EB病毒BHRF1基因的克隆及其表达产物抑制细胞凋亡的研究

目的ＥＢ病毒ＢＨＲＦ１基因克隆，其表达产物抑制ＣＨＯ细胞凋亡功能的研究。方法以Ｂ９５－８细胞株ＥＢＶＤＮＡ为模板设计一对引物，采用ＰＣＲ技术扩增ＢＨＲＦ１基因，用目的基因内的两个单酶切点ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ进行酶切鉴定。用引物上所引入的两个酶切位点ＮｃｏⅠ、ＳｃｌⅠ酶切目的基因后定向连接到ｐＢＶ２２１载体上，转入宿主菌ＤＨ５α经质粒抽提，单、双酶切鉴定，从所获克隆中筛选重组质粒克隆。温控诱导目的基因表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及凝胶薄层扫描分析。采用缺血清培养方法建立ＣＨＯ细胞凋亡模型。结果所得扩增产物长５９２ｂｐ与预期大小一致；筛选出的９个重组质粒克隆经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和扫描表明重组蛋白表达量占菌体蛋白总量的２．５％。将含重组蛋白的菌体蛋白加入缺血清培养体系，通过与空白菌体蛋白对照表明，重组蛋白具有明显的抑制ＣＨＯ细胞凋亡的能力。结论ＢＨＲＦ１蛋白具有有效控制血清缺乏所诱导的ＣＨＯ细胞凋亡功能，这为ＢＨＲＦ１蛋白的广泛应用提供了依据。     

EB病毒早期基因BHRF1-Bcl-2的病毒性同源基因

BHRF1是近年来得到确认的EBV新的致癌基因，在结构上和功能上与细胞原癌基因Bcl-2相似，属Bcl-2家族成员。由于其抑制细胞凋亡和细胞转化作用而受到广泛关注，本文就BHRF1的作用特点、与bcl-2的关系以及应用前景作一综述。     

鼻咽癌亚系细胞中EB病毒LMP-1基因的检测

鼻咽癌亚系细胞中ＥＢ病毒ＬＭＰ１基因的检测韩立群方芳高进曾毅我们采用ＰＣＲ扩增和分子杂交技术，检测ＥＢ病毒基因ＬＭＰ１片段在体外长期传代培养的低分化人鼻咽癌细胞及其亚系细胞中的存在状况，以期论证ＥＢ病毒与鼻咽癌病因之间的关系。一、材料和方法１细...     

重组EB病毒BHRF1蛋白对裸鼠脾细胞程序性死亡的抑制作用

目的：观察适当浓度的ＥＢＶ－ＢＨＲＦ１重组蛋白（ｒＢＨＲＦ１）抽提液有无拮抗裸鼠脾细胞程序性死亡（ＰＣＤ）作用。方法：用１×１０６ｍｏｌ／Ｌ地塞米松作用１８ｈ、４３℃加热１０ｍｉｎ及无血清培养４８ｈ等方法诱导脾细胞发生ＰＣＤ,预先加入终浓度为２ｍｇ／Ｌ的ｒＢＨＲＦ１蛋白起拮抗作用。结果：未加ｒＢＨＲＦ１的对照组细胞发生典型的ＰＣＤ,即细胞ＤＮＡ的电泳出现ＰＣＤ特征性的梯形（ｌａｄｅｒ）ＤＮＡ降解片段;电镜观察显示核凝缩,但细胞膜及细胞器结构基本保持正常。若与适当浓度的ｒＢＨＲＦ１预培养８ｈ,再用上述方法处理,则因有重组蛋白的保护而未出现ＤＮＡ降解片段及ＰＣＤ的形态学变化。结论：初步显示ｒＢＨＲＦ１具有抑制脾细胞发生ＰＣＤ的功能。     

HBVx基因在肝癌细胞中的表达及其对肝癌细胞凋？…

目的：研究乙型为病毒Ｘ基因在肝癌细胞中的表达及其对肝癌细胞凋亡的影响。方法：用分子生物学的构建ＨＢＶｘ真核表达载体ｐ＾ＣＤＮＡ３．１．ＨＢＸ,用脂质体将真核表达载体Ｐ＾ＣＤＮＡ３．１－ＨＢＸ转染入肝癌细胞ＨＣＣ９２０４,Ｇ４１８ ５００ｍｇ·Ｌ＾－１筛选,获得稳定表达ＨＢｘ蛋白的细胞,阿霉素２０μｍｏｌ·Ｌ＾－１诱导细胞凋亡。电镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡细胞。结果：２０μｍｏｌ·Ｌ＾－     

人脐带血抗巨细胞病毒和EB病毒的特异性细胞毒？…

目的：探讨用人的脐带血单个核细胞体外同时扩增对抗ＥＢ病毒（ＥＢＶ）和巨细胞病毒（ＣＭＶ的特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞的可行性。方法：利用人的脐带血单个核细胞（ＣＢＭＣ）,通过ＥＢＶ感染转化成Ｂ成淋巴细胞细胞株（ＢＬＣＬ）,再通过逆转录病毒载体,将ＣＭＶ蛋白基因ｐｐ６５导入ＢＬＣＬ,用这种细胞体外刺激同一供者脐带血的ＣＢＭＣ产生细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）,经「＾５１Ｃｒ」释放实验（ＣＲＡ）检测产生的ＣＴＬ     

EB病毒中早期表达的癌基因—BARF1

BARF1是近期发现EB病毒编码的早期癌基因。对其认识还处于起步阶段，本文从BARF1的基因结构、体外对细胞的转化、肿瘤细胞中的表达及可能的作用机制方面的研究做一介绍。     

鼻咽癌细胞株SUNE1中EB病毒LMP1全基因克隆及部分？…

目的 研究广东地区鼻咽癌（ＮＰＣ）细胞株ＳＵＮＥ１中ＥＢ病毒ＬＭＰ１基因的结构特征。方法 利用聚合酶链反应从ＳＵＮＥ１细胞基因组中扩增ＬＭＰ１全长ＤＮＡ,并克隆到ｐｃＤＮＡ３载体中,采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧末端终止法测定ＳＵＮＥ－ＬＭＰ１ ３个外显子及２个内含子覆盖的序列,并与病毒原型Ｂ９５－８－ＬＭＰ１进行比较分析。结果 克隆到ｐｃＤＮＡ３中的ＳＵＮＥ１－ＬＭＰ１全基因长度为２．６ｋｂ,测序长度为     

EB病毒转化人外周血单个核细胞作为HCV复制模型？…

目的 复制丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染的细胞模型。方法 用ＥＢ病毒感染其ＨＣＶ阳性患者的外周血单个核细胞并使其转化，获得ＨＣＶ的外周永生化Ｂ细胞株。以后，每隔１个月应用套式逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测１次培养细胞和上清中的ＨＣＶ ＲＮＡ。结果 ＨＣＶ可以在传代细胞中持续存在１年，培养细胞中的ＨＣＶ负链和培养上清中的ＨＣＶ则呈间断阳性。结中以在该细胞株中较长时间存在、复制和分泌。     

髓细胞白血病—1基因及其产物研究进展

髓细胞白血病-1(myeloid cell lekemia-1,MCL-1)基因是高度可调节的分化早期活化基因,属于抗凋亡基因家族成员,其编码产物Mcl-1蛋白与正常和异常造血细胞的生存及分化有密切关系.细胞外调节蛋白激酶通路、Janus激酶/信号转导与转录活化因子(JAK/STAT)通路、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶Akt通路等多个信号转导途径参与了正常和异常造血细胞内MCL-1表达的调控.     

病毒与细胞凋亡

近年来的研究表明病毒感染与细胞凋亡之间有着密切的关系,在感染病毒引起细胞凋亡的过程中有许多新基因和新蛋白得到表达,并且参与作用,另外许多细胞因子直接或间接地参与了该过程。本文对最近几年在HIV,HBV,HCV,EBV,HPV等病毒在细胞凋亡方面的研究进展进行了综合介绍。     

LMP1与细胞凋亡

LMP1为EBV编码的病毒瘤蛋白,具有促进细胞增殖、调控细胞凋亡等多种生物学效应。LMP1有可能成为EBV相关肿瘤治疗的分子靶标。     

EB病毒潜伏感染在不同位T细胞淋巴瘤中的表达

探讨不同部位Ｔ细胞淋巴瘤与ＥＢ病毒感染的关系。方法对１００例不同部位的ＴＭＬ，采用原位杂交法检测肿瘤细胞ＥＢＶ编码的ＲＮＡ。结果（１）１００例中ＥＢＥＲ１／２检出率４８％，结内ＴＬ检出率３０％，结外ＴＭＬ检出率６０％，结内，结外ＥＢＶ检率差异有非常显著意义。     

抗凋亡基因bcl—2在EB病毒相关性鼻咽癌中的表达

目的：探讨抗凋亡基因ｂｃｌ－２与鼻咽癌发生及与ＥＢ病毒感染的关系。方法：应用ＰＣＲ技术和免疫组化ＳＰ法检测４６例鼻咽癌组织中ＥＢ病毒ＤＮＡ和抗凋亡基因ｂｃｌ－２的表达。结果：３７例ＥＢ病毒ＤＮＡ阳性病例中３１例出现ｂｃｌ－２表达８３．８％，９例ＥＢ病毒ＤＮＡ阴性病例吸７例ｂｃｌ－２阳性反应，两组间无明显差异。结论：ｂｃｌ－２基因在鼻咽癌中的异常高表达与ＥＢ病毒的感染无明显关系。     

肠道T细胞淋巴瘤中的EB病毒感染和T细胞内抗原1的表达

目的 探讨ＥＢ病毒感染在肠道Ｔ细胞淋巴瘤发病中的意义。方法 用ＥＢＥＲ１／２原位杂交及三步ＡＢＣ法免疫组织化学染色技术,观察２４例肠道Ｔ淋巴瘤患者中ＥＢ病毒感染及Ｑ细胞内抗原（ＴＩＡ－１）抗原表达情况,选用的抗体有ＴＬＡ－１,ＬＭＰ－１,ＣＤ３,ＣＤ２０,ＣＤ３０和ＣＤ４５ＲＯ等。     

口蹄疫病毒VP1基因真核表达载体的构建及其在树突状细胞的表达

目的:构建口蹄疫病毒VP1基因的真核表达载体, 转染并筛选稳定表达VP1的树突状细胞(dendritic cell, DC).方法:将pMD-18-VP1克隆于pcDNA3.1(+)中, 构建重组质粒, 酶切鉴定, DNA测序证实序列正确后, 利用脂质体将重组质粒转染DC, 经含G418培养基筛选获得抗G418细胞克隆, 用Western blot鉴定FMDV VP1基因在DC中的表达.结果:构建的pcDNA3.1-VP1真核表达载体经限制性内切酶酶切鉴定及序列分析证实了其序列的正确性, SDS-PAGE和Western blot结果显示G418筛选获得DC稳定表达VP1.结论:成功地构建了重组质粒pcDNA3.1- VP1真核表达载体, 并在DC中得到稳定表达.     

EB病毒亲上皮性基因BARF1研究进展

Epstein Barr病毒是一种与人类肿瘤有密切关系的DNA病毒 ,BARF1编码蛋白被认为是除LMP1外的另一个具有致瘤作用的病毒蛋白 ,可促使上皮细胞永生化和转化 ,并参与免疫调控 ,与上皮细胞性肿瘤如鼻咽癌和胃癌的发生发展有关     

EB病毒抗原诱导CD8细胞的特异性研究

本文进一步探讨了ＥＢＶ抗原诱导ＣＤ８细胞的特异性。结果表明，用ＥＢＶ抗原不能从ＥＢＶ血清学阴性者诱导出ＣＤ８细胞，而从ＥＢＶ血清学阳性者诱导的ＣＤ８细胞对ＥＢＣ活化自身Ｂ细胞呈明显的抑制作用，但无明显细胞毒作用。