帕金森病大鼠黑质和纹状体神经元的变化

本研究采用免疫细胞化学方法观察了由６－ＯＨＤＡ单侧微量注射制成的帕金森病大鼠黑质酪氨酸羟化酶样（多巴胺能）神经元及其纤维和纹状体头部Ｐ物质神经元及体部ＧＡＢＡ能神经元的变化，以进一步揭示黑质、纹状体间的功能联系。结果显示，６－ＯＨＤＡ注射侧黑质酪氨酸羟化酶样神经元及其纤维显著减少，注射侧纹状体面积、纹状体Ｐ物质神经元和ＧＡＢＡ能神经元数量均较正常对照侧明显减少。本研究表明黑质多巴胺能神经元的损毁，破坏了黑质纹状体间正常的递质运送，进而导致纹状体的改变。     

6-羟多巴胺制备的帕金森病大鼠脑内神经递质的变化

目的:研究6-羟多巴胺(6-0HDA)制备的帕金森病(PD)大鼠脑内神经递质的变化.方法:6-OHDA微量注射建立大鼠PD模型,免疫组织化学方法观测注射侧和正常侧黑质酪氨酸羟化酶(TH)、突触素(SYN)及纹状体内γ-氨基丁酸(GA-BA)的表达,利用免疫电镜技术观察黑质网状部突触的结构变化.结果:6-OHDA注射侧黑质致密部TH阳性细胞数、GA-BA阳性细胞数量、SYN阳性突触的面积及平均光密度值(D值)较正常侧均显著降低.免疫电镜观察SYN免疫反应产物定位于小圆形或扁形突触囊泡质膜面,电子密度高.正常侧可见密集的SYN免疫反应产物,清晰的突触结构,注射侧SYN免疫反应产物很少见,突触结构少见,结构模糊,线粒体肿胀、空泡样变.结论:6-OHDA制备的PD大鼠神经递质及突触结构发生了显著改变.     

大鼠纹状体边缘区P物质受体的免疫细胞化学研究

目的 研究大鼠纹状体边缘区的结构与功能.方法 用免疫细胞化学技术对大鼠脑切片内P物质受体的定位分布进行研究.结果 P物质受体阳性胞体和树突在中枢神经系统有不均匀分布.纹状体边缘区内有较强P物质受体阳性胞体和树突,典型的梭形细胞沿背腹方向行走.结论 边缘区内有P物质受体的分布.推测边缘区内P物质递质有接受、整合功能.     

褪黑素减弱帕金森病模型大鼠纹状体神经元的ROS反应

目的 帕金森病(PD)纹状体神经元损伤是否牵涉到氧化应激因素一直备受关注,本文结合行为学分析探讨褪黑素(MT)对纹状体不同神经元活性氧自由基(ROS)反应的影响.方法 随机将24只清洁级SD大鼠分为对照组、6OHDA组和6OHDA+MT处理组,实验借助行为学、组化、免疫组化技术对PD大鼠模型予以探察.结果 ①如同本实验室前期研究,6-羟基多巴胺(6OHDA)致使实验大鼠的学习记忆及肌张力改变,MT的使用明显改善其变化.②二氢乙锭(DHE)组化染色结果显示,作为氧化应激反应产物的ROS主要定位于纹状体投射神经元(NeuN+),同时可见一些单染色的ROS+以及NeuN+神经元.6OHDA组纹状体的ROS出现在NeuN+神经元的百分率(ROS-NeuN/ROS)以及NeuN+神经元呈现ROS+反应百分率(NeuN-ROS/NeuN)[分别为(80.34±1.75)％、(89.08±2.86)％]皆高于其对照组[分别为(68.67±2.57)％、(61.24±1.52)％](P＜0.05),而使用MT明显遏制由6OHDA诱导升高的百分率[6OHDA+MT组分别为(71.78±3.19)％、(64.64±2.97)％](P＜0.05)o③ROS-Parv双标记实验显示,作为纹状体主要类型的小清蛋白(Parv)中间神经元呈现ROS阳性反应,其百分率在60HDA组(91.62±8.63)％高于它的对照组(68.66±7.52)％(P＜0.05),MT对6OHDA诱导升高的百分率显示抑制效应(71.83±1.45)％(P＜0.05).结论 本文结果提示氧化应激因素可能牵涉到PD纹状体神经元损伤的病理过程,而MT对其具有保护作用.     

PD大鼠模型的行为学评价和黑质-纹状体通路中单胺类神经递质的含量变化

目的建立帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠模型,观测和评价其行为学改变,检测和分析PD大鼠模型黑质-纹状体通路中单胺类神经递质含量变化。方法采用6-羟基多巴胺立体定向注射至成年SD大鼠单侧前脑内侧束,制作偏侧PD大鼠模型,观测和评价其行为学改变(悬尾测试、旋转行为的旋转速度、启动时间和维持时间),通过高效液相色谱法测定和分析单胺类神经递质的含量在PD大鼠模型黑质-纹状体通路中的变化。结果 (1)PD大鼠出现了尾僵直、少动、运动迟缓、震颤、竖毛、咬尾或足、姿势和步态不稳等异常行为;(2)悬尾测试对于评价PD模型没有统计学意义,旋转行为的旋转速度、启动时间和维持时间的结果具有统计学意义且呈时间依赖性;(3)PD大鼠模型毁损侧的黑质与纹状体部位的多巴胺(Dopamine,DA)和五羟色胺(Serotonin,5-HT)含量均降低,DA的含量具有逐渐下降的趋势,术后第2、3、4及5周黑质部位的DA含量相对于正常对照组分别下降62.96%、82.88%、92.71%、91.50%,纹状体部位的DA含量分别下降77.47%、91.39%、96.25%、96.18%;术后第3、4及5周黑质部位的DA含量平均下降(89.03±5.36)%(第3、4及5周的DA含量无统计学差异),纹状体部位的DA含量平均下降(93.61±2.79)%(第3、4及5周的DA含量无统计学差异)。结论 (1)PD大鼠模型具有类似人类PD的运动症状,除旋转速度作为旋转行为经典的行为学指标外,启动时间和维持时间可作为PD模型旋转行为的辅助指标;(2)PD大鼠脑内毁损侧的黑质和纹状体部位的DA和5-HT含量均降低。     

帕金森病大鼠未注射侧纹状体和黑质酪氨酸羟化酶的表达

目的:观察不同病程偏侧帕金森病(PD)大鼠未注射侧纹状体和黑质酪氨酸羟化酶(TH)的表达.方法:6-羟基多巴胺(6-OHDA)右侧前脑内侧束立体定位注射1周,阿朴吗啡旋转实验筛选PD模型大鼠,随机分为2、4周和6周模型组,另设正常对照组.行嘴侧纹状体节段和黑质节段连续冠状石蜡切片,采用焦油紫染色定位,以TH抗体免疫组织化学阳性显示多巴胺(DA)能神经元胞体和纤维.结果:正常对照组和2周模型组大鼠左侧纹状体有较强的TH表达,而4周和6周模型组左侧纹状体的TH表达强度较上述两组降低,4周和6周模型组之间无差异.4组大鼠左侧黑质TH表达阳性细胞数无差异.正常对照组、2周和4周模型组左侧黑质有较强的TH表达,3组的表达强度无差异,而6周模型组左侧黑质的TH表达强度较上述3组均降低.结论:6-OHDA单侧注射制备的PD模型大鼠,注射侧的长期病变致未注射侧纹状体和黑质TH的表达减弱.     

大鼠黑质损毁后多巴胺能神经元形态及纹状体c-fos表达的变化

目的:观察毁损黑质后,多巴胺(DA)能神经元形态学变化和纹状体内相关神经元c-fos表达情况,探讨c-fos表达与毁损程度的关系。方法:利用6羟多巴胺(6OHDA)特异毁损大鼠黑质DA能神经元,采用阿朴吗啡(APO)诱导旋转实验观察术后1、7、14和21d行为学变化;利用HE染色、Nissl染色、免疫组织化学方法和电镜,观察各时间点黑质DA能神经元形态学变化和纹状体c-fos表达。结果:毁损侧DA能神经元逐渐减少,超微结构损伤逐渐加重;DA神经元丢失比例≥80%时,纹状体毁损侧c-fos表达上调,APO诱导的旋转实验>7r/min。结论:黑质DA能神经元丢失是毁损大鼠行为改变的病理学基础;cfos的表达与DA能神经元的毁损程度、行为改变有一定的关系。     

Mrh-aFGF对帕金森病大鼠黑质神经元的保护

目的 探讨重组人改构体酸性成纤维细胞生长因子(Mrh-aFGF) 对帕金森病(PD) 大鼠黑质神经元病变的影响。 方法 SD大鼠72只,随机分为4组：对照组、PD组、生理盐水（NS）处理组、　Mrh-aFGF 处理组,每组18只。 6-OHDA 分别注入左侧黑质和腹侧被盖区后建立PD 大鼠模型,侧脑室内注射Mrh-aFGF,用阿扑吗啡诱导旋转行为;Nissl 染色法观察大鼠黑质神经元病理学改变;电子显微镜观察黑质神经元超微结构的变化。 结果 对照组均未出现旋转行为;PD组术后旋转速度逐渐加快;NS 处理组旋转行为未见明显改善;Mrh-aFGF 处理组旋转速度明显减慢(P<0.05);PD组及NS 处理组大鼠损毁侧黑质神经元数目较健侧显著减少(P<0.05);Mrh-aFGF 处理组术后1周、2周、4周损毁侧神经元数目均较PD组及NS 处理组明显增加(P<0.05);PD组大鼠黑质神经元超微结构明显受损,出现核固缩,线粒体肿胀、嵴消失,粗面内质网扩张、脱颗粒,以及突触前后膜肿胀,突触间隙消失,Mrh-aFGF处理组黑质神经元超微结构有明显改善。 结论 Mrh-aFGF能改善PD大鼠的旋转行为,减少PD大鼠黑质神经元的丢失,并改善其黑质神经元的超微结构。     

大鼠纹状体边缘区P物质样免疫反应神经终末的超微结构研究

边缘区是用免疫组织化学与束路追踪相结合的方法,在大白鼠纹状体发现的一个新区,其间的P物质、脑啡肽等免疫反应神经终末的数量,比纹状体的其他部分多。本文用包埋前免疫电镜方法,研究了该区的P物质免疫反应神经终末的突触特点。发现4种主要的突触类型,最常见的是轴-树和轴-棘突触,几种由两个以上突触组成的复合型突触群也较常见,偶尔可见轴-轴突触。同时也观察到未标记的轴突终末与P物质样免疫反应树突形成突触。P物质样免疫反应轴突终未形成对称型和非对称型突触。非对称型突触、突触后小型树突以及突触构成的复杂性,证明该区的P物质样免疫反应神经终末的来源可能与纹状体其他部位不同,并且提示该区的功能与纹状体其他部分可能不同。     

损毁单侧黑质-纹状体通路的大鼠SVZ、纹状体和黑质神经前体细胞的变化

研究成年大鼠脑室下区 (SVZ)神经前体细胞 (neural precursors)在黑质 -纹状体通路损伤后的反应 ,本研究用 6-羟多巴胺单侧纹状体注射以损毁黑质 -纹状体通路 ,损毁 10 d后腹腔注射 Brd U ,连续 4d,每日两次 ;在 SVZ、纹状体和黑质部位用免疫组化方法检测 Brd U、nestin以及 GFAP阳性细胞。结果显示 :(1) 6-羟多巴胺损毁黑质 -纹状体通路后 ,伤侧 SVZ的 Brd U阳性细胞数明显增多 ,并成簇分布 ;nestin和 GFAP阳性细胞数也增多 ,但以 GF AP阳性细胞增多明显 ;(2 )伤侧纹状体可见大量 Br-d U、GFAP以及少量 nestin阳性细胞分布 ,而健侧只有少量 GFAP阳性细胞 ;(3 )伤侧可见 Brd U阳性细胞在 SVZ和纹状体之间呈条带样分布 ;(4 )伤侧黑质除酪氨酸羟化酶阳性神经元减少外 ,未见 Brd U、GFAP和 nestin阳性细胞表达。上述结果表明 ,6-羟多巴胺损毁黑质 -纹状体通路后 ,SVZ神经前体细胞活动增强 ,有向纹状体迁移的趋势。     

尼古丁对Parkinson小鼠黑质多巴胺能神经元及小胶质细胞的影响

为探讨尼古丁对多巴胺能神经元的保护作用,本研究采用尼古丁(0.25mg/kg)预处理C57BL/6J小鼠,再给予1-甲基-2-乙基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP;20mg/kg)诱导Parkinson病(PD)小鼠模型。通过行为学检测和中脑黑质致密部(SNc)的酪氨酸羟化酶(TH)以及OX-42的免疫组织化学染色,观察了尼古丁对PD小鼠的行为以及黑质多巴胺能神经元和小胶质细胞的影响。结果显示:经尼古丁预处理可以明显减轻PD小鼠的行为障碍,增加TH免疫阳性的多巴胺能神经元的数量,并且可以抑制SNc内小胶质细胞的增生。本研究结果提示,尼古丁可保护多巴胺能神经元,而抑制小胶质细胞的增生可能是其作用机制。     

急、慢性铁负载大鼠黑质内铁及TH样阳性细胞变化的相伴关系

许多研究证实Parkinson病(PD)患者黑质内铁含量显著增高,并伴有铁代谢的改变,由于铁的细胞毒作用和它能够促进羟自由基产生的能力,使其在PD中的作用不容忽视。本实验用葡聚糖铁建立急慢性铁负载模型大鼠,采用酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学技术和Perls铁染色技术分别观察了黑质中多巴胺能神经元的存活情况以及黑质中铁含量的变化。结果显示:(1)急性铁负载模型组:黑质中TH阳性细胞数明显减少,而铁染色阳性细胞数明显增多,与正常对照组相比差异有高度显著性(P<0.05);(2)慢性铁负载模型组:黑质中TH阳性细胞数明显减少,铁染色阳性细胞数则明显增多,与正常对照组相比差异有高度显著性(P<0.05);(3)慢性组与急性组相比,黑质内TH阳性细胞数的减少和铁染色阳性细胞数的增多更为明显,差异有高度显著性(P<0.05)。上述结果提示,葡聚糖铁铁负载模型可引起黑质内铁增多,过量铁可导致黑质内多巴胺能神经元变性死亡,慢性铁负载对多巴胺能神经元的损伤作用大于急性铁负载损伤。     

脑缺血后大鼠海马及纹状体一氧化氮合酶阳性神经元的变化

夹闭大鼠双侧颈总动脉２ｈ后，用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶反应观察了大鼠海马及纹状体一氧化氮合酶阳性神经元的变化及神经损伤。结果显示：在缺血损伤严重的ＣＡ１区及齿状回一氧化氮合酶阳性神经元较正常动物明显增多并深染，而在同样严重受损的纹状体一氧化氮合酶阳性神经元较正常者明显减少。结合文献及本结果提示：一氧化氮在脑缺血所致的神经损伤中起着重要作用，而海马、纹状体的一氧化氮合酶阳性神经元本身可能具有不同的抗伤害机制．     

GDNF激活星形胶质细胞保护PD模型大鼠黑质多巴胺能神经元

探索在胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)保护受损多巴胺(DA)能神经元过程中,星形胶质细胞的可能作用。成年大鼠右侧纹状体内注射6-羟多巴胺(6-OHDA)制备Parkinson病(PD)模型。动物模型右侧黑质内注射GDNF,于注射后第7、14和21d进行动物行为学分析,行黑质节段连续冠状石蜡切片,以抗酪氨酸羟化酶(TH)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)抗体免疫组化染色,分别显示DA能神经元和激活的星形胶质细胞,光镜观察并进行细胞计数。用免疫印迹法分析注射后第21d黑质内TH、GFAP蛋白表达量,蛋白条带用图像处理仪扫描,LabWorks软件分析处理。结果显示:动物在注射GDNF后第21d,行为学功能出现显著性恢复;TH阳性神经元数量显著增加;在检测的各时间点均可观察到大量的GFAP阳性细胞;TH、GFAP的蛋白表达量显著高于对照组。以上结果提示,黑质内注射GDNF可能通过激活了的星形胶质细胞保护PD模型大鼠黑质DA能神经元。     

重组人改构体酸性成纤维细胞生长因子减少帕金森病大鼠黑质酪氨酸羟化酶免疫阳性神经元丢失

目的 探讨重组人改构体酸性成纤维细胞生长因子(Mrh-aFGF)对帕金森病(PD)大鼠旋转行为和酪氨酸羟化酶(TH)免疫阳性神经元的影响.方法 6-OHDA分别注入黑质和腹侧被盖区后建立PD大鼠模型,侧脑室内注射Mrh-aFGF,用阿扑吗啡诱导旋转行为,免疫细胞化学染色观察TH免疫阳性神经元和纤维,并进行定量分析.结果 对照组均未引出旋转行为;PD组术后旋转启动时间缩短,持续时间延长,速度加快;生理盐水(NS)处理组旋转行为未见明显改善;Mrh-aFGF处理组旋转启动时间延长,持续时间缩短,速度减慢(P＜0.01).各组大鼠健侧黑质TH阳性神经元的数量维持在相近的水平.同组内健侧和损毁侧阳性神经元比较,对照组损毁侧无明显改变;PD组、NS处理组和Mrh-aFGF处理组损毁侧阳性神经元与健侧比较均明显减少(P＜0.01).其中PD组损毁侧黑质TH免疫阳性神经元数量随时问延长逐渐减少(P＜0.01).NS处理组损毁侧黑质TH免疫阳性神经元的变化与PD组相似;Mrh-aFGF处理组损毁侧黑质阳性神经元较PD组及NS处理组有明显改善,阳性神经元的数量明显增加(P＜0.01).结论 Mrh-aFGF能减少PD大鼠黑质TH免疫阳性神经元的丢失,并改善其旋转行为.     

黑质与纹状体毁损所致大鼠帕金森氏病模型的行为学比较

用ＱＬ １ 智能实验动物旋转监察仪对纹状体毁损法、黑质毁损法二种方法制备的帕金森氏病大鼠模型的行为学进行了对比研究。通过对两种模型鼠的阿普吗啡诱导的旋转分析表明：黑质内注射６ 羟基多巴后１ 周，阿普吗啡诱导的旋转行为即处于较高水平，即９．０ 转／ｍ ｉｎ， 并基本保持在此水平；纹状体内注射６ 羟基多巴后，术后１ 周动物基本没有旋转，至术后第２ 周才开始出现明显的旋转，随后缓慢上升，至术后４ 周才升至较高的水平并保持平稳。旋转测试的适当时间应为阿普吗啡给药后４０ｍ ｉｎ。     

Bcl-2蛋白、基因在Parkinson病鼠黑质内的表达及中药对其表达的影响

采用MPTP腹腔注射建立Parkinson病动物模型。选用健康C57BL/6J小鼠随机分成3组:正常组、模型组和中药治疗组。动物存活期分别为14d和28d。采用ABC免疫组化和原位杂交方法对各组脑切片分别进行Bcl-2蛋白和mRNA检测。结果表明:模型组Parkinson病鼠中脑黑质内Bcl-2及其mRNA的表达在两个时段均明显低于正常组。其光密度28d比14d降低更为明显,而中药可部分上调Bcl-2及其mRNA的表达。提示:Bcl-2可能参与了Parkinson病中黑质多巴胺神经元的凋亡过程,中药可通过调节凋亡相关蛋白和基因的表达,阻止多巴胺神经元的凋亡,从而达到防治Parkinson病的目的。     

MPTP对小鼠不同脑区神经递质代谢酶基因表达的影响

1-甲基 -4 -苯基 -1,2 ,3 ,6-四氢吡啶 (MPTP)能够诱发黑质纹状体系统多巴胺能神经元损伤并产生与帕金森病类似的症状。本实验通过 MPTP注射诱导 C5 7BL小鼠神经元损伤 ,利用逆转录 PCR方法检测酪氨酸羟化酶 (TH)、单胺氧化酶 B(MAO-B)以及胆碱乙酰基转移酶 (Ch AT)三种神经递质代谢相关基因的表达变化。结果发现 ,在小鼠黑质与纹状体中 ,MPTP导致 TH基因表达显著降低 ,而 MAO-B与 Ch AT基因的表达变化在黑质与纹状体则有所不同 ,在黑质 MPTP导致 MAO-B与 Ch AT基因表达的上升 ,在纹状体则略有下降。     

大鼠纹状体,中缝核向苍白球和黑质的分叉投射

分别将DAPI和PI注入大鼠同侧苍白球和黑质后,于尾状核、伏隔核、中缝背核和中央上核内见到较多的DAPI和PI单标细胞混杂存在,其中有少量双标细胞