抗瓜氨酸化聚合兔IgG抗体ELISA法的建立及初步应用

目的建立检测血清抗瓜氨酸化聚合兔IgG(citrullinated aggregated rabbit IgG,Cit-AgRIgG)抗体的ELISA方法,探讨其对类风湿关节炎(RA)的诊断价值。方法将兔IgG于62℃加热聚合变性,用肽酰精氨酸脱亚胺酶(PAD)将内含精氨酸催化生成瓜氨酸,制成瓜氨酸化聚合兔IgG(Cit-AgRIgG)。以此作为抗原,包被反应板微孔,建立检测抗Cit-AgRIgG抗体的ELISA方法。经方法学考核后,检测临床标本并对结果进行评价。结果 Cit-AgRIgG显示出与抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体有较高的结合活性。以其为包被抗原建立的检测抗Cit-AgRIgG抗体的ELISA法批内和批间平均变异系数分别为4.5%和9.5%。特异性阻断试验显示,Cit-AgRIgG、AgRIgG与CCP抗原对该抗体的最高抑制率分别为80.0%、65.9%和25.0%。抗Cit-AgRIgG与抗AgRIgG抗体的cut off值分别为0.565和0.459,此时RA患者抗Cit-AgRIgG抗体阳性率显著高于其他疾病和健康人对照组(P均0.01),其诊断RA的敏感性为79.3%,特异性为96.5%,阳性、阴性预测值分别为84.7%和95.1%,阳性、阴性似然比分别为22.66、0.215,Youden指数为0.758,ROC曲线下面积(AUCROC)为0.890。对RA和健康人对照者检查结果显示,抗CitAgRIgG与抗AgRIgG抗体(RF)总符合率97.7%,与抗CCP抗体总符合率91.7%。结论建立的检测抗Cit-AgRIgG抗体的ELISA法有良好的稳定性和特异性。抗Cit-AgRIgG抗体兼具RF与抗CCP抗体的双重特性,有可能发展成为RA疾病诊断和病情监测的一种新的参考指标。     

甲胎蛋白与CA 19-9双标记时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立钐(Sm3+)标记抗甲胎蛋白(AFP)单克隆抗体(单抗)和铕(Eu3+)标记抗糖类抗原19-9(CA19-9)单抗的双标记时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)法。方法将抗AFP单抗与抗CA19-9单抗混合包被96孔板作为捕获抗体,用Sm3+标记抗AFP单抗、Eu3+标记抗CA19-9单抗作为检测抗体,建立同步检测AFP/CA19-9的TrFIA法。结果建立的TrFIA法检测AFP/CA19-9的灵敏度分别为0.3 ng/mL和2.5 U/mL。AFP分析内和分析间变异系数(CV)分别为2.6%～5.9%和4.3%～8.1%,CA19-9分析内和分析间CV分别为4.9%～5.6%和5.0%～6.3%。分别用建立的TrFIA法与Perkin-Elmer公司解离增强镧系荧光免疫分析(DELFIA)法同时测定血清样本,两法AFP与CA19-9的相关系数分别为0.99与0.98。结论建立的同步检测AFP与CA19-9的TrFIA法灵敏、简便、准确,有助于消化道肿瘤和睾丸癌等的辅助诊断。     

BAS-TRFIA法检测抗环瓜氨酸肽抗体方法学的建立

目的利用生物素-链霉亲和素放大系统建立一种可快速、灵敏地定量检测患者血清中抗环瓜氨酸肽(anticyclic citrullinated peptide,CCP)抗体的时间分辨荧光免疫分析法(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)。方法将链霉亲和素同铕标记二乙烯三胺五乙酸酐结合制备铕标记链霉亲和素衍生物;生物素同兔抗人IgG抗体结合制备生物素化IgG抗体,后者在免疫检测系统中可联结铕标记亲和素和抗CCP抗体从而形成复合物。最后通过测量Eu3+-链霉亲和素在615nm的荧光值计算血清抗CCP抗体水平。结果该方法具有更宽的线性范围,其线性范围为0.58-9463U/ml,而应用ELISA试剂盒检测线性范围只有18.48-591.4U/ml。此外,该方法的抗CCP抗体检测限可达0.5U/mL。回收率为96.45-104.63%。用BAS-TRFIA和ELISA法测得的值具有很好的相关性(R2=0.892 7)。结论本研究数据表明我们的建立的BAS-TRFIA法在测定抗CCP抗体上较传统ELISA试剂盒有很大改进,为RA的诊断和治疗提供了一个更为理想的免疫方法学选择。     

烟曲霉硫氧还蛋白还原酶双抗体夹心ELISA法的建立及初步应用

目的建立检测烟曲霉硫氧还蛋白还原酶Gli T(thioredoxin reductase Gli T,TR)的双抗体夹心ELISA法,并用于几种真菌培养上清液中TR蛋白的检测。方法纯化鼠抗人TR单克隆抗体并进行辣根过氧化物酶(HRP)标记。以纯化羊抗TR多克隆抗体为包被抗体,HRP标记鼠抗人TR单克隆抗体为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法。用方阵滴定法确定包被抗体和检测抗体的最适浓度;对方法的精密度、特异性和最低检测限进行评价;比较分析其检测3种常见曲霉(烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉)培养上清中天然TR蛋白的能力,并与3种常见假丝酵母菌(白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌)作比较。结果方阵滴定的结果显示最适包被抗体浓度为1μg/m L,最适检测抗体的稀释度为1∶3 000。抗原最低检测限达2.25ng/m L。重组TR浓度为5 ng/m L和20 ng/m L时,批内和批间变异系数分别为8.57%、12.69%和6.73%、10.45%。阻断实验显示该法有较好的特异性,阻断率达84.7%。该法可以检出烟曲霉24 h培养上清中的天然TR,TR含量与烟曲霉菌丝含量呈正相关。本法与另2种曲霉和3种假丝酵母菌培养上清无交叉反应。结论成功建立并优化了检测烟曲霉TR抗原的ELISA法。该法具有良好的精密度及特异性,对烟曲霉感染有潜在的诊断价值。     

抗环瓜氨酸肽抗体的检测及其临床意义

目的　研究抗环瓜氨酸肽抗体的检测及其临床意义。方法　用双抗原夹心ELISA法对80例健康献血员和96例类风湿关节炎(RA)患者血清进行抗环瓜氨酸肽(抗CCP)抗体检测,其结果和类风湿因子(RF)免疫透射比浊检测的结果进行比较。结果　抗CCP抗体的特异性比RF高,但敏感性比RF低。抗CCP抗体在RF阳性组的检出率为89 .7% ,显著高于RF阴性组的检出率33. 3% (P <0 . 0 1) ,抗CCP抗体和RF检测结果的符合率达85 . 4 % ,两者总体的检出率有关联(P <0 . 0 1)。结论　抗CCP抗体是检测RA的一项特异性很高的血清学指标,可以作为RA的早期诊断指标。     

电化学发光免疫测定法检测抗环瓜氨酸肽抗体的方法比较

目的:比较电化学发光免疫测定(ECLIA)法与酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测抗环瓜氨酸肽(抗CCP)抗体的价值。方法:采用ECLIA法和ELISA法分别检测192例类风湿关节炎(RA)患者、56例其他风湿性疾病患者及100名健康对照者血清中的抗CCP抗体,观察ECLIA法检测抗CCP抗体的精密度、回收率、诊断灵敏度、诊断特异度,并分析ECLIA法与ELISA法间的相关性。结果:ECLIA法检测抗CCP抗体的批内、批间变异系数分别为0.9%~1.8%、1.7%~2.4%,明显低于ELISA法(5.8%~8.6%,6.7%~9.8%)(P<0.01)。ECLIA法检测抗CCP抗体的回收率为96.7%~98.6%,灵敏度和特异度分别为72.9%、98.7%,与ELISA法检测结果的一致率达96.7%。结论:ECLIA法检测抗CCP抗体的精密度较高,且对RA诊断的灵敏度、特异度与ELISA法具有较好的一致性。     

ELISA 检测KRT10_C 和COL6A3_C 短肽抗体的方法建立及作为RA 诊断的应用价值

目的 建立角蛋白I型细胞骨架10[keratin type I cytoskeletal 10,KRT10)和VI型胶原蛋白A3[collagen alpha-3(VI)chain,COL6A3]短肽抗体的ELISA检测方法,并探讨两种瓜氨酸化短肽抗体在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)实验室诊断中的价值。方法 以合成短肽为包被抗原,抗人IgA,IgG及IgM为二抗,检测100例抗瓜氨酸化蛋白抗体(anti-citrullinated protein antibodies,ACPA)阳性组、100例健康对照组和29例RA确诊患者血清中的KRT10,KRT10_C,COL6A3及COL6A3_C短肽抗体水平,比较不同短肽抗体与RA的相关性,采用ROC曲线分析KRT10_C和COL6A3_C短肽抗体对于RA的诊断价值,并对此ELISA方法进行精密度评价。结果 与临床诊断相比,KRT10_C短肽抗体诊断RA的灵敏度为58.62%,特异度为52.17%,用于诊断抗CCP抗体阳性RA患者的ROC曲线下面积达0.895; COL6A3_C短肽抗体诊断RA的灵敏度为65.52%,特异度为78.95%,用于诊断抗CCP抗体阴性的RA患者的ROC曲线下面积可达0.956。ELISA检测值KRT10_C(以抗人IgG为二抗)的批内变异系数分别为11.2%(低值)、7.8%(中值)和6.7%(高值)。ELISA检测COL6A3_C(以抗人IgM为二抗)的批内变异系数分别为12.9%(低值)、8.4%(中值)和8.9%(高值)。结论 KRT10_C和COL6A3_C短肽抗体对RA诊断具有重要意义,有望加入并完善实验室诊断体系,提高RA的早期诊断率。     

血清抗甲状腺过氧化物酶抗体ELISA定量方法的建立

摘要：目的：建立一种ELISA方法用于定量分析血清抗甲状腺过氧化物酶（TPO）抗体（TPOAb）。 方法：用生物素化牛血清清蛋白（BSA）和链霉亲合素包被微孔板,同时加入生物素化TPO抗原和待检血清,再加入酶标记抗人IgG,建立间接包被模式酶联免疫法测定抗TPO抗体。经方阵滴定确定生物素化抗原和酶标抗体的最适浓度,优化反应条件,并进行方法学评价。 结果：本法抗原包被量为0.083 μg/mL,检测灵敏度为0.165 IU/mL;高、低浓度混合血清批间变异系数（CV）为9.2%、9.0%,批内CV为4.6%、5.6%;回收率为96.0%~104.0%;包被板37 ℃放置5 d保持稳定;与抗甲状腺球蛋白抗体（TGAb）交叉反应率为0.22%。经检测120例健康人,将参考值定为<65.7 IU/mL。与Abbott公司试剂盒检测结果的相关系数（r）为0.985（P<0.01）。 结论：间接包被模式适合TPOAb测定,包被抗原用量少,方法灵敏度高,特异性强;操作简单,成本较低,适合基层医院。     

抗-CCP抗体与RF联合检测对类风湿关节炎的诊断价值

目的探讨抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体与类风湿因子(RF)联合检测对类风湿关节炎(RA)的诊断价值。方法选取RA患者184例(RA组)、非RA患者76例(非RA组)、健康对照组30例为研究对象,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测抗CCP IgG型抗体,免疫比浊法检测RF,比较单项和两项联合检测对RA诊断的敏感度和特异性。结果RA患者的抗CCP抗体和RF阳性率分别为77.7%和76.09%;串联方式的特异性高(96.22%),但敏感度(60.32%)减低;并联方式的敏感度(93.48%)明显提高,但特异性(39.67%)较低。结论联合检测抗CCP抗体和RF可提高RA诊断的准确性。     

血清抗环瓜氨酸肽抗体在类风湿关节炎诊断中的评价

目的:评价抗环瓜氨酸抗体在类风湿关节炎(RA)诊断中的价值。方法:用ELISA法检测RA及疑似患者血清中的抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体。比较抗CCP抗体和类风湿因子(RF)对RA诊断的敏感度、特异度及诊断预测性方面的差异。结果:抗CCP抗体的敏感度为42.5%,RF为67.8%,RF高于抗CCP抗体(P<0.05),抗CCP抗体的特异度为97.4%,RF为78.7%,抗CCP抗体明显高于RF(P<0.05),在RA诊断预测中,抗CCP抗体明显优于RF(P<0.05)。结论:抗CCP抗体在RA诊断中具有高的特异性和预测性,可作为诊断RA的理想血清学指标。     

双抗原夹心ELISA检测抗HCV总抗体

目的建立检测抗HCV抗体的双抗原夹心ELISA法,评价其可行性。方法将与His或GST融合表达的HCV基因工程抗原,分别用作ELISA的包被和酶标记抗原,建立用于抗HCV总抗体检测的双抗原夹心ELISA。用此方法检测1 968份临床血清标本,并以间接ELISA(北京万泰试剂)与之对照;此外,用套式RT-PCR检测部分血清的HCV RNA。结果有1 761份血清2种ELISA检测均为阴性,有190份血清均为阳性,两种方法符合率为99.1%;有17份血清的检测结果不相符,间接法阳性而本法阴性的14份,其中HCV RT-PCR阳性1份;本法阳性而间接ELISA阴性的3份,其中RT-PCR阳性2份。双抗原夹心ELISA与间接ELISA的敏感性分别为99.48%、98.96%,特异性分别为99.94%、99.27%。结论新研制的检测抗HCV总抗体的双抗原夹心ELISA具有较高的敏感性和特异性,值得作进一步的深入研究。     

量子点标记技术同步检测抗弓形虫IgG和IgM抗体的实验研究

目的建立抗弓形虫(TOX)IgG和IgM抗体同步检测体系。方法分别用不同发射波长的量子点标记羊抗人IgG、羊抗人IgM作为检测抗体,以免疫磁珠作为固相载体,建立抗弓形虫IgG和IgM抗体同步检测体系,并对该检测体系进行了优化;同时检测280份临床血清标本,并与进口酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒进行方法学比较。结果 TOX抗原的最适固化浓度为50μg/mL,固化效率在35%～55%之间。抗TOX IgG、IgM抗体检测结果与进口ELISA试剂盒相比符合率分别为96.4%,97.1%,本体系同时检测两种抗体的阳性检测率达8.2%。结论成功建立了抗TOX IgG和IgM抗体同步检测体系,该体系操作简便快速,灵敏度高,具有有良好的临床应用价值。     

应用生物素-链霉亲合素放大ELISA系统检测抗环瓜氨酸肽抗体

目的用生物素-链霉亲合素放大ELISA系统建立一种敏感、特异、经济简便的抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体的测定法。方法用链霉亲合素(SA)预包被,使生物素化的CCP(bio-CCP)固相化,摸索检测抗CCP抗体的最优实验条件,并进行方法学考核和临床应用评价。结果本法对类风湿关节炎(RA)的诊断敏感性为69.4%,特异性为96.8%,阳性预测值为89.1%,阴性预测值为94.1%,阳性似然比为19.28,阴性似然比为0.317,Youden指数为0.658。与欧蒙试剂比对,两法所测抗CCP抗体吸光度/cutoff比值显著相关(n=61,r=0.9253,P<0.001)。在所统计的168例血清样本中,两法同时阳性者60例,同时阴性者105例,一致性百分率达98.2%,结果具有高度一致性(Kappa=0.961,P<0.001)。ROC曲线分析结果显示本法所测抗CCP抗体对RA诊断准确性达到了一个较高水平(AUCROC值=0.901)。在13例诊断为早期RA者中,有10例抗CCP抗体阳性(阳性率76.9%),未发现抗CCP抗体与RA患者临床症状、疾病活动指标(ESR)及RF水平有关。结论成功将生物素-链霉亲合素ELIS...     

抗环瓜氨酸肽抗体水平测定对类风湿性关节炎的临床评价

目的 探讨抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体对类风湿关节炎(RA)诊断的临床意义.方法 用ELISA法对328例患者(RA124例、非RA 204例)及35例正常人血清CCP抗体进行检测,分析抗CCP抗体的水平与RF、AKA的相关性.结果 抗CCP抗体的阳性率在RA中为80.6%,在非RA中为3.4%,正常人全部阴性.3种抗体对RA诊断的敏感性和特异性分别为CCP 80.6%、96.6%;AKA 44.4%、93.6;RF 75.0%、74.0%.抗CCP抗体与AKA、RF之间显著相关(P<0.01).严重关节侵蚀、关节肿痛RA患者,抗 CCP 抗体水平高于无/轻微关节侵蚀、关节肿痛RA患者,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 抗CCP抗体对RA诊断具有很高的临床应用价值;抗CCP抗体水平的检测有助于预后判断,有望替代AKA与经典指标RF联合检测.ELISA法检测血清中抗CCP抗体,操作简便,结果可靠,易于临床推广应用.     

抗心磷脂抗体IgG时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中的抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACA)IgG的时间分辨荧光免疫分析方法。方法采用ACA抗原(心磷脂+β2糖蛋白I)和鼠抗人IgG抗体分别作为固相抗原和铕标记抗体,如果样本中存在ACA抗体,则形成ACA抗原-ACA抗体-铕标记鼠抗人IgG抗体复合物,加入解离增强液解离铕离子,检测荧光强度,样本中ACA-IgG抗体含量与荧光强度成正比;对建立的时间分辨荧光免疫(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)法检测ACA抗体的线性范围、精密度、检测范围进行分析;对25例ACA-IgG抗体阳性血清标本分别利用TRFIA及ELISA法检测ACA-IgG抗体,分析其相关性;收集50例健康献血者,利用TR-FIA检测其血清中的ACA-IgG抗体,计算临床特异度。结果 利用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,TRFIA法检测高、中、低3种浓度混合血清的批内(n=20)精密度分别为2.34%、3.25%和3.87%,批间(n=8)精密度分别为2.89%、3.67%和4.50%;方法的灵敏度为0.1GPL U/ml;TRFIA法检测健康献血者,临床特异度为98%;TRFIA与ELISA 2种方法检测结果的一致性检验采用相关性分析,相关系数为0.987;TRFIA比ELISA的检测范围更宽,稳定性能好。结论首次建立稳定的高灵敏度和宽检测范围的TRFIA法检测人血清中的ACA-IgG抗体,对早期诊断自身免疫性疾病及监测疗效具有重要意义,该方法以其优势有望在各检验科室得以普遍应用。     

抗CCP抗体检测在类风湿关节炎诊断中的价值

目的:探讨抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体在类风湿关节炎(RA)诊断中的价值.方法:用ELISA法检测92例RA患者及30例非RA患者血清抗CCP抗体,其结果和类风湿因子(RF)进行比较.结果:在92例RA标本中,检出抗CCP抗体63例,抗CCP抗体对RA诊断的阳性率为68.48%(63/92),抗CCP抗体对RA诊断的特异性为96.67%(29/30),RF对RA诊断的特异性为76.67%(23/30),抗CCP抗体的特异性比RF高.结论:检测抗CCP抗体有助于提高类风湿关节炎的诊断率.     

抗CCP抗体检测在未分化关节炎鉴别诊断中的意义

目的检测未分化关节炎(UA)患者血清抗环状瓜氨酸肽(抗CCP)抗体,探讨抗CCP抗体在UA鉴别诊断及早期类风湿关节炎(RA)诊断中的价值。方法294例患者中,24例符合1987年ARA的RA诊断标准,诊断为RA;130例符合UA诊断标准,其余为其他风湿病患者。用ELISA方法检测抗CCP抗体。结果130例UA患者中抗CCP抗体阳性56例,最后诊断为RA,另74例抗CCP抗体阴性患者正在继续随访中。24例RA中20例抗CCP抗体阳性,4例阴性。健康对照组中阳性率为0。结论用ELISA法检测血清中抗CCP抗体简便、结果可靠,对RA诊断具有高度敏感性和特异性。在UA鉴别诊断中有重要意义;抗CCP抗体阴性患者不能完全排除RA。     

抗环瓜氨酸肽抗体等四种抗体在早期类风湿关节炎诊断中的意义

目的 抗环瓜氨酸肽抗体、类风湿因子（RF）三种分型IgG、IgA及ISM在早期类风湿关节炎诊断中的意义及应用价值。方法 90例血清标本，包括32例早期类风湿关节炎，8例强直性脊柱炎，加例未确诊的早期关节炎，30例健康对照，以酶联免疫吸附法（ELISA）检测抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体、类风湿因子（RF）-IgG、RF-IgA、RF-IgM，并随诊9个月。结果 RA组抗CCP抗体、RF-IgG、W-IgA、RF-IgM明显高于其余三组（P〈0．05）。抗CCP抗体对RA诊断的特异性、敏感性、阳性预测值及阴性预测值均明显高于RF-IgG、RF-IgA、RF-IgM的相应指标。结论 抗CCP抗体存在于RA疾病的早期，对早期RA有较好的敏感性和特异性，抗CCP抗体检测有利于RA的早期诊断。     

抗环瓜氨酸肽抗体的定量检测在类风湿性关节炎诊断中的应用

目的探讨抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体在类风湿性关节炎(RA)中的诊断意义.方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测抗CCP抗体相对浓度,采用免疫散射比浊法定量检测类风湿因子(RF)浓度,并比较抗CCP抗体与RF的相关性.结果抗CCP抗体在RA诊断中其敏感性较RF低(P＜0.05),特异性较RF高,有显著性差异(P＜0.01),抗CCP抗体联合检测在诊断RA时,能使敏感性提高到86.7%,特异性提高到98.6%.结论抗CCP抗体对RA具有很高的特异性,尚不能认为与RF具有相关性.因此,两者联合检测能提高RA血清学的阳性率.     

抗环瓜氨酸肽抗体与葡萄糖6磷酸异构酶抗原联合检测在类风湿关节炎诊断中的应用

[目的]探讨抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体和葡萄糖6磷酸异构酶（GPI）抗原联合检测对类风湿关节炎（RA）早期诊断的意义。[方法]用酶联免疫吸附试验（ELISA）、胶乳增强免疫透射比浊法对120例（RA67例,非RA53例）患者血清进行抗CCP抗体、RF和GPI抗原检测,比较RA患者与非RA患者之间抗CCP抗体、RF和GPI抗原检测的差异;同时对67例RA患者血清进行抗CCP抗体和GPI抗原联合检测,将其结果与RA患者RF检测结果进行比较,并进行相关性分析。[结果]RA组中3种抗原抗体的阳性率显著高于非RA组（P〈0．001）;对RA组,用抗CCP抗体和GPI抗原联合检测,其阳性率显著高于RF（P〈0．001）检测,相关性分析,两种方法的检测结果均相关联（r=0．48）。[结论]抗CCP抗体、RF和GPI抗原检测对RA有适度的敏感性,对诊断RA均有良好的应用价值;但联合检测抗CCP抗体和GPI抗原具有更高的敏感性。