miR-185通过靶向调控TAZ基因抑制非小细胞肺癌H1299细胞增殖、迁移和侵袭

目的 研究miR-185对肺癌H1299细胞增殖、迁移和侵袭的影响和其潜在的分子机制.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测转录共激活因子(TAZ)和miR-185 mRNA的表达,Western印迹检测TAZ蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法测定H1299细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证miR-185对TAZ转录活性的影响.结果 与人正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,TAZ在肺癌细胞H1299中的表达量显著升高(P<0.05),而miR-185的表达量则显著下降(P<0.05);过表达miR-185可以抑制H1299细胞增殖、迁移和侵袭.Western印迹和qRT-PCR结果均显示,在H1299细胞中,过表达miR-185时,TAZ蛋白和mRNA表达量均显著下降(P<0.05);下调miR-185表达时,TAZ蛋白和mRNA表达量均显著上升(P<0.05).双荧光素酶报告实验表明,miR-185抑制TAZ的表达;沉默TAZ基因表达可抑制肺癌H1299细胞增殖、迁移和侵袭;同时过表达miR-185和过表达TAZ则会促进H1299细胞增殖、迁移和侵袭.结论 miR-185通过靶向TAZ基因表达调控H1299细胞增殖、迁移和侵袭,miR-185有望成为肺癌分子诊断和治疗的靶点.     

miR-539通过靶向调控DCLK1抑制非小细胞肺癌的侵袭能力

目的 探讨非小细胞肺癌组织中miR-539的表达水平及其抑制肺癌细胞侵袭的作用机制.方法 通过基因表达数据库dbDEMC分析miR-539在非小细胞肺癌组织及正常肺组织中的表达量差异.根据235例miR-539高表达的非小细胞肺癌患者和102例miR-539低表达的非小细胞肺癌患者随访资料,分析miR-539与非小细胞...     

miR-202通过靶向EGFR抑制A549细胞的增殖和侵袭

目的探索miR-202对非小细胞肺癌A549细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法实验分为5组,包括miR-NC组,shNC组,miR-202组,shEGFR组和miR-202+EGFR组。五组细胞分别转染miR-NC,sh-NC,miR-202 mimics,shEGFR和miR202+pcDNA3.1-EGFR。采用双荧光酶报告基因法验证miR-202对EGFR的靶向性。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法用于检测A549细胞中mRNA和蛋白的表达。采用流式细胞术检测细胞周期。细胞克隆形成和Transwell法用于检测细胞的增殖和侵袭能力。结果双荧光素酶报告基因实验证实miR-202与EGFR的3’-UTR片段结合。miR-202组的miR-202的表达显著高于miR-NC组(P0.05)。转染miR-202 mimics或shEGFR可以显著下调EGFR的mRNA和蛋白表达水平(P0.05),而转染pcDNA3.1-EGFR可以上调因转染miR-202 mimics而下调的EGFR mRNA和蛋白表达水平(P0.05)。过表达miR-202或者敲低EGFR可以使A549的细胞周期停滞在G0/G1期(P0.05),同时抑制A549细胞的增殖和侵袭能力(P0.05)。通过转染pcDNA3.1-EGFR可以逆转过表达miR-202对A549细胞增殖和侵袭的抑制(P0.05)。过表达miR-202通过靶向EGFR显著下调p-PI3K/PI3K,p-AKT/AKT和p-ERK1/2/ERK1/2等蛋白表达的比值(P0.05)。结论 miR-202靶向EGFR抑制PI3K/AKT和MAPK/ERK信号通路,影响A549细胞的增殖和侵袭,可能成为非小细胞肺癌临床治疗的新靶点。     

miR-26b-5p靶向VEGF抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的 探讨miR-26b-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法 培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和非小细胞肺癌细胞A549,通过qPCR检测BEAS-2B和A549细胞中miR-26b-5p和VEGF mRNA的表达水平。通过Western Blot检测BEAS-2B和A549细胞中E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白的表达水平。生物信息学预测VEGF与miR-26b-5p的靶向关系。使用脂质体法将NC-mimic和miR-26b-5p-mimic转染A549细胞,通过CCK8法、EDU实验检测miR-26b-5p对细胞生长的影响;通过划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-26b-5p对细胞迁移和侵袭的影响;通过Western Blot检测对E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白表达的影响。结果 与BEAS-2B细胞相比,在A549细胞中,miR-26b-5p表达水平显著下降(P<0.05),VEGF的mRNA和蛋白表达水平显著上升(P<0.05),E-cadherin蛋白的表达水平显著下降(P<0....     

lncRNA UNC5 B-AS1靶向miR-300影响非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)不协调同源基因5B反义RNA1(UNC5B-AS1)对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和分子机制.方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肺癌组织、癌旁组织中UNC5B-AS1和miR-300的表达水平.将si-NC、si-UNC5B-AS1、miR-NC、miR-...     

沉默OGFR基因对非小细胞肺癌A549细胞株增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨沉默OGFR基因对非小细胞肺癌A549细胞株增殖、迁移和侵袭的影响。方法取A549细胞株,分为对照组、实验组,分别转染si-NC阴性对照、OGFR特异性的小干扰RNA。采用RT-qPCR和Westernblotting法分别检测细胞中的OGFRmRNA和蛋白,采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,平板克隆形成实验检测细胞集落形成能力。结果与对照组相比,实验组OGFRmRNA及蛋白相对表达量低,培养24、48、72 h细胞增殖OD值均低,穿膜细胞数少,细胞迁移率低,克隆形成细胞集落数少(P均<0.05)。结论沉默OGFR基因可降低A549细胞株OGFR基因mRNA和蛋白质的表达,在体外减弱了其增殖、迁移和侵袭能力。     

慢病毒载体介导的miR-342-3p对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭迁移的影响研究

目的 探讨miR-342-3p对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭迁移的影响及分子机制.方法 用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌组织及细胞中miR-342-3p和NUCKS1的表达水平;构建慢病毒介导的miR-342-3p过表达载体(LV-miR-342-3p),将LV-miR-342-3p和阴性对照空病毒...     

长链非编码RNA GAS5通过调控miR-196 b-5 p抑制非小细胞肺癌细胞增殖侵袭迁移的机制

目的 研究长链非编码RNA(LncRNA)GAS5对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,探讨其作用机制.方法 运用qRT-PCR检测非小细胞肺癌细胞A549和肺支气管正常细胞16HBE中LncRNA GAS5、miR-196b-5p的表达;将miR-196b-5p组(转染miR-196b-5p mimics)、mi...     

MiR-32对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的探讨miR-32靶向CCNE2调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的增殖、迁移和侵袭的机制。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测30例NSCLC患者癌组织及其匹配癌旁组织和支气管上皮细胞株16-HBE及NSCLC细胞株A549、H460和H1299中miR-32 mRNA表达水平;选择A549和H1299细胞为研究对象,将细胞随机分8组:NC组(转染miR-NC)、miR-32组(转染miR-32 mimics)、NC inhibitor组(转染miR-32-NC)、miR-32 inhibitor组(转染miR-32 inhibitor)、si-NC组(转染对照干扰RNA)、si-CCNE2组(转染CCNE2干扰RNA)、miR-32+vector(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1)、miR-32+CCNE2组(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1-CCNE2),转染按照Lipofectamine^TM2000试剂进行。qRT-PCR检测转染效果,qRT-PCR和Western印迹分别检测CCNE2 mRNA和蛋白...     

lncRNA GAS5通过靶向miR-221抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的研究lncRNA生长停滞特异性转录因子(GAS)5在骨肉瘤(OS)细胞U2OS中的表达,并深入探讨GAS5对OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法 qRT-PCR检测U2OS细胞中GAS5和miR-221的表达;噻唑蓝(MTT)和Transwell小室法分析U2OS细胞的增殖、迁移和侵袭能力;Starbase软件预测GAS5和miR-221的靶向关系,之后采用双荧光素酶报告实验和qRT-PCR分析加以验证。结果与hFOB 1.19组相比,GAS5在U2OS细胞中明显低表达;通过在U2OS细胞中转染pcDNA-GAS5可高效过表达GAS5;外源过表达GAS5可抑制U2OS细胞的增殖、迁移和侵袭能力;GAS5能够与miR-221通过互补位点相互作用;与hFOB 1.19组相比,miR-221在U2OS细胞中明显高表达,且外源过表达miR-221可逆转GAS5对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 GAS5通过降低miR-221表达抑制U2OS细胞的增殖、迁移和侵袭能力,在骨肉瘤中发挥抑癌作用。     

miR-363-3p对非小细胞肺癌细胞迁移与侵袭能力的影响

目的 观察miR-363-3p对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移与侵袭能力的影响.方法 收集发生和未发生淋巴结转移的NSCLC组织样本各26、21例份,常规培养人NSCLC细胞株A549及高转移性NSCLC细胞株H441,采用实时荧光定量PCR法检测不同组织及细胞中miR-363-3p相对表达量.将对数生长期的H44...     

miRNA-126靶向抑制A549细胞迁移和侵袭能力的研究

目的研究microRNA-126（miR-126）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞迁移和侵袭能力的影响。方法利用脂质体介导法将十勾建的miR126过表达质粒转染至NSCI．C细胞株A549细胞（A549／miR-126组）,并设空质粒转染组（A549／MOCK组）和空白对照组（A549组）。利用RT-PCR技术检测3组细胞中EGFI。7（miR126的靶标）的表达水平,采川细胞划痕实验观察细胞迁移能力差异,采用Transwell小室法分析3组细胞侵袭能力的差异。结果RT—PCR检测A549／miR-126组、A549／MOCK组和A549组细胞中EGFI。7mRNA分别为2．32±0．088、1．43±0．026和1．00±0．000,差异有统计学意义（P〈0．01）;细胞划痕实验显示A549／miR—126组、A549jM（）CK组和A549组细胞平均迁移距离分别为3．0μm、2．65μm和0．5μm,平均抑制率分别为0、11．25％和83．75％,差异有统计学意义（P〈O．05）;Transwell小室实验显示,A549／miR126组24hr侵袭细胞数为（28．6±2．322）个,36h侵袭细胞数为（29．2±3．7683）个,A549／M（）CK组24h为（49．8±3．7014）个,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论miR-126可上调EGFL7mRNA的表达,并可能通过表达产物EGFI。7蛋白抑制A549细胞的迁移和侵袭能力。     

circ＿0081666/miR-330-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的 探讨circ＿0081666对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法 选取30例非小细胞肺癌患者癌组织及癌旁组织;A549细胞分为si-con组(转染si-con)、si-circ＿0081666组(转染si-circ＿0081666)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-circ＿0081666组(转染pcDNA-circ＿0081666)、miR-con组(转染miR-con)、miR-330-5p组(转染miR-330-5p)、si-circ＿0081666+anti-miR-con组(共转染si-circ＿0081666和anti-miR-con)、si-circ＿0081666+anti-miR-330-5p组(共转染si-circ＿0081666和anti-miR-330-5p)。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测circ＿0081666和miR-330-5p表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测circ＿0081666和miR-330-5p的靶向关系。结果...     

HIF-1α、PD-L1与非小细胞肺癌淋巴转移的相关性

目的探讨HIF-1α、PD-L1表达水平与非小细胞肺癌(NSCLC)患者淋巴转移风险的相关性。 方法选择2015年12月至2017年12月于我院手术治疗且未发生淋巴结转移的NSCLC患者97例。免疫组化分析对所有患者癌症病灶中HIF-1α、PD-L1的表达量进行检测。而后进行为期24月的随访,记录淋巴转移发生情况。根据HIF-1α及PD-L1表达量对所有患者进行分组,分析随访期间两种蛋白不同表达量患者淋巴转移风险之间的差异。通过COX回归分析确定NSCLC淋巴结转移之间的危险因素。 结果所有患者平均随访时间19(12,24)月,共计92例患者完成随访,发生淋巴结转移例数36例,淋巴结转移率39.13%,淋巴结未转移中位时间时间24(16,24)月。HIF-1α高表达及低表达患者淋巴结转移率巴结转移发生率分别为92.6%和26.9%,HIF-1α高表达患者淋巴结转移率显著高于低表达患者(log-rankχ²＝63.052;P<0.001)。PD-L1高表达及低表达患者淋巴结转移发生率分别为82.1%和21.3%,PD-L1高表达患者淋巴结转移率显著高于低表达患者(log-rankχ²＝39.555;P<0.001)。HIF-1α高表达(HR＝25.790,95%CI＝10.005-30.287)、PD-L1高表达(HR＝16.693,95%CI＝12.014-20.356)、CEA(HR＝1.058,95%CI＝1.013-1.106)是NSCLC患者淋巴转移的危险因素(P<0.05)。 结论HIF-1α、PD-L1高表达与NSCLC患者淋巴转移风险具有显著相关性,可作为早期预测和治疗的靶点。     

Moesin调控肺癌A549细胞增殖、侵袭的实验研究

目的研究Moesin在非小细胞肺癌中的作用及其机制。方法通过数据库分析发现Moesin高表达在非小细胞肺癌患者中与不良预后相关。利用Western Blot检测Moesin在肺癌细胞株内表达情况。选取Moesin表达量中等A549细胞株进行实验。将A549细胞分为对照组和Moesin干扰组,分别利用CCK-8, Transwell检测细胞增殖、转移的作用,利用Western blot检测干扰Moesin对细胞增殖、上皮间充质转移(EMT)信号通路蛋白的影响。结果干扰Moesin后,增殖信号通路p-AKT, p-ERK,EMT信号通路E-cadherin, N-cadherin, Vimtein等蛋白都有明显变化,并且肺癌细胞表型如增殖,转移、侵袭能力也有明显下降。结论 Moesin在非小细胞肺癌中表达上调,其高表达与不良预后相关。并且,通过影响下游增殖、转移信号通路蛋白,Moesin可促进肺癌细胞增殖转移。     

姜黄素对肺癌A549细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨姜黄素对肺癌A549细胞侵袭迁移力的影响及其机制。 方法利用不同浓度姜黄素处理正常肺上皮细胞,台盼蓝法检测药物细胞毒性;不同浓度的姜黄素作用于A549细胞,MTT法测定A549细胞增殖水平;细胞划痕实验和Transwell实验分别测定药物处理后A549细胞的迁移和侵袭能力变化情况;Werstern blot测定A549细胞中于侵袭迁移有关的表皮生长因子受本(EGFR)、E-型钙黏蛋白(E-cadherin)、N-型钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白的表达。 结果姜黄素浓度在0～40 μg/ml时正常肺上皮病死率低,差异无明显统计学差异(P>0.05),表明姜黄素对正常肺上皮细胞的不良反应小;MTT实验结果显示姜黄素以浓度依赖的方式抑制A549细胞的增殖,各组与对照组相比均具有统计学意义(P<0.01);细胞划痕实验显示姜黄素以浓度依赖的方式抑制A549细胞的迁移能力,各组与对照组相比均具有统计学意义(P<0.01);Transwell实验显示姜黄素以浓度依赖的方式抑制A549细胞的侵袭能力,各组与对照组相比均具有统计学意义(P<0.01);Western blot显示姜黄素处理A549细胞后EGFR蛋白(P<0.01)和N-cadherin蛋白表达降低(P<0.01),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.01)。 结论一定浓度内姜黄素细胞毒性低,姜黄素能够抑制A549的增殖、迁移和侵袭,可能是通过调节EGFR、N-cadherin、E-cadherin蛋白从而逆转上皮间质转化过程。     

微小RNA-190低表达调控肺癌A549细胞增殖、侵袭和凋亡的实验研究

目的 探讨微小RNA(miR)-190对肺癌A549细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养的A549细胞分为对照(Ctrl)组、抑制剂阴性对照(anti-miR-NC)组和miR-190抑制剂(anti-miR-190)组,转染miR-190抑制剂及其阴性对照后,采用实时荧光定量PCR检测检测A549细胞...     

lncRNA DGCR5通过靶向调控miR-21抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的 探讨lncRNA DGCR5对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法 将pcDNA-NC、pcDNA-DGCR5、anti-miR-NC、anti-miR-21质粒分别转染至CNE-1、HNE-1细胞中,记为pcDNA-NC组、pcDNA-DGCR5组、anti-miR-NC组、anti-miR-21组;将pcDNA-DGCR5分别与mimic-NC、mimic-miR-21共转染至CNE-1、HNE-1细胞中,记为pcDNA-DGCR5+mimic-NC组、pcDNA-DGCR5+mimic-miR-21组;采用qRT-PCR检测miR-21和DGCR5的表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Transwell、流式细胞术检测CNE-1、HNE-1细胞增殖活性、迁移、侵袭和凋亡;双荧光素酶报告实验检测DGCR5和miR-21靶向调控。结果 与癌旁组织和人永生化鼻咽上皮细胞NP69相比,鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞SUNE-1、CNE-2、CNE-1、HNE-1、HONE-1中DGCR5表达水平显著降低(P<0.05),miR-21表达水平显著增加(P<0.05)...     

TGF-β1通过HPIP诱导非小细胞肺癌A549细胞增殖和转移

目的研究TGF-β1通过影响HPIP的表达,对非小细胞肺癌细胞系A549的增殖和转移的作用。方法使用CCK-8检测TGF-β1在不同浓度及不同作用时间下对肺癌A549细胞增殖活力的作用;使用Transwell迁移实验检测TGF-β1对肺癌A549细胞迁移能力的影响;使用qRT-PCR检测不同浓度TGF-β1对Homo sapiens pre-B-cell leukemia homeobox interacting protein 1(HPIP/PBXIP1)基因转录的作用;使用western blot检测不同浓度TGF-β1对HPIP蛋白表达的影响;通过siRNA下调HPIP在A549细胞中的表达量,并检测下调表达后对A549细胞增殖活力及迁移能力的影响,并进一步验证对于TGF-β1促进增殖及促进迁移能力的影响。结果随着TGF-β1浓度的增加,其促进肺癌A549细胞增殖活力的作用逐渐增加;随着TGF-β1作用时间的延长,同样逐渐增加其促进肺癌A549细胞增殖活力的作用;Transwell迁移实验结果显示,TGF-β1可促进肺癌A549细胞的迁移能力;qRT-PCR及western blot结果显示,随着TGF-β1浓度的增加,HPIP的转录及翻译水平逐渐增加;通过siRNA敲低A549细胞中HPIP的表达量,可以显著减弱TGF-β1促进肺癌A549细胞增殖及迁移的能力。结论 TGF-β1具有促进非小细胞肺癌A549细胞增殖及迁移的能力,该作用可能与TGF-β1介导的HPIP表达增加相关。本课题为HPIP作为潜在的非小细胞肺癌治疗靶点提供了一定的理论基础。