实验性哮喘豚鼠内脏感觉传入部位SP免疫反应的研究

用免疫组织化学方法结合显微图像分析 ,观察哮喘豚鼠脊神经节、结状神经节、脊髓和孤束核内 P物质的变化。正常豚鼠 C7～ T5 脊神经节及结状神经节内存在 SP阳性反应细胞 ,其细胞质内充满棕色阳性反应颗粒 ,并可见大量的阳性反应纤维。 P物质免疫反应也见于 C7～ T5 脊髓后角板层 、板层 、中间带外侧核 ,呈点状分布 ,偶见阳性纤维。孤束核内可见大量的 P物质阳性反应。哮喘豚鼠结状神经节、C7～ T5 脊神经节和相应节段脊髓后角、孤束核内 P物质阳性反应的密度明显增多而平均灰度值却明显地低于对照组。上述结果表明 ,哮喘豚鼠内脏感觉传入部位 P物质表达增强 ,提示这些部位的 P物质可能参与哮喘的发病过程     

降钙素基因相关肽在哮喘豚鼠内脏传入系统的定量分析

本文应用放射免疫分析方法研究了实验性哮喘豚鼠与下呼吸道有关的内脏传入系统内降钙素基因相关肽含量的变化 ,藉以探讨降钙素基因相关肽在哮喘发病时的作用机制。结果表明 ,哮喘豚鼠与下呼吸道有关的内脏传入系统 (结状神经节、C7～T5 节段脊神经节和脊髓后角、孤束核等处 )中的降钙素基因相关肽含量明显高于各对照组 ( P<0 .0 5)。本研究提示 ,下呼吸道和肺的内脏传入成分中的降钙素基因相关肽可能参与哮喘发病的病理生理过程。     

哮喘豚鼠内脏感觉传入部位P物质含量的变化

目的：研究哮喘豚鼠内脏感觉传入各部位内P物质含五的变化,探讨P物质在哮喘发病中的作用机制。方法：放射免疫分析。结果：哮喘豚鼠内脏感觉传入部位P物质水平（结状神经88.23±16.32,C7－C8段脊神经节对．77.22±13.26T1-T2段脊神经节75.96±15.67,T3－T5段脊神经节75．50±19．28,C7－T5段脊阅后角68．25±13．39,孤束核（81．63±17．68）pg/gW．W）明显高于正常对照组（结状神经节70．28±12．29,C7－C8段脊神经节59．87±17．36,T1-T2段脊神经节65．35±13．24,T3－T5段脊神经63．23±12.88,C7－T5段脊伍后角57．52±18．69,孤束核（68．37±16．89)pg/gW.W（P＜0.05）。结论：下呼吸道和肺的内脏感觉传入征路各部位的P物质可能参与哮喘发病过程。     

哮喘豚鼠脊神经节和结状神经节内的NKA

应用ＡＢＣ免疫组织化学方法，结合图像定量分析，研究了１８只哮喘豚鼠结状神经节和Ｃ７～Ｔ５段脊神经节内神经激肽Ａ（ＮＫＡ）的变化。结果表明，哮喘时结状神经节及Ｃ７～Ｔ，段脊神经节内ＮＫＡ阳性细胞教分别增加了约３０．６％和３５．１％；ＮＫＡ平均密度分别增加了３５．２％和３１．７％，ＮＫＡ灰度值的改变也有极显著性意义（Ｐ＜０．０１）。结果提示一级传入系统的ＮＫＡ可能参与了哮喘发作的病理生理过程，是其发作的重要因素之一     

哮喘豚鼠下呼吸道及内脏传入部位NGF表达的研究

目的　探讨哮喘豚鼠下呼吸道和内脏传入系统神经生长因子 (NGF)的作用。　方法　利用免疫组织化学和原位杂交结合显微图像分析 ,研究哮喘豚鼠下呼吸道和内脏传入系统NGF免疫反应及mRNA表达的变化。　结果　与对照组相比 ,哮喘豚鼠NGF免疫反应在气道上皮、C7～T5段脊神经节及脊髓背角明显上调 (P <0 0 1) ,NGFmRNA表达在气道上皮明显增多 (P <0 0 1) ,而在C7～T5段脊神经节及脊髓背角却未见明显改变。　结论　气道上皮、C7～T5段脊神经节及对应节段脊髓背角的NGF可能参与哮喘的发病过程 ;C7～T5段脊神经节细胞及对应节段脊髓背角神经细胞本身能合成NGF。     

NGF对哮喘豚鼠下呼吸道及内脏感觉传入部位TNF-αmRNA表达的上调作用

目的　探讨神经生长因子 (NGF)在哮喘发病中的作用及其神经免疫调节机制。　方法　应用原位杂交方法结合显微图像分析 ,研究实验性哮喘豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位肿瘤坏死因子 αmRNA(TNF αmRNA)表达的变化以及NGF抗体对其的影响。　结果　生理盐水组与单纯致敏组TNF αmRNA的表达没有显著差异 (P >0 0 5 ) ;与这两个对照组相比 ,哮喘豚鼠TNF αmRNA的表达在气道上皮、肺内炎性细胞、C7～T5段脊神经节及脊髓后角内均明显上调 (P <0 0 1) ;在哮喘 +NGF抗体组 ,上述部位内TNF αmRNA的表达明显低于哮喘组 (P <0 0 1)。　结论　NGF诱发TNF α的表达可能是NGF参与哮喘发病的机制之一 ,NGF抗体抑制哮喘时下呼吸道和内脏感觉传入部位TNF αmRNA的表达可能是治疗哮喘的新途径。     

地塞米松对哮喘豚鼠肺内脏感觉传入部位TrkA表达的抑制作用

为了探讨地塞米松对哮喘豚鼠肺内脏感觉传入系统(C7T5脊神经节及对应的脊髓后角)TrkA表达的影响,我们利用免疫组织化学和Westernblot方法,研究了哮喘豚鼠C7T5脊神经节及对应的脊髓后角TrkA的免疫反应变化。结果显示:哮喘组豚鼠C7T5脊神经节及对应的脊髓后角TrkA表达明显高于对照组(P<0.01),而地塞米松组则明显低于哮喘组(P<0.01)。结果提示TrkA可能参与哮喘的发病过程,地塞米松抑制哮喘豚鼠TrkA的表达可能是其治疗哮喘的作用机制之一。     

神经生长因子对哮喘豚鼠内脏感觉传入部位MMP-2表达的影响

目的探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在哮喘豚鼠内脏感觉传入部位的表达及神经生长因子(NGF)对MMP-2的调节作用。方法应用免疫组织化学方法检测豚鼠内脏感觉传入部位MMP-2免疫反应的变化。用W estern b lot蛋白印迹方法检测豚鼠C7~T5段脊神经节和相应节段脊髓背角NGF和MMP-2的表达。用Luzex-F实时图像分析系统和凝胶成像分析系统分别对结果进行图像分析。结果①免疫组织化学结果显示:豚鼠C7~T5段脊神经节和相应节段脊髓背角内MMP-2阳性免疫反应产物的平均灰度值(0-深色,255-浅色),生理盐水组(175.50±4.67、166.47±6.20)与单纯致敏组(172.63±9.51、165.20±5.14)比较没有显著差异(P>0.05);哮喘组(139.87±4.88、125.93±4.49)明显低于生理盐水组和单纯致敏组(P<0.01);哮喘+NGF抗体组(鼻腔吸入NGF抗体,169.73±6.24、152.37±8.67)则明显高于哮喘组(P<0.01)。②W estern b lot结果显示:与生理盐水组和单纯致敏组比较,哮喘组豚鼠C7~T5段脊神经节及相应节段脊髓样品中MMP-2和NGF阳性产物的IDV(Integrated Density Value)与β-actin IDV的比值均明显升高(P<0.01),而哮喘+NGF抗体组则明显低于哮喘组(P<0.01),表明NGF可上调豚鼠内脏感觉传入部位MMP-2的表达。结论C7~T5段脊神经节以及相应节段脊髓背角内的MMP-2可能也参与哮喘的发病过程,NGF诱发MMP-2的表达可能是NGF参与哮喘发病的机制之一,NGF抗体抑制哮喘时MMP-2的表达有可能延缓气道重塑的发生,可能是治疗哮喘的新途径。     

哮喘豚鼠初级传入神经元ERK的表达及NGF的调节作用

目的　探讨细胞外信号调节蛋白激酶 (ERK)在哮喘豚鼠初级传入神经元 (C7 T5脊神经节 )的表达及神经生长因子 (NGF)对ERK的调节作用。方法　利用免疫组织化学结合显微图像分析 ,研究哮喘豚鼠C7 T5脊神经节活化的ERK免疫反应变化。结果　与对照组相比 ,哮喘组豚鼠活化ERK免疫反应在C7 T5脊神经节神经元核内明显上调 (P <0 .0 1) ,其阳性细胞比率明显高于对照组。Anti NGF组豚鼠活化ERK免疫反应在C7 T5脊神经节神经元的核中明显低于哮喘组 (P <0 .0 1)。结论　C7 T5脊神经节神经元活化的ERK可能参与哮喘的发病过程 ,NGF可上调哮喘豚鼠C7 T5脊神经节神经元活化的ERK表达     

哮喘时豚鼠下呼吸道及内脏感觉传入部位Trk A的表达以及神经生长因子对其影响

目的：探讨神经生长因子(NGF)在哮喘发病中的作用及其神经免疫调节机制。方法：应用免疫组织化学方法检测豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位 NGF 高亲和力受体酪氨酸激酶 A(TrkA),用 Western blot 蛋白印迹方法检测豚鼠肺、脊神经节和脊髓背角 NGF 和 TrkA 的表达。结果：(1)与对照组相比,哮喘豚鼠气道上皮、肺内炎性细胞、血管平滑肌内的神经末梢、C_7～T_5段脊神经节及相应节段脊髓背角内 TrkA 阳性反应产物的平均灰度值均明显降低;哮喘 NGF 抗体组则明显高于哮喘组。(2)哮喘组豚鼠肺、C_7～T_5段脊神经节及相应节段脊髓样品中 TrkA 或 NGF 目标带的 IDV 与内参照 IDV 的比值均明显升高,而哮喘 NGF 抗体组则明显低于哮喘组。结论：NGF 可上调 TrkA 的表达,TrkA 介导的细胞内信号传导系统可能是 NGF 参与哮喘发病的主要途径之一。     

神经激肽A免疫反应在哮喘豚鼠脊髓中的定量分析

用免疫细胞化学ＡＢＣ法结合显微图像定量分析，研究了神经激肽Ａ（ＮＫＡ）免疫反应物在哮喘豚鼠脊髓中的分布及其变化。结果表明，ＮＫＡ免疫反应纤维及终末分布于豚鼠Ｃ７～Ｔ５段脊髓后角Ⅰ～Ⅲ层和背外侧索核区，ＮＫＡ样阳性免疫反应物的平均密度在前者为４２．２％，后者为３７．２％；它们的平均灰度值分别为１３４．７和９２．９，与对照组（平均密度分别为２７．２％和２４．９％，平均灰度值分别为１９９．９和１２９．２）比较均有显著性差别（Ｐ＜０．０１）。这些研究结果提示脊髓内ＮＫＡ可能参与了哮喘发作的神经病理生理机制，是其发作的重要因素之一。     

实验性哮喘下呼吸道神经激肽B免疫反应纤维

用免疫组织化学方法研究了神经激肽B免疫反应纤维在实验性哮喘豚鼠下呼吸道的变化。在气管和支气管,实验组一抗最佳稀释浓度为1:1500,对照组为1:1000,当两组的一抗浓度均为1:1500时,两者的神经激肽B免疫反应纤维见于平滑肌层,上皮内、上皮和平滑肌交界处以及外膜层,实验组的纤维数量明显多于对照组。在肺组织,实验组一抗最佳稀释浓度为1:2000,对照组为1:1500,当一抗稀释浓度均为1:2000时,两组的神经激肽B免疫反应纤维主要见于肺内各级支气管平滑肌层、血管壁平滑肌层、血管周围结缔组织和肺泡隔内,但实验组的阳性纤维数量明显比对照组多。     

实验性哮喘豚鼠延髓内神经激肽A免疫反应的定量分析

应用免疫组织化学ABC法结合显微图像定量分析,研究了神经激肽A免疫反应在哮喘豚鼠延髓中的分布及其变化.结果表明:神经激肽A免疫反应细胞纤维或终末分布于豚鼠的延髓的弧束核区.腹外侧面浅表区,三叉神经脊束核区及网状结构等区域.此外,哮喘豚鼠延髓孤束核及腹外侧部浅表区内神经激肽A阳性免疫反应物的平均密度分别为49.2%和41.6%;它们的平均灰度值分别为129.6和110.5,与对照组(平均密度31.7%和28.8%;平均灰度值:183.7和165.2)比较均有显著性差异(P相似文献   

P物质与Griffonia simplicifolia I-B_4结合位点在大鼠初级传入神经元的共存

应用荧光双标组织化学技术观察到，在大鼠腰段脊神经节中，GriffoniasimplicifoliaI-B.（I-B4）结合反应物与P物质样免疫反应物均分布在小细胞中，且34％～43％的I-B4结合反应阳性细胞和87％～95％的P物质阳性细胞为I-B4与P物质双标细胞。切断单侧脊神经后根的大鼠，切断侧脊髓后角内I-B4结合反应在术后第3d即明显减弱，至第5d消失。向成年大鼠蛛网膜下腔注射辣椒素后，脊髓后角和Lissauer束内的I-B4结合反应于第3d已明显减弱，于第5d、第7d和第10d减弱更显著，但仍有部分残留。电镜下.脊髓后角I～III层有大量轴突终末被I-B4标记，其中许多标记终末参与构成突触小球。在包埋前免疫金-银-ABC法双标电镜标本上，脊髓后角内I-B4与SP双标轴突终末分别占I-B4阳性轴突终未总数和P物质阳性轴突终末总数的33％～36％和39％～53％。上述结果进一步证实了I-B4与初级传入的小神经元结合的特异性，并表明I-B4结合位点是鉴别脊髓后角内P物质阳性轴突终末的初级传入来源的重要标志。     

哮喘豚鼠脊髓内CGRP免疫反应的定量分析

应用免疫组织化学和显微图像分析方法，对１６ 只哮喘豚鼠Ｃ７～Ｔ５ 节段脊髓后角内的ＣＧＲＰ免疫反应产物进行了定量研究。结果表明，哮喘豚鼠Ｃ７～Ｔ５ 节段脊髓后角内ＣＧＲＰ阳性反应纤维的密度大大高于正常对照组和实验对照组（Ｐ＜ ０．０１），平均灰度值明显低于正常对照组和实验对照组（Ｐ＜ ０．０１）。本研究结果提示，Ｃ７ ～Ｔ５ 节段脊髓后角内的ＣＧＲＰ可能参与支气管哮喘发病的病理生理过程。本实验结果为进一步探讨哮喘发病的中枢机制提供了一定的形态学依据。     

大鼠胸腺传入纤维在中枢内的跨节投射——CB-HRP法

本文将CB-HRP注入大鼠胸腺,研究了标记细胞在感觉神经节的分布及初级感觉终末在脊髓、脑干中的投射。结果表明:1.在双侧迷走神经结状节中有标记细胞;2.在C_1-T_5段双侧脊神经节中有标记细胞,推测这些标记细胞可能随交感神经传入,其中C_3-C_4段的投射可能随膈神经传入;3.脊髓中的标记终末,见于C_1-C_8节段,主要分布在Ⅰ层内;4.脑干中的标记终末,主要见于双侧孤束核的全长及连合核中。在疑核标记的节前神经元附近有的也可见终末分布,提示胸腺的一级传入与传出神经元间可能存在直接联系。