PI3K/Akt信号通路,进而产生抗凋亡作用。