丹参对血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞表达TGF-β1,ROS和PAI-1的影响

目的：探讨丹参对血管紧张素Ⅱ致肾小球硬化的干预作用。方法：采用血管紧张素Ⅱ刺激系膜细胞增殖,同时加入不同剂量的丹参注射液分别对系膜细胞作用24 h。观察系膜细胞纤溶酶原激活剂抑制物-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)mRNA、培养上清液中的PAI-1蛋白和转化生长因子β1(transforming growth factorβ₁,TGF-β₁)的含量,以及细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的变化。结果：丹参明显抑制住了由血管紧张素Ⅱ刺激大鼠肾脏系膜细胞而产生的PAI-1 mRNA以及蛋白表达的升高,且其抑制作用的强弱与丹参注射液的剂量密切相关。丹参还明显下调了因血管紧张素Ⅱ刺激后TGF-β₁的表达增加以及细胞内ROS水平的升高。结论：丹参下调血管紧张素Ⅱ诱导的系膜细胞PAI-1表达的增加,以及抑制TGF-β1的分泌增加与细胞内ROS水平的增高,从而发挥抗肾小球硬化的作用。     

丹参对血管紧张素Ⅱ致肾小球系膜细胞Wnt/β-catenin信号通路活化干预的影响

目的:基于Wnt/β-catenin信号通路,探讨丹参对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)刺激肾脏系膜细胞后的影响。方法:浓度为(0~10-5mol/L)AngⅡ刺激系膜细胞,以及浓度为10-6mol/L的AngⅡ在不同时间(0 min~24 h)刺激系膜细胞,分别用氯沙坦和丹参注射液干预。用实时定量PCR与Western Blot方法分别检测细胞Wnt-1、β-catenin、PAI-1mRNA与蛋白水平,用ELISA方法测定细胞上清中纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的含量。结果:AngⅡ使系膜细胞Wnt-1、β-catenin、PAI-1表达增加,FN水平升高,呈现剂量、时间依赖性。浓度为150 mg/mL的丹参注射液干预后,Wnt-1、β-catenin、PAI-1表达以及FN水平明显下降,与ARB作用相当。结论:AngⅡ通过刺激Wnt/β-catenin信号途径活化致肾小球硬化,而丹参能通过抑制AngⅡ诱导的系膜细胞Wnt/β-catenin信号途径活化进而下调PAI-1表达与FN合成而发挥抗肾小球硬化的作用。     

丹参注射液对血管紧张素Ⅱ诱导肾脏系膜细胞活性氧水平增加的干预作用

目的:观察丹参注射液对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导肾脏系膜细胞活性氧(ROS)水平增加的干预作用。方法:采用AngⅡ刺激系膜细胞增殖,同时加入浓度分别为37.5、75、150m g/m l的丹参注射液对系膜细胞作用24 h。观察系膜细胞内ROS水平的变化。同时设非干预组(对照组)及单纯丹参组。结果:AngⅡ与大鼠肾脏系膜细胞孵育24 h后,细胞内ROS水平上升为对照组的4.61倍(P<0.01)。各浓度丹参注射液干预后细胞内ROS水平为对照组3.88倍(P<0.01)、2.55倍(P<0.05)、2.20倍(P<0.05);中、小剂量干预组与AngⅡ组比较:P<0.01);150m g/m l丹参注射液单独与系膜细胞孵育后对细胞内ROS水平没有影响。结论:丹参注射液下调AngⅡ诱导的系膜细胞内ROS水平的增高,从而发挥抗肾小球硬化的作用。     

丹参多酚酸盐对人肾小球系膜细胞TGF-β/Smad信号转导通路的影响

目的:探讨丹参多酚酸盐对血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小球系膜细胞TGF-β/Smad信号传导通路的影响。方法:培养人肾小球系膜细胞,分为正常组;模型组;丹参多酚酸盐高剂量(200μmol/L);中剂量(20μmol/L);低剂量(2μmol/L)组。经预实验筛选结果,采用10-8mol/L血管紧张素Ⅱ诱导模型组及丹参多酚酸盐各组人肾小球系膜细胞增殖,采用MTT法检测各组及各时间点的细胞活性。收集培养48 h时间点各组细胞,采用Western blot法及Real-timePCR法分别检测Smad2、Smad3蛋白及TGF-β及Smad7 mRNA的表达情况。结果:模型组与正常组比较,在培养24 h,48 h,72 h内系膜细胞的增值活性增强、丹参多酚酸盐各组能够抑制其增殖,于48 h达到稳定;模型组与正常组比较,系膜细胞中Smad2、Smad3蛋白及TGF-βmRNA的表达显著上升(P0.05),而Smad7mRNA的表达则明显降低(P0.05);丹参多酚酸盐各组与模型组比较,均能逆转上述变化(P0.05)。结论:血管紧张素Ⅱ能够有效刺激肾小球系膜细胞增殖,丹参多酚酸盐可能通过多靶点抑制TGF-β/Smad信号通路的传导,从而抑制延缓肾小球硬化及纤维化。     

虫草肾荼胶囊对人肾小球系膜细胞TGF-β1mRNA及PAI-1mRNA表达的影响

目的:研究虫草肾茶胶囊对培养在高糖条件下人肾小球系膜细胞(HMC)转化生长因子-β1mRNA(TGF-β1mRNA)和纤维蛋白溶解酶原激活物抑制剂-1mRNA(PAI-1mRNA)表达的影响,探讨其在糖尿痛肾病(DN)防治中的意义.方法:制备虫草肾茶胶囊及福辛普利药物血清,用实时定量PCR方法测定各组HMCTGF-β1以及PAI-1mRNA表达,并以福辛普利为对照.结果:虫草肾茶胶囊高、中剂量组及福辛普利组TGF-β1mRNA和PAI-1mRNA表达均低于高糖组,且以虫草肾茶胶囊高剂量组表达最低(P<0.05).结论:高糖可促进HMCTGF-β1mRNA和PAI-1mRNA表达,虫草肾茶胶囊可下调高糖刺激下HMCTGF-β1mRNA及PAI-1mRNA的表达,从而预防肾小球硬化的发生、发展,进而延缓DN的进展.     

虫草肾茶胶囊对人肾小球系膜细胞TGF-β1 mRNA及PAI-1mRNA表达的影响

目的：研究虫草肾茶胶囊对培养在高糖条件下人肾小球系膜细胞（HMC）转化生长因子-β1mRNA（TGF-β1mRNA）和纤维蛋白溶解酶原激活物抑制剂-1mRNA（PAI-1mRNA）表达的影响,探讨其在糖尿病肾病（DN）防治中的意义。方法：制备虫草肾茶胶囊及福辛普利药物血清,用实时定量PCR方法测定各组HMCTGF-β1以及PAI-1mRNA表达,并以福辛普利为对照。结果：虫草肾茶胶囊高、中剂量组及福辛普利组TGF-β1mRNA和PAI-1mRNA表达均低于高糖组,且以虫草肾茶胶囊高剂量组表达最低（P〈0.05）。结论：高糖可促进HMCTGF-β1mRNA和PAI-1mRNA表达,虫草肾茶胶囊可下调高糖刺激下HMCTGF-β1mRNA及PAI-1mRNA的表达,从而预防肾小球硬化的发生、发展,进而延缓DN的进展。     

茶多酚对氧化低密度脂蛋白诱导系膜细胞TGF-β1mRNA表达的影响

目的：观察茶多酚对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1mRNA表达的影响。方法：以ox-LDL刺激体外培养的大鼠系膜细胞，不同浓度的茶多酚干预后，检查系膜细胞内总胆固醇(TC)含量，用原位杂交法测TGF-β1mRNA的表达。结果：ox-LDL与系膜细胞共同孵育后细胞内TC含量、TGF-β1mRNA表达与细胞对照比较，均明显增高；茶多酚干预后系膜细胞中TC含量下降，TGF-β1mRNA的表达下降。结论：茶多酚可抑制系膜细胞摄取氧化低密度脂蛋白和TGF-β1mRNA的表达。     

黄芪当归合剂通过抑制c-Jun氨基末端激酶活性影响肾小球系膜细胞表型变化

目的观察中药黄芪当归合剂(A&A)对白细胞介素-1β(IL-1β)和血管紧张素Ⅱ(AⅡ)诱导的肾小球系膜细胞分泌表型及其细胞内 JNK 信号通路的影响。方法在体外培养的大鼠肾小球系膜细胞中,以IL-lβ和 AⅡ为刺激物,采用蛋白印记和酶联免疫吸附法测定α-平滑肌动蛋白(a-SMA)表达、纤维粘连蛋白(FN)分泌量和 c-Jun 氨基末端激酶(JNK)活性,用共聚焦显微镜观察 IL-lβ刺激前后系膜细胞内α-SMA 的分布变化,并观察 A&A 血清滤液对上述指标的影响。结果外源性 IL-lβ和 AⅡ可刺激肾小球系膜细胞表达α-SMA 和 FN 增加,A&A 血清滤液可明显抑制 IL-lβ刺激系膜细胞导致的上述效应,但对 AⅡ引起的上述变化无明显作用。同时,A&A 血清滤液可显著抑制 IL-lβ刺激诱导的 JNK 活化;AⅡ对 JNK 活化无明显刺激作用,A&A 血清滤液对 AⅡ的作用亦无明显影响。结论 A&A 可抑制 IL-lβ诱导的系膜细胞表型转化,该作用可能与其下调 JNK 信号通路活化有关。     

糖肾汤对高糖下肾小球系膜细胞TGF-β1表达影响的实验研究

目的：观察高糖对肾小球系膜细胞TGF-β1蛋白及mRNA表达的影响，以及糖肾汤的干预作用。方法：分别用低糖、高糖以及高糖下糖肾汤不同剂量培养肾小球系膜细胞，采用ELISA法测定TGF-β1蛋白含量，逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)法测定TGF-β1ImRNA表达，并以开博通作为阳性药对照。结果：高糖可刺激肾小球系膜细胞TGF-β1蛋白及mRNA的表达，糖肾汤具有对抗高糖刺激作用，且呈现一定的量效关系。结论：糖肾汤对高糖对肾小球系膜细胞的影响具有干预作用。     

安肾口服液对肾小球系膜细胞的影响及机理研究

目的:探讨安肾口服液治疗肾小球疾病肾阳虚证之作用机理。方法:采用血清药理学方法和系膜细胞培养方法,提取大鼠的含药血清作用于体外培养的大鼠肾小球系膜细胞,观察安肾口服液对肾小球系膜细胞增殖的影响以及对白细胞介素1、血管紧张素Ⅱ、Ⅳ型胶原刺激肾小球系膜细胞增殖的影响。结果:安肾口服液可抑制肾小球系膜细胞的异常增殖,可拮抗白细胞介素1、血管紧张素Ⅱ、Ⅳ型胶原刺激肾小球系膜细胞的异常增殖。结论:抑制肾小球系膜细胞的异常增殖、拮抗白细胞介素1、血管紧张素Ⅱ、Ⅳ型胶原刺激肾小球系膜细胞的异常增殖是安肾口服液治疗肾小球疾病肾阳虚证的重要机制之一。     

益气解毒化瘀小复方及其单味药对大鼠肾小球系膜细胞Smad3,Smad7mRNA的影响研究

目的:探讨益气解毒化瘀小复方及其单味药对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肾小球系膜细胞信号通路Smad3,Smad7mRNA的基因表达影响,初步明确其抗肾小球硬化的作用机理。方法:常规培养大鼠肾小球系膜细胞(GMCs),RT-PCR法检测Smad3,Smad7mRNA表达。结果:小复方组抑制系膜细胞Smad3mRNA的表达最为明显,促进Smad7mRNA表达最为明显,与各单味药组、西药对照组比较,有显著性差异(P 0. 01或P 0. 05)。结论:益气解毒化瘀小复方可有效地抑制肾小球系膜细胞Smad3mRNA的表达,有效地促进系膜细胞Smad7mRNA表达,并优于单味药,从而达到抗肾小球硬化,保护肾脏的目的。     

肾络通对大鼠系膜细胞外基质分泌及转化生长因子β1表达的影响

目的: 探讨肾络通药物血清对大鼠系膜细胞外基质不同成分的抑制作用及对转化生长因子β1(TGF-β1)表达的调节作用.方法:以体外培养大鼠肾小球系膜细胞及血清药理学方法为基础,采用酶联免疫吸附试验检测细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)的含量;采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1 mRNA的表达.结果:细胞外基质FN,ColⅣ的含量与TGF-β1 mRNA的表达呈正相关关系,肾络通对二者均有抑制作用.结论:肾络通能够减少细胞外基质的积聚,抑制TGF-β1的分泌与表达,从而进一步明确了其防治多种肾小球疾病,延缓肾小球硬化的作用机制.     

芪蓟肾康方对AngⅡ所致大鼠肾小球系膜细胞增殖变化中JNK-AP1影响

目的：探讨芪蓟肾康方通过JNK信号通路对大鼠肾小球系膜细胞的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞,用血管紧张素Ⅱ刺激系膜细胞增生,给予芪蓟肾康方黄酮干预,用酶联免疫吸附（ELISA）法检测肾小球系膜细胞上清液 c-Jun 氨基末端激酶（JNK）、活化蛋白1（AP-1）、纤维粘连蛋白（FN）蛋白表达;实时定量 PCR 法检测 JNK、AP-1 mRNA 的表达。结果：与正常组比较,模型组及治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN 蛋白表达明显升高（P〈0.05或 P〈0.01）;与模型组比较,治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN 蛋白表达明显降低（P〈0.05或 P〈0.01）。与正常组比较,模型组及治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN mRNA 表达明显升高（P〈0.05或 P〈0.01）;与模型组比较,治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN mRNA明显降低（P〈0.05）。结论：芪蓟肾康方可以通过下调肾小球系膜细胞JNK、AP-1 mRNA及蛋白的表达水平,抑制 JNK 信号转导,降低 AP-1的活性,减少 FN 的增殖,从而减轻 GMC 增生,延缓肾小球的损伤,防止肾小球的硬化。     

肾络通对大鼠系膜细胞外基质分泌及转化生长因子β1表达的影响

目的:探讨肾络通药物血清对大鼠系膜细胞外基质(ECM)不同成分的抑制作用及对转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的调节作用.方法:以体外培养大鼠肾小球系膜细胞(MCs)及血清药理学方法为基础,采用酶联免疫吸附试验(ELAIS)检测细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)的含量;采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1 mRNA的表达.结果:细胞外基质FN、ColⅣ的含量与TGF-β1 mRNA的表达呈正相关关系,肾络通对二者均有抑制作用.结论:肾络通能够减少细胞外基质的积聚,抑制TGF-β1的分泌与表达,从而进一步明确其防治多种肾小球疾病,延缓肾小球硬化的作用机制.     

肾疏宁对肾小球系膜细胞ICAM-1及其mRNA表达的影响

目的 :探讨中药肾疏宁对系膜细胞分泌细胞间粘附分子的作用。方法 :应用细胞培养技术和血清药理学方法 ,采用血管紧张素Ⅱ作为一种刺激因子 ,观察肾疏宁血清对血管紧张素Ⅱ条件系膜细胞分泌ICAM - 1的影响。结果 :系膜细胞受到血管紧张素Ⅱ刺激后 ,ICAM - 1的分泌显著增加 ,而肾疏宁血清能明显抑制ICAM- 1的分泌和表达。结论 :肾疏宁对粘附分子介导的病理损伤过程有明显的抑制作用。     

通络益肾方对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞MMP-9/TIMP-1和TGF-β1表达的影响

目的观察通络益肾方对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞增殖、细胞外基质调控系统MMP-9/TIMP-1、TGF-β1表达的影响,探讨其防治糖尿病肾病的可能机制。方法以体外培养的大鼠肾小球系膜细胞为研究对象,将培养的肾小球系膜细胞分为空白对照组、高糖培养组(高糖组)、通络益肾方高、中、低剂量组及西药对照组,用大鼠含药血清给药,分别给予相应处理48 h后,采用四甲偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,ELISA法检测细胞培养上清液TGF-β1、MMP-9和TIMP-1的水平。结果与空白对照组比较,高糖组肾小球系膜细胞增殖明显(P<0.01),上清液中TGF-β1和TIMP-1水平显著增加,MMP-9水平减少(均P<0.01);通络益肾方高、中、低剂量均能明显抑制肾小球系膜细胞增殖(P<0.01或P<0.05),下调TGF-β1和TIMP-1表达,上调MMP-9表达(P<0.05或P<0.01),尤以高剂量组效果最佳,呈剂量依赖性;西药对照组上述指标表达水平和中药中剂量组相当(P>0.05)。结论通络益肾方可能通过抑制肾小球系膜细胞增殖和下调TGF-β1、促进细胞外基质的降解而拮抗糖尿病肾病肾小球硬化,发挥其肾保护作用。     

肾络通对肾小管间质纤维化大鼠肾素-血管紧张素系统的影响

目的:观察肾络通对阿霉素诱导的肾小管间质纤维化大鼠肾组织肾素血管紧张素系统(RAS)及转化生长因子-β1(TGF-β1)、TGF-β1 mRNA袁达和纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)的影响.方法:采用生化、放射免疫法及免疫组织化学、原位杂交等方法观察大鼠肾功能,肾组织肾素活性、血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)水平及TGF-β1、FN、LN的蛋白表达和TGF-β1 mRNA表达.结果:肾络通及缬沙坦组肾功能明显改善,肾素活性、ANGⅡ水平有所下降,TGF-β1、FN、LN的蛋白表达及TF-β1 mfRNA减少.结论:肾络通可能通过调节RAS,抑制TGF-β1和TGF-β1 mRNA的表达,减少细胞外基质的沉积,减轻肾小管间质纤维化进程.     

痰瘀同治对肾小球硬化大鼠肾组织TGF-β1、MMP-2的影响

目的：探讨痰瘀同治对肾小球硬化大鼠肾组织TGF-B1、MMP．2的影响。方法：将大鼠分为正常组、模型对照组、治疗组，给药12周，采集并固定肾组织。PAS染色，观察肾小球系膜区面积，并用免疫组化及免疫荧光细胞化学技术观察肾脏TGF-β1、MMP-2的表达。结果：模型大鼠肾小球系膜区面积增大，TGF-β1强阳性表达，MMP-2表达微弱，药物治疗大鼠肾小球系膜区面积显著减小，TGF-β1表达减弱，MMP2表达增强，差异显著。结论：痰瘀同治可减少肾小球系膜区面积，显示抗肾小球硬化作用，其作用机制与抑制TGF-βI表达、促进MMP-2表达有关。     

当归补血汤对高糖条件下系膜细胞增殖及TGF-β_1 mRNA和NF-κB表达的影响

目的:研究当归补血汤对培养在高糖条件下肾小球系膜细胞(GMC)增殖及GMC中转化生长因子-β1mRNA(TGF-β1mRNA)及核转录因子(NF-кB)蛋白的表达的影响,探讨其在糖尿病肾病(DN)防治中的意义。方法:①利用噻唑蓝(MTT)比色法动态观察各种处理因素的作用下各组GMC增殖情况;②用荧光定量PCR的方法检测各种处理因素的作用下各组GMC中TGF-β1mRNA表达的情况;③用Western-blot的方法检测各种处理因素的作用下各组GMC中NF-кB蛋白的表达情况。结果:高糖能明显刺激体外培养的GMC增殖,同时细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达也增加(P0.05)。而当归补血汤能明显抑制GMC增殖及细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达也相应减少(P0.05或P0.01),并呈一定量效关系,即随糖或药物浓度的增加,GMC增殖及细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达也相应增加或减少。结论:高糖可促进GMC增殖及GMC中TGF-β1mRNA和NF-кB蛋白的表达增加,当归补血汤能明显抑制高糖条件下GMC增殖,抑制细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达增加,说明当归补血汤能直接抑制GMC增殖、GMC中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达增加,从而发挥预防和治疗肾小球硬化和间质纤维化的发生、发展,进而延缓DN的进展。