重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin-dNK对黑色素瘤细胞A-375增殖和凋亡的影响研究

目的构建重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin-dNK,探讨其对黑色素瘤A-375细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同病毒感染复数(MOI)感染黑色素瘤细胞A-375及人正常皮肤细胞HFF;以MTT法检测细胞增殖情况;并以流式细胞术检测细胞凋亡情况,同时设空白对照组。结果重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin-dNK转染后在黑色素瘤细胞A-375中呈特异表达,在人正常皮肤细胞HFF中无表达。黑色素瘤细胞A-375的增殖随MOI增加而逐渐受到抑制,HFF细胞的增殖无明显变化。慢病毒治疗组A-375细胞凋亡明显优于对照组,而对HFF细胞无明显作用。结论重组慢病毒LV-hTERT-tumstatin-dNK可靶向促进黑色素瘤细胞A-375的细胞凋亡,并抑制其增殖。     

姜黄素抑制肾癌ACHN细胞增殖及促凋亡的实验研究

目的观察姜黄素对人肾癌ACHN细胞株增殖及细胞凋亡的影响,探讨姜黄素诱导ACHN细胞株凋亡的作用机制。方法不同浓度姜黄素作用人肾癌ACHN细胞24 h后,应用MTT比色法检测姜黄素对人肾癌ACHN细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测姜黄素诱导细胞的凋亡率;RT-PCR检测姜黄素对ACHN细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65 mRNA表达的影响;Western blot方法检测其对细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65I、κB蛋白表达的影响。结果姜黄素对人肾癌ACHN细胞有明显的抑制作用,可引起细胞凋亡,并且存在剂量和时间依赖;不同浓度姜黄素作用细胞24 h后,Bcl-2、NF-κBP65 mRNA水平下降,Bax mRNA水平升高(P0.05),Bcl-2、NF-κBP65蛋白表达量下降,BaxI、κB蛋白表达量升高(P0.05)。结论姜黄素通过上调IκB,下调NF-κB活性,调控凋亡基因Bcl-2/Bax的表达,抑制人肾癌ACHN细胞的增殖,诱导人肾癌ACHN细胞的凋亡。     

3′,5-二甲酰和厚朴酚诱导人肾癌NC-65细胞凋亡作用研究

目的:通过体外研究厚朴酚衍生物3′,5-二甲酰和厚朴酚(3a)对人肾癌NC-65细胞增殖、凋亡及相关蛋白水平的影响,探讨3a诱导凋亡、抑制肾癌细胞增殖的作用机制。方法:采用CCK-8法检测3a对NC-65细胞生存率的影响;通过Hoechst 33342染色法观察3a刺激细胞24 h后细胞形态学的改变;利用流式细胞术观察3a刺激后细胞凋亡以及周期变化;蛋白免疫印迹技术(Western blotting)检测细胞凋亡及周期相关蛋白的表达水平改变。结果:3a对人肾癌NC-65细胞有明显抑制增殖的作用,呈剂量依赖;3a可使NC-65细胞周期阻滞于G_0/G_1期;经药物处理后,细胞凋亡率随3a浓度增加呈上升趋势;凋亡相关蛋白Bax、活化的caspase-9、caspase-3蛋白以及抑癌蛋白p53等均表达上调。结论:3a可抑制人肾癌NC-65细胞的增殖,导致细胞周期阻滞,诱导细胞凋亡,其机制可能与调节凋亡及周期相关蛋白的表达有关。     

姜黄素通过PPAR-γ途径促进人肾癌细胞的调亡

目的观察姜黄素对人肾癌细胞株A498细胞增殖和凋亡的影响,并探讨PPAR-γ途径在其中的作用。方法姜黄素(10、50、100μmol/L)处理A498细胞12、24、48h。采用MTT法测定细胞活力,并计算肿瘤细胞抑制率,流式细胞术测定细胞凋亡。实时定量PCR和Western Blot分别检测Bcl-2、Bax及PPAR-γmRNA和蛋白的表达。观察PPAR-γ阻断剂GW9662对姜黄素作用的影响。结果姜黄素(10、50、100μmol/L)分别处理人肾癌细胞株A498细胞24、48、72h后,以浓度和时间依赖的方式抑制细胞增殖促进细胞凋亡,同时以浓度依赖的方式下调了A498细胞中Bcl-2的表达,增加了Bax和PPAR-γ的表达。GW9662部分地消除了姜黄素对A498细胞增殖和凋亡的影响。结论姜黄素抑制人肾癌细胞增殖促进其凋亡,其机制涉及到PPAR-γ途径。     

瑞芬太尼通过抑制AKT/mTOR通路阻碍肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:研究瑞芬太尼对肾癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响以及潜在机制.方法:常规培养的ACHN细胞作为参照,噻唑蓝(MTT)实验检测不同浓度瑞芬太尼(1、10、50、100μmol/L)作用的ACHN细胞的增殖;流式细胞术检测各组细胞的凋亡率;Transwell实验检测细胞侵袭、迁移,蛋白质印迹法(Western Bl...     

小干扰RNA对肾癌786-O细胞Survivin表达及其增殖的抑制作用

目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)对人肾癌细胞Survivin基因表达及其增殖、凋亡的影响.方法 设计、合成1对Survivin编码基因序列特异的siRNA,用脂质体包裹转染人肾癌786-O细胞,分不同浓度组(10、50、100 nmol/L),采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot技术检测Survivin mRNA及蛋白表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,免疫组织化学TUNEL法榆测细胞凋亡.结果 Survivin siRNA能有效下调Survivin基因表达水平,抑制了细胞生长,促进其凋亡.并呈剂量依赖性(3组的mRNA 88.3%、62.4%、43.8%,蛋白87.7%、62.4%、46.5%,增殖抑制率11.6%、41.2%、57.5%,凋亡率14.2%、29.4%、38.1%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 Survivin基因siRNA能抑制人肾癌786-O细胞Survivin基因表达,进而抑制其增殖,促进其凋亡.     

小干扰RNA对肾癌786-O细胞Survivin表达及其增殖的抑制作用

目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)对人肾癌细胞Survivin基因表达及其增殖、凋亡的影响.方法 设计、合成1对Survivin编码基因序列特异的siRNA,用脂质体包裹转染人肾癌786-O细胞,分不同浓度组(10、50、100 nmol/L),采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot技术检测Survivin mRNA及蛋白表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,免疫组织化学TUNEL法榆测细胞凋亡.结果 Survivin siRNA能有效下调Survivin基因表达水平,抑制了细胞生长,促进其凋亡.并呈剂量依赖性(3组的mRNA 88.3%、62.4%、43.8%,蛋白87.7%、62.4%、46.5%,增殖抑制率11.6%、41.2%、57.5%,凋亡率14.2%、29.4%、38.1%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 Survivin基因siRNA能抑制人肾癌786-O细胞Survivin基因表达,进而抑制其增殖,促进其凋亡.     

RNA干扰对肾癌细胞端粒酶基因表达和活性的抑制作用及其增殖、凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)对人肾癌细胞端粒酶基因表达、活性的抑制作用及对肾癌细胞增殖、凋亡的影响。方法将针对人端粒酶RNA(hTR)模板区的siRNA(100nmol/L)转染肾癌7860细胞,采用RTPCR检测7860细胞端粒酶mRNA表达,端粒重复序列扩增酶联免疫吸附法检测端粒酶活性,MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学TUNEL法检测细胞凋亡。结果hTRsiRNA处理组7860细胞端粒酶mRNA表达(40.7±1.5)%降低,端粒酶活性(32.7±2.3)%降低,细胞增殖抑制率(63.6±1.6)%增加,凋亡细胞阳性率(39.4±0.6)%增加。分别与阴性siRNA对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论siRNA能抑制人肾癌细胞端粒酶mRNA表达及活性,进而抑制其增殖、促进其凋亡,有望成为肾癌基因治疗的有效工具。     

小干扰RNA对肾癌786-O细胞Survivin表达及其增殖的抑制作用

目的 观察小分子干扰RNA(siRNA)对人肾癌细胞Survivin基因表达及其增殖、凋亡的影响.方法 设计、合成1对Survivin编码基因序列特异的siRNA,用脂质体包裹转染人肾癌786-O细胞,分不同浓度组(10、50、100 nmol/L),采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot技术检测Survivin mRNA及蛋白表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,免疫组织化学TUNEL法榆测细胞凋亡.结果 Survivin siRNA能有效下调Survivin基因表达水平,抑制了细胞生长,促进其凋亡.并呈剂量依赖性(3组的mRNA 88.3%、62.4%、43.8%,蛋白87.7%、62.4%、46.5%,增殖抑制率11.6%、41.2%、57.5%,凋亡率14.2%、29.4%、38.1%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 Survivin基因siRNA能抑制人肾癌786-O细胞Survivin基因表达,进而抑制其增殖,促进其凋亡.     

过氧化物酶体增殖激活物受体γ配体诱导肾癌细胞的凋亡

目的 观察过氧化物酶体增殖激活物受体γ(PPARγ)配体对肾癌细胞凋亡的影响.方法 通过ELISA方法 观察0～100 μmol/L浓度的吡格列酮和曲格列酮(TZDs)对肾癌细胞786-0、A498及正常肾细胞HK-2、HMCC凋亡的影响,Heochst 33342荧光染色、DNA片段化分析检测70.00 μmol/L吡格列酮或80.00 μmol/L曲格列酮处理后肾癌细胞的凋亡,Western blot观察TZDs处理后肾癌细胞凋亡调控蛋白bcl-2/bax的表达变化及Caspase-3活性的改变.结果 超过50.00 μmol/L的TZDs可诱导肾癌细胞出现凋亡,LC_(50)值分别为65.11 μmol/L(曲格列酮/786-O)、67.73 μmol/L(吡格列酮J/786.0)、63.91 μmol/L(曲格列酮/A498)和78.12 μmol/L(吡格列酮/A498),但对正常肾细胞没有影响.荧光染色显示80.00 μmol/L的吡格列酮及70.00 μmol/L的曲格列酮处理后肾癌细胞明显凋亡,伴随bcl-2蛋白的表达水平降低和bax蛋白的增加,Caspase-3的活性明显增强,在48 h可达到基础值的3.5-4.5倍.结论 激活PPARγ可以诱导肾癌细胞的凋亡,PPARγ有可能成为肾细胞癌新的治疗靶点.     

日达仙诱导肾癌细胞株ACHN细胞凋亡的实验研究

目的：探讨日达仙诱导肾癌细胞株ACHN凋亡的抗肿瘤作用的机制.方法：以浓度50～400 mg/L日达仙作用肾癌ACHN细胞24～72 h后,用MTT比色法检测细胞生长活性,用单细胞凝胶电泳法和流式细胞仪分别检测ACHN细胞DNA损伤和凋亡的情况.结果：日达仙能显著抑制肾癌细胞株ACHN细胞的体外生长,呈时间与剂量依赖性;日达仙诱导肾癌细胞株ACHN凋亡.结论：日达仙通过抑制肾癌细胞株ACHN增殖、诱导细胞凋亡等机制,显著抑制肾癌细胞的体外生长.     

姜黄素抑制人肾癌细胞769-P增殖及促凋亡的实验研究

【摘要】 目的 分析不同浓度姜黄素（curcumin，分子式C₂₁H₂₀O₆）对人肾癌细胞769-P的生物学作用及其调控机制。方法 体外培养人肾癌细胞769-P，用不同浓度姜黄素处理24 h后，采用MTT比色法测定姜黄素对细胞的增殖抑制作用，利用倒置显微镜观察细胞的显微形态结构，采用细胞划痕法观察细胞的迁移情况；Western Blot 法检测细胞内Caspase-3、 AIF蛋白质的表达情况；用反转录PCR法检测AIF、Bax mRNA的表达水平。结果 MTT法检测显示姜黄素能显著抑制人肾癌细胞系769-P的增殖，呈现浓度和时间效应关系；倒置显微镜结果显示姜黄素能够使肾癌细胞系的形态学发生改变，呈现出典型凋亡特征如核皱缩、核破裂、核肿胀等形态；细胞划痕实验显示，姜黄素抑制了肾癌细胞系的迁移；RT-PCR实验显示，姜黄素促进了BAX mRNA和AIF mRNA的表达；蛋白杂交实验显示，姜黄素促进了Caspase-3和AIF蛋白的活化，从而促进了凋亡。结论 姜黄素能显著抑制人肾癌细胞的增殖并促进其凋亡，这种生物学效应可能与激活Bax和AIF表达，活化Caspase-3的信号通路有关。     

2-脱氧-D-葡萄糖对人脐静脉内皮细胞的作用

目的观察2-脱氧-D-葡萄糖对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移、管腔形成及细胞凋亡的影响,试图寻找治疗血管瘤的新药。方法用四甲基偶氮唑盐比色法、倒置显微镜下形态学观察、体外划痕实验的方法,观察2-脱氧-D-葡萄糖对人脐静脉内皮细增殖、迁移的作用;用成管法,检测2-DG对血管形成的影响;用流式细胞仪检测2-DG对血管内皮的凋亡影响、结果2-DG作用于人脐静脉内皮细胞后,对其增殖,迁移和成管能力有明显抑制作用,大大地增加细胞的凋亡率,且有显著剂量和时间依赖性．结论2-DG对HUVEC增殖、迁移和成管有显著的抑制作用,且能促使细胞凋亡。     

shRNA 介导的NGF-β下调对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨shRNA介导的神经生长因子β(NGF-β)下调对人胆管癌细胞系QBC939体外增殖与凋亡的影响.方法:构建稳定转染NGF-β shRNA的QBC939细胞系,将细胞分为干扰组(转染NGF-β shRNA组)和对照组(转染空质粒组).以Western blot方法检测细胞转染效果;细胞增殖实验(CCK-8实验)检测细胞增殖能力,单克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡.结果:干扰组细胞较之对照组的细胞增殖、克隆形成能力明显降低,S期细胞明显减少(P＜0.05),凋亡率明显增加(P＜0.05).结论:抑制NGF-β能降低QBC939细胞系的增殖和克隆形成能力,该作用与其阻滞细胞进入S期,促进细胞凋亡有关.     

成纤维细胞生长因子受体抑制剂BGJ398对肾癌细胞生物学行为的影响

目的研究成纤维细胞生长因子(FGFR)抑制剂BGJ398对人源肾癌细胞株OSRC-2增殖、黏附及其对细胞侵袭功能的影响,为肾细胞癌的靶向治疗提供新思路。方法用不同浓度(0、0.1、0.5、1、2、5、10μmol/L)的FGFR抑制剂BGJ398处理体外培养的人源肾癌细胞OSRC-2后,通过CCK8法检测细胞增殖变化;激光共聚焦显微镜观察BGJ398对细胞的活力和骨架的影响;Transwell小室法检测BGJ398对人肾癌细胞侵袭能力的影响。结果 BGJ398能明显抑制OSRC-2细胞增殖。CCK8结果显示BGJ398处理人肾癌细胞后,细胞增殖受到抑制,并具有剂量依赖性。Live/Dead荧光染色实验证明BGJ398可显著抑制肾癌细胞的增殖及活力(P0.01)。细胞黏附及Transwell实验结果表明,BGJ398可抑制细胞骨架的重塑及侵袭效应(P0.01)。结论 BGJ398对肾癌细胞的增殖,活力和侵袭力具有明显的抑制作用。抑制FGFRs有望成为肾癌治疗的新靶点,为FGFR特异性抑制剂成为潜在的肾癌靶向治疗药物提供实验证据。     

血管新生抑制剂TNP-470对鼠ACHN肾细胞癌增殖与凋亡的影响

目的 :探讨血管新生抑制剂TNP 4 70对ACHN肾细胞癌增殖与凋亡状态的影响。方法 :采用TNP 4 70 (4 0mg·kg-1·0 .2ml-1)皮下注射治疗ACHN肾细胞癌荷瘤裸鼠 ,观察肿瘤生长情况 ,进行细胞增殖与细胞凋亡的研究。结果 :TNP 4 70治疗组与对照组相比 ,ACHN肾癌生长明显减慢 ,肿瘤细胞凋亡指数明显增加 (P <0 .0 1) ,增殖指数无显著变化 (P >0 .0 5 )。肿瘤体积与凋亡指数间存在负相关 (r =- 0 .85 4 0 ,P <0 .0 1)。结论 :TNP 4 70对ACHN肾癌有显著的抑制肿瘤生长作用 ,可能与肾癌细胞凋亡增加有关     

地西他滨对恶性黑色素瘤细胞A375增殖、凋亡及侵袭的影响

目的:研究甲基化抑制剂地西他滨对人恶性黑色素瘤细胞A375增殖、凋亡及侵袭的影响。方法:采用不同浓度的地西他滨对A375细胞进行干预,用MTT实验检测地西他滨对细胞增殖的影响,用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化,划痕愈合实验及Transwell小室实验观察细胞体外迁徙侵袭能力的改变。结果:与对照组相比,地西他滨组A375细胞的增殖活性受到明显抑制,凋亡比例显著增加,体外迁移和侵袭能力减弱,差异有统计学意义(P0.05),地西他滨对A375细胞周期的影响则无显著差异(P0.05)。结论:地西他滨能抑制恶性黑色素瘤A375细胞的增殖,其抗肿瘤效应有可能成为恶性黑色素瘤治疗的新途径。     

姜黄素对人肾癌ACHN细胞放疗增敏作用的实验研究

目的研究姜黄素对人肾癌ACHN细胞放射增敏作用并探讨其作用机制。方法不同浓度姜黄素作用于ACHN人肾癌细胞24h后,MTT法检测姜黄素药物毒性;克隆形成实验观察其对放射敏感性的影响;流式细胞术检测姜黄素诱导细胞的凋亡率、细胞周期分布。结果姜黄素对人肾癌ACHN细胞有明显的抑制作用,可引起细胞的凋亡,且存在剂量和时间依赖;较低浓度的姜黄素（5μmol和10μmol）即可降低放射后ACHN细胞的克隆形成率,其放射增敏比分别为1．61及2．36;姜黄素及姜黄素联合辐射组的细胞周期阻滞在辐射敏感时相G2／M期;结论低剂量的姜黄素对人肾癌ACHN细胞有放射增敏作用,其机制可能与其引起细胞的凋亡增加,细胞周期阻滞有关。     

蒲葵子提取物对膀胱癌细胞增殖凋亡的影响及其相关机制

目的:探讨蒲葵子提取物对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及其相关机制。方法:将T24细胞分别用含蒲葵子提取物且终浓度分别为0、25、50、100 mg/L的培养液培养,分别记为对照组和蒲葵子低、中、高剂量组。用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞存活率;克隆形成实验检测细胞克隆形成数量;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法...     

连接粘连分子3对肾癌细胞迁徙和凋亡的作用机制

目的研究连接粘附分子3(JAM3)在肾癌细胞中的表达情况以及在调控肾癌细胞迁徙和凋亡过程中的可能作用及机制。方法①RT-qPCR和Western-blot检测JAM3的表达水平;②siRNA、流式细胞仪、细胞划痕实验及细胞迁移实验分析其对RCC迁移和凋亡的影响;③Western-blot检测E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白、整合素β1和基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达水平,初步探究JAM3影响癌细胞迁移的可能机制。结果①与正常肾小管上皮细胞相比,人肾癌细胞中的JAM3表达显著上调(P<0.05);②JAM3敲除可促进肾癌细胞的凋亡(P<0.05)及抑制肾癌细胞迁移(P<0.05);③JAM3基因敲除后,肾癌细胞中E-粘连蛋白的表达增加,N-粘连蛋白、整合素β1、MMP-2、Bcl-2的蛋白水平下降(P<0.05)。结论 RCC中JAM3表达上调,并可能通过调控E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白、整合素β1、MMP-2表达水平抑制癌细胞凋亡和促进其迁移。