地高辛原位杂交显示锌转运体 3 mRNA 在脑、脊髓和脊神经节中的分布

目的:为研究锌转运体 3(ZnT3) 在神经系统功能中的作用提供形态学依据.方法:制备带有地高辛标记物的 ZnT3反义 RNA 探针,取雄性 SD 大鼠脑、脊髓和脊神经节行冷冻切片,作 ZnT3 mRNA 原位杂交组织化学显色,杂交后用 AKP标记的抗地高辛抗体显色.结果:脑内 ZnT3 mRNA 主要分布于海马结构,包括街状回颗粒细胞和 CAl～CA4 区的锥体细胞,在梨状皮质、扣带后皮质中也有分布,显示的细胞较小;腩干中也有 ZnT3 mRNA 分布,面神经核处分布较多,网状结构中有少量分布;脊髓灰质前角内有少数胞体较大的细胞呈 ZnT3 mRNA 阳性;脊神经节内的多数神经元呈 ZnT3 mRNA 强阳性.结论:ZnT3 mRNA 主要分布于海马、大脑皮质、杏仁核、脑干网状结构等可塑性较强结构和周围神经神经元中,提示ZnT3 可能在学习、记忆、初级感觉传入和肌运动调控等方面发挥重要作用.     

人体脊髓节段和脊神经节观测

成人尸体１５具,其中男尸６具,女尸９具,共３０侧,分别去其头、颈和四肢,取出胸腔器官,从背部人路进行解剖,直至切除椎弓,暴露硬膜囊和椎间孔,打开硬膜囊,并追随后根直至椎间孔处的脊神经节,剥去包膜,清理周围组织,用游标卡尺测量第１胸髓上缘至第５腰髓下缘长度,胸腰各脊髓节段的长度和横径,胸腰各脊神经节的长度和最大横径。数据经统计处理后列于附表。结果显示：（１）脊髓节段长度从Ｔ１向下逐渐变长到Ｔ９达到最高值,此后逐渐变短到Ｌ５达最低值;（２）脊髓节段的横径从Ｔ１向下逐渐变小,Ｔ７～Ｔ１０稳定在一个低水…     

大鼠消化道促性腺激素释放激素受体mRNA的原位杂交研究

目的　探讨大鼠消化道是否存在 Gn RH受体 m RNA及其定位。　方法　用原位杂交组织化学法。　结果　胃底腺壁细胞、胃小凹上皮细胞可检测到较强的 Gn RH受体 m RNA杂交信号。3段小肠绒毛上皮细胞、小肠腺细胞可检测到较强的 Gn RH受体 m RNA杂交信号。盲肠、结肠和直肠的粘膜上皮细胞、肠腺上皮细胞也能检测到 Gn RH受体 m RNA杂交信号。信号物质均分布在胞质内 ,胞核呈阴性。　结论　大鼠消化道能合成 Gn RH受体。Gn RH也是一种胃肠激素 ,它由消化系统自身合成 ,又作用于胃肠道参与胃肠功能的调节     

神经生长因子在大鼠心内神经节的表达

目的 观察成年和中老年大鼠心内神经节神经生长因子(NGF)阳性神经元的存在及其变化。方法 免疫组织化学法。结果 成年及巾老年大鼠心内神经节均存在NGF阳性神经元,但中老年大鼠心内神经节NGF阳性神经元明显减少,表达明显降低。结论 心房后壁心内神经节存在NGF阳性神经元,并随年龄增加表达减少,提示NGF表达的减少可能与心脏功能的退化相关。     

含Calbindin－D28K mRNA神经元在大鼠脊髓中的分布──原位杂交组织化学法观察

用原位杂交组织化学技术，对大鼠脊髓内含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ＫｍＲＮＡ的神经元的分布状况进行了观察。发现含Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ＫｍＲＮＡ的神经元见于脊髓灰质的各层，但是，不同区域或核团中所含阳性神经元的数量和标记强度各不相同。其中含强阳性神经元的部位有：Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ层及前角外侧运动柱的内侧部；含中等阳性神经元的部位有：Ⅲ、Ⅷ层及中间带；有的区域仅含弱阳性神经元，如：Ⅵ层及中央区，而中间带外侧核及前角的大型运动神经元未见到阳性杂交信号。Ｃａｌｂｉｎｄｉｎ－Ｄ２８ＫｍＲＮＡ在大鼠脊髓内的区域特异性分布特点，提示其在神经系统的某些生理功能中可能有重要作用。     

大鼠膈神经传出和传入神经成分在脊髓内的分布

采用HRP追踪法,对成年大鼠膈神经运动纤维的起源和初级传入神经元胞体的位置及在其中枢突脊髓的投射进行了观察。结果表明,膈神经运动纤维在脊髓标记(膈核)主要分布在注射侧C_3-C_5脊髓节段的前角。隔神经感觉纤维初级传入标记的神经元见于注射侧C_3-C_6后根节,其中C_4标记的细胞数最多。     

新生大鼠脊神经节与心肌细胞联合培养的光镜观察

将新生大鼠的脊神经节与心肌细胞进行联合培养，用相差显微镜和Ｈｏｌｍｅｓ还原银染色观察了神经元的生长以及神经纤维与心肌细胞之间的关系。脊神经节与心肌细胞联合培养７２￣９６小时可观察到神经纤维终止于搏动的心肌细胞表面。神经节组织块周围有许多神经纤维在心肌细胞表面相互交织成网状。交叉的神经纤维相互粘连在一起，终止于搏动的心肌细胞表面的一条神经纤维移动将会牵动邻近的交叉神经纤维网。Ｈｏｌｍｅｓ还原银染色结     

大鼠脊髓和后根节内5—HT1A,2A受体mRNA阳性神经元的分布

目的 观察大鼠脊髓及后根节内５－ＨＴ１Ａ,２Ａ受体ｍＲＮＡ阳性神经元的分布。方法 原位杂交组织化学技术。结果 （１）５－ＨＴ１Ａ受体ｍＲＮＡ阳性神经元分布于脊髓灰质各层,主要见于一角浅层（Ⅰ、Ⅱ层）及Ⅲ、Ⅳ层,Ⅴ、Ⅶ层和Ｘ层也有散在分布。在角（Ⅸ层）内仅有小量阳性神经元;（５）５－ＨＴ２Ａ受体ｍＲＮＡ阳性神经元的分布较局限,主要见于后角浅层及前角（Ⅸ层）神经元,在其他各层仅呈散在分布。在大鼠后根节内观察到：（１）１０．４％的后根节细胞呈５－ＨＴ１Ａ受体ｍＲＮＡ阳性,阳性细胞以中、小型节细胞为主;（２）１７．４％的后根节细胞呈５－ＨＴ２Ａ受体ｍＲＮＡ阳性,阳性细胞也以中、小型节细胞为主。结论 ５－ＨＴ１Ａ和５－ＨＴ２Ａ受体在脊髓和后根节内具有不同的分布特点,它们在介导５－羟色胺在脊髓水平的镇痛及在外周的致痛作用中     

Slit-Robo GTPase激活蛋白在坐骨神经切断后脊神经节的表达变化

目的:观察Slit-Robo GTP酶激活蛋白(srGAP)在成年哺乳类动物脊神经节(DRG)的表达及其变化,了解srGAP在神经再生中的作用.方法: 应用RT-PCR、免疫印迹法、免疫组织化学方法,检测成年SD大鼠正常和坐骨神经切断后1、3、7d 的DRG srGAP1、2、3 mRNA及其蛋白的表达.结果: srGAP1、3 mRNA在正常DRG均有弱表达,而srGAP2不表达;坐骨神经切断后3、7d,srGAP1、3 mRNA表达增强,以术后7d最高;免疫组织化学显示,srGAP1在神经元胞体、突起均有表达,在DRG内胶质细胞亦有表达,坐骨神经切断后3、7d表达增强.结论: 本研究结果说明Slit-Robo信号通路存在于大鼠周围感觉神经元内,周围神经损伤可激活此信号通路.     

Nerve Growth Factor Involves Mutual Interaction between Neurons and Satellite Glial Cells in the Rat Trigeminal Ganglion

Nerve growth factor (NGF) plays a critical role in the trigeminal ganglion (TG) following peripheral nerve damage in the oral region. Although neurons in the TG are surrounded by satellite glial cells (SGCs) that passively support neural function, little is known regarding NGF expression and its interactions with TG neurons and SGCs. This study was performed to examine the expression of NGF in TG neurons and SGCs with nerve damage by experimental tooth movement. An elastic band was inserted between the first and second upper molars of rats. The TG was removed at 0–7 days after tooth movement. Using in situ hybridization, NGF mRNA was expressed in both neurons and SGCs. Immunostaining for NGF demonstrated that during tooth movement the number of NGF-immunoreactive SGCs increased significantly as compared with baseline and reached maximum levels at day 3. Furthermore, the administration of the gap junction inhibitor carbenoxolone at the TG during tooth movement significantly decreased the number of NGF-immunoreactive SGCs. These results suggested that peripheral nerve damage may induce signal transduction from neurons to SGCs via gap junctions, inducing NGF expression in SGCs around neurons, and released NGF may be involved in the restoration of damaged neurons.     

神经生长因子在成年猴脊髓的表达--免疫组织化学研究

目的探讨神经生长因子(NGF)在成年猴脊髓的表达分布情况,为成年猴脊髓存在此生长因子的表达提供免疫组织化学证据。方法云南成年健康雄性猕猴5只,平均体重6kg左右,氯氨酮(0．25ml／kg)肌肉注射麻醉后,Zamboni液经心脏主动脉插管灌注固定动物,取T8脊髓节段入4％多聚甲醛后固定(4℃)6小时,在-20℃恒冷切片机下制作20μm厚的连续冰冻切片,间隔取片后分别以抗NGF抗体行免疫组化ABC染色。在Olympus光学显微镜下观察NGF在猴脊髓的表达分布情况。结果1．NGF的免疫阳性反应产物在成年猴脊髓腹角、背角神经元均有分布。2．NGF的免疫阳性反应产物在猴脊髓背角Li ssauer束有分布,表达NGF的Li ssauer束因染色而呈明显的毛刷状／发束状。3．NGF阳性神经膨体分布于猴脊髓背角Ⅰ、Ⅱ板层。4．NGF的免疫阳性反应产物在成年猴脊髓中央管(X板层)均有分布。结论成年猴脊髓存在NGF的表达,提示其可能在成年猴脊髓的生理过程中发挥作用。     

坐骨神经损伤后AChE在大鼠脊神经节与脊髓前、后角中动态变化的分析比较

结扎切断SD大鼠左侧坐骨神经,在一定的存活时间序列里,用Oympus显微镜的测光装置对经EL-Badawi改良法显色处理后的脊神经节切片的乙酰胆碱酯酶(ACHE)进行了相对变化率(/Xc-1)×100％的测定。结果发现:坐骨神经切断术后,术侧脊神经节细胞体出现膨胀,缩小,又增大之变化;AChE于术后4天,增高+19.4％(P<0.05);术后15天降低为-38.6％(P<0.01);术后60天再次升高达+61.3％(P<0.05);AChE的变化呈双峰夹谷状。本文推测:脊神经节细胞体的变化可能与AChE的变化有一定的关系。同时分析比较了AChE在脊神经节与在脊髓前后角中变化的异同性。     

大鼠脊髓压迫损伤后COX-2基因和蛋白的表达

目的观察大鼠脊髓压迫损伤后COX-2mRNA和蛋白在脊髓组织内表达的时间特征,以及COX-2的空间分布特点。方法以压迫装置致脊髓损伤后,在伤后不同时间点(30min、3h、6h、24h、72h、1w)分别应用RT-PCR、Western blotting、免疫组化技术检测COX-2mRNA和蛋白表达和分布。结果RT-PCR和Western blotting显示,COX-2mRNA和蛋白伤后30min表达开始增加,于伤后6h达到峰值,伤后1w表达接近基础水平。免疫组化提示,COX-2蛋白在假手术组表达仅见于脊髓血管内皮细胞,伤后COX-2蛋白表达见于损伤区附近脊髓灰质内的神经元和血管内皮细胞,损伤中心部位COX-2免疫阳性细胞少见。结论脊髓压迫损伤早期可快速诱导COX-2基因的表达上调和蛋白的合成,伤后COX-2蛋白分布发生变化,主要位于脊髓神经元和血管内皮细胞。     

VEGF和HIF-1在糖尿病大鼠坐骨神经的表达及NGF的调节作用

目的探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)及缺氧诱导因子-1(H IF-1)在糖尿病周围神经病变中的表达及神经生长因子的调节作用。方法大鼠糖尿病造模后分成糖尿病(DM)组及神经生长因子(NGF)治疗组,治疗2周后采用蛋白印迹及免疫组化法观察坐骨神经VEGF及H IF-1动态变化。结果蛋白印迹显示正常组坐骨神经纤维无VEGF和H IF-1表达,DM组VEGF及H IF-1表达呈阳性,NGF治疗组无表达。免疫组织化学结果显示,坐骨神经VEGF阳性产物位于轴突及雪旺氏细胞中,DM组积分光密度明显高于正常组及NGF组(P<0.01)。结论局部应用外源性NGF减少糖尿病大鼠坐骨神经VEGF和H IF-1的表达。     

In Situ Hybridization Evidence for a Paracrine/Autocrine Role for Insulin-Like Growth Factor-I in Tooth Development

Abstract

Insulin-like growth factor-I(IGF-I) has both metabolic and growth-promoting activities in many cell and tissue types. Although IGF-I is present in serum, it is also thought to have important autocrine and paracrine functions. Immunohistochemistry for IGF-I and its receptor have shown that IGF-I is synthesised locally by the tooth forming cells which exhibit both the IGF-I and the growth hormone receptors. This concept required to be tested by in situ hybridization. Using a digoxigenin-labelled synthetic oligodeoxyribonucleotide probe for IGF-I, we investigated the distribution of IGF-I mRNA in the continuously erupting rat incisor by in situ hybridization. The distribution and intensity of the hybridization signal varied with the developmental stage of the rat incisor. The cells of the apical loop expressed a positive hybridization signal, but the earliest polarised odontoblasts and pre-ameloblasts did not show any positive signal. The onset of enamel secretion was accompanied by a strong hybridization signal in the secretory ameloblasts as well as the odontoblasts. Maturation ameloblasts also demonstrated IGF-I message in their cytoplasm as well as their nuclei. The cells of the pulp and the dental follicle were consistently negative. However, in the adjacent alveolar bone, the signal was high in the osteoblasts and osteoclasts. These findings support the notion of paracrine or autocrine function for IGF-I in tooth development.     

Fixation/Permeabilization: New Alternative Procedure for Immunofluorescence and mRNA In Situ Hybridization of Vertebrate and Invertebrate Embryos

A new procedure is described to visualize the spatial pattern of expression of proteins and mRNAs in cryosections or whole‐mounted leech, Drosophila, zebrafish, and chick embryos. Our principal contribution is in the use of a nonconventional fixation/permeabilization procedure based on the use of formaldehyde or paraformaldehyde combined with a short C‐chain carboxylic acid. Detergents, methanol, and proteinases were omitted. Hybridization procedures were modified from those of routinely used protocols developed for the same embryos. Results showed that cytoskeletal and other cytoplasmic proteins, as well as different mRNAs, were clearly visualized in the expected regions of the embryos. Our procedure has several advantages over currently used protocols: is simpler, produces better general preservation of cells, yields reliable results, and can be used for embryos of different taxa at different developmental stages. It is hypothesized that short C‐chain aliphatic carboxylic acids modulate the cross‐linking effect of aldehyde fixatives on cell proteins. Developmental Dynamics 242:493–507, 2013. © 2013 Wiley Periodicals, Inc.     

大鼠脊髓损伤及继发损伤时脊髓诱发电位与运动诱发电位的变化

本文采用改良Ａｌｌｅｎ’ｓ法，分别以５０ｇ／ｃｍ和１００ｇ／ｃｍ打击大鼠Ｔ１３～Ｌ１脊髓，造成不同程度的脊髓损伤，分别观察伤后２４小时内的ＳｐＥＰ和ＣＭＥＰ的变化，以了解不同程度损伤对ＳｐＥＰ和ＣＭＥＰ的影响及ＳｐＥＰ、ＣＭＥＰ的变化与脊髓继发性损伤发展过程的关系。结果表明：①两种不同程度的脊髓损伤均可造成大鼠脊髓ＳｐＥＰ，ＣＭＥＰ的明显变化，尤以ＳｐＥＰ变化明显。损伤越重，电位改变越明显．②在脊髓损伤后１～２４小时内，伤后１０分钟ＳｐＥＰ，ＣＭＥＰ波幅却有明显降低，４～８小时进一步降低。两次降低有明显差异。ＳｐＥＰ峰潜伏时延长，以４～８小时显著。表明原发损伤后在受损部位存在继发性损伤，提示阻止继发损伤的时间应早于伤后４小时，并尽可能提前。     

神经生长因子对大鼠心肌梗塞后胆碱能神经的保护作用

目的　观察神经生长因子(NGF)对大鼠心肌梗塞后胆碱能神经的影响,探讨NGF对心肌梗塞的可 能治疗作用。方法　SD大鼠20只制心梗模型,其中10只心梗后给予NGF为实验组,2天后取材,同时取正常心肌 作对照。以Karnovsky Roots法,显示胆碱能神经纤维,应用多功能真彩色病理图像分析系统分析胆碱能神经纤维 密度。结果　心梗左心室心肌梗塞区及梗塞周围区存活心肌中胆碱能神经纤维密度比正常组明显降低(P<0. 01);实验组应用NGF后胆碱能神经纤维密度较心梗组升高。结论　神经生长因子能增加大鼠心肌梗塞后胆碱能 神经纤维的密度,可能对心梗有治疗作用。     

巢蛋白在胚胎及新生大鼠脊髓的表达

目的　检测不同发育时期巢蛋白 (nestin)在脊髓神经干细胞的表达水平 ,探讨脊髓神经干细胞的发育规律 ,为分离、富集和增殖均质的神经干细胞以及后期的研究工作如神经干细胞定向分化及移植治疗等研究提供实验依据。方法　将Wistar大鼠按胎龄及日龄分组 ,剥离脊髓 ,制成单细胞悬液 ,经间接荧光法标记nestin抗原 ,用流式细胞仪检测和分析。结果　从E13到P7整个发育过程中都有nestin抗原的表达 ,呈升高趋势 ,其中P1期表达水平最高。出生后表达下降 ,趋近于 90d(同型对照 )表达水平。结论　巢蛋白在脊髓的表达出现于胚胎早期 ,表达水平随胎龄轻微波动 ,呈升高趋势 ,P1达到高峰 ,出生后表达下降 ,趋于成鼠的微量表达