HCV核心蛋白DNA疫苗诱导的小鼠体液免疫应答

目的：观察丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白ＤＮＡ疫苗诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠体液免疫应答的效力，为研制应用于人类的ＨＣＶ ＤＮＡ疫苗提供实验依据。方法：将全长ＨＣＶ核心蛋白基因插入真核表达质粒载体ｐｃＤＮＡ３．１，构建ＨＣＶ核心蛋白重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１ＨＣＶｃｏｒｅ，肌注ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以ＥＬＩＳＡ法检测小鼠血清ＨＣＶ抗体。以此重组质粒转染小鼠ＮＩＨ３Ｔ３细胞，以ＨＣＶ抗体阳性小鼠血清为捕获抗     

HCV核酸疫苗研究进展

丙型肝炎病毒是目前输血后肝炎的主要病因。并且与肝硬化和肝癌的发生和发展密切相关。由于ＨＣＶ存在不同的基因型,基因突变率高,特别是ＨＣＶ相似株的存在和免疫逃避现象,使传统疫苗的研制存在一定困难。随着基因免疫和基因治疗的兴起,ＨＣＶ核酸疫苗的研制就成为许多研...     

丙型肝炎病毒DNA疫苗的研究进展

目前,对慢性丙型肝炎尚无有效的治疗方法.DNA疫苗可诱导机体产生特异性体液和细胞免疫应答,丙型肝炎病毒（HCV）的DNA疫苗不仅可用于预防,而且有望成为治疗HCV持续感染的有效工具.作者就HCV DNA疫苗研究中抗原基因的选择、疫苗佐剂、疫苗导入体内的方法和存在的问题,以及应用前景等方面作一综述,并介绍一种评价HCV DNA疫苗效果的新代用模型.     

乙肝病毒表面抗原基因疫苗诱导小鼠细胞及体液免疫应答的 …

为观察乙肝病毒ＨＢｓＡｇ基因疫苗免疫小鼠后的细胞及体液免疫应答,将该疫苗定向克隆于质粒ｐｅＤＮＡ３巨细胞病毒启动子下游,构建能在真核细胞内表达的重组基因疫苗ｐｃＤＮＡ－ＨＢｓＡｇ。将此疫苗通过多点肌肉注射免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠后第六周,实验组小鼠均出现抗－ＨＢｓＩｇＧ阳性,其抗体水平明显高于对照组,同时Ｔｈ１免疫应答相关的细胞因子ＩＬ－２及γ干扰素水平显高于对照组,表明本文构建的基因疫苗ｐｃＤＮＡ３     

乙肝病毒核酸疫苗诱导BALB/c小鼠特异性免疫应答

目的 现察舍乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)preS2S基因的核酸疫苗免疫小鼠后的特异性免疫应答.方法 将BALB/c小鼠随机分为4组分别肌肉接种pCMV-S2S、乙肝表面抗原(HBsA8)、空载质粒(pCMV)及生理盐水(NS).免疫组织化学法检测接种局部组织preS2S抗原的表达,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL活性,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体Anti-HBs.结果 pCMV-S2S组小鼠肌肉细胞中有较多量的preS2S蛋白表达,其它小鼠肌肉细胞中均未检出preS2S蛋白表达.pCMV-S2S组小鼠CTL活性为(32.10±1.93)%,明显高于各对照组(P＜0.05).pCMV-S2S组小鼠8周后Anti-HBs阳性率最高为42.9%.HBsAg组小鼠4周时Anti-HBs阳性率即达到100%.pCMV组及NS组小鼠血清中均未检测出Anti-HBs.结论 乙肝核酸疫苗pCMV-S2S能在小鼠体内表达preS2S蛋白,并能在小鼠体内诱生较强的特异性CTL活性,也能诱生一定程度的特异性体液免疫应答.     

乙肝核酸疫苗NV—HB／s接种小鼠的免疫反应

目的：研究乙型肝炎核酸疫苗NV－HB／s经肌肉注射、皮下注射、转化伤寒杆菌CVD908后再经口服等不同途径接种小鼠后，小鼠产生体液免疫应答的规律，以及磷酸钙在提高核酸疫苗免疫能中的作用。方法用自制的乙肝核酸疫苗、佐剂化乙肝核酸疫苗及口服疫苗，以不同接种途径免疫小鼠，分别检测小鼠外周血中的HBsAg及抗HBs；肌肉组织标本中的 苗质粒以及C－myc mRNA。结果：肌注NV－HB／s 3天后，在接种部位检出了HBsAg;1月后外周血中检出了抗HBs。肌注与皮下注射对HV－HB／s的免疫效能无显著影响。口服接种所诱生的抗HBs阳转率及滴度低于肌肉注射与皮下注射。磷酸钙处理可降低核酸疫苗的用量，增加其安全性。结论：乙肝核酸疫苗NV－HB／s能有效地诱导小鼠产生抗HBs，在免疫后6个月内，质粒的注入未见癌基因的激活。     

使用“巢式”聚合酶链式反应技术检测丙型肝炎病毒核酸

我们研究了依据丙型肝炎病毒核酸5’端高度保守的非编码区(NC)序列设计的“巢式”引物,建立了检侧血清标本中丙型肝炎病毒核酸的“巢式”聚合酶链式反应技术。经血清丙肝病毒RNA的提取,CONA合成,使用“巢式”引物的聚合酶链式反应三个步骤,扩增产物经溴化乙染色紫外灯下观察,对40例临床确诊非甲非乙型肝炎忠者,10例慢性型开肝炎患者和10例正常献血员血清进行了丙肝病毒RNA检测,同时进行了血清抗-HCV检测。结果表明该方法敏感及特异性强,可应用于丙型肝炎的临床早期诊断及献血员筛选。     

乙肝核酸疫苗NV-HB/s接种小鼠的免疫反应

目的　研究乙型肝炎核酸疫苗 NV- HB/s经肌肉注射、皮下注射、转化伤寒杆菌 CVD90 8后再经口服等不同途径接种小鼠后 ,小鼠产生体液免疫应答的规律 ,以及磷酸钙在提高核酸疫苗免疫效能中的作用。方法用自制的乙肝核酸疫苗、佐剂化乙肝核酸疫苗及口服疫苗 ,以不同接种途径免疫小鼠 ,分别检测小鼠外周血中的HBs Ag及抗 HBs;肌肉组织标本中的疫苗质粒以及 C- m yc m RNA。结果　肌注 NV- HB/s 3天后 ,在接种部位检出了 HBs Ag;1月后外周血中检出了抗 HBs。肌注与皮下注射对 NV- HB/s的免疫效能无显著影响 ;口服接种所诱生的抗 HBs阳转率及滴度低于肌肉注射与皮下注射。磷酸钙处理可降低核酸疫苗的用量 ,增加其安全性。结论　乙肝核酸疫苗 NV- HB/s能有效地诱导小鼠产生抗 HBs;在免疫后 6个月内 ,质粒的注入未见癌基因的激活     

HBV adr亚型基因疫苗诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答

目的：构建乙型肝炎病毒（HBV)adr亚型基因疫苗pCMV-S2.S(PS），观察其诱导小鼠所产生的特异性体液和细胞免疫应答。方法：将PS注射于C57BL／6小鼠胫骨前肌内，应用ELISA方法检测不同时间小鼠血清中抗HBs抗体以及采用^51Cr释放实验检测淋巴细胞杀伤功能。结果：注射基因疫苗1周后，血清中抗HBs抗体转阳，4周后抗体达到高峰，并以高水平维持至少8周；第12周时PS诱导小鼠产生了良好的HBV特异的细胞免疫应答（P＜0.05）。结论；所构建的HBV adr亚型基因疫苗PS能够诱导小鼠产生较好的体液和细胞免疫应答。     

Humoral immune response to HCV core DNA vaccine in mice

DNAvaccine,alsocallednucleicacidvaccine,isarecombinanteukatyoticexpressionplasmidencodingcertainantigenofpathogen.DNAvaccinecanexpressantigenandinducecellularandhumoralimmuneresponsesaftervaccinationbyintramuscularinjectionorplasmid--coatedmicroparticlebombardment.Itshightemperaturestability,lowexpenseofmassproductionandtheabilitytoinducestrongimmuneresponsesevenfortheuseintherapyhavemadeDNAvaccineanexcitingwayfornewvaccinedevelopment['J.InordertofurnishevidenceforHCVDNAvaccinesuitablefo…     

乙肝病毒adr型基因疫苗诱导小鼠体液免疫应答

目的：构建乙肝病毒adr型基因疫苗pCMVS2-S,观察其免疫小鼠的特异性体液免疫应答。方法：将构建的乙肝病毒基因疫苗注射于C57BL/6小鼠胫骨前肌肉,运用ELISA检测不同时间小鼠血清中抗HBs抗体。结果：注射基因疫苗1周后,血清中抗HBs抗体转阳,1个月后抗体达到高峰,并以高水平维持至少2个月。结论：基因疫苗pCMVS2-S诱导C57BL/6小鼠产生较好的体液免疫应答。     

丙型肝炎病毒CTL-Th表位嵌合DNA疫苗的构建

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)CTL-Th表位嵌合DNA疫苗并探讨其体内免疫学效应。方法:基于我们前期从HCV中鉴定的4条HLA-A*0201限制性CTL(细胞毒性T细胞)表位(NS4b78-86、NS5a367-375、C181-189和NS2172-180),2条HLA-A*1101限制性CTL表位(NS3609-617和NS5b251-259),1条HLA-A*2402限制性CTL表位(NS5b382-390)和2条Th(辅助性T细胞)表位(P73-15和NS5A276-288),合成编码串联CTL表位和Th表位的基因并克隆入真核表达质粒pc DNATM3.1/myc-His(-)A;阳性重组质粒分别免疫HLA-A*0201、HLA-A*1101和HLA-A*2402转基因小鼠,采用ELISPOT实验和CTL杀伤实验检测小鼠脾细胞内单个CTL表位特异性T细胞的水平及其杀伤靶细胞的效应。结果:合成了含有Kozak序列和编码Igκ信号链序列、7条CTL表位、2条Th表位的基因序列并顺利克隆入了真核表达质粒。阳性重组质粒免疫三种转基因小鼠后,采用ELISPOT实验检测到小鼠脾细胞内存在单个CTL表位特异性分泌IFN-γ的CTL,后者可杀伤负载单个CTL表位的脾细胞。结论:成功构建了可诱导CTL反应的HCV的CTL-Th表位嵌合DNA疫苗。     

Detection of hepatitis G virus RNA in hepatitis C patients and hepatitis C virus infected hemodialysis patients

AlthoughsensitiveandspecificimmunoassayandmolecularbiologicaltechniquesforthedetectionofthehepatitisA--Evirusesareavailable,theetiologyofasubstantialfractionofpost--transfusionandcommunity--acquiredhepatitiscasesremainsundefined[1],suggestingtheexistenceofadditionalcausativeagents.Anewhumanhepatitisviruswasisolatedbytwoindependentgroups.ThenewvirusisprovisionallydesignatedashepatitisGvirus(HGV)[ZJorGBvirusC(GBV~C)[3'4),whichwasthoughttobetheagentofpartofthenon--A--Ehepatitispatients.Fro…     

肝细胞癌的石蜡包埋组织中HBV、HCV和HGV的核酸分析

目的从肝细胞癌（HCC）的石蜡包埋组织中提取HBV、HCV和HGV肝炎病毒,探讨中国哈尔滨地区肝炎病毒类型与HCC发生的关系。方法对119例HCC石蜡包埋组织,采用PCR技术,检测肝炎病毒核酸HBV-DNA、HCV-RNA和HGV-RNA。结果①119例HCC中,HBV-DNA阳性率为64．7％（77／119）,其中主要为c亚型92．2％（71／77）;②HBsAg和HBcAg的蛋白阳性表达率分别是49．6％（55／119）和19．3％（23／119）;③HCV-RNA和HGV-RNA阳性率分别为2．5％（3／119）和0．8％（1／119）。结论中国哈尔滨地区HCC的发生主要与HBV感染有密切关系,特别是HBV的c亚型。     

重组蛋白CTB表位对HCV多表位DNA疫苗的小鼠中免疫应答的影响

将一12aa的CTB表位连接于丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus,HCV)复合多表位抗原基因PCX的5'端,再克隆于真核表达载体pcDNA3中,获得重组质粒pcDNA3/CTB-PCX,利用表达IL-12的pWRG/mIL-12作为佐剂,肌注免疫小鼠后6W,用重组蛋白GZ-PCX加强免疫1次,第6W时可检测到较高水平的抗GZ-PCXIgG,最高滴度达1：10^3,与对照pcDNA3/PCX相比无显升高,提示CTB表位并无明显的增强PCX基因特异性体液免疫应答的作用。重组蛋白GZ-PCX可有效提高抗体水平,促进CD^8 T细胞增殖。免疫小鼠可诱发针对GZ-PCX融合蛋白的迟发性超敏反应（DTH）,免疫后小鼠体重正常,肝脾未见明显肿大。具有良好安全性。     

丙型肝炎病毒NS5A基因真核表达载体的构建

目的：构建HCV NS5A/pCI-neo真核表达载体,转染Huh-7细胞系,为体外高效表达NS5A蛋白奠定基础。方法：用PCR方法从带有丙型肝炎病毒NS5A基因的pC DNA 3.1（+）/HCV NS345质粒中扩增出HCV NS5A基因,然后TA克隆于pGEM-T载体中,转化大肠杆菌JM109。阳性克隆经测序鉴定,再经双酶切消化后插入真核表达载体pCI-neo上,经酶切鉴定与测序证实。结果：用PCR方法扩增出HCV NS5A基因全序列,因其 cDNA的G+C含量高直接测序未成功,后经TA克隆,筛选得到的阳性克隆经测序鉴定,与设计的HCV NS5A基因序列完全一致。经酶切连接并成功插入pCI-neo上。结论：成功构建了高效表达丙型肝炎病毒NS5A基因的pCI-neo真核表达载体。     

丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒交叉中和抗体的检测

[摘要]目的分析HCV感染者血清中是否存在交叉反应性中和抗体。 方法以分泌表达HCV包膜E2蛋白真核表达质粒转染的293T 细胞培养上清液中的HCV E2蛋白作为检测抗原,建立检测HCV E2抗体的ELISA方法,检测32份HCV抗体阳性的慢性丙肝患者血清,然后用免疫荧光分析血清与HCV全长包膜蛋白表达质粒转染的293T细胞的结合反应,再用5株HCV假病毒(HCVpp)及两株细胞培养产生的HCV(HCVcc)为模型分析血清的病毒中和活性。 结果32份HCV抗体阳性血清中,26份血清可检测出E2抗体,阳性率81.3%。其中HCV RNA阳性的12份血清均为E2抗体阳性,E2抗体水平与HCV RNA水平负相关。HCV E2抗体阳性血清对5株HCVpp以及两株HCVcc的感染性均有不同程度的中和作用,中和活性与E2抗体水平相平行。结论HCV感染可诱导保护性体液免疫应答,丙肝患者血清中存在交叉中和抗体,提示开发能诱导广泛交叉中和抗体的丙肝疫苗具有可行性。