普罗布考抑制氧化低密度脂蛋白上调巨噬细胞清道夫受体CD36的表达

背景普罗布考是一降脂药，同时具有抗氧化特性，近年来的研究表明其可以通过多种机制抑制动脉粥样硬化的形成，降低经皮冠状动脉成形术后再狭窄的发生。目的探讨普罗布考对氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）刺激巨噬细胞后清道夫受体CD36表达的抑制效应。方法用不同浓度的Ox-LDL刺激人单核细胞系THP-1源性巨噬细胞及用不同浓度普罗布考和核因子κBp65（NF-κBp65）特异性抑制剂（PDTC）预处理细胞后再用氧化低密度脂蛋白刺激，半定量RT—PCR方法检测CD36和NF-κBp65的mRNA的表达，Western-blot检测CD36和细胞核NF-κBp65蛋白表达水平。结果THP-1单核细胞分化成巨噬细胞后，CD36和NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达上调；不同浓度的Ox-LDL刺激后，CD36mRNA和蛋白的表达呈浓度依赖性增加，同时伴NF-κBp65 mRNA和蛋白的表达增加；PDTC和普罗布考干预后，NF-κBp65和CD36的mRNA和蛋白表达下调。结论Ox-LDL可以通过NF-κBp65途径上调巨噬细胞CD36的表达；而普罗布考则可以抑制CD36的表达，这种作用与抑制NF-κBp65有关。     

普罗布考抑制氧化低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞Fractalkine的表达

目的:探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)产生趋化因子Fractalkine及普罗布考的抑制作用.方法:用不同浓度的ox-LDL刺激HUVEC及用不同浓度普罗布考和PDTC预处理细胞后再用ox-LDL刺激,半定量RT-PCR方法检测Fractalkine和NF-κB p65的mRNA的表达.结果:未用ox-LDL刺激的HUVEC不表达Fractalkine,分别用25、50、100 mg/L浓度的ox-LDL刺激后,Fractalkine mRNA的表达呈浓度依赖性增加,与空白对照组比较分别增加384.58%(P＜0.01)、484.09%(P＜0.01)、558.26%(P＜0.01),同时NF-κB p65 mRNA的表达分别增加15.71%(P＞0.05),41.73%(P＜0.01),66.72%(P＜0.01).40 μmol/L PDTC预处理后,再用50 mg/L ox-LDL刺激HUVEC,NF-κB p65 mRNA的表达下降25.61%(P＜0.01),分别用20、40、80 μmol/L的普罗布考干预后,NF-κB p65 mRNA的表达分别下调15.52%(P＜0.05)、24.92%(P＜0.01)、34.93%(P＜0.01);同时,Fractalkine mRNA的表达则分别下调32.22%(P＜0.01)、10.07%(P＞0.05)、20.59%(P＜0.01)、33.60%(P＜0.01).结论:ox-LDL可以通过NF-κB p65诱导HUVEC表达Fractalkine,而普罗布考则可以抑制Fractalkine的表达,这种作用可能与抑制NF-κB p65有关.     

CD14对生殖支原体LAMPs激活NF-κB的影响

目的 探讨CD14在生殖支原体(Mg)脂质相关膜蛋白(LAMPs)激活NF-κB中作用。方法 THP-1细胞分别加入人血清和CD14抗体孵育,提取对数期Mg的LAMPs刺激,ELISA法检测其NF-κBp65水平;采用共转染技术和sCD14预孵育LAMPs,刺激Hela细胞,双荧光素酶报告基因分析CD14在LAMPs激活NF-κB中的作用。结果 人血清上调LAMPs诱导THP-1细胞激活NF-κBp65;CD14中和抗体抑制LAMPs诱导THP-1细胞激活NF-κBp65;mCD14和sCD14上调LAMPs诱导Hela细胞激活NF-κB。结论 CD14上调生殖支原体LAMPs激活NF-κB。     

三苯氧胺抑制促动脉粥样硬化基因CD36在单核-巨噬细胞的表达

目的 观察抗肿瘤药物三苯氧胺(tamoxifen,Tam)对促动脉粥样硬化基因CD36在单核-巨噬细胞表达的影响。方法 分别以不同浓度Tam(1,5,10 μmol/L)和它的活性代谢物羟-三苯氧胺(OH-Tam)作用于培养的THP-1单核细胞,24 h后观察CD36蛋白在细胞表面的表达;以氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)刺激THP-1单核-巨噬细胞CD36表达,并给予Tam或OH-Tam处理,流式细胞术观察CD36的变化。结果 Tam和OH-Tam可降低单核细胞CD36蛋白表达;同时对氧化型低密度脂蛋白引起的单核-巨噬细胞CD36表达上调具有抑制作用。结论 Tam可能通过抑制CD36在单核-巨噬细胞的表面表达来发挥其抗动脉粥样硬化作用。     

PCKS9通过TLR4/NF-κB/COX-2途径调节单核-内皮细胞黏附性

目的探讨前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)是否通过人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/环氧合酶2(COX-2)途径调节单核-内皮细胞黏附性。方法氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)处理HUVECs,real-time PCR与Western blot法检测PCSK9、TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达;ox-LDL处理后,用人重组PCSK9蛋白孵育或PCSK9 siRNA转染HUVECs,检测TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达;ox-LDL处理后,用人重组PCSK9蛋白与TLR4抑制剂瑞沙托维(TAK-242)或NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)共同孵育HUVECs,检测NF-κB p65与COX-2的mRNA和蛋白表达;COX-2抑制剂(NS398)与人重组PCSK9蛋白先后处理HUVECs后,加入THP-1单核细胞检测单核-内皮细胞黏附性。结果 ox-LDL上调HUVECs的PCSK9、TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达(P均0.05);人重组PCSK9蛋白在ox-LDL基础上上调TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达(P均0.05);PCSK9 siRNA转染可抑制ox-LDL对TLR4、NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达的上调作用(P均0.05);TAK-242抑制人重组PCSK9蛋白对TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达的上调作用(P均0.05);PDTC抑制人重组PCSK9蛋白对NF-κB p65、COX-2 mRNA和蛋白表达的上调作用(P均0.05);NS398可抑制人重组PCSK9蛋白的促单核-内皮细胞黏附作用(P均0.05)。结论 PCSK9可通过TLR4/NF-κB/COX-2途径调节单核-内皮细胞黏附性。     

PHF-2在氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1源性

目的　观察氧化型低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞植物同源结构域指蛋白2（PHF-2）表达的影响,探讨表观遗传调节在氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞炎症反应中的作用。方法　用不同浓度（0、50、100、150　mg/L）氧化型低密度脂蛋白处理THP-1巨噬细胞4　h,采用酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子α和巨噬细胞炎性蛋白1β的表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western　blot分别检测PHF-2　mRNA和蛋白质的表达;采用免疫共沉淀法检测PHF-2和p65核因子κB的结合。结果　100～150　mg/L氧化型低密度脂蛋白处理THP-1巨噬细胞4　h后,肿瘤坏死因子α和巨噬细胞炎性蛋白1β的表达明显上调;氧化型低密度脂蛋白呈浓度依赖性上调THP-1巨噬细胞PHF-2　mRNA和蛋白质的表达,并促进PHF-2和p65核因子κB的结合。结论　　PHF-2参与氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞核因子κB激活和炎症因子表达。     

核因子κB通过Sortilin促进荷脂THP-1巨噬细胞泡沫化

目的探究核因子κB(NF-κB)是否通过分拣蛋白Sortilin影响荷脂THP-1巨噬细胞脂质代谢和泡沫化。方法 NF-κB激活剂PMA或其特异性抑制剂PDTC孵育荷脂THP-1巨噬细胞,qRT-PCR检测Sortilin mRNA水平,Western blot检测Sortilin蛋白表达;沉默荷脂THP-1巨噬细胞Sortilin同时加入PMA孵育,胞内胆固醇流出行液体闪烁计数器检测,胞内脂质含量行高效液相色谱法检测,胞内脂滴情况用油红O染色显示。结果 PMA孵育处理荷脂THP-1巨噬细胞后Sortilin mRNA水平及蛋白表达上调,PDTC孵育处理后Sortilin mRNA水平及蛋白表达下调;PMA孵育处理荷脂THP-1巨噬细胞内脂质流出减少,脂质蓄积程度增加,泡沫细胞形成加剧,而PMA与Sortilin shRNA共处理后,其胞内脂质流出增多,胞内脂质蓄积程度减轻,泡沫细胞形成受抑。结论 NF-κB通过促进Sortilin表达,导致巨噬细胞内脂质流出受抑,胞内脂质蓄积程度加重,从而加剧泡沫细胞形成。     

硫化氢对THP-1源性巨噬细胞脂质摄取的影响

目的探索硫化氢对THP-1源性巨噬细胞脂质摄取的影响及可能机制。方法采用荧光显微镜测DiI标记的氧化型低密度脂蛋白(DiI-ox-LDL)摄取、RT-PCR和免疫印迹法测定CD36 mRNA和蛋白表达。结果巨噬细胞与DiI-ox-LDL孵育后大量摄取氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL),外源性硫化氢供体硫氢化钠显著抑制巨噬细胞摄取氧化型低密度脂蛋白,而炔丙基甘氨酸(一个硫化氢产生酶胱硫醚-γ-裂解酶抑制剂)加剧巨噬细胞摄取氧化型低密度脂蛋白。进而,硫氢化钠呈浓度依赖性抑制巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白表达,而炔丙基甘氨酸促进巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白表达。结论硫化氢抑制巨噬细胞摄取脂质及清道夫受体CD36表达。     

血管紧张素Ⅱ对巨噬细胞移动抑制因子mRNA表达的影响

目的探讨血管紧张素(Ang)Ⅱ是否能通过核因子(NF)-κB途径调节巨噬细胞移动抑制因子(MIF) mRNA的表达。方法佛波酯诱导THP-1细胞48 h并使其转化为巨噬细胞,用CD68进行免疫细胞化学鉴定。第一组:对照组、AngⅡ1×10~(-8)mol/L组、AngⅡ1×10~(-7)mol/L组、AngⅡ1×10-6mol/L组、AngⅡ1×10~(-5)mol/L组。第二组:对照组、AngⅡ(1×10(-6)mol/L)组、AngⅡ(1×10~(-6)mol/L)+吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(PDTC)组、PDTC组。Western印迹方法检测第一组细胞核内NF-κB的表达。Real time RT-PCR方法检测第二组巨噬细胞MIF mRNA的表达。结果 Western印迹随着AngⅡ浓度的升高,NF-κBp65的表达逐渐增强。Real time RT-PCR:AngⅡ组MIF mRNA表达明显高于对照组;给予NF-κB特异性抑制剂PDTC后,由AngⅡ诱导的MIF mRNA表达明显降低。结论 AngⅡ能通过NF-κB信号通路促进巨噬细胞MIF mRNA的表达。     

高糖对THP-1巨噬细胞CD36表达及脂质蓄积的影响

目的 观察高糖对THP-1巨噬细胞清道夫受体CD36表达和脂质蓄积的影响。方法 用不同浓度的D-葡萄糖（分别为5.6、11、20、30及35 mmol/L）、50 mg/L氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）、50 mg/L ox-LDL＋20 mmol/L D-葡萄糖孵育THP-1巨噬细胞24 h,油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱分析法检测细胞内总胆固醇水平,定量PCR与免疫印迹分析法分别检测THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达。结果 随着D-葡萄糖处理THP-1巨噬细胞浓度的增加,CD36 mRNA和蛋白的表达逐渐增加（P<0.05）;高糖可协同ox-LDL诱导THP-1巨噬细胞CD36 mRNA和蛋白的表达上调（P<0.05）,并增加细胞内总胆固醇水平（P<0.05）。结论 高糖可诱导THP-1巨噬细胞CD36的表达上调,并促进细胞内脂质蓄积。