LePtin对缺氧诱导胎肺H型上皮细胞凋亡的影响及机制

目的观察瘦素(LEP)对缺氧诱导胎鼠肺Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)凋亡的拮抗作用,并探讨其机制.方法采用改良免疫黏附法原代培养胎鼠AECⅡ细胞,并用SP-A免疫细胞化学法和透射电镜进行鉴定;用含5 mmol/L连二亚硫酸钠(Na2S2O4)培养液培养AECⅡ细胞12 h建立缺氧诱导细胞凋亡模型,处理组含不同浓度LEP(100-1 600 μg/L);噻唑兰(MTT)比色法检测细胞存活情况;流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期;蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测凋亡蛋白caspase 3的表达.结果采用免疫黏附法获得高纯度原代培养的AECⅡ细胞,免疫细胞化学法示SP-A阳性表达,电镜下可见细胞内特征性板层小体;5 mmol/L Na2S2O4能诱导AECⅡ细胞凋亡和caspase 3活化,LEP(100-1 600 μg/L)能减轻Na2S2O4所致的细胞损伤,表现为AECⅡ存活率提高、增殖指数(PI)增高及凋亡峰下降、细胞形态恢复和caspase 3活化受抑制.结论LEP可拮抗缺氧所致AECⅡ细胞凋亡,这可能与其促使细胞周期从G1期进入S期及抑制凋亡蛋白caspase 3活化有关.     

西拉普利和牛磺酸对慢性缺氧肺组织细胞凋亡的影响

目的：初步观察西拉普利和牛磺酸对慢性缺氧肺组织细胞凋亡的影响。方法：采用原位末端民法。结果：缺氧模型及普利组细胞凋亡明显高于其他各组,而牛磺酸组、自然恢复组册与正常对照无差异。结论：西拉普利可能诱发细胞凋亡的作用,细胞凋亡的发生与否可能与肺动脉高压的形成与发展有关。     

Persephin基因转染对缺氧诱导的神经干细胞凋亡的影响

目的:探讨重组腺病毒介导Persephin基因治疗对缺氧状态下对神经干细胞凋亡的作用。方法:体外培养C17.2神经干细胞,建立神经干细胞缺氧模型;将携带人类Persephin基因的重组腺病毒感染C17.2神经干细胞;Western-blotting法分析Persephin蛋白的表达;TUNEL法检测凋亡指数,显微镜观察凋亡小体;流式细胞术测定细胞凋亡率的变化。结果:转染pAdPersephin的C17.2神经干细胞成功表达Persephin蛋白;缺氧后神经干细胞凋亡指数为(25.54±4.30)%,而转染pAdPersephin后的细胞凋亡指数显著减少至(10.04±1.32)%(P<0.01),而转染pAdCMVPersephin Persephin反义寡核脱氧核酸细胞凋亡指数为(24.05±3.05)%,与对照组无显著差异(P>0.05)。结论:腺病毒介导的Persephin基因能高效表达Persephin;外源性Persephin对C17.2神经干细胞具有抗凋亡作用,能够提高C17.2神经干细胞对缺氧的耐受性。     

缺氧诱导因子-1与细胞凋亡

缺氧诱导因子 1(HIF -1)是一种主要由缺氧诱导细胞产生的重要的转录因子。HIF- 1的表达水平与糖酵解、细胞周期阻滞、细胞生存与增殖、血管新生、血管舒缩、红细胞生成、肿瘤生长,转移以及肿瘤多药耐药等许多生命活动密切相关。HIF- 1通过调控凋亡相关基因的转录在促细胞凋亡和抗细胞凋亡中都发挥着重要的作用。     

缺氧预适应抑制缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡的作用及机制

目的：研究缺氧预适应（HP）对缺氧复氧（H/R）诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法： 体外培养新生大鼠心肌细胞，分3组：正常对照组、HP+ H/R组和H/R组，吖啶橙（AO）染色法观察心肌细胞凋亡形态学特征，流式细胞术检测心肌细胞凋亡率，比色法检测心肌细胞caspase-3的活性，免疫组织化学法结合计算机图像分析检测心肌细胞Bcl-2蛋白的表达。结果： 心肌细胞H/R损伤后，AO染色可见典型凋亡细胞，流式细胞仪检测其凋亡率为(29.7±5.4)%，HP可显著降低心肌细胞凋亡率至(7.8±1.3)%（P＜0.01）。H/R组心肌细胞caspase-3的相对活性为5.9±0.8，HP+H/R组心肌细胞caspase-3的相对活性为2.6±0.5，显著低于H/R组（P＜0.01）。Bcl-2在正常心肌细胞即有表达，其阳性染色吸光度值为119.4±7.1，H/R组为99.6±5.0，显著低于正常组（P＜0.01），HP+H/R组为126.5±6.2，显著高于H/R组（P＜0.01）。结论： HP可通过增加心肌细胞Bcl-2的表达、降低caspase-3活性而抑制H/R诱导的心肌细胞凋亡，发挥心肌细胞保护作用。     

左旋卡尼汀对缺氧/复氧诱导的子鼠心肌细胞凋亡的影响

目的：探讨左旋卡尼汀（L-carnitine）对缺氧/复氧（I/R）诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法： 采用原代培养大鼠子鼠心肌细胞作为模拟缺血再灌注损伤实验模型，实验分3组：①正常对照组（control）；②I/R组:缺氧120 min,复氧240 min;③L-carnitine组：I/R前2 h加用L-carnitine设4个浓度梯度。观察各组细胞经I/R损伤后，细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量的变化情况，并用流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率。结果： I/R组SOD活性低于对照组，MDA含量、细胞凋亡率均高于对照组，与control组相比均有显著差异(P＜0.05)；在L-carnitine用药组，SOD活性高于I/R组，MDA含量、细胞凋亡率均显著高于I/R组，P＜0.05。结论： 左旋卡尼汀对I/R损伤诱导的子鼠心肌细胞凋亡有抑制作用，其作用在一定范围内呈剂量依赖关系。     

参麦注射液对缺氧心肌细胞凋亡的影响

目的： 观察参麦注射液对体外培养的心肌细胞缺氧后细胞凋亡的影响，并探讨其可能机制。方法： 分离乳鼠心肌细胞，进行离体培养。用95%N2与5%CO2混合气体造成缺氧环境，建立体外细胞缺氧模型，使细胞分别缺氧6 h和12 h。参麦注射液治疗组于缺氧处理前24 h至缺氧结束加入5 mL/L参麦注射液进行干预。首先通过Annexin V-FITC/PI双染法，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。继而使用MTT法观察心肌细胞线粒体活性的改变，并应用激光共聚焦显微镜观察线粒体膜电位，荧光酶标仪检测胞浆内caspase3、7的活性。结果： 随着缺氧时间的延长凋亡细胞增多，参麦注射液能增强缺氧细胞的线粒体活性，维持线粒体膜电位，抑制caspase3、7的激活，从而减少凋亡细胞（P<0.01）。结论： 缺氧可以通过线粒体途径诱发心肌细胞的凋亡，参麦注射液能减少缺氧后细胞凋亡的发生，其机制与维持线粒体膜电位稳定，抑制caspase酶激活，即抑制凋亡的线粒体途径有关。     

促血小板生成素对化学性缺氧诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的:研究促血小板生成素(TPO)对化学性缺氧诱导的大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞凋亡的影响及保护作用。方法:将PC12细胞进行相应实验处理,分为对照组、氯化钴(Co Cl2)处理组、Co Cl2+TPO组及TPO对照组。检测各组PC12细胞的存活率并用Annexin V/PI双染流式细胞术分别检测细胞凋亡率,线粒体膜电位的变化及细胞内活性氧簇的变化。结果:化学性缺氧模拟剂Co Cl2可以明显抑制PC12细胞的生长(P0.01);与对照组比较,Co Cl2组的细胞凋亡率明显升高(P0.05),而Co Cl2+TPO组的细胞凋亡率显著低于Co Cl2组(P0.05);TPO能减少细胞内活性氧簇生成以及抑制细胞线粒体膜电位的降低(P0.01)。结论:TPO能对抗Co Cl2缺氧所致的细胞凋亡,稳定线粒体膜电位,发挥细胞保护作用。     

瘦素对缺氧复氧L02肝细胞凋亡及Fas/FasL表达的影响

目的： 观察瘦素(leptin)对缺氧复氧人正常肝细胞（L02）凋亡的影响。方法: 将L02细胞分别分为正常对照组、单纯缺氧12 h复氧组(IR组)和缺氧12 h复氧加不同浓度的瘦素（分别为100 μg/L、200 μg/L、400 μg/L、800 μg/L 和1 600 μg/L）干预组, 以流式细胞仪分析、DNA缺口末端标记 (TUNEL) 试验、荧光定量 PCR 等方法观察leptin 对L02肝细胞凋亡、Fas/FasL mRNA表达的影响。结果: （1）与正常对照组相比,IR组细胞凋亡率和TUNEL细胞阳性率增加（P<0.01）,加用不同浓度瘦素干预组的细胞凋亡率和TUNEL细胞阳性率与IR组相比明显下降（P<0.05）;（2）与正常对照组相比,IR组 L02 细胞中Fas/FasL mRNA表达明显上调(P<0.01);加用不同浓度瘦素干预组与IR组相比,Fas/FasL mRNA表达下降,以400 μg/L瘦素作用明显,结果有显著差异（P<0.05）。结论: 瘦素能减轻缺氧复氧培养L02肝细胞的凋亡,其机制可能与其下调细胞中Fas/FasL mRNA的表达有关。     

2型登革病毒诱导RAW264.7细胞凋亡的机制及凋亡对病毒复制的影响

 目的：探讨2型登革病毒（DENV2）感染能否诱导RAW264.7细胞凋亡,并初步探讨凋亡对病毒复制的影响。方法：用DENV2感染RAW264.7细胞,MTT检测细胞活性,Hoechst 33342染色检测细胞核变化,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测caspase-3和caspase-8活化片段的变化,比色法检测caspase-9活性变化,JC-1染色检测线粒体膜电位变化,Z-VAD-FMK抑制细胞凋亡后以TCID50检测感染细胞上清病毒滴度。结果：DENV2感染RAW264.7细胞24 h、36 h及48 h后细胞活性受到抑制,免疫荧光检测有核固缩现象,流式细胞术检测发现病毒感染诱导了细胞凋亡,Western blotting检测发现活化caspase-3和caspase-8的表达增加,caspase-9活性也增加,JC-1染色发现病毒感染诱导RAW264.7细胞线粒体膜电位降低,用Z-VAD-FMK抑制凋亡后感染细胞上清病毒滴度增加。结论：登革病毒感染可以通过内、外源性途径诱导RAW264.7细胞发生凋亡;凋亡发生抑制了病毒的产生。     

沉默Bax基因对TNF-α诱导人肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响

目的:运用RNA干扰(RNAi)技术沉默人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549的B细胞淋巴瘤-2相关基因(Bax),探讨Bax在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导A549细胞凋亡中的作用。方法:体外培养A549细胞,利用脂质体LipofectamineTM2000将化学合成的Bax小干扰RNA(siRNA)转染入A549细胞,给予10μg/LTNF-α刺激24h,RT-PCR检测bax mRNA的表达,Western blotting和免疫组化检测Bax蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果:化学合成的Bax siRNA抑制了A549细胞Bax mRNA和蛋白的表达(P0.05),流式细胞术显示BaxsiRNA组的细胞凋亡率明显低于TNF-α组和阴性对照siRNA组(P0.05)。结论:体外实验证明Bax的高表达在TNF-α诱导A549细胞凋亡中发挥了重要的促凋亡作用,利用RNAi技术沉默Bax基因可以有效抑制由TNF-α介导的A549细胞凋亡。     

缺氧/复氧诱导细胞凋亡及其调控

缺氧/复氧诱导细胞凋亡与其诱导细胞产生的复杂的生理反应,如线粒体细胞色素C释放、活性氧生成及线粒体Ca2+向胞质转移等密切相关,这些生理异常均直接或间接地启动了细胞凋亡;缺氧/复氧诱导细胞凋亡过程受Bcl-2家族蛋白、能量代谢、缺氧诱导因子以及缺氧反应基因等多因素的调控.     

缺氧诱导的心肌细胞凋亡及一氧化氮的保护作用

目的　研究缺氧在新生大鼠心肌细胞凋亡中的作用及一氧化氮 (NO)的保护作用。方法　取体外培养的新生大鼠心肌细胞置 95 0mL/LN2 ,5 0mL/LCO2 孵箱中培养16 ,32和 48h ,造成缺氧损伤的细胞模型 ,观察凋亡发生的情况 ;将NO供体SNAP加入培养基中 ,使其终浓度为 10 0μmol/L ,置于上述缺氧环境中培养 16 ,32和 48h ,检测细胞凋亡。结果在缺氧条件下培养 16 ,32 ,48h后 ,心肌细胞的凋亡率分别为 :( 2 9± 0 5 ) % ,( 6 2± 0 8) %和 ( 2 6 6±3 0 ) % ;而加入NO供体后 ,凋亡率分别为 :( 0 2± 0 3) % ,( 3 4± 0 4) %和 ( 11 8± 1 2 ) %。结论凋亡是心肌细胞缺氧损伤的主要形式 ;NO对缺氧引起的心肌细胞凋亡有保护作用     

一种神经元体外缺氧诱导凋亡模型的建立

目的： 在不改变细胞生长环境条件下，建立一种体外培养大鼠皮层神经元缺氧诱导细胞凋亡模型。方法：取新生鼠培养第 8 d 的皮层神经元，采用不改变原培养基成分，将细胞置于缺氧环境(密闭容器内，抽取成真空并维持 30 min，然后充95%N2、5%CO2)中分别培养0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0和 24 h 后，于不同时间取出， Hochest33258神经元核染色观察凋亡小体及凋亡细胞核，抽提DNA琼脂糖电泳检测DNA梯形条带，以明确导致皮层神经元凋亡的缺氧时间。结果和结论：缺氧 0.5 h 后即可见DNA梯形条带形成，缺氧 1 h 后即可见神经元细胞核固缩、细胞核凋亡小体形成。在不改变细胞培养基及其它成分的条件下，平均缺氧 1 h 即可诱导体外培养的神经元细胞凋亡，成功地建立起一种体外培养大鼠皮层神经元缺氧诱导神经元凋亡模型，而且重复性好，可以作为体外缺氧/缺血诱导神经元凋亡的良好平台。     

VEGF基因对缺氧诱导的内皮细胞凋亡和坏死的影响

采用缺氧诱导体外培养血管内皮细胞凋亡模型, 用脂质体介导的基因转移法将含血管内皮生长因子(VEGF)cDNA的真核表达载体pSVI21 导入血管平滑肌细胞(VSMC) 中, 取此VSMC条件培养液, 再行血管内皮细胞(VEC) 培养, 用透射电镜、原位末端标记和流式细胞仪分析法观察VEGF对凋亡产生的影响。结果发现: 缺氧组凋亡发生率明显增加, 而加用转基因VSMC条件培养液后凋亡发生率明显减少, 并可减轻缺氧致内皮细胞超微结构的改变。结果表明: VEGF可减少缺氧诱导血管内皮细胞凋亡的产生, 保持血管内皮细胞的完整, 有益于防止或减少缺氧时内皮受损及内皮功能紊乱     

左旋卡尼汀对缺氧/复氧诱导的心肌细胞氧化、凋亡影响的体外研究

目的：探讨左旋卡尼汀（L-carnitine）对缺氧/复氧（A/R）诱导的乳鼠心肌细胞抗氧化、抗凋亡效应及其可能的作用机制。方法： 采用原代培养乳鼠心肌细胞作为模拟缺血再灌注损伤实验模型，实验分3组：①正常对照组（control）；②A/R组:缺氧120 min,复氧240 min;③L-carnitine组：A/R前2 h加用L-carnitine设4个浓度梯度，1组20 mg/L，2组50 mg/L，3组100 mg/L，4组200 mg/L。观察各组细胞经A/R损伤后，细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量、琥珀酸脱氢酶（SDH）活性的变化情况，并用流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率，透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果： A/R组SOD活性、SDH活性明显低于对照组，MDA含量、细胞凋亡率均高于对照组(P＜0.05）；在L-carnitine用药组，随给药浓度的增加，MDA含量逐渐恢复正常，SOD活性、SDH活性逐渐回升，而且细胞凋亡率下降，各药物治疗组与A/R组比较各实验指标均显著差异(P＜0.05)；A/R组心肌细胞超微结构损伤明显重于药物治疗组。结论:左旋卡尼汀对心肌细胞具有保护作用，其作用在一定范围内呈剂量依赖关系。     

激活TLR2通过促进神经细胞死亡诱导假激酶表达诱导肺上皮细胞凋亡

目的探讨特异性激活Toll样受体2(TLR2)对于小鼠MLE-12肺上皮细胞发生细胞凋亡的影响及其潜在的分子机制。方法应用(0、1、3.3、10、33)ng/mL的TLR2特异性配基PAM3CYS4处理24 h或用33 ng/mL PAM3CYS4处理0、8、16、24、36、48 h,激活肺上皮细胞MLE-12的TLR2,使用Western blot法检测神经细胞死亡诱导假激酶(NIPK)和活性caspase-3的蛋白表达,用TUNEL凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡的情况。结果与正常培养的MLE-12细胞相比,特异性激活TLR2可以促进NIPK和活性caspase-3的表达增加,细胞凋亡的阳性细胞数目增加;使用siRNA技术特异性抑制NIPK的表达后,显著抑制活性caspase-3表达,凋亡细胞数减少。结论特异性激活TLR2可增加NIPK的表达,促进肺上皮细胞发生凋亡。     

缺氧复氧对肠上皮细胞凋亡指数及线粒体膜电位的影响

观察缺氧复氧对IEC-6(肠上皮)细胞凋亡和线粒体膜电位的影响,探讨其细胞损伤的机制.建立IEC-6细胞缺氧复氧损伤模型;用流式细胞仪检测细胞凋亡指数,采用激光共聚焦显微镜测定线粒体膜电位变化.结果表明IEC-6细胞缺氧复氧损伤后,细胞凋亡指数明显升高(P<0.01),线粒体膜电位明显降低(P<0.01).     

程序化细胞死亡因子5对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和自噬的影响及机制

目的:探讨程序化细胞死亡因子5(PDCD5)对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞凋亡和自噬的影响及其作用机制。方法:以H9c2心肌细胞系为研究对象,建立H/R损伤模型,采用RNA干扰方法抑制PDCD5的表达,MTT法检测心肌细胞的存活率,TUNEL显色法检测细胞凋亡率,RT-qPCR和Western blot法分别检测mRNA和蛋白的表达水平。结果:H/R损伤的H9c2心肌细胞中,PDCD5表达水平升高,同时细胞的存活率降低,细胞凋亡率和自噬水平增加,而PDCD5沉默能够增加细胞存活率,同时减少细胞凋亡率,促进Bax表达且抑制抑Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及自噬相关蛋白beclin-1的表达。此外,沉默PDCD5可通过降低p-P65的蛋白水平抑制NF-κB通路。结论:沉默PDCD5通过阻断NF-κB信号通路而抑制H/R损伤诱导的心肌细胞凋亡和自噬,从而保护心肌细胞。