应用荧光定理PCR测定肝移植受者HBV—DNA

血清中乙肝病毒脱氧核糖核酸 (ＨＢＶ -ＤＮＡ)的存在一直被认为是病毒复制的标志 ,且与传染性有关。以前主要应用聚合酶链反应 (ＰＣＲ)技术检测 ,但由于ＰＣＲ只能定性 ,对病毒基因无法定量 ,且检测过程中染色剂溴乙锭具有较强的致癌作用且污染环境。随着分子诊断学的发展 ,新技术不断被开发 ,荧光定量ＰＣＲ检测具有定量、高灵敏度、高速循环及高重复性等优点。本文采用荧光定量法和酶联免疫方法对７例肝移植患者进行术前、术后的血清ＨＢＶ -ＤＮＡ和乙肝标志物的检测 ,共９５例次 ,以评价荧光定量ＰＣＲ测定ＨＢＶ -ＤＮＡ在肝移植术中…     

荧光定量PCR检测 HBV-DNA的临床意义

目的了解荧光定量PCR法检测的HBV-DNA与乙型肝炎,标志物的关系,探讨荧光定量PCR在HBV-DNA检测方面的临床价值。方法采用荧光定量PCR技术对乙肝标志物阳性血清进行HBV-DNA定量测定,对26例HBV-DNA( )(拷贝数105～109/ml)、HBeAg( )(≥10.86NCU/ml)患者贺普丁治疗前后血清HBV-DNA、HBeAg进行定量监测。结果①108例HBsAg( )/HBeAg( )/HBcAb( )者有106例HBV-DNA阳性,阳性率98%,含量为(7.65±1.06)拷贝/ml;112例HBsAg( )/HBeAb( )/HBcAb( )者有58例阳性,阳性率为51%,含量为(5.38±1.55)拷贝/ml;46例HBsAg( )/HBcAb( )者有17例阳性,阳性率36%,含量为(4.09±1.79)拷贝/ml。②HBV-DNA基因拷贝数与HBeAg水平呈正相关。③26例HBeAg( )、HBV-DNA( )患者经12个月治疗,HBeAg阴转率为42%,HBV-DNA( )阴转率为80%,明显高于HBeAg阴转率(P<0.01)。结论荧光定量PCR检测HBV-DNA,能直接反映HBV-DNA含量,在判断体内HBV是否复制,复制程度,是否被清除等方面明显优于HBV血清标志物检测,对抗病毒治疗过程监测、愈否监控以及疗效评价具有一定的实用价值。     

乙肝病毒载量与血清标志物定量的相关性

目的 探讨电化学发光法定量检测乙肝病毒血清标志物(HBV-M)与荧光定量PCR检测HBV-DNA的相关性.方法 采用荧光定量PCR法和电化学发光免疫分析法测定286例乙肝患者血清HBV-DNA和HBV-M.结果 Ⅰ组(HBsAg,HBeAg,HBcAb三项阳性)、Ⅱ组(HBsAg,HBeAb,HBcAb三项阳性)、Ⅲ组(HBsAg,HB-cAb阳性)血清中HBV-DNA阳性率分别为91.60%,51.16%,40.98%;Ⅰ组血清中HBV-DNA拷贝数显著高于Ⅱ组与Ⅲ组血清中HBV-DNA拷贝数(P<0.01),Ⅱ组与Ⅲ组差异无显著性(P>0.05),在HBeAg阳性血清中,随着HBV-DNA拷贝数的下降,HBeAg COI值也趋于下降,且差异有显著性(P<0.01).结论 同时检测HBV-M和HBV-DNA可以对病情的发展进行跟踪,随时监测,为临床诊断和疗效观察提供依据,两者互为补充.     

实时荧光定量PCR检测HBV-DNA的临床应用价值

目的 探讨实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HBV-DNA的临床应用价值.方法 采用FQ-PCR方法检测296例不同血清学类型的乙肝病毒感染者血清中的HBV-DNA,同时检测了乙肝血清标志物与肝功能.结果 99例HBeAg( )标本中HBV-DNA阳性率为100%,平均HBV-DNA含量为1. 21×l07拷贝/mL,其 HBV-DNA检出率和含量与HBeAg(-)模式的检出情况比较差异有显著性(P＜0.01);HBsAg( )与HBsAg(-)模式比较,HBV-DNA检测结果差异有显著性(P＜0.01); 肝功能正常组与肝功能异常组HBV-DNA检出率比较差异有显著性(P＜0.01).58例HBsAg(-),且肝功能又正常的标本中检出了4例HBV-DNA阳性.结论 实时荧光定量PCR可以快速、准确定量检测HBV-DNA,是诊断乙肝病情和判断疗效的重要手段,在临床上具有重要应用价值.     

电化学法检测HBV-M与荧光定量检测HBV-DNA的相关性观察

目的：探讨电化学法定量检测乙肝病毒血清标志物（HBV-M）与荧光定量PCR检测HBV-DNA的相关性。方法：采用荧光定量PCR法和电化学发光免疫测定（ECLIA）检测330例乙肝患者血清HBV-DNA和HBV-M。结果;在HBV-M的不同阳性模式中HBeAg阳性组HBV-DNA阳性率明显高于HBeAb阳性组,且HBV-DNA拷贝数有显著性差异;在HBeAg阳性血清中,随着HBV-DNA拷贝数的下降,HBeAg COI值也趋于下降,且有显著性差异（P〈0．01）。结论：ECLIA技术灵敏度高,特异性强,快速定量,可以对病情的发展进行跟踪,随时监测,尤其在HBeAg定量检测上可以为临床提供重要的依据;荧光定量PCR技术检测HBV-DNA能反映病毒的复制状态,也为临床诊断和疗效观察提供依据。     

粪便中乙肝病毒的定量检测及其与乙肝病毒标志物的相关性研究

采集50例乙型肝炎未并发消化道出血患者的血液和粪便标本,采用酶联免疫法检测粪便和血清中乙肝病毒标志物( HBVM ), QIAmp DNA Stool kit 试剂盒法提取粪便总DNA,巢式 PCR 定性检测粪便中乙肝病毒 DNA ( HBV-DNA),实时荧光定量PCR( FQ-PCR)定量检测血清和粪便中HBV-DNA。根据血清HBVM 阳性的不同组合(感染模式)将50例患者分成3组,粪便乙肝表面抗原( HBsAg)阳性37例,血清HBsAg阳性46例,两者检出率差异有统计学意义(P<0.05),1例血清阴性者,粪便中HBsAg阳性。 FQ-PCR定量检测血清和粪便HBV-DNA含量分别为4.35±1.49和4.50±1.59。血清HBV-DNA检测,30例阳性(60%),粪便中HBV-DNA共检测出31例阳性(62%)。     

电化学发光法定量检测乙型肝炎表面抗原与荧光定量PCR检测乙肝病毒DNA载量的关系

目的 探讨外周血中电化学发光免疫分析法(ECLIA)定量检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)与荧光定量PCR检测乙肝病毒DNA(HBV-DNA)载量之间的相互关系.方法 运用电化学发光法、荧光定量PCR法两种方法同时检测180份血清标本的HBsAg含量和HBV-DNA载量,并按HBV-DNA载量分成4组,对其结果应用统计学分析.结果 在180份血清标本中,HBsAg阳性为161例,占89.4%,HBV-DNA阳性为101例,占56.1%,两者同时为阳性的有101例,占56.1%.经统计学分析HBsAg定量与HBV-DNA载量之间无统计学意义,没有相关性(r＜0.3,P＞0.05).结论 电化学发光法定量检测HBsAg与HBV-DNA载量无关,联合检测两者可以为临床提供诊断治疗依据.     

乙型肝炎病毒免疫学标志物与血清HBV-DNA的相关性探讨

目的:探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术定量检测HBV-DNA与乙型肝炎病毒免疫学标志物(HBV-M)的相关性。方法:采用ELISA法和FQ-PCR法对230例乙肝患者进行HBV-DNA定量检测以及HBV-M的检测。比较不同模式的HBV-DNA阳性情况。结果:HBeAg(+)血清中HBV-DNA阳性率和含量最高,血清中HBeAg与HBV-DNA含量密切相关,但部分Ⅲ模式中也有一定的HBV-DNA阳性率及含量。结论:HBV-M应与荧光定量PCR法联合检测可以准确地为临床提供科学的诊断依据和指导用药。     

血清HBV-DNA与HBV免疫学标志物相关性研究

目的 探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术定量检测HBV-DNA与乙型肝炎病毒(HBV)血清学标志物之间的相关性.方法 采用ELISA和FQ-PCR法对250例乙肝患者进行HBV-M以及HBV-DNA定量检测.比较不同乙肝病毒血清学标志物阳性组合HBV-DNA阳性情况.结果 HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)血清中HBV-DNA阳性率和含量最高,血清中HBeAg与HBV-DNA含量密切相关,但部分HBeAg阴性或HBeAb阳性患者也有较高的HBV-DNA阳性率及含量.结论 荧光定量PCR法检测血清中HBV-DNA含量可以准确地反映病人体内病毒的感染和复制情况,可准确地为临床提供科学的诊断依据.     

2250例慢性乙肝患者HBV-M与HBV-DNA及ALT检测结果分析

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清中乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)载量与乙型肝炎病毒血清学标志物(HBV-M)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)的关系。方法对2250例慢性乙型肝炎患者血清采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HBV-M,荧光定量PCR方法检测HBV-DNA和速率法检测ALT。结果慢性乙肝患者血清HBV-DNA阳性总检出率47.96%,ALT总升高率为25.2%,其中HBeAg 组中HBV-DNA和ALT检出率最高。结论联合检测患者血清中HBV-DNA载量?HBV-M和ALT,对乙型肝炎的临床诊治和预后判断具有重要意义。     

HBsAg阴性孕妇乙型肝炎病毒宫内感染检测分析

目的:探讨使用荧光定量PCR方法检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阴性孕妇乙型肝炎病毒(HBV)宫内感染情况。方法:选择住院分娩的HBsAg阴性孕妇,使用荧光定量PCR方法检测孕妇及其新生儿的血清中HBV-DNA。结果:502例HBsAg阴性孕妇血清HBV-DNA阳性40例,其中27例发生宫内感染,宫内感染总阳性率5.38%。以HBeAb+HBcAb+组合模式的宫内感染率最高,达12.50%,而HBVM全阴性者发生宫内感染率最低,为1.10%。结论:HBsAg阴性孕妇也可能发生HBV宫内感染,采用灵敏度高的荧光定量PCR方法检测HBsAg阴性孕妇及新生儿血清中HBV-DNA,对发现其HBV宫内感染有重要意义。     

乙肝HBsAg定量检测的临床诊断意义

目的 探讨化学发光方法对乙肝表面抗原(HBsAg)含量测定结果与HBV-DNA水平及乙肝病毒标志物模式之间的相互关系.方法 运用化学发光法、荧光定量PCR(FQ-PCR)及ELISA三种方法同时检测346例患者血清标本,并对其结果进行统计学分析.结果 346例患者血清HBsAg含量与HBV-DNA水平及乙肝病毒标志物检测的结果具有较好相关性.结论 化学发光法定量检测HBsAg能较准确、快速地反映体内乙肝病毒复制情况.     

荧光定量PCR检测HBV-DNA与血清标志物的关系探讨

目的:探讨乙型肝炎血清HBV-DNA水平与乙肝抗原抗体模式的关系。方法:对320例血清标本同时用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HBV DNA和用酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙肝标志物,根据不同检测结果进行对比分析。结果:320份血清中,乙型肝炎病毒标志物不同组合HBV-DNA阳性率有差异(P<0.01),320份血清中,有188例HBV-DNA阳性,占56.2%,HBsAg HBeAg HBcAb阳性者HBV-DNA阳性率占98.6%,>10copies/ml占64.5%,HBsAg HBeAb HBcAb阳性者HBV-DNA阳性率占37.5%,10 copies/ml占18.2%。结论:HBeAg和HBV-DNA有明显的相关性,PCR定量检测HBV-DNA含量更有助于判断体内HBV复制的情况及传染性强弱,在临床上有重要意义。     

荧光定量PCR检测肝病患者血清HBV-DNA的对比研究

[目的]探讨荧光定量PCR检测HBV-DNA的应用价值.[方法]采用荧光定量PCR检测309例不同肝病患者血清HBV-DNA含量,同时采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定乙肝病毒血清免疫标志物HBeAg.[结果]肝硬变、肝癌患者血清HBV-DNA含量低于慢性乙型肝炎患者(x2=10.8,P＜0.01).309例肝病患者的HBV-DNA的阳性率为73.8%(228/309),其中HBeAg阳性组的DNA阳性率为87.7%(136/155),HBeAg阴性组的DNA阳性率为59.7%(92/154),两组的差异具统计学意义(x2=31.3,P＜0.0001).236例慢性乙型肝炎中HBeAg阳性患者血清HBV-DNA含量与HBeAg阴性患者的差异具统计学意义(t=-2.45,P＜0.05).[结论]荧光定量PCR是直接检测HBV-DNA水平,能够更精确直观的反映人体体内病毒复制情况及所带病毒量.     

冷冻保存血清对HBV-DNA荧光定量PCR检测结果的影响

目的研究荧光定量PCR检测一年内冷冻保存(-80℃)血清中HBV-DNA的结果与冷冻保存时间的相关性。方法采集25例乙型肝炎患者血清标本,将其分成4份于-80℃保存,分别在第0、2、6、12月相同条件下冻融,再进行HBV-DNA荧光定量PCR检测。将检测数据转化成对数值,采用分析软件处理数据。结果 25份血清标本HBV-DNA初始值为103~107copies/ml,2个月冷冻保存的血清各组标本HBV-DNA含量较初始值没有明显差异(P=0.39);但在冷冻保存6个月和12个月后HBV-DNA含量显著低于初始值(P=0.01,P=0.00);6个月冷冻保存也明显低于2个月保存HBV-DNA含量(P=0.014)。一元线性回归分析显示,HBV-NDA检测的含量与时间成负相关(r=0.985)。结论冷冻保存(-80℃)血清时间越长HBV-DNA含量随之越低。     

血清HBV-DNA含量与HBcAg在慢性乙型肝炎患者肝组织中表达的关系

目的 研究慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA含量与肝组织中HBcAg表达的关系。方法 血清HBV-DNA定量检测采用荧光PCR法(FQ-PCR)；肝组织中HBcAg表达采用免疫组化ABC法标记。结果血清HBV-DNA含量较低组(A、B组)，肝组织中HBcAg的表达呈阴性或少数阳性；而血清HBV-DNA含量较高组(C、D组)，肝组织HBcAg表达多数呈阳性或强阳性，随着血清HBV-DNA含量的升高肝组织HBcAg表达强度和范围也随之增加，提示血清HBV-DNA含量与肝组织HBcAg表达有一定的相关性。结论 血清HBV-DNA定量检测能较好地反映乙肝病毒在体内的复制状况。     

乙肝HBV DNA荧光定量检测与血清标志物结果相关性分析

目的 研究乙肝血清学标志物（HBV-M）结果与HBV-DNA水平的关系，分析HBV DNA阳性率在各年龄组的分布情况。方法对深圳市部分服务行业人员血清应用荧光定量PCR检测和ELISA法检测并对结果进行分析。结果1781例乙肝血清学标志物阳性血清中有1102例HBV-DNA阳性。其中883例1．3．5阳性（俗称“大三阳”）血清中HBV-DNA的阳性率为96．15％；722例1．4．5阳性（俗称“小三阳”）血清中HBV-DNA的阳性率为24．38％；138例1．5阳性血清中HBV-DNA的阳性率为38．41％；22例1．3阳性血清中HBV-DNA的阳性率为90．91％；11例HBsAg阳性血清中HBV-DNA阳性率为36．36％。结论两种方法检测乙肝标志物有密切的相关性。荧光定量PCR是检测HBV-DNA含量较精确的方法，能正确反映乙肝病毒的复制水平和活跃程度；HBsAg和HBeAg与HBV-DNA含量有着明显的相关关系。     

乙型肝炎病毒父婴垂直传播的临床研究

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)阳性父亲的新生儿宫内感染情况以及HBV定量与婴儿感染率之间的相关性。方法:以母亲HBsAg阴性、父亲HBsAg阳性的新生儿40例(A组)为研究对象,同时以母亲HBsAg阳性、父亲HBsAg阴性的新生儿40例(B组)及父母双亲HBsAg均阴性者40例(C组)作对照,采用血清荧光免疫试验及荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测新生儿血清HBsAg及HBV-DNA水平以及父/母血清HBV-DNA拷贝数,采用χ2检验进行统计学分析。结果:A组阳性率为32.5%,B组阳性率为35.0%,C组无1例感染,而A、B两组间无统计学差异。荧光定量PCR分析发现,父代、母代HBV-DNA含量越高,其子代感染率越高。结论:HBV可能通过父婴途径垂直传播,其感染率与母婴传播相当,且与父代血清HBV-DNA含量的高低密切相关。     

乙肝病毒携带产妇血清和乳汁中HBV-DNA定量检测及其临床意义

目的:研究分析乙肝病毒携带产妇的母乳中HBV-DNA含量及其传染性,更好地指导母乳喂养。方法:采用荧光定量PCR技术检测107例孕期检测有一项以上乙肝血清学标志物(HBVM)阳性,其他产检项目正常的产妇,及20例乙肝标志物阴性的健康产妇作对照,进行初乳HBV-DNA与血清中HBV-DNA的检测结果的比较。结果:107例乙肝病毒携带产妇血清和乳汁中HBV-DNA的检出率分别为70.1%(75/107)和56.1%(60/107);HBeAg阳性组产妇乳汁排毒率明显高于HBeAg阴性组,差异有显著性(P<0.01)。结论:乳汁与血清中HBV-DNA含量具有较好的相关性,血清中HBV-DNA高拷贝的产妇,最好不要进行母乳喂养。产妇血清中HBeAg与乳汁及血清中HBV-DNA含量都具有明显关系,它的存在提示血清及乳汁中的HBV-DNA含量较高。     

HBV血清标志物与HBV-DNA定量检测的相关性分析

目的探讨HBV血清标志物ELISA法与HBV-DNA荧光定量检测的相关性。方法采用ELISA法与PCR荧光定量法同时检测378份血清标本。结果用ELISA法测定HBsAg（＋）、HBeAg（＋）、抗-HBc（＋）时，HBV-DNA荧光定量阳性率高达91.2％；用ELISA法测定HB-sAg（＋）、抗-HBe（＋）、抗-HBc（＋），HBV-DNA阳性率为47．3％。而在133例HBV血清标志物全国性的标本中，仍有3例检出HBV-DNA阳性。结论在各种HBV模式中，以HBeAg阳性者的病毒复制水平最高，而血清中未检出标志物者并不能排除HBV感染。两种方法联合检测对临床有不同的指导意义。