巢式RT—PCR法检测肝细胞癌外周血AFP mRNA的临床应用

原发性肝细胞癌 (ｐｒｉｍａｒｙｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉ -ｎｏｍａ ,ＰＨＣ)是目前临床上恶性程度最高、进展最快且疗效最差的肿瘤之一。其诊断主要依据临床、影像及血清甲胎蛋白 (α -ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ ,ＡＦＰ)的检测 ,一旦发现远处转移 ,即属Ⅳ期 ,病人预后极差。因此ＰＨＣ的早期诊断 ,尤其小肝癌的转移倾向的诊断 ,不仅直接关系到病人的预后 ,对临床选择治疗手段 (手术、栓塞、放疗或化疗 )亦有重要价值。循环血中ＰＨＣ细胞的发现 ,可作为ＰＨＣ转移预测的指标之一。但因循环血中ＰＨＣ细胞数量极少 ,很难从形…     

用nested RT—PCR法检测肝癌患者外周血癌细胞

寻求一种高灵敏的检测肝癌患者外周血中部细胞的方法。方法：采用ｎｅｓｔｅｄ ＲＴ－ＰＣＲ法检测外周血中的肝癌细胞。能从２ｍｌ人外周静脉血中检测到１０个左右肝癌细胞表达的人甲胎蛋白ｍＲＮＡ。。此方法特异性强，灵敏高，可作为一种理想的临床检测手段。     

RT-PCR检测胃癌患者外周血癌细胞CEAmRNA预测胃癌微转移的研究

肿瘤的浸润和转移是影响肿瘤患者预后的重要因素 ,肿瘤的转移大多通过淋巴结及血循环 ,因此检测淋巴结、血液及骨髓中的肿瘤细胞对肿瘤的诊断、分期、复发及预后判断和治疗方案的选择均有重要的指导意义。通常进入淋巴结、血液、骨髓中的肿瘤细胞数量极其微量 ,用传统的病理学、免疫组织化学等方法较难检测到微量的癌细胞。逆转录聚合酶链反应 (ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ ,ＲＴ ＰＣＲ)可望解决这个问题[1] 。本文采用ＲＴ ＰＣＴ技术 ,选择ＣＥＡｍＲＮＡ为胃癌微转移的靶…     

巢式RT-PCR检测外周血中前列腺特异膜抗原mRNA

目的：应用巢式逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测外周血中前列腺特异膜抗原mRNA（PSM－mRNA)并探讨其临床意义。方法：取40例不同分期前列腺癌患者及对照组30例（15例良性前列腺增生患者，15例健康青年男性）周围静脉血各10ml，用巢式RT－PCR检测PSM－mRNA，并培养LNCaP细胞进行阳性对照。结果：共有24例前列腺癌血标本检测出PSM－mRNA(60.0%)，前列腺增生及健康对照组中无1例阳性，19例伴有远处骨转移的前列腺癌患者中16例检测到PSM-mRNA(84.2%)，未发现远处转移的21例中8例阳性（38．1％）。在10ml正常血液中加入10个LNCaP细胞，可检出PSM－mRNA。结论：PSM－mRNA可作为前列腺癌的辅助诊断指标，PSM－mRNA的检出率与前列腺癌分期（ABCD）、转移与否、血清PSA水平有相关性。     

半定量RT—PCR方法检测肝癌相关cDNA克隆的表达

肝癌是我国常见的恶性肿瘤 ,研究其分子水平发病机制对预防及治疗该肿瘤有着重大现实意义。人类基因组 17ｐ13.3在肝癌组织中存在高频率的杂合性缺失 (ＬＯＨ) [1] ,提示该区段含有与肝癌发生发展相关的抑癌基因。采用该染色体区段内的人工酵母染色体 (ＹＡＣ)、人工细菌染色体 (ＢＡＣ)筛选人正常肝ｃＤＮＡ文库及外显子捕获 (ｅｘｏｎｔｒａｐｐｉｎｇ)方法 ,本实验室已找到若干该区域内的ｃＤＮＡ克隆[2 ] ,但这些表达序列与肝癌发生的关系尚未阐明 ,检测这些表达序列在肝癌和癌旁中的表达差异性无疑是寻找这种相关性的一种有效方法。材…     

RT—PCR方法在小鼠肝炎病毒检测中的应用

用４株小鼠肝炎病毒（ＭＨＶ１、ＭＨＶ３、Ａ５９和ＪＨＭ）的混合液定量人工感染ＳＣＩＤ小鼠、ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠、ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,接种病毒后１、２、５、８ｄ分别取小鼠的全血、肝,用组织总ＲＮＡ抽提试剂盒提取总ＲＮＡ,用一步法ＲＴ－ＰＣＲ方法检测小鼠肝炎病毒。结果显示：接种后１ｄ,ＳＣＩＤ小鼠和ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠即保检测到小鼠肝炎病毒,而ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠即可检测到小鼠肝炎病毒,而ＢＡＬＢ／ｃ小鼠至接     

巢式RT-PCR检测前列腺癌患者外周血中PSA mRNA和PSM mRNA的比较

目的　盲法比较研究巢式反转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测前列腺癌 (PC)患者外周血中前列腺特异性膜抗原(PSM)mRNA和前列腺特异性抗原 (PSA)mRNA在PC诊断中的真实性和可靠性 .方法　根据PSM和PSA的cDNA序列设计合成引物 .应用巢式RT PCR方法分别检测 36例PC患者和 2 3例前列腺增生 (BPH)患者外周血中PSMmRNA和PSAmRNA .结果　PSAmRNA和PSMmRNA阳性表达的灵敏度 (Sen)分别为 :2 9.7% ,6 7.6 % (P <0 .0 1) .特异度 (Spe)分别为 :86 .4 % ,10 0 .0 % (P <0 .0 5 ) .准确度 (Ac)分别为 :5 0 .8% ,79.8% (P <0 .0 5 ) .卡柏值 (κ)分别为 :0 .13(差 )、0 .6 (一般 ) .结论　应用巢式RT PCR方法 ,患者外周血中PSMmR NA在PC的诊断、微转移、术后随访、人群筛选中的真实性和可靠性明显优于PSAmRNA .     

巢式RT-PCR技术检测肺癌76例微量癌细胞转移分析

目的 :建立检测肺癌患者外周血及淋巴结微转移癌细胞的敏感的分子检测方法 ,并探讨其临床应用的意义。方法 :采用巢式逆转录聚合酶链反应 ( RT- PCR)技术特异引物扩增 CK19- m RNA,以检测肺癌患者外周血及淋巴结中 CK19- m RNA的表达情况。分析CK19- m RNA扩增结果与患者临床指标的关系。结果 :76例肺癌患者外周血标本中 39例CK19- m RNA阳性 ,阳性率为 5 1 .3% ,2 7例肺良性病变中仅 1例阳性 ,阳性率为 3.7% ,1 5例健康对照者均为阴性。全部患者 1 5 7枚淋巴结中 CK19- m RNA检测出阳性率为 38.9%( 61 / 1 5 7) ,常规病理方法检出阳性率为 1 4.6% ( 2 3/ 1 5 7) ,两种方法比较 ,有显著性差异 ( P<0 .0 5 ) ,且 HE染色阴性的 1 34枚淋巴结中 ,经 RT- PCR法证实存在癌转移的阳性率为 2 8.3% ( 38/ 1 34) ,两组比较有显著性差异 ( P<0 .0 5 )。结论 :巢式 RT- PCR是一种特异性和敏感性均较高的癌细胞微量转移检测方法 ;可能有助于肺癌细胞微转移的早期诊断。     

RT—PCR检测食管鳞癌组织中GST—π基因的表达

为了解原发性食管癌组织中ＧＳＴ－π基因的表达情况，用ＲＴ－ＰＣＲ方法定量检测了食管癌组织及相对应的正常食管粘膜组织中ＧＳＴ－π基因的表达。结果：在癌组织中ＧＳＴ－π基因表达的阳性率为８０．０％，在癌旁正常粘膜组织中为８６．６％。但在癌组织中ＧＳＴ－π基因表达的强度大于正常粘膜组织。管癌组织分化越差，ＧＳＴ－π基因阳性表达率越低，Ｐ〈０．０５。结果提示：在原发性食管组织中ＧＳＴ－π基因存在较高频率的     

庚型肝炎病毒的RT—PCR法检测

根据国外报道的庚型肝炎病毒基因组序列设计两对５’非编码区引物，用ＲＴ－ＰＣＲ法检测了２４例丙型肝炎和１０例透析病人血清静 标本。结果丙型肝炎病人透析病人各１例检出ＨＧＶ ＲＮＡ，占总受检例数的５．８８％。本研究说明了ＨＧＶ在我国的存在，提示开展ＨＧＶ相关研究的必要性。     

外周血中肝癌细胞转移的检测

目的 寻找检测外周血中肝癌细胞的灵敏方法，以便早期发现肝癌患者的血行微转移灶。方法 采用逆转录和巢式多聚酶链式反应及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交技术，将ＡＦＰ ｍＲＮＡ作为肝癌细胞的特异标志，特异扩增检测肝癌患者外周血中微量转移的肝癌细胞。结果 ３０全正常人和２１例肝转移癌均阴性，２４例慢性肝病中有１例阳性；８３例肝癌患者有５１例阳性，阳性率６１．５％。结论 用此方法可以较目前其它检查方法更早发现肝癌患者     

Detection of hepatocellular carcinoma cells in peripheral venous blood and its significance

Primary hepatocellular carcinoma (PHC) is a major cause of death in patients with chronic liver disease. One of the difficulties in the management of PHC is its extensive character: intrahepatic metastasis, venous invasion and distant metastasis. In the process of metastasis, tumor cells are scattered from the original site, spread hematogenously and arrested at small vessel. Thus, detection of tumor cells in the circulation might predict metastasis of tumor.1 However, the number of cells in circulation could be much too small to be detected morphologically.     

RT-PCR检测子宫内膜癌患者外周血中细胞角蛋白20基因的表达

【目的】建立自外周血样本中检测细胞角蛋白20（cytokeratins 20,ck20）基因表达的RT-PCR方法,初步检测其在子宫内膜癌患者中的阳性率。【方法】17例病理确诊为子宫内膜癌患者为子宫内膜癌组,46例正常体检的女性为正常对照组,提取子宫内膜癌组子宫内膜组织及所有个体外周血单个核细胞总RNA,逆转录合成cDNA,巢式RT-PCR扩增ck20基因,同时扩增beta-actin基因以确保cDNA的有效性。以电泳中可见ck20基因的DNA条带确定为阳性表达。【结果】子宫内膜癌组患者的内膜组织及部分血样中可成功扩增出ck20基因。经小样本比较,ck20基因在正常对照组无阳性表达,在子宫内膜癌组外周血中的阳性率为70.6%。【结论】RT-PCR可检测血样中ck20基因的表达。与正常对照组相比,子宫内膜癌组ck20基因在外周血中的检出率显著升高,作为肿瘤标志物,对恶性上皮性肿瘤的诊断具有一定的临床价值。     

肝细胞癌患者外周血循环肿瘤细胞阳性提示预后不良

目的评价外周血循环肿瘤细胞（CTCs）检测在肝细胞癌临床诊治中的应用价值。方法随机选取2013年7月~2015年1 月期间南方医院肝胆外科收治的肝细胞癌患者296例为肝细胞癌组,并同时收集39例非肿瘤或肝脏良性肿瘤患者为对照组,采 用广州益善生物技术股份有限公司开发的CanPatrolTM CTCs检测技术检测肝细胞癌组及对照组患者外周血中CTCs的分布情 况,并分析外周血CTCs阳性与肝细胞癌患者临床病理参数之间的关系,以及CTCs与肝细胞癌患者术后无瘤生存时间的关 系。结果在对照组患者外周血中未检测到CTCs,在肝细胞癌组中,191例患者外周血中检测到CTCs,阳性率为64.5%,显著高 于对照组（P<0.05）;肝细胞癌患者外周血中CTCs阳性与患者血清甲胎蛋白水平、肿瘤数量、TNM分期、BCLC分期、门静脉癌栓 及转移等显著相关（P<0.05）;在127例接受根治性手术治疗的肝细胞癌患者中,CTCs阳性的肝细胞癌患者术后无瘤生存时间 显著缩短（P<0.05）。结论肝细胞癌患者外周血CTCs阳性提示预后不良,CTCs可以成为监测肝细胞癌患者预后一个较好的 辅助指标。     

肝癌患者外周血细胞形态检查结果分析

目的:分析探讨肝癌患者外周血细胞形态检查结果及其临床意义。方法:选取肝癌患者357例,从中随机抽取200例作为观察组,对其外周血细胞形态进行检查并与对照组200例正常外周血细胞形态进行比较。结果:与对照组正常外周血细胞形态相比,观察组200例中明显可见57例粒细胞核左移,43例明显可见粒细胞核右移,38例明显可见粒细胞空泡样变性。观察组102例外周血细胞样本出现了不同程度的红细胞形态异常,其中口型红细胞18例,破碎红细胞16例,泪滴形红细胞11例,椭圆形红细胞17例。结论:肝癌患者外周血细胞形态变化主要表现为粒细胞不同程度不同数量的异常,同时还会伴有红细胞的形态异常,准确把我细胞形态的变化对临床肝癌的诊断具有重要指导意义。     

循环RNA测定与肿瘤外周血微转移的研究进展

复发和转移是影响肿瘤患者预后的主要因素，血液等成分正常情况下不表达上皮细胞的组成成分如癌胚抗原（CEA），细胞角蛋白（CKs)和上皮膜抗原（EMA），以编码特异性上皮性蛋白的mRNA作为靶基因，通过分子生物学技术（RT-PCR）检测血液中的循环肿瘤细胞，可提高肿瘤病理TNM分期的正确性，有助于临床治疗方案的选择及预后的判断。     

肝细胞癌患者外周血中调节性T细胞、NK细胞及NKT细胞的表达及意义

目的 探讨CD4+CD25+调节性T细胞、CD3-CD57+NK细胞及CD3+CD57+NKT细胞在肝细胞癌患者外周血中的表达及意义.方法 利用流式细胞仪对31例肝细胞癌患者、59例慢性肝炎、肝硬化患者及48例正常人外周血中的CD4+CD25+调节性T细胞、CD3-CD57+NK细胞及CD3+CD57+NKT细胞进行定量分析.结果 肝细胞癌组外周血中CD4+CD25+T细胞较正常对照组及慢性肝炎、肝硬化组明显减少(P<0.05),肝细胞癌组外周血中CD3-CD57+NK细胞及CD3+CD57+NKT细胞较正常对照组及慢性肝炎、肝硬化组明显增加(P<0.05).结论 CD4+CD25+调节性T细胞可能通过对CD3-CD57+NK细胞及CD3+CD57+NKT细胞功能的抑制参与了肝癌细胞的免疫逃逸作用.     

巢式RT-PCR检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞的临床价值

目的:联合采用细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)及乳腺上皮黏蛋白(small breast epithelial mucin,SBEM)指标,探讨通过巢式RT-PCR(nested RT-PCR)方法检测乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)的临床价值?方法:采用MCF-7 RNA与健康志愿者外周血单核细胞(peripheral mononuclear cell,PMNC)RNA进行梯度混合后的反转录产物,检测优化后巢式RT-PCR体系的敏感性,再选择10例健康志愿者以及20例乳腺良性疾病患者外周血检测其特异性后,对56例乳腺癌患者外周血中CK19 mRNA及SBEM mRNA表达情况进行检测? 结果:优化后的检测体系能够在3 ml外周血PMNCs中检测到1个MCF-7细胞,10例健康志愿者以及20例乳腺良性疾病患者外周血中未检测到CK19 mRNA与SBEM mRNA的表达;两者的表达与原发肿瘤大小,腋窝淋巴结状况及TNM分期相关(P < 0.05),而与原发肿瘤病理类型,激素受体以及C-erbB-2的表达无明显相关性(P > 0.05)? 结论:经过优化的巢式RT-PCR体系联合检测乳腺癌患者外周血CK19 mRNA及SBEM mRNA的表达敏感性和特异性较高,能用于检测外周血CTC,对进一步精确评估预后及指导治疗可能有较高的临床价值?